結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

1、結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫， 同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。本指導(dǎo)原則是對(duì)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用， 若不適用， 需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)， 并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)文件， 不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)， 亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行， 如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法， 也可以采用， 但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使

2、用本指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、 標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、 標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。一、范圍結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌、 牛結(jié)核分枝桿菌和非洲分枝桿菌等引起的慢性傳染性疾病， 可累及全身各個(gè)器官， 以肺結(jié)核最為1/29多見。其中，結(jié)核病的病原菌主要是結(jié)核分枝桿菌，牛結(jié)核分枝桿菌次之。 結(jié)核分枝桿菌主要是經(jīng)空氣傳播，大多數(shù)人在感染結(jié)核分枝桿菌后并無(wú)癥狀，稱為潛伏感染。 潛伏感染可持續(xù)幾十年，僅有 5% 10%的潛伏感染者發(fā)展為活動(dòng)性肺結(jié)核。在結(jié)核病的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中，通常將分枝桿菌分為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（ Mycobacterium

3、 tuberculosis complex ）和非結(jié)核分枝桿菌（ Nontuberculosis mycobacteria, NTM）。結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群包括結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis ）、牛結(jié)核分枝桿菌(M.bovis) 、非洲分枝桿菌（M.africanum ）和田鼠分枝桿菌（M.microti ）。在結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群內(nèi)各種中，除田鼠分枝桿菌對(duì)人無(wú)致病力外，其他三種菌均可對(duì)人致病， 產(chǎn)生大致相同的臨床表現(xiàn)。 因此，臨床上往往只做結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的鑒定而不進(jìn)行亞種水平的鑒定，用于結(jié)核輔助診斷的核酸檢測(cè)試劑也常采用結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群共有的核酸序列作為靶標(biāo)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。核酸檢測(cè)

4、是肺結(jié)核病原學(xué)診斷的重要參考。2009 年，美國(guó)疾病控制預(yù)防中心（CDC ）更新了肺結(jié)核的診療指南，將核酸檢測(cè)作為肺結(jié)核的輔助診斷方法，明確：對(duì)所有疑似肺結(jié)核患者，應(yīng)至少進(jìn)行一個(gè)呼吸道樣本的核酸檢測(cè)。我國(guó)臨床診療指南結(jié)核病分冊(cè)也明確：結(jié)核分枝桿菌的DNA 檢測(cè)可作為肺結(jié)核診斷的參考。 與其他實(shí)驗(yàn)室檢查方法比較，核酸檢測(cè)的價(jià)值在于：（ 1）可快速鑒別結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群與非結(jié)核分枝桿菌，提高涂片陽(yáng)性肺結(jié)核的診斷特異性； （ 2）與涂片比較，靈敏度較高，2/29可提高涂片陰性肺結(jié)核的檢出率；（ 3）與培養(yǎng)相比，操作快速，可及早進(jìn)行正確的醫(yī)療處置。結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑是指：利用分子生物學(xué)檢測(cè)

5、技術(shù)，如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）等，以特定的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群共有的核酸序列為檢測(cè)靶標(biāo)，對(duì)痰、支氣管肺泡灌洗液中的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群進(jìn)行體外定性檢測(cè)的試劑，用于肺結(jié)核的輔助診斷。本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于熒光探針PCR 方法建立的，對(duì)于其他分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)，可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請(qǐng)人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)不適用部分進(jìn)行修訂或補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)和驗(yàn)證，但需闡述不適用的理由，并驗(yàn)證替代方法的科學(xué)合理性。本指導(dǎo)原則適用于以結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群共有的靶核酸序列作為靶標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)的試劑， 對(duì)于某些以結(jié)核分枝桿菌特有的靶核酸序列為靶標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)的試劑， 可能部分要求不完全適用或本文所述技

6、術(shù)指標(biāo)不夠全面， 申請(qǐng)人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)不適用部分進(jìn)行修訂或補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)和驗(yàn)證，但需闡述不適用的理由，并驗(yàn)證替代方法的科學(xué)合理性。本指導(dǎo)原則適用于預(yù)期用途為肺結(jié)核輔助診斷的、 以痰或支氣管肺泡灌洗液作為適用樣本類型的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑。 對(duì)于用途相同的其他呼吸道樣本類型，或者預(yù)期用途為肺外結(jié)核輔助診斷的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑，可能3/29部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面， 申請(qǐng)人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)不適用部分進(jìn)行修訂或補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)和驗(yàn)證。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。二、注冊(cè)申報(bào)資料要求（一）綜述資料綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、

7、 產(chǎn)品描述、 有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗(yàn)原理、最低檢測(cè)限及被測(cè)靶核酸序列的特性等方面寫明申報(bào)試劑與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。 若被測(cè)物為新的靶核酸序列， 則應(yīng)詳細(xì)論述作為檢測(cè)靶標(biāo)的核酸序列的臨床意義， 即其與臨床應(yīng)用 （可用于肺結(jié)核輔助診斷） 的相關(guān)性，并提供充分的支持資料。綜述資料應(yīng)符合體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法 （國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號(hào)，以下簡(jiǎn)稱辦法 ）和關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2014 年第

