實(shí)驗(yàn)二蛋白質(zhì)沉淀變性反應(yīng)PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1實(shí)驗(yàn)二蛋白質(zhì)沉淀變性反應(yīng)實(shí)驗(yàn)二蛋白質(zhì)沉淀變性反應(yīng)1 1、了解使蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定的因素。、了解使蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定的因素。2 2、了解蛋白質(zhì)的可逆沉淀反應(yīng)和不可逆沉淀反應(yīng)。、了解蛋白質(zhì)的可逆沉淀反應(yīng)和不可逆沉淀反應(yīng)。3 3、掌握蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)、變性作用的原理及、掌握蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)、變性作用的原理及 它們的相互關(guān)系。它們的相互關(guān)系。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康牡?頁(yè)/共17頁(yè)維持蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定的因素：維持蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定的因素：水化水化膜膜同種電同種電荷荷外面的親水基團(tuán)結(jié)外面的親水基團(tuán)結(jié)合一層水，形成水合一層水，形成水化膜化膜同種蛋白質(zhì)同種蛋白質(zhì)表面帶有相表面帶有相同電荷同電荷第2

2、頁(yè)/共17頁(yè)破壞水化膜破壞水化膜中和電荷中和電荷使蛋白質(zhì)沉淀使蛋白質(zhì)沉淀的原理的原理聚集體的直徑聚集體的直徑100nm100nm即為不穩(wěn)定的粗分散即為不穩(wěn)定的粗分散系系第3頁(yè)/共17頁(yè)（1 1）鹽析）鹽析（2 2）有機(jī)試劑）有機(jī)試劑（3 3）重金屬鹽）重金屬鹽（4 4）有機(jī)酸）有機(jī)酸（5 5）加熱）加熱 使蛋白質(zhì)沉淀的方法使蛋白質(zhì)沉淀的方法第4頁(yè)/共17頁(yè)常用方法常用方法原理原理常用試劑常用試劑實(shí)用實(shí)用鹽析鹽析破壞蛋白質(zhì)膠體溶液的水化破壞蛋白質(zhì)膠體溶液的水化層和電荷層層和電荷層 (NH (NH4 4) )2 2S0S04 4、NaNa2 2S0S04 4、NaNa3 3P0P04 4、NaCl

3、NaCl、MgS0MgS04 4常用此法來(lái)分離和純常用此法來(lái)分離和純化蛋白質(zhì)?；鞍踪|(zhì)。有機(jī)試劑有機(jī)試劑鹽析鹽析脫水作用；降低水的介電常脫水作用；降低水的介電常數(shù)和蛋白質(zhì)溶解度；蛋白質(zhì)數(shù)和蛋白質(zhì)溶解度；蛋白質(zhì)析出析出乙醇、丙酮、甲醇乙醇、丙酮、甲醇低溫乙醇提取血液中低溫乙醇提取血液中的蛋白質(zhì)組分的蛋白質(zhì)組分強(qiáng)酸、強(qiáng)強(qiáng)酸、強(qiáng)堿沉淀堿沉淀破壞蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)發(fā)生蛋破壞蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)發(fā)生蛋白質(zhì)變性白質(zhì)變性鹽酸鹽酸, , 硫酸硫酸, , 硝酸、氫氧硝酸、氫氧化鈉化鈉 滅活病毒滅活病毒加熱加熱變性變性雞蛋、肉類等加工雞蛋、肉類等加工重金屬鹽重金屬鹽沉淀沉淀變性；生成不溶性鹽變性；生成不溶性鹽Ag+Ag+，

4、Hg2+Hg2+，Cu2+Cu2+和和Pb2+Pb2+臨床上常用蛋清或牛臨床上常用蛋清或牛乳解救誤服重金屬鹽乳解救誤服重金屬鹽的病人的病人有機(jī)酸沉有機(jī)酸沉淀淀生成不溶性鹽生成不溶性鹽苦味酸、鞣酸、三氯醋酸、苦味酸、鞣酸、三氯醋酸、磺基水楊酸等生物堿試劑磺基水楊酸等生物堿試劑沉淀蛋白濾液等沉淀蛋白濾液等第5頁(yè)/共17頁(yè)蛋白質(zhì)沉淀分類蛋白質(zhì)沉淀分類（1 1）可逆沉淀反應(yīng)：）可逆沉淀反應(yīng)：蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)并未發(fā)生蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)并未發(fā)生顯著變化，基本保持原有的性質(zhì)，沉淀因素除去后顯著變化，基本保持原有的性質(zhì)，沉淀因素除去后，能溶于原來(lái)的溶劑中。例如：鹽析、乙醇低溫短，能溶于原來(lái)的溶劑中。例如：鹽

