蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系

1、一、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系一、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 前體與活性蛋白質(zhì)前體與活性蛋白質(zhì) 分子病分子病蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 肌紅蛋白的結(jié)構(gòu)與功能肌紅蛋白的結(jié)構(gòu)與功能 血紅蛋白的結(jié)構(gòu)與功能血紅蛋白的結(jié)構(gòu)與功能 ( (一一) )蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系1.一級(jí)結(jié)構(gòu)一級(jí)結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ) 在生物體內(nèi)，蛋白質(zhì)的多肽鏈一旦被合成后，即在生物體內(nèi)，蛋白質(zhì)的多肽鏈一旦被合成后，即可根據(jù)可根據(jù)一級(jí)結(jié)構(gòu)一級(jí)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)自然折疊和盤(pán)曲，形成一定的特點(diǎn)自然折疊和盤(pán)曲，形成一定的的空間構(gòu)象空間

2、構(gòu)象，特定的空間構(gòu)象主要是由蛋白質(zhì)分子，特定的空間構(gòu)象主要是由蛋白質(zhì)分子中多肽鏈和側(cè)鏈中多肽鏈和側(cè)鏈R R基團(tuán)形成的次級(jí)鍵來(lái)維持的。蛋基團(tuán)形成的次級(jí)鍵來(lái)維持的。蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)決定了它的二級(jí)、三級(jí)結(jié)構(gòu)，即由白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)決定了它的二級(jí)、三級(jí)結(jié)構(gòu)，即由一級(jí)結(jié)構(gòu)可以自動(dòng)地發(fā)展到二、三級(jí)結(jié)構(gòu)。一級(jí)結(jié)構(gòu)可以自動(dòng)地發(fā)展到二、三級(jí)結(jié)構(gòu)。ACDEFGHIKLMNPQRSTVWY一一 級(jí)級(jí) 結(jié)結(jié) 構(gòu)構(gòu)二級(jí)結(jié)構(gòu)二級(jí)結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)三三 級(jí)級(jí) 結(jié)結(jié) 構(gòu)構(gòu)四四 級(jí)級(jí) 結(jié)結(jié) 構(gòu)構(gòu)一級(jí)結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ)一級(jí)結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ) 牛核糖核酸酶的結(jié)牛核糖核酸酶的結(jié)構(gòu)構(gòu)二二硫硫鍵鍵 天然狀態(tài)，天然狀態(tài)，

3、有催化活性有催化活性 尿素、尿素、 -巰基乙醇巰基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巰基乙醇巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無(wú)活性非折疊狀態(tài)，無(wú)活性牛核糖核酸酶牛核糖核酸酶核糖核酸酶核糖核酸酶A變性，酶的三級(jí)結(jié)變性，酶的三級(jí)結(jié)構(gòu)和活性完全喪失，生成含有構(gòu)和活性完全喪失，生成含有8個(gè)巰基的多肽鏈。個(gè)巰基的多肽鏈。 加脲和加脲和巰基乙醇巰基乙醇去除脲和巰基乙醇，去除脲和巰基乙醇，又恢復(fù)到天然狀態(tài)又恢復(fù)到天然狀態(tài)核糖核酸酶核糖核酸酶A變性和復(fù)性變性和復(fù)性 胰島素（胰島素（Insulin）首先合成）首先合成108個(gè)氨基酸的個(gè)氨基酸的前胰島素前胰島素原原（pre-proinsulin），），隨即切去隨即切去N-端的端的2

4、4個(gè)氨基酸信個(gè)氨基酸信號(hào)肽，形成號(hào)肽，形成84個(gè)氨基酸的個(gè)氨基酸的胰島素原胰島素原（proinsulin），），形形成正確的二硫鍵，成正確的二硫鍵，在包裝分泌時(shí)，在包裝分泌時(shí)，A、B鏈之間的鏈之間的33個(gè)個(gè)氨基酸氨基酸C肽肽殘基被切除，才形成殘基被切除，才形成胰島素。胰島素。人工合成的人工合成的胰島素，胰島素，A、B鏈分別合成后，等比例混合后就有活性。鏈分別合成后，等比例混合后就有活性。2.前體前體與與活性蛋白質(zhì)活性蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的關(guān)系一級(jí)結(jié)構(gòu)的關(guān)系胰島素的體內(nèi)合成胰島素的體內(nèi)合成胰島素基因胰島素基因mRNA核糖體核糖體SSSSSSB chainSSSSSSA chain胰島素原胰島素原 9k

