常見病毒鑒定分析

1、會(huì)計(jì)學(xué)1常見病毒鑒定分析常見病毒鑒定分析第1頁/共112頁 第一節(jié) 呼吸道病毒 1 第二節(jié)2 第五節(jié)5肝炎病毒 第六節(jié)6 第四節(jié)4 第三節(jié)3 反轉(zhuǎn)錄病毒 皰疹病毒 腸道病毒 朊粒及其他病毒第2頁/共112頁第3頁/共112頁第4頁/共112頁第5頁/共112頁核衣殼核酸(單股負(fù)鏈RNA) 核蛋白（NP） RNA多聚酶核衣殼包膜基質(zhì)蛋白（MP）脂蛋白（LP）刺突血凝素（HA）神經(jīng)氨酸酶（NA）第一節(jié) 呼吸道病毒第6頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第7頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第8頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第9頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第10頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第11

2、頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第12頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第13頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第14頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第15頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第16頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第17頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第18頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第19頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第20頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第21頁/共112頁第一節(jié) 呼吸道病毒第22頁/共112頁病毒名稱形態(tài)結(jié)構(gòu)所致疾病SARS冠狀病毒球形、冠狀，有包膜，單正鏈RNA發(fā)熱、干咳、胸悶、氣短，急性呼吸窘迫綜合癥、休克、多器官功能障礙綜合癥等麻疹病毒球形、衣殼呈螺旋

3、對(duì)稱型，有包膜，不分節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA發(fā)熱、咳嗽、流涕、眼結(jié)膜充血、皮膚出現(xiàn)紅色斑丘疹腮腺炎病毒球形，核心為單股負(fù)鏈RNA，衣殼呈螺旋對(duì)稱，有包膜一側(cè)或雙側(cè)腮腺腫大，伴有疼痛、發(fā)熱第一節(jié) 呼吸道病毒第23頁/共112頁病毒名稱形態(tài)結(jié)構(gòu)所致疾病腺病毒球形、雙鏈DNA、核衣殼20面體對(duì)稱、無包膜咽炎、扁桃體炎、肺炎、流行性眼結(jié)膜炎、急性出血性膀胱炎、胃腸炎等副流感病毒球形、單負(fù)鏈RNA、核衣殼螺旋對(duì)稱、有包膜小兒氣管炎、支氣管炎、肺炎、普通感冒等呼吸道合胞病毒球形、單負(fù)鏈RNA、核衣殼螺旋對(duì)稱、有包膜嬰幼兒喘息性支氣管炎、肺炎、成人普通感冒等鼻病毒球形、單正鏈RNA、核衣殼20面體對(duì)稱、無包膜嬰

4、幼兒支氣管炎、支氣管肺炎、成人普通感冒等第一節(jié) 呼吸道病毒第24頁/共112頁第25頁/共112頁第26頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第27頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第28頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第29頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第30頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第31頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第32頁/共112頁小球形顆粒:直徑22nm；管形顆粒:直徑22nm，長(zhǎng)度在50700nm之間；大球形顆粒:即Dane顆粒，直徑42nm。第二節(jié) 肝炎病毒第33頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒即完整的HBV顆粒，也稱Dane顆粒，直徑約42nm，分為包膜和核心兩部分。包膜含HBsAg、糖

5、蛋白和細(xì)胞脂肪，核心含核心蛋白（即乙型肝炎核心抗原，HBcAg）、環(huán)狀雙股HBV-DNA和HBV-DNA多聚酶。第34頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒小球形顆粒：直徑約22nm。管狀顆粒：直徑約22nm，長(zhǎng)度100500nm。這兩種顆粒均由與病毒包膜相同的脂蛋白（即乙型肝炎表面抗原，HBsAg）組成，不含核酸，一般無傳染性。第35頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第36頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第37頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第38頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第39頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第40頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第41頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒5.抵抗力具有頑強(qiáng)的抵抗

6、力：它對(duì)低溫、干燥、紫外線、對(duì)一般濃度的化學(xué)消毒劑，都能夠耐受；常用的消毒劑，如酒精、來蘇兒、碘酒等對(duì)它根本不起作用，不能殺死它們，所以家里有了乙肝病人就不要用這些消毒劑來消毒，但是HBV怕高熱，如加熱到100度，只要10分鐘就可使其失去傳染性。HBV對(duì)0.5%過氧乙酸非常敏感，5%次氯酸鈉也可用來殺滅HBV。第42頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第43頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第44頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒1.形態(tài)結(jié)構(gòu) 球形，單正鏈RNA 有包膜 2.抵抗力：對(duì)有機(jī)溶劑敏感1.標(biāo)本：血清或血漿2.鑒定：檢測(cè)病毒抗體：用ELISA法檢測(cè)抗-HCV檢測(cè)病毒RNA：因HCV在血液中含量很少

