生物選修一專題二復習題

1、學習必備歡迎下載專題 2 微生物的培養(yǎng)與應用微生物的實驗室培養(yǎng)：微生物需要的五大類營養(yǎng)物質：碳源、氮源、生長因子、無機鹽和水，另外還需要滿足微生物生長對 pH、特殊營養(yǎng)物質（如 : 生長因子）以及氧氣的要求1. 培養(yǎng)基：即人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求配制出供其生長繁殖的基質2. 培養(yǎng)基種類劃分標準培養(yǎng)基種類特點用途液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產狀態(tài)固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂微生物分離、鑒定等培養(yǎng)基中加入某種化學物質，用來抑制不培養(yǎng)和分離出特定微生物( 如分離酵母菌用途選擇培養(yǎng)基需要的微生物的生和霉菌，可以在培養(yǎng)基中加入青霉素)長，促進所需要的微生物的生長根據微生物的代謝特鑒別不同種類的微生

2、物，如用伊紅美藍用途鑒別培養(yǎng)基點，在培養(yǎng)基中加入培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否含有某種指示劑或化學藥大腸桿菌 ( 若有，則菌落呈深紫色并帶有品金屬光澤 )3. 營養(yǎng)構成營養(yǎng)定義作用主要來源物質能提供碳元素的構成生物體的物質，異養(yǎng)生物的能無機物： CO2、 NaHCO3碳源有機物：糖類、脂肪酸、石油、花物質源物質生粉餅等氮源能提供氮元素的合成蛋白質、核酸以及含氮代謝產無機物： N2、 NH3、氨鹽、硝酸鹽物質物有機物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生長生長不可缺少的酶和核酸的成分維生素、氨基酸、堿基等因子微量有機物水和無水不僅是優(yōu)良溶劑，而且可維持生外界攝入物大分子的穩(wěn)定；無機鹽是細胞內機鹽成分和調節(jié)物

3、質注意：(1) 微生物最常利用的碳源是糖類 ( 特別是葡萄糖 ) ，常利用的氮源是氨鹽、硝酸鹽。(2) 在微生物所需要的化合物中需要量最大的是碳源。(3) 微生物之所以需要補充生長因子， 是由于缺乏合成這些物質所需要的酶或合成能力有限。4. 配制原則目的明確：根據微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源以CO2碳源異養(yǎng)型：有機碳源營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當學習必備歡迎下載適宜的pH 值：加入緩沖劑（細菌偏堿，真菌偏酸）二. 無菌技術：防止外來雜菌的污染1. 消毒與滅菌：結果常用的方法僅殺死物體表面或內部一部分對人煮沸消毒法、 巴氏消毒法、 紫外線消毒體有害的微生物( 不包括芽孢和孢或化

4、學藥物消毒法子 )殺死物體內外所有的微生物，包括芽 灼燒滅菌、 干熱滅菌、 高壓蒸汽滅滅菌菌孢和孢子2. 無菌范圍：實驗前應對操作空間、操作人員消毒，對所有器具和培養(yǎng)基滅菌。實驗進行時需在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)操作，另外要避免已滅菌處理材料再次污染。常用的消毒方法和滅菌方法（酒精消毒時，70%的酒精殺菌效果最好，原因是：濃度過高，使菌體表面蛋白質凝固成一層保護膜，乙醇分子不能滲入其中；濃度過低，殺菌力減弱。）接種環(huán)灼燒滅菌牛 奶巴氏消毒雙 手化學消毒培養(yǎng)基干熱滅菌培養(yǎng)皿紫外線消毒空 氣高壓蒸氣滅菌三、微生物實驗室培養(yǎng)1、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基步驟：計算稱量溶化滅菌倒平板思考：培養(yǎng)基的制作是否

5、合格？如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 天后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備2、微生物純化的原理及方法：原理： 在 固體培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成單個，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細菌菌落。接種方法：，要求無菌操作。（ 1） 平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體，這就是菌落。( 劃 3 個平板 1 個不劃線空白對照)注意事項：(1) 第一次劃線及每次劃線之前都需灼燒接種環(huán)進行滅菌，劃線操作結束仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表

6、：第一次灼燒避免接種環(huán)上可能目的存在的微生物污染培養(yǎng)物每次劃線之前灼燒劃線結束后灼燒殺死上次劃線結束后接種環(huán)殺死接種環(huán)上殘留的上殘留的菌種，保證每次劃菌種，避免細菌污染線的菌種都來自上次劃線的環(huán)境和感染操作者末端學習必備歡迎下載(2) 灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免因溫度太高殺死菌種。(3) 劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。(4) 劃線用力要大小適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。(2).稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面， 進行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單