5、Da胰島素胰島素 5.5 5.5kDakDaC 肽肽GOLGI分泌顆粒分泌顆粒 血血 液液Zn2+MICROCRYSTALS切割位點(diǎn)切割位點(diǎn)A肽肽B肽肽30 aa33 aa21 aa前胰島素原前胰島素原 11.5 kDaRER600600核苷酸核苷酸C肽肽24 aa信號(hào)肽信號(hào)肽3.蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的種屬差異種屬差異與與分子進(jìn)化分子進(jìn)化 對(duì)于對(duì)于不同種屬來(lái)源不同種屬來(lái)源的的同種蛋白質(zhì)同種蛋白質(zhì)進(jìn)行一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定和比較，進(jìn)行一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定和比較，發(fā)現(xiàn)存在種屬差異，這種差異可能是分子進(jìn)化的結(jié)果，但發(fā)現(xiàn)存在種屬差異，這種差異可能是分子進(jìn)化的結(jié)果，但與與功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)總是有高度的保守性功能相關(guān)

6、的結(jié)構(gòu)總是有高度的保守性。 以細(xì)胞色素以細(xì)胞色素C C為例為例：細(xì)胞色素：細(xì)胞色素C C廣泛存在于真核生物細(xì)胞的廣泛存在于真核生物細(xì)胞的線(xiàn)粒體中，是一種含有血紅素輔基的單鏈蛋白質(zhì)。在生物氧線(xiàn)粒體中，是一種含有血紅素輔基的單鏈蛋白質(zhì)。在生物氧化時(shí)，細(xì)胞色素化時(shí)，細(xì)胞色素C C在呼吸鏈的電子傳遞系統(tǒng)中起傳遞電子的作在呼吸鏈的電子傳遞系統(tǒng)中起傳遞電子的作用，使血紅素上鐵原子的價(jià)數(shù)發(fā)生變化。用，使血紅素上鐵原子的價(jià)數(shù)發(fā)生變化。 細(xì)胞色素細(xì)胞色素c c的一級(jí)結(jié)構(gòu)與生物進(jìn)化的關(guān)系的一級(jí)結(jié)構(gòu)與生物進(jìn)化的關(guān)系n 脊椎動(dòng)物的細(xì)胞色素脊椎動(dòng)物的細(xì)胞色素C C由由l04l04個(gè)氨基酸殘基組成；昆蟲(chóng)有個(gè)氨基酸殘基組成

7、；昆蟲(chóng)有108108個(gè)個(gè)氨基酸殘基組成；植物則有氨基酸殘基組成；植物則有112112個(gè)氨基酸殘基組成。個(gè)氨基酸殘基組成。n 對(duì)不同生物的細(xì)胞色素對(duì)不同生物的細(xì)胞色素C C的一級(jí)結(jié)構(gòu)分析表明，大約有的一級(jí)結(jié)構(gòu)分析表明，大約有2828個(gè)氨個(gè)氨基酸殘基是各種生物共有的，表明這些氨基酸殘基是規(guī)定細(xì)基酸殘基是各種生物共有的，表明這些氨基酸殘基是規(guī)定細(xì)胞色素胞色素C C的生物功能所必需的。其中包括的生物功能所必需的。其中包括第第1414和和1717位上兩個(gè)半位上兩個(gè)半胱氨酸殘基胱氨酸殘基是細(xì)胞色素是細(xì)胞色素C C與輔基血紅素共價(jià)相連的位置；與輔基血紅素共價(jià)相連的位置；第第70-8070-80位上成串的不變

8、氨基酸殘基位上成串的不變氨基酸殘基可能是細(xì)胞色素可能是細(xì)胞色素C C與酶結(jié)合與酶結(jié)合的部位。的部位。在分子進(jìn)化過(guò)程中，細(xì)胞色素在分子進(jìn)化過(guò)程中，細(xì)胞色素C C分子中保持氨基酸殘分子中保持氨基酸殘基不變的區(qū)域稱(chēng)為基不變的區(qū)域稱(chēng)為保守部位保守部位。保守部位的氨基酸都保守部位的氨基酸都是細(xì)胞色素是細(xì)胞色素C C完成其生物學(xué)功能所必需的完成其生物學(xué)功能所必需的。同源蛋白質(zhì)的物種差異與生物進(jìn)化同源蛋白質(zhì)的物種差異與生物進(jìn)化同源蛋白質(zhì)同源蛋白質(zhì)：在生物體中行使相同或相似功能在生物體中行使相同或相似功能的蛋白質(zhì)。的蛋白質(zhì)。 不變殘基不變殘基 可變殘基可變殘基來(lái)自?xún)蓚€(gè)物種的同源蛋白質(zhì)，其序列之間的氨來(lái)自?xún)蓚€(gè)物

9、種的同源蛋白質(zhì)，其序列之間的氨基酸差異數(shù)目與這些物種間的系統(tǒng)差異成比例?；岵町悢?shù)目與這些物種間的系統(tǒng)差異成比例。即在進(jìn)化位置上相差愈遠(yuǎn)，其氨基酸序列差別即在進(jìn)化位置上相差愈遠(yuǎn)，其氨基酸序列差別愈大。愈大。4.蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)與分子病分子病 幾乎所有遺傳病都與蛋白質(zhì)幾乎所有遺傳病都與蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)改變分子結(jié)構(gòu)改變有關(guān)，稱(chēng)之為有關(guān)，稱(chēng)之為分子分子病病。在蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，參與在蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，參與功能活性部位的殘基功能活性部位的殘基或或處于特處于特定構(gòu)象關(guān)鍵部位的殘基定構(gòu)象關(guān)鍵部位的殘基，即使在整個(gè)分子中發(fā)生，即使在整個(gè)分子中發(fā)生一個(gè)殘基的異常一個(gè)殘基的異常，那么該蛋白質(zhì)

