阿卡波糖有關(guān)雜質(zhì)制備方法研究

1、    阿卡波糖有關(guān)雜質(zhì)制備方法研究    邵鑫鑫 陳才 姚偉敏摘 要：按照不同的酸、堿條件對(duì)阿卡波糖的降解反應(yīng)，可以獲取不同的雜質(zhì)。同時(shí)在不同的酸堿濃度、溫度等條件上也會(huì)對(duì)雜質(zhì)產(chǎn)生比較顯著的影響。阿卡波糖能夠?qū)μ悄虿』颊咂鸬胶芎玫闹委熥饔?，屬于非胰島素依賴(lài)性藥物，可以幫助輕度糖尿病患者實(shí)現(xiàn)自身胰島素的分泌，但是受到分泌量不足的影響，患者會(huì)出現(xiàn)胰島素敏感度下降等情況，對(duì)血糖影響比較嚴(yán)重。針對(duì)這種情況，本文也將針對(duì)阿卡波糖中的雜質(zhì)制備方法進(jìn)行研究，希望對(duì)這項(xiàng)研究工作的開(kāi)展起到更為有效的幫助。關(guān)鍵詞：阿卡波糖；雜質(zhì)；制備方法doi：10.16640/ki.3

2、7-1222/t.2018.17.017阿卡波糖的工業(yè)生產(chǎn)主要是借助微生物發(fā)酵法，也就是大游動(dòng)放線(xiàn)菌合成的假四糖類(lèi)次級(jí)代謝物。但是經(jīng)過(guò)實(shí)際研究可以發(fā)現(xiàn)，阿卡波糖在發(fā)酵環(huán)節(jié)中除了會(huì)生產(chǎn)阿卡波糖之外，還會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物質(zhì)，這也是阿卡波糖中的主要雜質(zhì)。如果在阿卡波糖中含有一定量的雜質(zhì)，不僅會(huì)對(duì)藥物的純度會(huì)造成影響，嚴(yán)重的還將直接威脅到藥物的安全性與穩(wěn)定性。所以在此種背景下進(jìn)行雜質(zhì)研究，提升阿卡波糖藥物質(zhì)量也是一項(xiàng)極具社會(huì)意義的工作。1 實(shí)驗(yàn)概述1.1 材料和試劑本文所研究的阿卡波糖主要是由杭州中美華東制藥公司提供。在這項(xiàng)工作中所采用的試劑大多為分析純度試劑，這些試劑均由天津市永大化學(xué)試劑公司所

3、生產(chǎn)，實(shí)驗(yàn)室中所用的水都為超純水1。1.2 儀器和設(shè)備這項(xiàng)工作中主要采用的設(shè)備和儀器為：barnstead tii 超純水系統(tǒng)、半制備液的相色譜儀等。1.3 實(shí)驗(yàn)方法（1）液相色譜檢測(cè)條件。要先將選取的樣品溶解在純水中，保證其溶液濃度為2mg/l，進(jìn)行該操作時(shí)要按照歐洲藥典來(lái)進(jìn)行，同時(shí)，使用將磷酸緩沖鹽作為流動(dòng)相，并測(cè)出液相色譜2。（2）液質(zhì)連用分析條。高效液相色譜環(huán)節(jié)為aglient1100，液相條件也上文實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，但是為了避免出現(xiàn)不揮發(fā)鹽對(duì)質(zhì)譜的毛細(xì)管造成堵塞。在此環(huán)節(jié)中噴霧電壓需要控制在4kv，毛細(xì)管的溫度要在300攝氏度以上，并在此環(huán)節(jié)中對(duì)的正負(fù)離子模式下的工作進(jìn)行有效檢測(cè)。（3）

4、酸降解液的制備。先將阿卡波糖樣品加入到濃度為12mol/l的驗(yàn)算溶液中，將其濃度進(jìn)行有效轉(zhuǎn)變，并在恒溫條件下將其溫度控制在25攝氏度，在靜置一小時(shí)后，借助氫氧化鈉溶液將其調(diào)整至中性。2 結(jié)果分析和討論實(shí)驗(yàn)中要借助相應(yīng)的技術(shù)對(duì)阿卡波糖降解液中的成分進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)雜質(zhì)的有效定位。2.1 酸降解結(jié)果分析通過(guò)對(duì)酸降解需要借助液質(zhì)聯(lián)用分析，hplc色譜圖的研究結(jié)果表示，在保留時(shí)間在27分鐘左右的時(shí)候會(huì)明顯出現(xiàn)一個(gè)離子峰值的變化，通過(guò)此種方式可以對(duì)保留時(shí)間、離子峰的結(jié)果都和阿卡波糖相同，由此可以確定為阿卡波糖。當(dāng)保留時(shí)間在16分鐘左右也將出現(xiàn)一個(gè)明顯的離子峰，按照相關(guān)資料的研究，雜質(zhì)對(duì)阿卡波糖的保留