7、，常用敏感的RT-PCR法（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)第45頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第46頁/共112頁HDV結(jié)構(gòu)模式圖第二節(jié) 肝炎病毒第47頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第48頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第49頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第50頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第51頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第52頁/共112頁第二節(jié) 肝炎病毒第53頁/共112頁病毒名稱形態(tài)結(jié)構(gòu)所致疾病HAV球形、線性單正鏈RNA、核衣殼20面體對(duì)稱、無包膜急性甲型肝炎HBV球形、雙鏈環(huán)狀DNA、層衣殼急性、慢性乙型肝炎，并與肝硬化及肝癌相關(guān)HCV球形、單正鏈RNA、有包膜急性或慢性丙型肝炎HDV球形、單鏈

8、環(huán)狀RNA、有包膜加重乙型肝炎HEV球形、單正鏈RNA、無包膜戊型肝炎第二節(jié) 肝炎病毒第54頁/共112頁人類嗜T細(xì)胞病毒人類免疫缺陷病毒（HIV） HIV-I型和HIV-II型獲得性免疫缺陷綜合癥（AIDS）第55頁/共112頁 中國AIDS流行現(xiàn)狀截至2014年2月28日，我國累計(jì)報(bào)告報(bào)告的HIV/AIDS 587182例，死亡138956例。現(xiàn)存活艾滋病病毒感染者271624例，艾滋病病人176602例。我國艾滋病疫情總體上保持低流行態(tài)勢(shì)，但依然呈上升趨勢(shì)，幅度較以前有所減緩。據(jù)統(tǒng)計(jì)，自2005年至今，性傳播比例持續(xù)攀升。2014年3月新發(fā)現(xiàn)的HIV/AIDS中，異性性傳播4515例（6

9、9.8%），同性性傳播1260例（19.5%），注射毒品傳播430例（6.6%），母嬰傳播36例（0.6%），性接觸加注射毒品傳播13例（0.2%），既往輸血及使用血制品傳播11例（0.2%），既往采血漿傳播5例（0.1%），傳播途徑不詳203例（3.1%）。50歲以上群體和學(xué)生群體所占比例上升，這也是我國HIV傳播的新特點(diǎn) 知識(shí)拓展第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒第56頁/共112頁第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒第57頁/共112頁第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒第58頁/共112頁HIV-1P24-可用于“窗口期”及HIV-1抗體陽性的母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒第59頁/共112頁（2）血清抗體檢測(cè) 分為篩

10、查和確認(rèn)試驗(yàn)免疫印跡法-是HIV血清學(xué)檢測(cè)中最常用的確證性試驗(yàn)篩查陽性者必須進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒第60頁/共112頁（3）測(cè)定病毒核酸臨床常用于測(cè)定感染者體內(nèi)游離病毒的RNA含量即病毒載量（4）CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù) 應(yīng)用流式細(xì)胞儀（FCM）進(jìn)行CD4+T細(xì)胞記數(shù)及占淋巴細(xì)胞的百分率（正常情況下與CD8+T細(xì)胞比例為2:1）CD4+T細(xì)胞數(shù): 0.5109/L時(shí)，為抗反轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療的指征0.2109/L時(shí)，應(yīng)立刻進(jìn)行卡氏肺孢子菌的預(yù)防治療 0.1109/L時(shí)，易感染巨細(xì)胞病毒和結(jié)核分枝桿菌（5）耐藥性檢測(cè)檢測(cè)患者標(biāo)本中HIV基因序列，監(jiān)控變異的發(fā)生，間接估計(jì)藥物耐藥情況。第三節(jié) 反轉(zhuǎn)

11、錄病毒第61頁/共112頁（三）臨床意義HIV無癥狀攜帶者和AIDS患者傳播途徑性接觸、輸血或血制品、母-嬰傳播傳染源病毒選擇性侵犯CD4+細(xì)胞，細(xì)胞變性、壞死，導(dǎo)致以CD4+細(xì)胞缺陷為主的嚴(yán)重免疫缺陷1致病機(jī)制第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒第62頁/共112頁（1）急性期：（2）無癥狀潛伏期：（3）AIDS期:感染后26周內(nèi)一般為810年通常難以檢測(cè)到HIV抗體血清抗體陽性，具傳染性。持續(xù)發(fā)熱、盜汗、失重、不明原因的慢性腹瀉、濕疹、銀屑病、脂溢性皮炎、皮炎、皰疹-帶狀皰疹、口腔念珠菌病、黏膜白斑病等機(jī)會(huì)感染和腫瘤2臨床特征第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒第63頁/共112頁機(jī)會(huì)性感染 帶狀皰疹 毛囊炎第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病