10、的功能也會(huì)受到明顯的影響，導(dǎo)致疾病的發(fā)生。那么該蛋白質(zhì)的功能也會(huì)受到明顯的影響，導(dǎo)致疾病的發(fā)生。這這種變異來(lái)源于基因上遺傳信息的突變，所以是可種變異來(lái)源于基因上遺傳信息的突變，所以是可遺傳遺傳的的。鐮刀狀細(xì)胞貧血病鐮刀狀細(xì)胞貧血病-血紅蛋白血紅蛋白 或或 鏈突變鏈突變地中海貧血地中海貧血-血紅蛋白血紅蛋白 或或 鏈缺失鏈缺失 被稱(chēng)之為被稱(chēng)之為“分子病分子病”的的鐮刀狀細(xì)胞貧血鐮刀狀細(xì)胞貧血僅僅是血紅蛋白（僅僅是血紅蛋白（HbHb）亞基亞基574574個(gè)氨基酸殘基中，一個(gè)氨基酸殘基即個(gè)氨基酸殘基中，一個(gè)氨基酸殘基即N N端的第端的第6 6位的谷位的谷氨酸被纈氨酸取代，發(fā)生了變異所造成的。突變導(dǎo)致

11、本是可溶氨酸被纈氨酸取代，發(fā)生了變異所造成的。突變導(dǎo)致本是可溶性的血紅蛋白聚集成絲，相互粘著，導(dǎo)致紅細(xì)胞變形而成鐮刀性的血紅蛋白聚集成絲，相互粘著，導(dǎo)致紅細(xì)胞變形而成鐮刀狀，極易破碎導(dǎo)致貧血。狀，極易破碎導(dǎo)致貧血。鐮刀狀細(xì)胞貧血病鐮刀狀細(xì)胞貧血病血紅蛋白分子病血紅蛋白分子病地中海貧血地中海貧血產(chǎn)生原因：產(chǎn)生原因：v 缺失一個(gè)或多個(gè)編碼血紅蛋白鏈的基因；缺失一個(gè)或多個(gè)編碼血紅蛋白鏈的基因；v 一個(gè)或多個(gè)基因無(wú)義突變縮短的蛋白鏈；發(fā)生移碼突一個(gè)或多個(gè)基因無(wú)義突變縮短的蛋白鏈；發(fā)生移碼突變不能合成正確的多肽鏈；變不能合成正確的多肽鏈；v 編碼區(qū)外突變轉(zhuǎn)錄阻斷或編碼區(qū)外突變轉(zhuǎn)錄阻斷或mRNA不能正確加

12、工。不能正確加工。類(lèi)型：類(lèi)型： -地中海貧血地中海貧血 -地中海貧血地中海貧血( (二二) )蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 蛋白質(zhì)多種多樣的蛋白質(zhì)多種多樣的功能功能與各種蛋白質(zhì)特定的與各種蛋白質(zhì)特定的空間構(gòu)象空間構(gòu)象密切密切相關(guān)，蛋白質(zhì)的相關(guān)，蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象是其功能活性的基礎(chǔ)空間構(gòu)象是其功能活性的基礎(chǔ)，構(gòu)象發(fā)生變化，構(gòu)象發(fā)生變化，其功能活性也隨之改變。蛋白質(zhì)變性時(shí)，由于其空間構(gòu)象被破其功能活性也隨之改變。蛋白質(zhì)變性時(shí)，由于其空間構(gòu)象被破壞，故引起功能活性喪失，變性蛋白質(zhì)在復(fù)性后，構(gòu)象復(fù)原，壞，故引起功能活性喪失，變性蛋白質(zhì)在復(fù)性后，構(gòu)象復(fù)原，活性即能恢復(fù)。活性即能恢復(fù)

13、。 在生物體內(nèi)，當(dāng)某種物質(zhì)特異地與蛋白質(zhì)分子的某個(gè)部位結(jié)在生物體內(nèi)，當(dāng)某種物質(zhì)特異地與蛋白質(zhì)分子的某個(gè)部位結(jié)合，觸發(fā)該蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生一定變化，從而導(dǎo)致其功能活性合，觸發(fā)該蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生一定變化，從而導(dǎo)致其功能活性的變化，這種現(xiàn)象稱(chēng)為蛋白質(zhì)的的變化，這種現(xiàn)象稱(chēng)為蛋白質(zhì)的別構(gòu)效應(yīng)別構(gòu)效應(yīng)( (allosteryallostery) )。蛋白蛋白質(zhì)質(zhì)( (或酶或酶) )的別構(gòu)效應(yīng)，在生物體內(nèi)普遍存在，這對(duì)物質(zhì)代謝的的別構(gòu)效應(yīng)，在生物體內(nèi)普遍存在，這對(duì)物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)和某些生理功能的變化都是十分重要的。調(diào)節(jié)和某些生理功能的變化都是十分重要的。肌紅蛋白：主要肌紅蛋白：主要肌細(xì)胞肌細(xì)胞貯存和貯存和分配氧