8、 44 號(hào)）的相關(guān)要求。（二）主要原材料的研究資料應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、酶、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照以及企業(yè)參考品等的選擇與來(lái)源、制備過程、 質(zhì)量分析和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工4/29藝必須相對(duì)穩(wěn)定； 如主要原材料購(gòu)自其他供貨商， 應(yīng)提供的資料包括：供貨商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告或性能指標(biāo)證書，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。申請(qǐng)人應(yīng)提供企業(yè)參考品的詳細(xì)制備過程， 包括組成、來(lái)源、菌株特性（如名稱、種屬、靶核酸的拷貝數(shù)、濃度等）等信息。企業(yè)參考品的項(xiàng)目應(yīng)包括：陰性參考品、陽(yáng)性參考品、最低檢測(cè)限參考品、 重復(fù)性參考品等。陽(yáng)性參考品應(yīng)著重考慮結(jié)核分枝桿

9、菌復(fù)合群的代表菌株，陰性參考品則主要涉及對(duì)分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗(yàn)證情況。建議采用滅活的菌株建立企業(yè)參考品， 不宜采用質(zhì)粒、菌株的基因組提取 /純化物等核酸或臨床樣本（如痰液）。申報(bào)試劑的質(zhì)控體系通過設(shè)置陽(yáng)性、陰性、內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）等各種對(duì)照來(lái)實(shí)現(xiàn)，需考慮對(duì)樣本核酸提取/純化、配液及加樣、試劑及儀器性能、擴(kuò)增反應(yīng)抑制物（管內(nèi)抑制）、交叉污染、靶核酸降解等因素可能造成的假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果的質(zhì)量控制。陽(yáng)性對(duì)照的核酸性質(zhì)應(yīng)與待測(cè)樣本的核酸性質(zhì)一致，如同為RNA或 DNA 。企業(yè)應(yīng)對(duì)各種對(duì)照的 Ct 值或相應(yīng)判斷數(shù)值做出明確的范圍要求。申報(bào)資料應(yīng)詳細(xì)描述對(duì)照的原料選擇、制備、 定值過程等試驗(yàn)資料。本指

10、導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于熒光探針PCR 方法建立的，對(duì)于采用該方法學(xué)的結(jié)核核酸檢測(cè)試劑，建議至少設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和內(nèi)對(duì)照。5/291.內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）內(nèi)對(duì)照可對(duì)實(shí)驗(yàn)過程可能存在的擴(kuò)增反應(yīng)抑制物、儀器、試劑和操作等所導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。內(nèi)對(duì)照可采用不含靶核酸序列的質(zhì)粒或線性DNA 、非結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的病原體或克隆菌株，靶核酸為RNA 時(shí)可采用假病毒等。申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）的引物、探針和模板濃度做精確的驗(yàn)證，既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽(yáng)性曲線又要盡量降低對(duì)靶核酸序列檢測(cè)造成的抑制而導(dǎo)致假陰性。2.陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照可對(duì)實(shí)驗(yàn)過程進(jìn)行質(zhì)控。陽(yáng)性對(duì)照可為： 含有靶核酸序列的核酸、 含

11、有靶核酸序列的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合物菌株或其他克隆菌株，靶核酸為RNA 時(shí)可采用假病毒等。企業(yè)應(yīng)對(duì)各種陽(yáng)性對(duì)照的Ct 值或相應(yīng)判斷數(shù)值做出明確的范圍要求。3.陰性對(duì)照陰性對(duì)照對(duì)可能存在的交叉污染進(jìn)行假陽(yáng)性結(jié)果的質(zhì)控。陰性對(duì)照可以是空白對(duì)照。陰性對(duì)照需參與樣本核酸的平行提取/純化。由于申報(bào)試劑所適用的臨床樣本比較復(fù)雜，其中可能含有各種影響PCR 反應(yīng)的抑制物，從而影響后續(xù)試驗(yàn)結(jié)果，造成假陰性的可能性。因此，申報(bào)試劑應(yīng)充分考慮對(duì)樣本核酸提取/純化環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制，通過設(shè)置各種對(duì)照進(jìn)行質(zhì)控。比如，采用克隆菌株作為內(nèi)對(duì)照， 或者采用菌株作為陽(yáng)性對(duì)照并參與樣本核酸的6/29平行提取 /純化，或者設(shè)置專門的核酸

12、提取/純化對(duì)照（如菌株）等，以對(duì)樣本核酸提取/純化的質(zhì)量及效率進(jìn)行評(píng)估。4.核酸提取 /純化組分 （如適用） 的主要組成、 原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。5.PCR 組分的主要材料（包括引物、探針、各種酶、內(nèi)標(biāo)及其他主要原料）的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)研究資料，主要包括以下內(nèi)容：5.1 脫氧三磷酸核苷（dNTP）核酸的組成成分， 包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP 和 dTTP ，對(duì)純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的詳細(xì)驗(yàn)證資料。5.2 引物由一定數(shù)量的dNTP 構(gòu)成的特定序列，通常采用DNA 合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）或其他適宜方法純化。需提供對(duì)序列準(zhǔn)確性、純度、