12、毒第64頁/共112頁在AIDS患者中念珠菌屬感染是很常見的, 象鵝口瘡（上圖）盡管不危及生命但十分討厭. 左圖為念珠菌性肺炎.機(jī)會(huì)性感染第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒第65頁/共112頁惡性腫瘤圖為AIDS患者常出現(xiàn)的Kaposi肉瘤第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒第66頁/共112頁第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒第67頁/共112頁患艾滋病的孩子 第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒第68頁/共112頁二、人類嗜T細(xì)胞病毒 引起T細(xì)胞白血病和毛細(xì)胞白血病人類嗜T細(xì)胞病毒(HTLV)（一）生物學(xué)特性u(píng)電鏡下HTLV呈球形，直徑約100nm，中心為病毒的RNA和反轉(zhuǎn)錄酶u最外層系病毒的包膜，其表面嵌有g(shù)p120，能與細(xì)胞表面的CD4分子結(jié)合而介導(dǎo)病

13、毒的感染。包膜內(nèi)有病毒的衣殼，含有P18和P24兩種結(jié)構(gòu)蛋白第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒第69頁/共112頁（二）微生物學(xué)檢查*電鏡觀察*免疫血清或單克隆抗體鑒定*血液中HTLV-I抗體的存在即可診斷為該病毒感染；而血液中異常淋巴細(xì)胞數(shù)量的大量增生，同時(shí)證實(shí)這些淋巴細(xì)胞中有HTLV-IDNA，則可支持成人T淋巴細(xì)胞白血病的診斷第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄病毒第70頁/共112頁HTLV-I可經(jīng)輸血、注射或性接觸等傳播，也可通過胎盤、產(chǎn)道或哺乳等途徑垂直傳播。（三）臨床意義成人T淋巴細(xì)胞白血病主要采取化療，但對(duì)HTLV-I的抵抗效果不佳；AZT和其他反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑能夠有效的對(duì)抗細(xì)胞培養(yǎng)中的HTLV-II。第三節(jié) 反轉(zhuǎn)錄

14、病毒第71頁/共112頁 第四節(jié) 皰疹病毒皰疹病毒（Herpesviruses）是一群中等大小的有包膜的雙股DNA病毒，有110個(gè)以上成員，其中與人感染有關(guān)的人皰疹病毒已發(fā)現(xiàn)有8種常用名單純皰疹病毒1型巨細(xì)胞病毒單純皰疹病毒2型人類皰疹病毒6型水痘帶狀皰疹病毒人類皰疹病毒7型EB病毒人類皰疹病毒8型第72頁/共112頁球形，直徑約為120300nm。核心為雙鏈線性DNA，衣殼呈20面體，有包膜感染類型感染類型增殖感染破壞宿主細(xì)胞潛伏宿主細(xì)胞部分整合到宿主細(xì)胞DNA中經(jīng)胎盤感染胎兒，先天畸形對(duì)脂溶劑敏感，臨床采集標(biāo)本不應(yīng)與脂溶劑接觸。最適保存溫度為-196（液氮），在-70病毒感性可保存數(shù)月，4

15、可保存數(shù)天，-20易破壞病毒包膜，短期保存即完全滅活皰疹病毒共同的特： 第四節(jié) 皰疹病毒第73頁/共112頁一、單純皰疹病毒（HSV）HSV-1 HSV-2HSV-2型則與生殖器皰疹和新生兒感染有關(guān) 主要引起口唇和角膜皰疹（一）生物學(xué)特性基因組DNA有40%左右的序列同源 HSV的增殖周期短，常潛伏于神經(jīng)節(jié)中引起潛伏感染。抵抗力較弱，易被脂溶劑滅活。溫度高于56 30分鐘失去感染性 第四節(jié) 皰疹病毒第74頁/共112頁（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1標(biāo)本 采集水皰液、唾液、腦脊液、角膜刮取物、陰道拭子等標(biāo)本，經(jīng)常規(guī)處理后接種或置低溫冰箱保存2分離培養(yǎng)鑒定 常用原代兔腎、人胚肺、人胚腎細(xì)胞或地鼠腎等傳代細(xì)胞

16、分離培養(yǎng)病毒。在雞胚絨毛膜上，HSV-2形成大空斑，而HSV-1形成針尖大小的空斑。常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有家兔、豚鼠、小鼠等3血清學(xué)檢測(cè) 中和試驗(yàn)、免疫熒光等鑒定也可分離病毒DNA，根據(jù)DNA酶切圖譜差異鑒定型別 第四節(jié) 皰疹病毒第75頁/共112頁（三）臨床意義直接接觸傳染或被唾液污染的餐具 間接傳染HSV感染一般分為原發(fā)感染和復(fù)發(fā)感染。原發(fā)感染好發(fā)于嬰幼兒或兒童，多為隱性感染，并不表現(xiàn)出癥狀HSV-2侵及軀體腰以下部位，主要是生殖器，它是引起性病的主要病原體之一HSV-1主要侵犯軀體腰以上部位，可引起口腔、唇、眼、腦及腰以上部位感染 第四節(jié) 皰疹病毒第76頁/共112頁單純皰疹病毒感染-多核細(xì)胞

