實(shí)驗(yàn)五ELISA法檢查乙肝表面抗原HBsAg學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)(shyn)五五ELISA法檢查乙肝表面抗法檢查乙肝表面抗原原HBsAg第一頁，共21頁。放射免疫測(cè)定法：131I，32P免疫熒光技術(shù)：FITC，PE免疫酶測(cè)定法：HRP，AP第1頁/共20頁第二頁，共21頁。第2頁/共20頁第三頁，共21頁。第3頁/共20頁第四頁，共21頁。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay）,簡(jiǎn)稱ELISA，它是實(shí)驗(yàn)室最常用的檢測(cè)方法，用酶標(biāo)記抗原或抗體檢測(cè)液體（血液、細(xì)胞液）中未知抗體或抗原。 ELISA具有準(zhǔn)確性高、檢測(cè)時(shí)間短、價(jià)格低廉、判斷結(jié)果有客觀標(biāo)準(zhǔn)、結(jié)果便于記錄和保存等優(yōu)點(diǎn)，適合于大批標(biāo)本的檢

2、測(cè)，廣泛應(yīng)用于食品安全檢測(cè)、醫(yī)療(ylio)檢測(cè)以及免疫實(shí)驗(yàn)分析等領(lǐng)域。第4頁/共20頁第五頁，共21頁。2、ELISA基本原理第5頁/共20頁第六頁，共21頁。第6頁/共20頁第七頁，共21頁。 ELISA的試劑(shj)ELISA中有中有3個(gè)是必要的試劑個(gè)是必要的試劑(shj)：免疫吸附劑、標(biāo)記物和顯色劑。：免疫吸附劑、標(biāo)記物和顯色劑。（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）； （聚苯乙烯板：具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性）（聚苯乙烯板：具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保

3、留原來的免疫學(xué)活性）（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物）；）酶標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物）；（3）酶作用的底物（顯色劑）；）酶作用的底物（顯色劑）；（4）陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品，參考標(biāo)準(zhǔn)品；）陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品，參考標(biāo)準(zhǔn)品；（5）樣品及標(biāo)準(zhǔn)本的稀釋液；）樣品及標(biāo)準(zhǔn)本的稀釋液；（6）洗滌液；）洗滌液；（7）酶反應(yīng)終止液）酶反應(yīng)終止液第7頁/共20頁第八頁，共21頁。4、ELISA類別(libi)第8頁/共20頁第九頁，共21頁。雙抗體(kngt)夾心法第9頁/共20頁第十頁，共21頁。間接(jin ji)法第10頁/共20頁第十一頁，共21頁。用抗體包被固相載體加入抗原Sample(二價(jià)以上)，

4、溫育加入酶標(biāo)抗體，溫育加入底物，顯色清洗(qngx)清洗(qngx)清洗終止反應(yīng)，底物顯色深淺與待檢抗原量成正比。利用已知濃度的抗原制成標(biāo)準(zhǔn)品，稀釋為梯度濃度，對(duì)其最終OD值與濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，那么樣品的濃度可以根據(jù)最終的OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出。第11頁/共20頁第十二頁，共21頁。第12頁/共20頁第十三頁，共21頁。第13頁/共20頁第十四頁，共21頁。第14頁/共20頁第十五頁，共21頁。實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)(shyn)步步驟驟第15頁/共20頁第十六頁，共21頁。第16頁/共20頁第十七頁，共21頁。1 2 3 4陰性陰性(ynxng)陰性陰性陽性陽性陽性陽性第17頁/共20頁第十八頁，共21頁。第18頁/共20頁第十九頁，共21頁。第19頁/共20頁第二十頁，共21頁。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)會(huì)計(jì)學(xué)。辣根過氧化物酶(HRP)，堿性磷酸酶(AP)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)。例如：蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與聚苯乙烯表面的疏水基團(tuán)能產(chǎn)生(chnshng)互作用而吸附。（4）陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品，參考標(biāo)準(zhǔn)品