14、分配氧的蛋白質(zhì)。肌紅蛋白是的蛋白質(zhì)。肌紅蛋白是由一由一條多肽鏈條多肽鏈和和一個(gè)輔基血紅一個(gè)輔基血紅素（原卟啉素（原卟啉IX 和和Fe的絡(luò)合物）的絡(luò)合物）組成，除去血紅素的脫輔基肌組成，除去血紅素的脫輔基肌紅蛋白稱(chēng)珠蛋白（紅蛋白稱(chēng)珠蛋白（globin），），它和血紅蛋白的亞基在氨基酸它和血紅蛋白的亞基在氨基酸序列上有明顯的同源性，構(gòu)象序列上有明顯的同源性，構(gòu)象和功能也相似，由和功能也相似，由8個(gè)個(gè)-螺旋螺旋組成。組成。氧氣與肌紅蛋白的結(jié)合氧氣與肌紅蛋白的結(jié)合nO2與與CO競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合血紅蛋白和肌紅蛋白；競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合血紅蛋白和肌紅蛋白；n空氣中空氣中CO的含量達(dá)到的含量達(dá)到0.06-0.08%即有中毒即有

15、中毒的危險(xiǎn)，達(dá)到的危險(xiǎn)，達(dá)到0.1%時(shí)則能窒息死亡；時(shí)則能窒息死亡；nO2的結(jié)合改變肌紅蛋白的構(gòu)象，但對(duì)肌紅的結(jié)合改變肌紅蛋白的構(gòu)象，但對(duì)肌紅蛋白的功能影響不大。蛋白的功能影響不大。構(gòu)型（構(gòu)型（configurationconfiguration）：）：分分L L、D D型，改變時(shí)有共價(jià)型，改變時(shí)有共價(jià)鍵的斷裂。鍵的斷裂。構(gòu)象（構(gòu)象（conformationconformation）：）：改變無(wú)須有共價(jià)鍵的斷裂，改變無(wú)須有共價(jià)鍵的斷裂，只是次級(jí)鍵斷裂。只是次級(jí)鍵斷裂。2、血紅蛋白、血紅蛋白(hemoglobin,Hb)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)與功能與功能 4 4個(gè)個(gè)亞基亞基組成，組成，兩兩相同，每個(gè)亞兩兩相同

16、，每個(gè)亞基都有一個(gè)血紅素基都有一個(gè)血紅素基和一個(gè)氧結(jié)合部基和一個(gè)氧結(jié)合部位。位。 HbHb分子分子近似球形近似球形，4 4個(gè)亞基占據(jù)相當(dāng)個(gè)亞基占據(jù)相當(dāng)于四面體的四個(gè)頂于四面體的四個(gè)頂角。角。輔基血紅素（輔基血紅素（heme）n氧與蛋白不能直接結(jié)合；氧與蛋白不能直接結(jié)合；n借助過(guò)渡金屬的低氧態(tài)（借助過(guò)渡金屬的低氧態(tài)（Fe2）和有機(jī)分子原卟啉）和有機(jī)分子原卟啉IX；n卟啉化合物著色力強(qiáng)，血紅蛋白的鐵卟啉使血液呈卟啉化合物著色力強(qiáng)，血紅蛋白的鐵卟啉使血液呈紅色；紅色；n原卟啉原卟啉IX和和Fe的絡(luò)合物成為血紅素（的絡(luò)合物成為血紅素（heme）。）。O2 血紅素與氧結(jié)合血紅素與氧結(jié)合后，鐵原子半徑變后

17、，鐵原子半徑變小，就能進(jìn)入卟啉小，就能進(jìn)入卟啉環(huán)的小孔中，繼而環(huán)的小孔中，繼而引起肽鏈位置的變引起肽鏈位置的變動(dòng)。動(dòng)。卟啉平面卟啉平面卟啉平面卟啉平面n HbHb與與MbMb一樣能可逆地與一樣能可逆地與O O2 2結(jié)合，結(jié)合，HbHb與與O O2 2結(jié)合后稱(chēng)為結(jié)合后稱(chēng)為氧合氧合HbHb。氧合氧合HbHb占總占總HbHb的百分?jǐn)?shù)（稱(chēng)的百分?jǐn)?shù)（稱(chēng)百分飽和度百分飽和度）隨）隨O O2 2濃度變化而濃度變化而改變。改變。n 血紅蛋白存在兩種主要血紅蛋白存在兩種主要構(gòu)象構(gòu)象態(tài)：態(tài)：T T態(tài)態(tài)（tense statetense state）和和R R態(tài)態(tài)（relaxed staterelaxed stat