13、穩(wěn)定性、功能性實(shí)驗(yàn)等的驗(yàn)證資料。 如為外購(gòu)， 應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如PAGE 電泳結(jié)果或高效液相色譜法（HPLC ）分析圖譜。5.3 探針特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段 （寡聚核苷酸片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測(cè)。合成后經(jīng)PAGE 或其他適宜方法純化，在5'-端(和 /或 3'-端 )進(jìn)行標(biāo)記，如熒光素報(bào)告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在3'-端標(biāo)記熒光7/29素淬滅基團(tuán)， 并經(jīng) HPLC 或其他適宜方法純化，純度應(yīng)達(dá)到高效液相色譜純。 如為外購(gòu)， 應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如 HPLC 分析圖譜； 應(yīng)對(duì)探針

14、的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進(jìn)行核實(shí)，并作HPLC 分析。5.4 PCR 反應(yīng)所需酶DNA 聚合酶，應(yīng)具有 DNA 聚合酶活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性， 如：94 保溫 1 小時(shí)后仍保持50%活性；尿嘧啶糖基化酶（ UNG ），具有尿嘧啶糖基化活性，無(wú)核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，應(yīng)對(duì)酶活性有合理驗(yàn)證；應(yīng)提供有關(guān)保存穩(wěn)定性、活性及功能實(shí)驗(yàn)等的驗(yàn)證資料。6.核酸類檢測(cè)試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無(wú)脫氧核糖核酸酶（ Dnase）或核糖核酸酶（Rnase）污染。（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料主要生產(chǎn)工藝包括：配制工作液、 半成品檢定、 分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要

15、求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對(duì)pH 、電導(dǎo)率等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。生產(chǎn)工藝研究資料應(yīng)能對(duì)反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、質(zhì)控體系設(shè)置、Ct（臨界）值確定等，提供確切的依據(jù)，主要包括以下內(nèi)容：1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示。2.反應(yīng)原理介紹。3.基因序列的選擇、PCR 方法學(xué)特性介紹。8/294.核酸提取 /純化方法確定的研究資料。5.確定最佳PCR 反應(yīng)體系的研究資料，包括酶濃度、引物/探針濃度、 dNTP 濃度、陽(yáng)離子濃度、樣本量及反應(yīng)體積等。6.確定 PCR 反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間及循環(huán)數(shù)的研究資料。7.對(duì)于基線閾值（threshold）和閾值循環(huán)數(shù)（

16、Ct）確定的研究資料。（四）分析性能評(píng)估資料企業(yè)應(yīng)提交在產(chǎn)品研制階段對(duì)申報(bào)試劑進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，包括具體的試驗(yàn)方法（操作步驟）、內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、 統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。對(duì)于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸定性檢測(cè)試劑，建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。1.最低檢測(cè)限（分析靈敏度）1.1 最低檢測(cè)限的確定建議使用結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株、牛結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株或 BCG 標(biāo)準(zhǔn)菌株（如適用）的梯度稀釋液來(lái)確定最低檢測(cè)限。每個(gè)梯度進(jìn)行不少于20 次的重復(fù)檢測(cè)，將具有95%陽(yáng)性檢出率的菌株濃度作為最低檢測(cè)限。應(yīng)明確每份菌株的來(lái)源、基因型特性、濃度、制備方法等信息。企業(yè)可采用鋪板計(jì)數(shù)細(xì)菌集落形成單位（ c

17、olony forming unit ， CFU ）的方法進(jìn)行菌株濃度的確認(rèn)，以 CFU/mL 作為菌株濃度的表示方式； 也可采用國(guó)家參考品對(duì)菌株濃度進(jìn)行標(biāo)定，以 “個(gè)菌 /mL”作為菌株濃度的表示方式。為確定痰樣本的最低檢測(cè)限， 建議將已知濃度的菌株與結(jié)核9/29分枝桿菌復(fù)合群陰性的痰樣本進(jìn)行混合，完全按照申報(bào)試劑的操作步驟對(duì)此 “制備痰液 ”進(jìn)行樣本前處理、核酸提取/純化、擴(kuò)增等。對(duì)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群陰性痰樣本的確認(rèn)，應(yīng)采用涂片、 培養(yǎng)鑒定、臨床診斷和其他已上市的核酸檢測(cè)試劑盒進(jìn)行聯(lián)合確認(rèn)。最低檢測(cè)限的濃度應(yīng)是“制備痰液 ”的最終菌株濃度。1.2 最低檢測(cè)限的驗(yàn)證應(yīng)在最低檢測(cè)限的菌株濃度對(duì)

18、結(jié)核分枝桿菌、牛結(jié)核分枝桿菌或 BCG 菌株（如適用） 進(jìn)行至少 20 次的重復(fù)試驗(yàn)驗(yàn)證，每種菌株的陽(yáng)性檢出率為95%。企業(yè)應(yīng)能夠提供用于最低檢測(cè)限驗(yàn)證的各個(gè)菌株的來(lái)源、制備方法及濃度等信息?！白畹蜋z測(cè)限的驗(yàn)證 ”的試驗(yàn)方法可參考“最低檢測(cè)限的確定”。2.分析特異性2.1 交叉反應(yīng)用于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類主要考慮以下幾方面：核酸序列具有同源性、易引起相同或相似的臨床癥狀、采樣部位正常寄生或易并發(fā)的其他病原體。主要包括：非結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（NTM ）、常見的口腔和呼吸道共生的病原體等，具體目錄參見表1和表 2。建議在病原體感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。

