06實驗四人類X小體、Y小體檢測

1、實驗四實驗四 人類人類x小體、小體、y小體檢測小體檢測 一、實驗目的一、實驗目的 v掌握掌握x小體、小體、y小體的玻片標片制作方法。小體的玻片標片制作方法。v繪制繪制x小體、小體、y小體形態(tài)特征及所在部位。小體形態(tài)特征及所在部位。v鑒定個體的性別，為進一步研究人類染色體畸鑒定個體的性別，為進一步研究人類染色體畸變與疾病的關系提供基礎方法、為遺傳病臨床變與疾病的關系提供基礎方法、為遺傳病臨床診斷提供參考。診斷提供參考。 二、實驗原理二、實驗原理 v1949年年barr和和bertran在研究貓的間期神經細胞時，發(fā)現雌貓體細胞核在研究貓的間期神經細胞時，發(fā)現雌貓體細胞核膜邊緣有一個可被堿性染料染色

2、的小體而雄貓沒有。后來發(fā)現人類正常膜邊緣有一個可被堿性染料染色的小體而雄貓沒有。后來發(fā)現人類正常女性口腔上皮、陰道上皮、皮膚、羊水等的細胞中都有一個這樣的小體，女性口腔上皮、陰道上皮、皮膚、羊水等的細胞中都有一個這樣的小體，繼而有人進一步發(fā)現所有哺乳動物雌體細胞中都有同樣的一個小體。一繼而有人進一步發(fā)現所有哺乳動物雌體細胞中都有同樣的一個小體。一般認為這種小體是兩個般認為這種小體是兩個x染色體中的一個在間期發(fā)生異固縮形成的，故染色體中的一個在間期發(fā)生異固縮形成的，故而將其稱為而將其稱為x小體，小體，x染色質，又稱為染色質，又稱為barr小體。小體。barr小體出現在哺乳小體出現在哺乳動物雌性個

3、體細胞的細胞核膜邊緣，這主要是因為這條染色體處在失活動物雌性個體細胞的細胞核膜邊緣，這主要是因為這條染色體處在失活狀態(tài)所致，狀態(tài)所致，morishima等利用放射性標記的方法證實了失活狀態(tài)的性染等利用放射性標記的方法證實了失活狀態(tài)的性染色體與其他異染色質（色體與其他異染色質（heterochromatin）一樣，在）一樣，在dna復制時總落后復制時總落后于其他常染色質，且大多出現在核膜邊緣。性染色質的數目是于其他常染色質，且大多出現在核膜邊緣。性染色質的數目是x染色體染色體數減數減1。故可以根據。故可以根據x小體的有無、數目來鑒定胎兒的性別和性別畸形。小體的有無、數目來鑒定胎兒的性別和性別畸形

4、。vy小體是人類男性體細胞中小體是人類男性體細胞中y染色體長臂末端顯現的明亮小體，是由螢染色體長臂末端顯現的明亮小體，是由螢光染料染色后顯示的螢光所致。因而稱為光染料染色后顯示的螢光所致。因而稱為y小體或小體或y染色質。亦可根據染色質。亦可根據y小體的有無、數目鑒定胎兒的性別和性別畸形。小體的有無、數目鑒定胎兒的性別和性別畸形。 三、實驗材料三、實驗材料 v口腔粘膜（男、女）、發(fā)根細胞（女）口腔粘膜（男、女）、發(fā)根細胞（女） 四、實驗器具和藥品四、實驗器具和藥品 v1.器具：普通顯微鏡、熒光顯微鏡、恒溫水浴鍋、載玻片、器具：普通顯微鏡、熒光顯微鏡、恒溫水浴鍋、載玻片、蓋玻片、鑷子、牙簽、濾紙、