18、e），T T態(tài)和態(tài)和R R態(tài)之間能互換，而且均能結(jié)合態(tài)之間能互換，而且均能結(jié)合氧，但氧，但R R態(tài)的結(jié)合能力要強(qiáng)。態(tài)的結(jié)合能力要強(qiáng)。n 作為作為T(mén) T態(tài)的去氧血紅蛋白有專(zhuān)一性的氫鍵和鹽橋起著穩(wěn)定作態(tài)的去氧血紅蛋白有專(zhuān)一性的氫鍵和鹽橋起著穩(wěn)定作用，用，4 4個(gè)亞基的個(gè)亞基的C C末端處于受束縛的狀態(tài)。末端處于受束縛的狀態(tài)。n 血紅蛋白除運(yùn)輸氧外，還運(yùn)輸血紅蛋白除運(yùn)輸氧外，還運(yùn)輸H和和CO2。血紅蛋白的構(gòu)象變化與結(jié)合氧血紅蛋白的構(gòu)象變化與結(jié)合氧 肌紅蛋白與血紅蛋白結(jié)構(gòu)和功能的比較肌紅蛋白與血紅蛋白結(jié)構(gòu)和功能的比較結(jié)構(gòu) 共同點(diǎn) 差異： 肌紅蛋白只有三級(jí)結(jié)構(gòu)，具有一條多肽鏈，血紅蛋白具有四 級(jí)結(jié)構(gòu)，含

19、有四個(gè)亞基功能共同點(diǎn)：均可與氧可逆結(jié)合差異： 肌紅蛋白只能貯備氧，而血紅蛋白可以運(yùn)輸氧，此外也可運(yùn)輸H+和CO2肌紅蛋白肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線(xiàn)的氧解離曲線(xiàn) 血紅蛋白氧血紅蛋白氧合曲線(xiàn)為合曲線(xiàn)為 S 形形 肌紅蛋白肌紅蛋白氧合曲線(xiàn)為氧合曲線(xiàn)為雙雙曲線(xiàn)形曲線(xiàn)形HbHb T T態(tài)和態(tài)和R R態(tài)互變態(tài)互變HbHb氧合與脫氧構(gòu)象轉(zhuǎn)換示意氧合與脫氧構(gòu)象轉(zhuǎn)換示意Hb與與O2的結(jié)合或解離曲線(xiàn)呈的結(jié)合或解離曲線(xiàn)呈S型與型與Hb的的變構(gòu)效應(yīng)有關(guān)。變構(gòu)效應(yīng)有關(guān)。n Hb與與O2結(jié)合鹽鍵斷裂，結(jié)合鹽鍵斷裂，R型型n Hb與與O2解離鹽鍵形成，解離鹽鍵形成，T型型n T型對(duì)型對(duì)O2親和

20、力小。親和力小。n R型對(duì)型對(duì)O2親和力大。親和力大。協(xié)同效應(yīng)協(xié)同效應(yīng)( (cooperativitycooperativity) ) u 一個(gè)一個(gè)寡聚體蛋白質(zhì)寡聚體蛋白質(zhì)的一個(gè)亞基與其配體結(jié)合后，能影響此的一個(gè)亞基與其配體結(jié)合后，能影響此寡聚體中另一個(gè)亞基與配體結(jié)合能力的現(xiàn)象，稱(chēng)為寡聚體中另一個(gè)亞基與配體結(jié)合能力的現(xiàn)象，稱(chēng)為協(xié)同效協(xié)同效應(yīng)應(yīng)。 如果是促進(jìn)作用則稱(chēng)為如果是促進(jìn)作用則稱(chēng)為正協(xié)同效應(yīng)正協(xié)同效應(yīng)(positive (positive cooperativitycooperativity) )如果是抑制作用則稱(chēng)為如果是抑制作用則稱(chēng)為負(fù)協(xié)同效應(yīng)負(fù)協(xié)同效應(yīng)(negative (negati

21、ve cooperativitycooperativity) )u 血紅蛋白的氧合具有血紅蛋白的氧合具有正協(xié)同性同促效應(yīng)正協(xié)同性同促效應(yīng)，也即一個(gè)，也即一個(gè)O2的結(jié)的結(jié)合增加同一合增加同一Hb分子中其余空的氧結(jié)合部位對(duì)分子中其余空的氧結(jié)合部位對(duì)O2的親和力。的親和力。變構(gòu)效應(yīng)變構(gòu)效應(yīng)(allosteric effect) 蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的改變伴隨其功能的變化，稱(chēng)為蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的改變伴隨其功能的變化，稱(chēng)為變構(gòu)效應(yīng)變構(gòu)效應(yīng)。 HbHb與與O O2 2結(jié)合后，結(jié)合后，HbHb的構(gòu)象發(fā)生變化，這類(lèi)變化稱(chēng)的構(gòu)象發(fā)生變化，這類(lèi)變化稱(chēng)為為變構(gòu)效應(yīng)變構(gòu)效應(yīng)，即通過(guò)構(gòu)象變化影響蛋白質(zhì)的功能，即通過(guò)構(gòu)象變化影響

