兔甲狀腺近全切除術(shù)+~131I清甲后短期甲減對(duì)動(dòng)脈內(nèi)膜損傷及阿托伐他汀干預(yù)研究

1、兔甲狀腺近全切除術(shù) +（131）I 清甲后短期甲減對(duì)動(dòng)脈內(nèi)膜損傷及阿托伐他汀干預(yù)研究目的：1 通過對(duì)兔行甲狀腺近全切除術(shù) +¹³¹I 清甲建立短期甲狀 腺功能減退的動(dòng)物模型。 2觀察短期甲減對(duì)動(dòng)脈內(nèi)膜形態(tài)的影響， 探討 eNOS、ET-1 表達(dá)在動(dòng)脈內(nèi)膜損傷中的作用。 3 觀察阿托伐他汀對(duì)甲減狀態(tài)動(dòng)脈內(nèi)膜損傷的保 護(hù)作用。方法：1 本實(shí)驗(yàn)選用新西蘭大白兔 60只，雌雄各半，中位周齡 9.2 周（8¹0 周），平均體重 1.7Kg （1.5².0Kg ）。實(shí)驗(yàn)

2、動(dòng)物飼 養(yǎng)于河北省人民醫(yī)院動(dòng)物室，給予標(biāo)準(zhǔn)飼料，飲用自來水，室內(nèi)溫度15²5°C，濕度 50%⁶0% 12h 光照 /12h 暗循環(huán)。根據(jù)性 別、周齡及體重隨機(jī)分成三組：（1）假甲狀腺切除術(shù)組（shamthyroidectomy group，ST組），行甲狀腺暴露后即刻縫合；（2）甲狀腺近全切除術(shù)組（Near-total thyroidectomy group，NT組），行甲狀腺近全切除術(shù)（單側(cè)甲狀腺全切 +對(duì)側(cè)甲 狀腺切除 90%）；（3）甲狀腺近全切除術(shù) +阿托伐他汀鈣干預(yù)組（ Near-

3、total thyroidectomy andAtorvastatin treatment group， NT+A組），行甲狀腺近全切除 +阿托伐他汀治療。手術(shù)麻醉用10%水合氯醛，劑量2mL/K® NT+A組術(shù)后3天內(nèi)開始給予阿托 伐他汀鈣混懸液灌胃，劑量為每日5mL/Kg（即阿托伐他汀鈣7.5mg/Kg）。余各組 給予蒸餾水灌胃。各組兔每3天稱重一次。NT組和NT+A組，術(shù)后22天（P2點(diǎn)后1天）給予 ¹³¹l清除殘余甲狀腺功能；2各處理時(shí)間點(diǎn)：（1）分別于P1點(diǎn)（手術(shù)前1天）、P2點(diǎn)（手術(shù)后3周、<sup>131<

4、/sup>I治療前1天）、P3點(diǎn)（手術(shù)后5 周，¹³¹l治療后2周）取耳中動(dòng)脈采血 5ml, 3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘取上清液，并放置-70 C冰箱保存待測(cè)。（2）分別于P2點(diǎn)、P3點(diǎn)給予各組兔 0.1mCi¹³¹l 腹腔注射， 24h 后行甲狀腺顯像。（3）術(shù)后22天（P2點(diǎn)后1天）給予NT組和NT+A組兔耳緣靜脈注射 ¹³¹l（ 1.0mCi/Kg），清除殘余甲狀腺功能。（4）于手術(shù)后36天（P3 點(diǎn)后 1 天）處死所有試驗(yàn)兔， 取升主動(dòng)脈。 3

5、 分別采用酶聯(lián)免疫 （ Enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）法測(cè)定各組兔血清促甲狀腺激素（TSH、游離三 碘甲狀腺原氨酸（FT3）、游離甲狀腺素（FT4）、甘油三酯（TG、總膽固醇（TC）、 高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、血清內(nèi)皮素-1（endothelin-1，ET-1），采用硝酸還原酶法測(cè)定兔血清一氧化氮（NO,以及制作兔升主動(dòng)脈病理切片觀察兔動(dòng)脈內(nèi)膜變化并利用免疫組織化學(xué)技術(shù)（Immunohistochemistry ，IHC）測(cè)定兔動(dòng)脈內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelialnitric oxide s