7、個的菌落。( 各梯度分別涂布3 個平板 1 個不涂布作空白對照)純化培養(yǎng)： 將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基放入37恒溫箱中培養(yǎng)觀察并記錄菌種保藏：短期保存：固體斜面培養(yǎng)基上4保藏，缺點是菌種易被污染或產生變異。長期保存：采用甘油管藏法 20冷凍箱中保藏。12h 24h 后，菌種純化案例：大腸桿菌的純化培養(yǎng)（見課本）做一題 例 1如下所示為培養(yǎng)某種微生物的培養(yǎng)基的配方，請回答：成分含量NaNO33 gK2HPO41 gKCl0 5 gMgSO4·7H2O0 5 gFeSO40 01 g(CH2O)30 gH2O1 000 mL青霉素0 1 萬單位(1) 依物理狀態(tài)，該培養(yǎng)基屬于

8、_培養(yǎng)基；依用途劃分，則屬于 _培養(yǎng)基。(2) 根據培養(yǎng)基的配方可判斷出，該培養(yǎng)基所培養(yǎng)微生物的同化作用的類型是_，培養(yǎng)的微生物可能是_。(3) 該培養(yǎng)基中的碳源是 _。不論何種培養(yǎng)基，在各成分都溶化后分裝前，要進行的是_和 _；倒平板時， 一般需冷卻至 _左右，并且要在 _附近操作。(4) 若用該培養(yǎng)液培養(yǎng)纖維素分解菌，應除去的物質是_ ，至少應加入的物質是_，為檢測纖維素分解菌的存在與否還應加入_，形成 _色復合物， 若產生 _，則證明有纖維素分解菌存在。2右圖是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序為12345。下列操作方法正確的是()A需操作前將接種環(huán)放在火焰旁灼燒滅菌即可B劃線操作需在火焰

9、上進行C在 5 區(qū)域中才可以得到所需菌落D在 12345 區(qū)域中畫線前后都要對接種環(huán)滅菌學習必備歡迎下載微生物應用：目的微生物的篩選其相關技術廣泛應用于微生物實驗室培養(yǎng)及發(fā)酵工業(yè)生產實踐中，本考點也常作為熱點內容呈現在各地高考試卷中，考查點著重于選擇培養(yǎng)基的制備、目標微生物的分離流程、對照實驗的設置篩選思路：要尋找所需目的菌株，需要根據對生存環(huán)境的要求，到相應的環(huán)境中去尋找篩選原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件，同時抑制或阻止其他微生物的生長。篩選方法： 篩選目的菌株就是利用選擇性培養(yǎng)基，對微生物進行選擇培養(yǎng)，從而獲得所需微生物。1幾種典型微生物的篩選方法(1) 培養(yǎng)基中加入青霉素可以分離

10、出酵母菌和霉菌。(2) 培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。(3) 培養(yǎng)基中缺乏氮源時， 可以分離固氮微生物， 因為非固氮微生物不能在此培養(yǎng)基上生存。(4) 當培養(yǎng)基的某種營養(yǎng)成分為特定化學成分時，也具有分離效果。 如當石油是唯一碳源時，可以抑制不能利用石油的微生物的生長， 使能夠利用石油的微生物生存， 達到分離能消除石油污染的微生物的目的。(5) 改變微生物的培養(yǎng)條件，也可以達到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到耐高溫的微生物。2微生物篩選過程中必要的兩種對照培養(yǎng)基及其作用對照組作用現象結論未接種有無雜菌污染的未接種的培養(yǎng)皿中無菌落生長未被雜菌污染培養(yǎng)基判斷接種

11、的牛肉膏選擇培養(yǎng)基篩選牛肉膏培養(yǎng)基上的菌落數大于選擇選擇培養(yǎng)基具有蛋白胨作用的確認培養(yǎng)基上的數目篩選作用培養(yǎng)基 關鍵一點 即使使用了選擇培養(yǎng)基，所得到的微生物也未必全為“目標微生物”，因此，常需對選擇培養(yǎng)基中菌落作進一步鑒定。篩選實例：一、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(1) 分離原理：土壤中細菌之所以能分解尿素，是由于它們能合成，這種物質在把尿素分解成無機物的過程中起作用。使用以為唯一氮源的培養(yǎng)基能促進的細菌的生長和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生長，從而分離出目的菌2) 統(tǒng)計菌落數目：統(tǒng)計樣品中的活菌一般用稀釋涂布平板法。(3) 實驗流程：土壤取樣 樣品稀釋 取樣涂布 微生物培養(yǎng) 觀察并