5、紗布等。蓋玻片、鑷子、牙簽、濾紙、紗布等。v2.藥品：藥品：95%乙醇、乙醚、改良堿性品紅、鹽酸喹吖、乙醇、乙醚、改良堿性品紅、鹽酸喹吖、macllvaine氏緩沖液、石蠟。氏緩沖液、石蠟。1x小體的觀察小體的觀察 v取材取材:受檢查者用水漱口數次，盡可能除去細菌和食物殘渣；用潔凈的牙簽從口受檢查者用水漱口數次，盡可能除去細菌和食物殘渣；用潔凈的牙簽從口腔兩側頰部刮取粘膜，第一次刮取物棄去，將第二次、第三次刮取物涂在干凈腔兩側頰部刮取粘膜，第一次刮取物棄去，將第二次、第三次刮取物涂在干凈的載玻片上。的載玻片上。v固定固定:滴加固定液（滴加固定液（95%乙醇乙醇:乙醚乙醚=1:1或直接用乙醇）固

6、定或直接用乙醇）固定2030min，空氣干，空氣干燥。燥。v染色制片染色制片:滴加滴加12滴改良品紅于室溫下染色滴改良品紅于室溫下染色1020min（勿使干燥），加上蓋（勿使干燥），加上蓋片，墊上濾紙用手指輕輕加壓即可。片，墊上濾紙用手指輕輕加壓即可。v鏡檢鏡檢：低倍鏡下計數：低倍鏡下計數100個核膜完整，細胞不重疊，無核固縮的細胞；并在高個核膜完整，細胞不重疊，無核固縮的細胞；并在高倍或油鏡下觀察。倍或油鏡下觀察。v若使用女性發(fā)根細胞，需選用帶有毛囊的頭發(fā)（約若使用女性發(fā)根細胞，需選用帶有毛囊的頭發(fā)（約2cm長），再加一滴染液后長），再加一滴染液后加上蓋玻片，灑精燈上微熱，靜置加上蓋玻片，灑

7、精燈上微熱，靜置5min，后蓋一濾紙壓片。，后蓋一濾紙壓片。 五、實驗步驟五、實驗步驟人口腔人口腔x小體小體x小體的形狀小體的形狀2. y小體的觀察小體的觀察 v取材固定：取材固定： v染色制片：制好的涂片放入固定液（染色制片：制好的涂片放入固定液（1份份95%乙醇和乙醇和1份乙醚）份乙醚）固定固定1530min；95%乙醇處理乙醇處理20min；0.5%二鹽酸喹吖水二鹽酸喹吖水溶液染色溶液染色10min，自來水，自來水1min，然后加，然后加12滴滴macilvaine氏氏緩沖液（緩沖液（ph5.48.0），覆以蓋片。），覆以蓋片。 v熒光顯微鏡檢查：用低倍鏡，再用高倍鏡或油鏡觀察。整個熒光

8、顯微鏡檢查：用低倍鏡，再用高倍鏡或油鏡觀察。整個細胞發(fā)出熒光者不計。細胞發(fā)出熒光者不計。六、實驗結果六、實驗結果 1.x小體：小體：v油鏡下可見油鏡下可見x小體為一致密小體為一致密的濃染小體。輪廓清晰，約的濃染小體。輪廓清晰，約1um，常附著于核膜邊緣或，常附著于核膜邊緣或靠邊內側，其形態(tài)有三角形、靠邊內側，其形態(tài)有三角形、卵形、扁平形等。卵形、扁平形等。v正常女性間期細胞核中正常女性間期細胞核中x小小體比例約體比例約30%50%，男性，男性中則偶爾可見（中則偶爾可見（2%），且），且不典型。不典型。六、實驗結果六、實驗結果 v2y小體：熒光顯微鏡下可見細胞核中有發(fā)亮的熒小體：熒光顯微鏡下可見細胞核中有發(fā)亮的熒光小體，直徑光小體，直徑0.30.5um，正常情況下，正常情況下y小體的出小體的出現率為現率為2550%，正常女性無，性異常者，如核型，正常女性無，性異常者，如核型為為47，xyy的個體，可見兩個的個體，可見兩個y小體。小體。 七、作業(yè)及思考題七、作業(yè)及思考題v1.統計統計x小體的頻率，畫小體的頻率，畫23個典型細胞，示個典型細胞，示x小體的形小體的形態(tài)和所處部位。態(tài)和所處部位。v2.計算出現計算出現y小體的細胞頻率。小體的細胞頻率。v3.什么是劑量補償效