19、建議進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證的分枝桿菌、細(xì)菌或者真菌的最低濃度為106 CFU/mL ；進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病毒的最低濃度為 105 PFU/mL （ plaque forming unit ，PFU，空斑形成單位） 。應(yīng)提供用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體的制備方法、來(lái)源、種屬和濃度10/29等信息。對(duì)于某些難以培養(yǎng)或者因?yàn)樯锇踩詿o(wú)法培養(yǎng)的病原體，可采用病原體核酸樣本進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。應(yīng)提供用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體核酸的來(lái)源、組成和濃度等信息。采用病原體核酸樣本進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)， 應(yīng)將核酸樣本視為實(shí)際使用過程中參與PCR反應(yīng)的核酸樣本，根據(jù)試劑說(shuō)明書的要求配制PCR 反應(yīng)體系，進(jìn)行擴(kuò)增。有關(guān)交叉反應(yīng)驗(yàn)證的信息

20、應(yīng)以列表的方式在產(chǎn)品說(shuō)明書的【產(chǎn)品性能指標(biāo)】項(xiàng)中體現(xiàn)。表 1 用于交叉反應(yīng)研究的其他分枝桿菌（非結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的其他分枝桿菌）堪薩斯分枝桿菌蘇加分枝桿菌海分枝桿菌龜分枝桿菌土地分枝桿菌偶發(fā)分枝桿菌次要分枝桿菌恥垢分枝桿菌潰瘍分枝桿菌膿腫分枝桿菌戈登分枝桿菌胃分枝桿菌蟾蜍分枝桿菌胞內(nèi)分枝桿菌鳥分枝桿菌草分枝桿菌瘰疬分枝桿菌注:表中所列細(xì)菌均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。表 2 用于交叉反應(yīng)研究的其他病原體11/29肺炎鏈球菌金黃色葡萄球菌流感嗜血桿菌諾卡氏菌大腸桿菌綠膿桿菌表皮葡萄球菌白色念珠菌隱球菌人類副流感病毒 （1、2 和 3 型）人流感病毒（ A 型和 B 型）注:表中所列病原體均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。2.2

21、干擾物質(zhì)潛在的干擾物質(zhì)主要包括：內(nèi)源性物質(zhì)（如血液、粘液、人細(xì)胞等）和外源性藥物。建議使用醫(yī)學(xué)相關(guān)水平的干擾物濃度進(jìn)行驗(yàn)證，另外，建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度 (最差條件 ) 條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)于常見藥物干擾試驗(yàn)， 建議參照相應(yīng)藥物藥代動(dòng)力學(xué)研究確定的治療藥物濃度添加相應(yīng)藥物進(jìn)行干擾驗(yàn)證。表 3用于干擾研究的外源性藥物異煙肼乙胺丁醇利福平吡嗪酰胺卡那霉素鏈霉素抗生素（如：阿莫西林、左氧氟沙星） 抗病毒藥（如：扎那米韋）鼻腔噴霧劑或滴鼻劑 (如：腎上腺素、 鼻腔糖皮質(zhì)激素（如：倍氯羥甲唑啉、含防腐劑的氯化鈉溶液 ) 米松、地塞米松、氟尼縮松、曲安西龍、布地奈德、莫美他松、氟替卡松）鼻用

22、軟膏類（如：莫匹羅星）注: 表中所列外源性藥物均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證，括號(hào)內(nèi)至少選做一種。12/293.精密度測(cè)量精密度的評(píng)價(jià)方法并無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依， 可根據(jù)不同產(chǎn)品特征或企業(yè)的研究習(xí)慣進(jìn)行， 前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考國(guó)內(nèi)或國(guó)外的相關(guān)文件進(jìn)行。企業(yè)應(yīng)對(duì)每項(xiàng)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求， 如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。針對(duì)申報(bào)試劑的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求。3.1 對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除申報(bào)試劑（包括提取 /純化組分和 PCR 組分）本身的影響外，還應(yīng)對(duì)不同的適用機(jī)型（如 PCR 分析儀）、操作者、地點(diǎn)等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。3.2 合理的精密度評(píng)價(jià)周期，

23、例如：為期至少12 天的檢測(cè)，每天至少由2 人完成不少于2 次的完整檢測(cè)， 從而對(duì)批內(nèi) /批間、日內(nèi) /日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。如有條件，申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。3.3 建議采用結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（“ 陰性樣本 ”不適用）作為樣本，在以下3 個(gè)濃度水平進(jìn)行驗(yàn)證：陰性樣本：不含結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的樣本，陰性檢出率應(yīng)為100%（ n20）。弱陽(yáng)性樣本：結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株濃度略高于試劑盒的最低檢測(cè)限，陽(yáng)性檢出率應(yīng)高于95%（ n20）。中等陽(yáng)性樣本：結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株濃度約為最低13/29檢測(cè)限的2 倍或 3 倍，陽(yáng)性檢出率為100%且