12、記錄結果 細菌計數（4）、對分離的菌種的鑒定學習必備歡迎下載在細菌分解尿素的化學反應中， 細菌合成的 _脲酶 _將尿素分解成了培養(yǎng)基的堿性 _增強 _， PH_升高 _。因此，我們可以通過檢測培養(yǎng)基斷該化學反應是否發(fā)生。_氨 _。氨會使_PH_變化來判在以 _尿素 _為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入PH升高，指示劑將變 紅 ，說明該細菌能夠_酚紅 _指示劑。培養(yǎng)某種細菌后，如果_分解尿素 _ 。二、分解纖維素的微生物的分離1纖維素酶:是一種復合酶， 它包括C 酶、C 酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成1x纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。2纖維素分解菌的篩選原理(1) 篩選方法 : 篩選纖

13、維素分解菌的方法是 _ 該方法可以通過 _反應直接篩選。培養(yǎng)基：是以為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。(2) 其原理是： 剛果紅可以與纖維素形成 _，當纖維素被 _分解后， 紅色復合物無法形成， 出現以 _ 為中心的 _，我們可以通過 _來篩選纖維素分解菌?！举Y料三】剛果紅染色法方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進行顏色反應方法二：在倒平板時就加入剛果紅3. 分離分解纖維素的微生物的實驗流程（ 1）土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產生透明圈的菌落。(2) 選擇培養(yǎng)的目的： 增加纖維素分解菌的濃度， 確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。(3) 涉及到的微生物技術主要有：

14、培養(yǎng)基的制作、無菌操作、稀釋涂布平板法、選擇培養(yǎng)基的作用、土壤取樣等。做一題 例 2從自然菌樣篩選較理想生產菌種的一般步驟是：采集菌樣富集培養(yǎng)純種分離性能測定。(1) 不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是從合適的環(huán)境中采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。培養(yǎng)嗜鹽菌的菌樣應從_環(huán)境中采集。(2) 富集培養(yǎng)指創(chuàng)設僅適合待分離微生物旺盛生長的特定環(huán)境條件，使其數量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對產耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應選擇_ 的培養(yǎng)基，并在_條件下培養(yǎng)。(3) 下面兩圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，請分析接種的具體方法。獲得圖 A 效果

15、的接種方法是 _ ，獲得圖 B 效果的接種方法是 _ 。(4) 配制培養(yǎng)基時各種成分在溶化后分裝前必須進行_ ，接種前要進行_ ，在整個微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在 _ 微生物的數量測定條件下進行。本考點內容在生物技術實踐中占有比較重要的地位， 有關特定微生物的數量測定廣泛應用于食品及水質檢測等實踐中， 具重要的應用價值， 近年高考常將微生物計數與微生物培養(yǎng)及篩選綜合命題學習必備歡迎下載微生物的數量測定1 實驗流程2 統(tǒng)計菌落數目的方法(1) 顯微鏡直接計數法：原理：利用特定細菌計數板或血細胞計數板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數量。方法：用計數板計數。缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。

16、(2) 間接計數法 ( 活菌計數法 ) ：原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。操作：為了保證結果準確，一般選擇菌落數在30 300 的平板進行計數。計算公式： 每克樣品中的菌株數( C÷ V) × M，其中 C 代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數， V 代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL) ，M代表稀釋倍數。操作提示(1) 將待測樣品經一系列10 倍梯度稀釋，然后選擇3 個稀釋度的菌液，分別取0.1 mL 接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計數菌落數。(2) 為使結果接近真實值，可將同一稀釋度菌液加到3 個或 3 個以上的平板上，經涂布、培養(yǎng)，計算出菌落平均數。 關鍵一點 統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數目低。這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此，統(tǒng)計結果用菌落數而不是活菌數來表示。做一做 例 3急性腸胃炎、手足口病分別是由細菌和病毒通過消化道進入人體導致的。因此檢驗飲用水的細菌含量和病毒含量是有效監(jiān)控疾病發(fā)生的必要措施， 請回答下列與檢驗飲用水有關的問題：(1) 檢驗大腸桿菌的含量時，通常將水樣進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的