22、蛋白質(zhì)的功能，HbHb稱(chēng)為稱(chēng)為變構(gòu)蛋白變構(gòu)蛋白（allostericallosteric protein protein）。）。(R)relaxed state(T) tense state 血液中血液中O2的的運(yùn)輸運(yùn)輸 ( (HbHb R/T R/T態(tài)的互換態(tài)的互換) )LungMuscle靜脈靜脈動(dòng)脈動(dòng)脈環(huán)境氧濃度高時(shí)環(huán)境氧濃度高時(shí)Hb 快速吸收氧分子快速吸收氧分子環(huán)境氧濃度低時(shí)環(huán)境氧濃度低時(shí)Hb 迅速釋放氧氣迅速釋放氧氣任何一個(gè)亞基接受任何一個(gè)亞基接受O O2 2后，會(huì)增加其他亞基吸收后，會(huì)增加其他亞基吸收O O2 2的能力的能力釋放氧氣后釋放氧氣后Hb 變回變回 T state2,3

23、BPG的的作用作用2,3 BPG是是血紅蛋白的血紅蛋白的別構(gòu)效應(yīng)劑別構(gòu)效應(yīng)劑，一分子血紅蛋白只有一分子，一分子血紅蛋白只有一分子2,3 BPG，位于由四個(gè)亞基締合形成的中央孔穴內(nèi)。位于由四個(gè)亞基締合形成的中央孔穴內(nèi)。 2,3 BPG將將兩個(gè)鏈交聯(lián)在一起，有助于去氧血紅蛋白的構(gòu)象，促進(jìn)氧的釋放兩個(gè)鏈交聯(lián)在一起，有助于去氧血紅蛋白的構(gòu)象，促進(jìn)氧的釋放。q 2,3-二磷酸二磷酸-D-甘油酸（甘油酸（2,3BPG）是紅細(xì)是紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白的別構(gòu)效應(yīng)劑。胞內(nèi)血紅蛋白的別構(gòu)效應(yīng)劑。 q 2,3BPG 的存在，可使氧與全血中成熟的存在，可使氧與全血中成熟的血紅蛋白結(jié)合的的血紅蛋白結(jié)合的P50大約提高到大約提

24、高到26torr。q 換言之，紅細(xì)胞中的換言之，紅細(xì)胞中的2,3BPG實(shí)質(zhì)上是實(shí)質(zhì)上是降低了脫氧血紅蛋白對(duì)氧的親和性。降低了脫氧血紅蛋白對(duì)氧的親和性。q在紅細(xì)胞中，在紅細(xì)胞中，2,3BPG與血紅蛋白的濃度與血紅蛋白的濃度幾乎是等摩爾的。幾乎是等摩爾的。 肺肺中中pO2 （海平面）海平面） 肺肺中中pO2 (高原高原4500米米)組織中組織中 pO2氧氧飽飽和和度度2,3-二磷酸二磷酸-D-甘油酸甘油酸（2,3 BPG）對(duì)血紅蛋對(duì)血紅蛋白氧合曲線(xiàn)的影響白氧合曲線(xiàn)的影響 當(dāng)當(dāng)人從人從海平面上海平面上到到4500米高原后兩天米高原后兩天內(nèi)，內(nèi)， 2,3 BPG的的濃度濃度有原來(lái)的有原來(lái)的5mM增加到

25、增加到8mM，結(jié)果對(duì)組織的結(jié)果對(duì)組織的供氧量又恢復(fù)到接近供氧量又恢復(fù)到接近正常水平（正常水平（0.38）。）。 如果如果BPG仍仍維持維持5mM水平，對(duì)組織的水平，對(duì)組織的供氧量將減少四分之供氧量將減少四分之一，為一，為0.30。 波耳效應(yīng)波耳效應(yīng) （Bohr effect）pH對(duì)氧飽和曲線(xiàn)的對(duì)氧飽和曲線(xiàn)的影響影響 氧結(jié)合血紅蛋白的另外調(diào)節(jié)作用涉及到二氧化碳和質(zhì)子，二者氧結(jié)合血紅蛋白的另外調(diào)節(jié)作用涉及到二氧化碳和質(zhì)子，二者都是有氧代謝的產(chǎn)物。都是有氧代謝的產(chǎn)物。CO2能降低血紅蛋白對(duì)氧的親和性。在紅細(xì)能降低血紅蛋白對(duì)氧的親和性。在紅細(xì)胞內(nèi)碳酸酐酶催化胞內(nèi)碳酸酐酶催化CO2生成一個(gè)碳酸（生成一個(gè)