24、 CV15%（ n20）。4.反應(yīng)性（包容性）應(yīng)證明申報(bào)試劑可以檢測(cè)代表不同基因多態(tài)性的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌株。應(yīng)至少對(duì)結(jié)核分枝桿菌、牛結(jié)核分枝桿菌或BCG 菌株 (如適用 )、非洲分枝桿菌和田鼠分枝桿菌進(jìn)行驗(yàn)證。應(yīng)采用略高于最低檢測(cè)限濃度的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌株進(jìn)行研究。應(yīng)提供各個(gè)菌株的來(lái)源、菌株特性及濃度等信息。應(yīng)證明所有采用的菌株含有靶核酸序列。5.不同樣本類型、 樣本前處理方法、 核酸提取 /純化方法的分析性能資料要求由于痰和支氣管肺泡灌洗液樣本之間差異較大，如申報(bào)試劑同時(shí)包括這兩種樣本類型，申請(qǐng)人應(yīng)提交每種樣本類型的全項(xiàng)目分析性能評(píng)估資料。對(duì)于每種樣本類型而言，申請(qǐng)人應(yīng)提交適用的樣本

25、前處理方法（進(jìn)行全項(xiàng)目分析性能評(píng)估的樣本前處理方法除外）與后續(xù)試驗(yàn)配合進(jìn)行的性能試驗(yàn)（至少包括最低檢測(cè)限項(xiàng)目），以證明不同的樣本前處理方法不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。對(duì)于每種樣本類型而言，申請(qǐng)人應(yīng)提供適用的核酸提取/純化方法（進(jìn)行全項(xiàng)目分析性能評(píng)估的核酸提取/純化方法除外）與后續(xù)試驗(yàn)配合進(jìn)行的性能試驗(yàn)（至少包括最低檢測(cè)限和精密性項(xiàng)目），以證明不同的核酸提取/純化方法不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。如果申報(bào)試劑同時(shí)適用于幾種不同的臨床樣本類型、樣本前14/29處理方法和核酸提取/純化方法，每種樣本類型應(yīng)明確其適用的樣本前處理方法（一種或幾種）和核酸提取/純化方法（一種或幾種）。如果申報(bào)試劑最終僅保留某種樣本類型、某種樣

26、本前處理方法和某種核酸提取/純化方法，分析性能評(píng)估資料應(yīng)采用該組合進(jìn)行。6.注意事項(xiàng)對(duì)于適用多個(gè)機(jī)型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說(shuō)明書 【適用儀器】項(xiàng)中所列的所有型號(hào)儀器的至少三批全性能評(píng)估資料。（五）陽(yáng)性判斷值確定資料對(duì)于此類試劑，陽(yáng)性判斷值確定資料主要是指Ct 值的確認(rèn)資料，建議申請(qǐng)人采用受試者工作特征（ ROC）曲線的方式確定申報(bào)試劑用于結(jié)果判斷的臨界值。有關(guān)ROC 曲線分析的細(xì)節(jié)，請(qǐng)參考國(guó)內(nèi)外相關(guān)的文件。如存在灰區(qū)， 應(yīng)提交灰區(qū)上下限確定的詳細(xì)的研究資料。（六）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、

27、 開封穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究， 申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。 穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、 具體的實(shí)施方案、 詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究， 應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括冷藏和冷凍兩種條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇35 個(gè)溫15/29度點(diǎn)（應(yīng)至少包括范圍的上限和下限溫度） ，每間隔一定的時(shí)間段對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行分析性能驗(yàn)證， 從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。用于樣本穩(wěn)定性研究的樣本應(yīng)包括最低檢測(cè)限濃度的樣本。除了定性結(jié)果之外，還需要提供原始信號(hào)的分析，如Ct。

28、適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說(shuō)明書【儲(chǔ)存條件及有效期】 和【樣本要求】 兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。（七）臨床試驗(yàn)1.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)選定不少于3 家（含 3 家）臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)， 按照有關(guān)規(guī)定開展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)獲得國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局資質(zhì)認(rèn)可。申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及其預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)人種、 流行病學(xué)背景、 病原微生物的特性等因素選擇臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)。 臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)必須具有與申報(bào)試劑相適應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員及儀器設(shè)備，并能夠確保該項(xiàng)試驗(yàn)的實(shí)施。2.臨床試驗(yàn)樣本的選擇和樣本量臨床試驗(yàn)對(duì)象的選擇應(yīng)滿足如下條件：（ 1）具有

29、肺結(jié)核癥狀/體征的疑似肺結(jié)核患者病例，不建議選擇正常健康人群；（2）最終臨床診斷為肺結(jié)核患者的病例不少于350 例，并且涂片陰性的肺結(jié)核患者占所有肺結(jié)核患者的比例應(yīng)不小于50%；（3）應(yīng)包括其他易混淆疾病的病例（最終臨床診斷確定不是肺結(jié)核），以對(duì)申報(bào)試劑的特異性進(jìn)行評(píng)價(jià)，此部分病例不少于150 例；（ 4）每個(gè)臨床試驗(yàn)對(duì)象的臨床樣本應(yīng)足量，以便同時(shí)進(jìn)行申報(bào)試劑、對(duì)比試劑和其他合理方法的檢測(cè)。16/29鑒于痰和支氣管肺泡灌洗液樣本之間的差異較大，如果申報(bào)試劑同時(shí)適用于兩種樣本類型，每種樣本類型的例數(shù)不少于500例。臨床試驗(yàn)應(yīng)以新鮮樣本為主，如采用凍存樣本應(yīng)另行說(shuō)明。如果某種樣本類型適用于多種樣本