5、值將達(dá)到0.63。2.2 堿降解結(jié)果分析分析過(guò)程中，按照對(duì)液質(zhì)聯(lián)用對(duì)堿降解液進(jìn)行分析，hplc色譜圖中和季峰離子流進(jìn)行分析可以發(fā)現(xiàn)，在保留時(shí)間在25分鐘左右和27分鐘左右的時(shí)候都會(huì)出現(xiàn)離子峰。根據(jù)相關(guān)資料的研究，阿卡波糖和雜質(zhì)分子量一致，通過(guò)上文的研究，兩個(gè)研究結(jié)果中產(chǎn)生的雜質(zhì)保留時(shí)間來(lái)對(duì)制備雜質(zhì)條件進(jìn)行進(jìn)一步考察。2.3 溫度對(duì)堿降解的影響在這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)需要抽取樣品，并且將不同的樣品劃分為五組，在樣品中分別加入0.5mol/l的氫氧化鈉溶液，在恒溫培養(yǎng)箱的溫度分別控制為15，20，25，30和35攝氏度。最終可以發(fā)現(xiàn)，30攝氏度時(shí)雜質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，而較低的溫度很難進(jìn)行有效的降解，溫度一旦過(guò)高也

6、很容易出現(xiàn)分解環(huán)節(jié)中其他雜質(zhì)的出現(xiàn)，所以降解反應(yīng)最為合適的溫度就是三十?dāng)z氏度4。2.4 堿濃度對(duì)降解的影響先選取不同濃度為0.5mol/l、1mol/l、1.5mol/l的naoh溶液，在此環(huán)節(jié)中進(jìn)行對(duì)阿卡波糖的降解實(shí)驗(yàn)，在兩個(gè)小時(shí)后用鹽酸溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)，并將其轉(zhuǎn)變?yōu)橹行浴Ｍㄟ^(guò)氫氧化鈉濃度的逐漸提升，雜質(zhì)中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)也將大大降低，這對(duì)于講解雜質(zhì)也將起到十分重要的幫助。3 小結(jié)阿卡波糖其實(shí)就是一種將-葡萄糖苷酶作為抑制劑，并且具備較強(qiáng)復(fù)雜性的低聚糖，其結(jié)構(gòu)和寡糖更相似，但是這種非寡糖的“假寡糖”能在人體的小腸上部細(xì)胞刷狀緣處和寡糖競(jìng)爭(zhēng)而與-葡萄糖苷酶可逆地結(jié)合，通過(guò)對(duì)-葡萄糖苷酶，比如我們經(jīng)常在實(shí)

7、驗(yàn)中接觸的麥芽糖酶、異麥芽糖酶或蔗糖酶之間的活性，在工作中對(duì)其進(jìn)行淀粉分解為寡糖，比如經(jīng)常在實(shí)驗(yàn)中接觸的麥芽糖等低聚糖，通過(guò)這種方式將其分解葡萄糖過(guò)程進(jìn)行合理控制，并且對(duì)于蔗糖分解成果糖的速度也要進(jìn)行充分控制，以此實(shí)現(xiàn)對(duì)腸道葡萄糖的吸收減慢，有效實(shí)現(xiàn)對(duì)餐后高血糖問(wèn)題的降低，達(dá)到降低血糖的目的5。長(zhǎng)期服用，可降低空腹血糖和糖化血紅蛋白的濃度。因此在今后的研究工作中，對(duì)阿卡波糖的雜質(zhì)進(jìn)行降低和有效處理也將起到十分有效的指導(dǎo)意義。通過(guò)本文的研究，認(rèn)為對(duì)雜質(zhì)制備方法進(jìn)行有效應(yīng)用，可以更為準(zhǔn)確和有效的鑒別雜質(zhì)，并對(duì)時(shí)間和分子量進(jìn)行保留。阿卡波糖在發(fā)酵環(huán)節(jié)中除了會(huì)生產(chǎn)阿卡波糖之外，還會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的中結(jié)構(gòu)類(lèi)似物質(zhì)，這也是阿卡波糖中的主要雜質(zhì)。如果在阿卡波糖中含有一定量的雜質(zhì)，不僅會(huì)對(duì)藥物的純度會(huì)造成影響，嚴(yán)重的還將直接威脅到藥物的安全性與穩(wěn)定性。參考文獻(xiàn)：1梁現(xiàn)蕊，張會(huì)晨，何小嬡等.阿卡波糖中雜質(zhì)的制備方法研究j.浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，62（03）：289-293.2黃劍川，王超兒，王亞軍.阿卡波糖結(jié)構(gòu)類(lèi)似物組分a形成機(jī)制研究及其制備j.發(fā)酵科技通訊，2014，16（04）：1-6.3楊亞勇，陳景勇，黃雪群.發(fā)酵液中阿卡波糖的超濾和納濾膜提取工藝j.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2015，28（03）：179-182.4成都大學(xué).從含有阿卡波糖的溶液中提純阿卡波糖的方法：cn2015