26、碳酸（H2CO3），），碳酸容易解離形碳酸容易解離形成碳酸氫根離子和一個(gè)質(zhì)子：成碳酸氫根離子和一個(gè)質(zhì)子： CO2H2O HHCO3結(jié)果使得細(xì)胞內(nèi)的結(jié)果使得細(xì)胞內(nèi)的pH降低。低降低。低pH 導(dǎo)致血紅蛋白中的幾個(gè)基團(tuán)的質(zhì)導(dǎo)致血紅蛋白中的幾個(gè)基團(tuán)的質(zhì)子化，子化，質(zhì)子化的基團(tuán)可以形成有助于脫氧構(gòu)象穩(wěn)定的離子對(duì)質(zhì)子化的基團(tuán)可以形成有助于脫氧構(gòu)象穩(wěn)定的離子對(duì)。 CO2濃度增加以及相應(yīng)的濃度增加以及相應(yīng)的pH降低使得血紅蛋白的降低使得血紅蛋白的P50升高，這一升高，這一現(xiàn)象稱(chēng)之現(xiàn)象稱(chēng)之波耳效應(yīng)波耳效應(yīng)（Bohr effect），），它提高了氧轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的效率它提高了氧轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的效率。在肺部，在肺部，CO2水平

27、低，氧很容易被血紅蛋白占有，同時(shí)釋放出質(zhì)子水平低，氧很容易被血紅蛋白占有，同時(shí)釋放出質(zhì)子；而在代謝的組織中，；而在代謝的組織中，CO2水平相對(duì)來(lái)說(shuō)比較高，水平相對(duì)來(lái)說(shuō)比較高，pH較低，較低，O2容易容易從氧合血紅蛋白中卸載。從氧合血紅蛋白中卸載。3 3、蛋白質(zhì)構(gòu)象改變與疾病、蛋白質(zhì)構(gòu)象改變與疾病 蛋白質(zhì)構(gòu)象疾病蛋白質(zhì)構(gòu)象疾?。喝舻鞍踪|(zhì)的折疊發(fā)生：若蛋白質(zhì)的折疊發(fā)生錯(cuò)誤，盡管其一級(jí)結(jié)構(gòu)不變，但蛋白質(zhì)的構(gòu)錯(cuò)誤，盡管其一級(jí)結(jié)構(gòu)不變，但蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致疾病發(fā)生。致疾病發(fā)生。蛋白質(zhì)構(gòu)象改變導(dǎo)致疾病的機(jī)理蛋白質(zhì)構(gòu)象改變導(dǎo)致疾病的機(jī)理：

28、有些蛋白：有些蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的質(zhì)錯(cuò)誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)為蛋白淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)為蛋白質(zhì)淀粉樣纖維沉淀的病理改變。質(zhì)淀粉樣纖維沉淀的病理改變。這類(lèi)疾病包括這類(lèi)疾病包括：人紋狀體脊髓變性病、老：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。瘋牛病中的蛋白質(zhì)構(gòu)象改變瘋牛病中的蛋白質(zhì)構(gòu)象改變瘋牛病是由朊病毒蛋白瘋牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的引起的一組人和動(dòng)物神經(jīng)退行性病變。一組人和動(dòng)物神經(jīng)退行性病變。正常的正常的PrP富含

29、富含-螺旋，稱(chēng)為螺旋，稱(chēng)為PrPc。PrPc在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為-折折疊的疊的PrPsc，從而致病。從而致病。PrPc-螺旋螺旋PrPsc-折疊折疊正常正常瘋牛病瘋牛病 一條肽鏈對(duì)應(yīng)一個(gè)一條肽鏈對(duì)應(yīng)一個(gè)特定的空間結(jié)構(gòu)。特定的空間結(jié)構(gòu)。 這條法則的破壞是這條法則的破壞是災(zāi)難性的。瘋牛病的災(zāi)難性的。瘋牛病的就是一個(gè)例子就是一個(gè)例子。正常正常prion異常異常prion蛋白質(zhì)構(gòu)象改變與疾病老年性癡呆老年性癡呆（AD,Alzheimeis disease） 老年性癡呆老年性癡呆: :即阿爾茨海默病，是一種大即阿爾茨海默病，是一種大腦細(xì)胞退化萎縮，細(xì)胞

30、密度降低的器質(zhì)性腦細(xì)胞退化萎縮，細(xì)胞密度降低的器質(zhì)性疾病。疾病。主要癥狀：主要癥狀：部分或者全部的喪失記憶能部分或者全部的喪失記憶能力和認(rèn)識(shí)能力。力和認(rèn)識(shí)能力。同樣是蛋白質(zhì)構(gòu)象變化引起的疾病，與淀同樣是蛋白質(zhì)構(gòu)象變化引起的疾病，與淀粉樣纖維沉積有關(guān)?，F(xiàn)在已知，這種纖維粉樣纖維沉積有關(guān)。現(xiàn)在已知，這種纖維的形成是由于一種特征性交聯(lián)的的形成是由于一種特征性交聯(lián)的-Sheet-Sheet結(jié)構(gòu)的有序排列，且結(jié)構(gòu)的有序排列，且-Sheet-Sheet結(jié)構(gòu)的每一結(jié)構(gòu)的每一條鏈與纖維的長(zhǎng)軸垂直。條鏈與纖維的長(zhǎng)軸垂直。根據(jù)分子外形的對(duì)稱(chēng)程度分根據(jù)分子外形的對(duì)稱(chēng)程度分l球狀蛋白（球狀蛋白（globular pr