30、前處理方法，應(yīng)進(jìn)行不少于 150 例同源樣本的對(duì)比試驗(yàn)， 證明不同的樣本前處理方法不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。 其中，最終臨床診斷為肺結(jié)核患者的病例不少于100 例，涂片陰性的肺結(jié)核患者占所有肺結(jié)核患者的比例不小于50%，其他易混淆疾病的病例（最終臨床診斷確定不是肺結(jié)核）不少于 50 例。如果某種樣本類型適用于多種核酸提取/純化方法，應(yīng)進(jìn)行不少于150 例同源樣本的對(duì)比試驗(yàn)，證明不同的核酸提取/純化方法不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。其中，最終臨床診斷為肺結(jié)核患者的病例不少于 100 例，涂片陰性的肺結(jié)核患者占所有肺結(jié)核患者的比例不小于 50% ，其他易混淆疾病的病例（最終臨床診斷確定不是肺結(jié)核）不少于50 例。3.

31、對(duì)比試劑的選擇3.1 對(duì)于 “已有同品種批準(zhǔn)上市 ”試劑的臨床試驗(yàn)，申請(qǐng)人可按照法規(guī)要求選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、 臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，采用申報(bào)試劑與對(duì)比試劑進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。同時(shí)，申請(qǐng)人還應(yīng)選擇一定數(shù)量的臨床樣本進(jìn)行申報(bào)試劑與培養(yǎng)鑒定方法的對(duì)比研究， 每種樣本類型不少于100 例，其中涂片陰性和陽(yáng)性17/29各至少 50 例。培養(yǎng)方法可采用傳統(tǒng)的固體培養(yǎng)方法或臨床普遍認(rèn)可的液體培養(yǎng)方法，菌種鑒定方法可采用對(duì)硝基苯甲酸（ p-methylbenzylsulfonyl ，PNB）、測(cè)序、高性能的液相層析、質(zhì)譜、或其他已上市的核酸檢測(cè)試劑

32、盒方法。 臨床研究報(bào)告應(yīng)對(duì)采用的培養(yǎng)鑒定方法做詳細(xì)介紹。3.2 對(duì)于無(wú)法選擇對(duì)比試劑的新結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑，其臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇培養(yǎng)鑒定和/或核酸序列測(cè)定（測(cè)序）方法作為對(duì)比方法，總例數(shù)不少于500 例。有關(guān)培養(yǎng)鑒定方法的要求同3.1。臨床研究報(bào)告應(yīng)對(duì)選用的測(cè)序方法做詳細(xì)介紹。申請(qǐng)人應(yīng)提供以下關(guān)于測(cè)序部分的詳細(xì)試驗(yàn)資料，需由臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)簽章確認(rèn)。測(cè)序方法原理、 測(cè)序儀型號(hào)、 測(cè)序試劑及消耗品的相關(guān)信息。測(cè)序方法所用引物相關(guān)信息， 如核酸序列選擇、 分子量、純度、功能性實(shí)驗(yàn)等資料。 引物設(shè)計(jì)應(yīng)合理涵蓋申報(bào)試劑擴(kuò)增的靶核酸區(qū)段。對(duì)所選測(cè)序方法的分析性能進(jìn)行合理驗(yàn)證，尤其是最低檢測(cè)限的確認(rèn)，

33、 建議將所選測(cè)序方法與申報(bào)試劑的相關(guān)性能進(jìn)行適當(dāng)比對(duì)分析。測(cè)序方法應(yīng)建立合理的陽(yáng)性和陰性質(zhì)控品，以對(duì)臨床樣本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。18/29提交有代表性的樣本測(cè)序圖譜及結(jié)果分析資料。如果申報(bào)試劑同時(shí)適用于幾種不同的臨床樣本類型、樣本前處理方法和核酸提取/純化方法，每種樣本類型應(yīng)明確規(guī)定其適用的樣本前處理方法（一種或幾種）和核酸提取/純化方法（一種或幾種）。如果申報(bào)試劑最終僅保留某種樣本類型、某種樣本前處理方法和某種核酸提取/純化方法，臨床試驗(yàn)應(yīng)采用該組合進(jìn)行。4.臨床試驗(yàn)方法、臨床數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析4.1 應(yīng)在臨床試驗(yàn)方案或者臨床試驗(yàn)報(bào)告中詳細(xì)描述申報(bào)試劑和對(duì)比試劑的具體操作步驟。應(yīng)明確每個(gè)試驗(yàn)