17、第四節(jié) 皰疹病毒第77頁/共112頁二、水痘-帶狀皰疹病毒（VSV）（一）生物學(xué)特性 水痘-帶狀皰疹病毒（VZV） 初次感染再次感染水痘 （多見于兒童） 帶狀皰疹（多成人和老人） 第四節(jié) 皰疹病毒第78頁/共112頁（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)水痘一帶狀皰疹的臨床癥狀典型，一般不需作微生物學(xué)診斷。必要時(shí)可檢查嗜酸性核內(nèi)包涵體和多核巨細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)抗原（三）臨床意義 傳染源： 主要是患者，病毒經(jīng)呼吸道、口、咽、結(jié)膜、皮膚等處侵入人體1人是水痘-帶狀皰疹病毒的唯一自然宿主2帶狀皰疹 是潛伏在體內(nèi)的VZV復(fù)發(fā)感染 第四節(jié) 皰疹病毒第79頁/共112頁三、人巨細(xì)胞病毒（HCMV）和EB病毒一般是宮內(nèi)感染侵犯胎兒神經(jīng)

18、系統(tǒng)、肝、腎等器官，人巨細(xì)胞病毒（HCMV） EB病毒（EBV）與多種人類疾病相關(guān)如傳染性單核細(xì)胞增多癥、Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤等鼻咽癌和EB病毒關(guān)系密切，血清學(xué)檢查有高效價(jià)EB病毒抗原抗體可采集各種體液、分泌物等樣本進(jìn)行病毒分離、抗原或核酸檢測(cè) 第四節(jié) 皰疹病毒第80頁/共112頁第81頁/共112頁第五節(jié) 腸道病毒第82頁/共112頁較強(qiáng)較強(qiáng)第五節(jié) 腸道病毒第83頁/共112頁第五節(jié) 腸道病毒第84頁/共112頁第五節(jié) 腸道病毒第85頁/共112頁電鏡下的輪狀病毒第五節(jié) 腸道病毒第86頁/共112頁第五節(jié) 腸道病毒第87頁/共112頁第五節(jié) 腸道病毒第88頁/共112頁

19、第五節(jié) 腸道病毒第89頁/共112頁第五節(jié) 腸道病毒第90頁/共112頁與脊髓灰質(zhì)炎病毒生物性狀類似；為球形無包膜單股正鏈RNA病毒；柯薩奇病毒在多種組織細(xì)胞中生長(zhǎng)并產(chǎn)生CPE；埃可病毒在猴腎細(xì)胞中增殖良好。柯薩奇病毒血凝抑制試驗(yàn)鑒定；?？刹《局泻驮囼?yàn)鑒定第五節(jié) 腸道病毒第91頁/共112頁第五節(jié) 腸道病毒第92頁/共112頁第六節(jié) 朊粒及其他病毒PrPscPrPc氨基酸序列完全一致空間構(gòu)象對(duì)蛋白酶K抗性致病性有差異強(qiáng)第93頁/共112頁第六節(jié) 朊粒及其他病毒第94頁/共112頁神經(jīng)病理學(xué)檢查免疫學(xué)檢查基因分析法第六節(jié) 朊粒及其他病毒第95頁/共112頁第六節(jié) 朊粒及其他病毒第96頁/共112

20、頁第六節(jié) 朊粒及其他病毒第97頁/共112頁直接鏡檢病毒分離免疫熒光檢測(cè)抗原分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)第六節(jié) 朊粒及其他病毒第98頁/共112頁第六節(jié) 朊粒及其他病毒第99頁/共112頁分離培養(yǎng)血清學(xué)檢查分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)第六節(jié) 朊粒及其他病毒第100頁/共112頁病毒分離培養(yǎng)血清學(xué)檢查核酸檢測(cè)第六節(jié) 朊粒及其他病毒第101頁/共112頁小鼠最為敏感，任何途徑接種均能感染病毒檢測(cè)方法與乙型腦炎病毒相似森林硬蜱為主要傳播媒介及儲(chǔ)存宿主第六節(jié) 朊粒及其他病毒第102頁/共112頁 球形或卵圓形，RNA、有包膜，對(duì)酸、熱抵抗力弱 常用免疫熒光法、免疫酶染色法、分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè) 帶毒動(dòng)物為傳染源，以鼠傳播為主，以高熱、出血和