5、析、乙醇低溫短時(shí)作用，可用于蛋白質(zhì)提純。時(shí)作用，可用于蛋白質(zhì)提純。（2 2）不可逆沉淀反應(yīng)：）不可逆沉淀反應(yīng)：蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)、空蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)、空間構(gòu)象遭到破壞，失去原來(lái)的天然性質(zhì)，不再溶間構(gòu)象遭到破壞，失去原來(lái)的天然性質(zhì)，不再溶于原溶劑。例如：加熱、有機(jī)酸反應(yīng)。于原溶劑。例如：加熱、有機(jī)酸反應(yīng)。第6頁(yè)/共17頁(yè)蛋白質(zhì)分蛋白質(zhì)分子表面子表面水化膜水化膜同種電荷同種電荷穩(wěn)定的親水膠穩(wěn)定的親水膠脫水，失去電荷脫水，失去電荷沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)可逆沉淀反應(yīng)可逆沉淀反應(yīng)（不變性沉淀反應(yīng)）（不變性沉淀反應(yīng)）如：鹽析作用如：鹽析作用不可逆沉淀反應(yīng)不可逆沉淀反應(yīng)（變性沉淀反應(yīng)）（變性沉淀反應(yīng)）如：重金屬

6、鹽沉淀作用如：重金屬鹽沉淀作用第7頁(yè)/共17頁(yè)蛋白質(zhì)溶液：取10mL鮮雞蛋清，用蒸餾水稀釋至200ml，攪拌后用2-3層紗布過濾，新鮮配制。加入少量氯化鈉可加速溶解球蛋白。 試劑：飽和硫酸銨溶液，硫酸銨粉，95%乙醇，2%硝酸銀，0.5%乙酸鉛，1%硫酸銅，10%三氯乙酸溶液，5%磺基水楊酸。1 1. . 試劑試劑三、實(shí)驗(yàn)儀器和試劑三、實(shí)驗(yàn)儀器和試劑第8頁(yè)/共17頁(yè)漏斗,濾紙,吸管,試管及試管架,量筒、離心機(jī)等。2 2. . 儀器儀器第9頁(yè)/共17頁(yè)1. 1. 蛋白質(zhì)的可逆反應(yīng)蛋白質(zhì)的可逆反應(yīng)鹽析鹽析步驟步驟現(xiàn)象現(xiàn)象解釋結(jié)論解釋結(jié)論取試管1，加入3mL蛋白質(zhì)氯化鈉溶液和等量的飽和硫酸銨溶液，混

7、勻，靜置10分鐘觀察有無(wú)蛋白質(zhì)（球蛋白）的沉淀倒出上清液于試管2，取試管1中沉淀，加少量蒸餾水觀察沉淀的再溶解往試管2中，加入硫酸銨粉末，邊加邊用玻璃棒攪拌，直至粉末不再溶解，直至飽和觀察有無(wú)沉淀（清蛋白）析出靜置，棄去上清液，取出部分清蛋白沉淀，加少量蒸餾水觀察沉淀的再溶解四、實(shí)驗(yàn)操作四、實(shí)驗(yàn)操作第10頁(yè)/共17頁(yè)2 2. . 蛋白質(zhì)的可逆反應(yīng)蛋白質(zhì)的可逆反應(yīng)乙醇乙醇步驟步驟現(xiàn)象現(xiàn)象解釋結(jié)論解釋結(jié)論取試管1，加入1mL蛋白質(zhì)氯化鈉溶液和21mL95%乙醇觀察有無(wú)蛋白質(zhì)的沉淀靜置，棄去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸餾水觀察沉淀的再溶解第11頁(yè)/共17頁(yè)試管操作現(xiàn)象操作現(xiàn)象試管 11mL蛋白

8、質(zhì)溶液 3-4滴2%硝酸銀溶液過量的硝酸銀 觀 察 有 無(wú)蛋 白 質(zhì) 的沉淀 棄去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸餾水觀察沉淀的再溶解試管 21mL蛋白質(zhì)溶液 1-3滴0.5%乙酸鉛 過量的乙酸鉛觀 察 有 無(wú)蛋 白 質(zhì) 的沉淀?xiàng)壢ド锨逡?，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸餾水觀察沉淀的再溶解試管 31mL蛋白質(zhì)溶液 3-4滴1%硫酸銅過量的硫酸銅 觀 察 有 無(wú)蛋 白 質(zhì) 的沉淀?xiàng)壢ド锨逡?，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸餾水觀察沉淀的再溶解3 3. . 蛋白質(zhì)的不可逆反應(yīng)蛋白質(zhì)的不可逆反應(yīng)重金屬鹽（重金屬鹽（3 3支試管）支試管）第12頁(yè)/共17頁(yè)試管操作現(xiàn)象操作現(xiàn)象試 管 11mL蛋白質(zhì)溶液3滴10%三氯乙酸溶液 觀 察 有 無(wú) 蛋白質(zhì)的沉淀 棄去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸餾水觀察沉淀的再溶解試 管 21mL蛋白質(zhì)溶液3滴5%磺基水楊酸觀 察 有 無(wú) 蛋白質(zhì)的沉淀?xiàng)壢ド锨逡?，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸餾水觀察沉淀的再溶解4 4. . 蛋白質(zhì)的不可逆反應(yīng)蛋白質(zhì)的不可逆反應(yīng)有機(jī)酸（有機(jī)酸（2 2支試管）支試管）第13頁(yè)/共17頁(yè)五、結(jié)果與分析五、結(jié)果與