34、陰陽(yáng)性的判定標(biāo)準(zhǔn)，特別應(yīng)明確何為培養(yǎng)鑒定的陰陽(yáng)性。4.2 在臨床報(bào)告中，以列表的方式，明確：總樣本例數(shù)、臨床診斷為肺結(jié)核的患者總例數(shù)、涂片陰性的肺結(jié)核患者例數(shù)、涂片陽(yáng)性的肺結(jié)核患者例數(shù)、非結(jié)核的其他呼吸道疾病患者與易混淆疾病樣本例數(shù)，以判斷病例選擇的科學(xué)合理性。4.3 臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)以列表的方式表示，包括每個(gè)樣本的涂片結(jié)果、臨床診斷結(jié)果、申報(bào)試劑的結(jié)果、對(duì)比試劑的結(jié)果。4.4 對(duì)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如檢測(cè)結(jié)果一致性分析、受試者工作特征（ROC ）曲線分析、陰性/陽(yáng)性符合率等。4.5 申報(bào)試劑對(duì)涂片陰性的肺結(jié)核患者應(yīng)有一定的檢出率；申報(bào)試劑對(duì)涂片陽(yáng)性肺結(jié)核患者的檢出率至少為9

35、0%；申報(bào)試劑的臨床特異性至少為90%。19/294.6 臨床試驗(yàn)中的某些樣本，采用申報(bào)試劑檢測(cè)時(shí)為陽(yáng)性，采用培養(yǎng)鑒定方法檢測(cè)時(shí)為陰性， 出現(xiàn)這種情況的原因有： 樣本前處理導(dǎo)致結(jié)核菌的培養(yǎng)受抑制； 樣本中結(jié)核菌的濃度過低。 這可能導(dǎo)致申報(bào)試劑的特異性低。因此，在進(jìn)行4.4 統(tǒng)計(jì)分析的同時(shí)，建議進(jìn)行申報(bào)試劑與最終臨床診斷的對(duì)比統(tǒng)計(jì)分析， 以客觀地反應(yīng)申報(bào)試劑的臨床特異性。對(duì)于申報(bào)試劑與對(duì)比試劑（或?qū)Ρ确椒ǎ┑牡刃栽u(píng)價(jià)，常選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果， 對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方或 kappa 檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差

36、異。在臨床試驗(yàn)方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)， 即評(píng)價(jià)申報(bào)試劑與對(duì)比試劑（或?qū)Ρ确椒ǎ┦欠竦刃У臉?biāo)準(zhǔn)。5.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證在數(shù)據(jù)收集過程中，對(duì)于兩種試劑檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)采用金標(biāo)準(zhǔn)或其他合理方法進(jìn)行復(fù)核， 同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。 如無(wú)需復(fù)核， 應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明理由。6.臨床試驗(yàn)方案臨床試驗(yàn)實(shí)施前， 研究者應(yīng)從流行病學(xué)、 統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮， 設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)方案。 各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致， 且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施， 不可隨意改動(dòng)。 整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位

37、20/29的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的樣本入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的樣本再被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。 各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對(duì)比試劑應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 另外，申報(bào)試劑的樣本類型不應(yīng)超越對(duì)比試劑對(duì)樣本類型的檢測(cè)要求。7.臨床試驗(yàn)報(bào)告的撰寫根據(jù)體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則的要求， 臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述， 并應(yīng)包括必

38、要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床試驗(yàn)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。7.1 臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選擇、臨床主要研究人員簡(jiǎn)介等基本情況介紹。病例的納入 /排除標(biāo)準(zhǔn)。樣本類型，樣本的收集、處理及保存；痰液的培養(yǎng)、鑒定方法；培養(yǎng)鑒定陰性、陽(yáng)性的具體涵義等。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。7.2 具體臨床試驗(yàn)情況申報(bào)試劑和對(duì)比試劑的名稱、批號(hào)、有效期及所用機(jī)型等信息。21/29對(duì)各試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的病例數(shù)等情況進(jìn)行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對(duì)檢測(cè)精密度、質(zhì)控品測(cè)量值的抽查結(jié)果評(píng)估。具

39、體試驗(yàn)過程，樣本檢測(cè)、數(shù)據(jù)收集、樣本的保存條件、結(jié)果不一致樣本的校驗(yàn)等。7.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)或其他合理方法的復(fù)核以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對(duì)方案的修改。7.3.2 陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%（或99%）的置信區(qū)間。以交叉表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方或kappa 檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。7.4 討論和結(jié)論對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡(jiǎn)要分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床試驗(yàn)有無(wú)特別說(shuō)明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。（八）產(chǎn)品技術(shù)要求產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合辦法和體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求

40、及說(shuō)明的相關(guān)規(guī)定。申請(qǐng)人應(yīng)按照 醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求，內(nèi)容主要22/29包含產(chǎn)品性能指標(biāo)和檢驗(yàn)方法， 并在附錄中明確主要原材料、 生產(chǎn)工藝及半成品要求。產(chǎn)品技術(shù)要求中的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)與說(shuō)明書中相關(guān)內(nèi)容保持一致。 如申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國(guó)家或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布， 則產(chǎn)品技術(shù)要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。（九）注冊(cè)檢驗(yàn)根據(jù)辦法要求，首次申請(qǐng)注冊(cè)的第三類產(chǎn)品應(yīng)在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊(cè)檢測(cè)。如申報(bào)試劑有適用的國(guó)家參考品，應(yīng)采用國(guó)家參考品進(jìn)行注冊(cè)檢驗(yàn)， 并符合國(guó)家參考品的相關(guān)要求。（十）產(chǎn)品說(shuō)明書產(chǎn)品說(shuō)明書的格式應(yīng)符