6、ynthase ， eNOS）、 ET-1 的表達(dá)情況。4所有統(tǒng)計(jì)結(jié)果均經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件 SPSS13.0處理，以PV 0.05為有顯著性差異。結(jié)果：1 各處理組兔試驗(yàn)期間存活良好，直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束沒有意外死亡。 2升主動(dòng) 脈形態(tài)學(xué)觀察：ST組：升主動(dòng)脈內(nèi)膜均無異常形態(tài)學(xué)變化； NT組：術(shù)后5 周 20例中有 7例主動(dòng)脈內(nèi)膜呈脂紋樣變，內(nèi)皮下有較多吞噬脂質(zhì)的泡沫細(xì)胞； 有 1 例出現(xiàn)纖維斑塊樣改變， 內(nèi)膜增厚， 其中有大量吞噬脂質(zhì)的泡沫細(xì)胞； 其余 12例無異常形態(tài)改變；NT+A組：術(shù)后5周20例中有3例主動(dòng)脈內(nèi)膜呈脂紋樣 變，可見主動(dòng)脈內(nèi)膜脂質(zhì)條紋，內(nèi)膜輕度增厚，其中有吞噬脂質(zhì)的泡沫細(xì)胞；其 余 17

7、 例無異常形態(tài)改變。3各血清學(xué)檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果比較 3.1 各處理組甲狀腺功能比較 3.1.1TSH 水平：(F值時(shí)間因素、分組因素以及時(shí)間因素和分組的交互作用均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 范圍介于80.778⁷50.247之間；Pv 0.001 ）;每個(gè)分組在3個(gè)時(shí)間 點(diǎn)上的兩兩比較：ST組各時(shí)間點(diǎn)TSH水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05 ）; NT組 與NT+A組各時(shí)間點(diǎn)TSH水平手術(shù)后隨時(shí)間延長逐漸升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pv 0.01 ）。3.1.2FT3、FT4水平：ST組各時(shí)間點(diǎn)FT3 FT4水平差異無統(tǒng)計(jì) 學(xué)意義（P> 0.05）;與術(shù)

8、前相比，術(shù)后3周時(shí)NT組和NT+A組FT3 FT4水平 均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t值介于20.239和25.978 ; Pv 0.01 ）;術(shù) 后5周時(shí)NT組NT+A組FT3 FT4均未測(cè)出。3.2血脂水平比較3.2.1時(shí)間、分 組因素的作用以及時(shí)間和分組之間的交互作用：TG TC LDL-C結(jié)果：時(shí)間因素、分組因素及時(shí)間因素和分組的交互作用均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（F值介于3.998²3.687; Pv 0.05）;HDL-C結(jié)果：時(shí)間因素、分組因素以及 時(shí)間因素和分組的交互作用均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.2.2每個(gè)分組在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)上的兩兩比較：ST組：各

9、時(shí)間點(diǎn)TG TCHDL-C LDL-C水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P> 0.05）;NT組：各時(shí)間點(diǎn)TG TC LDL-C水平隨手術(shù)時(shí)間延長逐漸升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pv 0.05 ）;術(shù)后5周HDL-C水平與術(shù)前相比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pv 0.05 ）;NT+A組： 術(shù)后3周和術(shù)后5周TG水平均與術(shù)前明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pv 0.05 ）;術(shù)后3周LDL-C水平與術(shù)前相比有明顯差異（Pv 0.05 ）。其余各項(xiàng)結(jié)果比較，差 異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05 ）。3.3血清NO ET-1水平比較3.3.1時(shí)間因素、 分組因素及時(shí)間因素和分組的交互作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，

10、（F值范圍介于5.452¹33.765 之間; P v0.01）。3.3.2每個(gè)分組在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)上的兩兩比較：S T組：術(shù)后3周和術(shù)后5周NO水平與術(shù)前相比明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PV 0.05 );術(shù)后5周ET-1 水平與術(shù)前和術(shù)后3周相比明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PV 0.05 )。NT 組：各時(shí)間點(diǎn)NO水平手術(shù)后隨時(shí)間延長逐漸降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PV0.01 );術(shù)后 3周和術(shù)后 5周 ET-1 水平與術(shù)前相比明顯升高， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PV 0.01 )。N T+A組各時(shí)間點(diǎn)NOET-1水平差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>

11、0.05 )。4免疫組化各檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果比較 4.1eNOS ET-1的表達(dá)結(jié)果：eNOS表達(dá)主要 見于ST組和NT+A組動(dòng)脈切片，而NT組只有少量表達(dá)或不表達(dá)；ET-1表達(dá)主要 見于NT組和NT+A組，而ST組只有少量表達(dá)或不表達(dá)。4.2eNOS ET-1的統(tǒng)計(jì) 結(jié)果 4.2.1 多個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)：各處理組 eNOS、ET-1 結(jié)果比較差異均有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(H=10.198和H=13.572, Pv0.01 )。4.2.2兩個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)檢 驗(yàn)：與ST組比較，NT組eNOS表達(dá)明顯降低、ET-1表達(dá)明顯升高，差異均有統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義( Z=-3.087 和 Z=-3.722 ， Pv0.01 )。其余各項(xiàng)結(jié)果比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P>0.05)。 5甲狀腺放射顯像： 與ST組比較，術(shù)后3周NT組和NT+A組甲狀腺顯像明顯減低；術(shù)后5周NT組和 NT+A組