41、合體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則的要求，境外試劑的中文說(shuō)明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書一致，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說(shuō)明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致， 如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)， 則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。結(jié)合體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則的要求， 下面對(duì)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑說(shuō)明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地編制說(shuō)明書。1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：1.1 試劑盒用于體外定性檢測(cè)人xx 樣本中的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸。23/291.2 簡(jiǎn)單介紹結(jié)核分枝桿

42、菌復(fù)合群包括哪些種的細(xì)菌、致病性、感染后的臨床表現(xiàn)， 靶核酸序列的特征 （名稱和基因位置等）及選擇依據(jù)，其他病原體（如：非結(jié)核分枝桿菌NTM ）中是否存在靶核酸序列。1.3 待測(cè)人群特征介紹： 具有肺結(jié)核相關(guān)體征/癥狀和 X 線檢查結(jié)果的疑似結(jié)核病患者、地域要求或年齡限制（如有）等。1.4 強(qiáng)調(diào)：實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)接受過基因擴(kuò)增或分子生物學(xué)方法檢測(cè)的專業(yè)培訓(xùn)，具備相關(guān)的實(shí)驗(yàn)操作資格，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備相應(yīng)的生物安全防護(hù)條件。2.【主要組成成分】2.1 說(shuō)明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。2.2 試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組份，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑

43、 /耗材的名稱、貨號(hào)及其他相關(guān)信息。2.3 如果試劑盒中不包含用于核酸提取/純化的試劑組份，則應(yīng)在此注明經(jīng)過驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化核酸提取/純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、 產(chǎn)品名稱以及產(chǎn)品貨號(hào)、醫(yī)療器械注冊(cè)證號(hào)等詳細(xì)信息。3.【檢驗(yàn)原理】3.1 對(duì)試劑盒檢測(cè)的靶核酸序列進(jìn)行詳細(xì)描述（名稱和基因位置等），對(duì)不同樣品反應(yīng)管組合、對(duì)照設(shè)置及熒光信號(hào)檢測(cè)原理等進(jìn)行逐項(xiàng)介紹。24/293.2 核酸提取 /純化方法、原理等。3.3 試劑盒技術(shù)原理的詳細(xì)介紹，建議結(jié)合適當(dāng)圖示進(jìn)行說(shuō)明。如反應(yīng)體系中添加了相關(guān)的防污染組分（如UNG酶），也應(yīng)對(duì)其作用機(jī)理作適當(dāng)介紹。4.【儲(chǔ)存條件及有效期】說(shuō)明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開

44、封穩(wěn)定性、復(fù)融穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)明確具體的儲(chǔ)存條件及有效期。5.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：5.1 樣本的收集： 應(yīng)參照臨床技術(shù)操作規(guī)范 （結(jié)核病分冊(cè)） （中華醫(yī)學(xué)會(huì)編著）或者結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程（中國(guó)防癆協(xié)會(huì)基礎(chǔ)專業(yè)委員會(huì)編著）現(xiàn)行有效版本推薦的采樣要求，并詳細(xì)描述采樣步驟和注意事項(xiàng)。5.2 臨床樣本的前處理（如適用）：應(yīng)參考臨床技術(shù)操作規(guī)范（結(jié)核病分冊(cè)） （中華醫(yī)學(xué)會(huì)編著）或者結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程（中國(guó)防癆協(xié)會(huì)基礎(chǔ)專業(yè)委員會(huì)編著）現(xiàn)行有效版本推薦的前處理方法，尤其是痰標(biāo)本，如堿處理-直接法、 N- 乙酰-L- 半胱氨酸（ NALC ）-NaOH 法等，詳細(xì)描述

45、具體的前處理方法。5.3 樣本的其他處理、運(yùn)送和保存：明確核酸提取/純化前的其他處理（如離心、洗滌等）、保存條件及期限（短期、長(zhǎng)期）、運(yùn)送條件等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否需要恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的限制。25/296.【適用儀器】所有適用的儀器型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。7.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：7.1 實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)室分區(qū)、實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度、空調(diào)氣流方向控制等注意事項(xiàng)。7.2 試劑配制方法、注意事項(xiàng)。7.3 詳述待測(cè)樣本及相關(guān)對(duì)照核酸提取/純化的條件、 步驟及注意事項(xiàng)（如適用） 。7.4 擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。7.5 PCR 各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置或相應(yīng)的自動(dòng)化檢測(cè)程序及相關(guān)注意事項(xiàng)。7.6 儀器設(shè)置：特殊參數(shù)、結(jié)合探針的熒光素標(biāo)記情況、對(duì)待測(cè)基因及內(nèi)標(biāo)的熒光通道選擇。7.7 基線、循環(huán)閾值（ Ct 值）的選擇方法或相應(yīng)的自動(dòng)化檢測(cè)程序。8.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】結(jié)合陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）、核酸提取 /純化對(duì)照（如適用）以及樣本管檢測(cè)結(jié)果的Ct 值，以列表的形式對(duì)所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。如存在檢測(cè)灰區(qū)，應(yīng)詳述對(duì)于灰區(qū)結(jié)果的處理方式。9.【檢驗(yàn)方法的局限性】9.1 本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其