31、otein）：親水基團(tuán)位于分子表面，：親水基團(tuán)位于分子表面，疏水基團(tuán)位于分子內(nèi)部，形狀接近球形或橢球形，易溶于疏水基團(tuán)位于分子內(nèi)部，形狀接近球形或橢球形，易溶于水，如血清球蛋白和肌球蛋白等。水，如血清球蛋白和肌球蛋白等。l纖維狀蛋白纖維狀蛋白（fibrous protein）：具有比較簡(jiǎn)單、有規(guī)則：具有比較簡(jiǎn)單、有規(guī)則的線(xiàn)性結(jié)構(gòu)，呈細(xì)棒或纖維狀，難溶于水和稀鹽溶液，如的線(xiàn)性結(jié)構(gòu)，呈細(xì)棒或纖維狀，難溶于水和稀鹽溶液，如膠原蛋白、彈性蛋白、絲蛋白和角蛋白等。膠原蛋白、彈性蛋白、絲蛋白和角蛋白等。根據(jù)蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能分根據(jù)蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能分 酶、運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)、營(yíng)養(yǎng)和貯存蛋白質(zhì)、收縮蛋白質(zhì)和結(jié)構(gòu)酶、

32、運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)、營(yíng)養(yǎng)和貯存蛋白質(zhì)、收縮蛋白質(zhì)和結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)等。蛋白質(zhì)等。一、蛋白質(zhì)分離純化的一般原則總目標(biāo)：增加制品純度或比活總目標(biāo)：增加制品純度或比活1.1.前處理：因動(dòng)前處理：因動(dòng)/ /植物植物/ /細(xì)菌而異細(xì)菌而異2.2.粗分級(jí)分離：采用鹽析粗分級(jí)分離：采用鹽析/ /等電點(diǎn)沉淀等電點(diǎn)沉淀/ /有有機(jī)溶劑分級(jí)分離等方法機(jī)溶劑分級(jí)分離等方法3.3.細(xì)分級(jí)分離：采用凝膠過(guò)濾、離子交換細(xì)分級(jí)分離：采用凝膠過(guò)濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等層析、吸附層析以及親和層析等4.4.結(jié)晶結(jié)晶二、蛋白質(zhì)的分離純化方法（一）根據(jù)分子大小不同的純化方法根據(jù)分子大小不同的純化方法 1、透析和超過(guò)濾、透析和超過(guò)濾

33、w利用蛋白質(zhì)分子不能透過(guò)半透膜將其利用蛋白質(zhì)分子不能透過(guò)半透膜將其 與小分子物質(zhì)分開(kāi)與小分子物質(zhì)分開(kāi)w半透膜為玻璃紙或纖維素材料半透膜為玻璃紙或纖維素材料五、蛋白質(zhì)的分離純化方法（一）根據(jù)分子大小不同的純化方法根據(jù)分子大小不同的純化方法 1、透析和超過(guò)濾、透析和超過(guò)濾w利用蛋白質(zhì)分子不能透過(guò)半透膜將其利用蛋白質(zhì)分子不能透過(guò)半透膜將其 與小分子物質(zhì)分開(kāi)與小分子物質(zhì)分開(kāi)w半透膜為玻璃紙或纖維素材料半透膜為玻璃紙或纖維素材料支持膜的柵板加壓蛋白質(zhì)溶液半透膜超濾液2 2、密度梯度（區(qū)帶）離心、密度梯度（區(qū)帶）離心6000080000轉(zhuǎn)/分重力60萬(wàn)80萬(wàn)倍3、凝膠過(guò)濾、凝膠過(guò)濾（二）利用溶解度差別的純

34、化方法二）利用溶解度差別的純化方法 1.1.等電點(diǎn)沉淀等電點(diǎn)沉淀 調(diào)整溶液調(diào)整溶液pH 不同蛋白在各自不同蛋白在各自 pI處依次沉淀處依次沉淀 2.2.鹽溶和鹽析鹽溶和鹽析3.3.有機(jī)溶劑分級(jí)分離法有機(jī)溶劑分級(jí)分離法w降低介電常數(shù)降低介電常數(shù)w爭(zhēng)奪水化膜爭(zhēng)奪水化膜原理：原理： 蛋白質(zhì)在非等電點(diǎn)時(shí)所帶總電荷不為蛋白質(zhì)在非等電點(diǎn)時(shí)所帶總電荷不為0 0 分子大小不同，電場(chǎng)中移動(dòng)速度也不同分子大小不同，電場(chǎng)中移動(dòng)速度也不同幾種重要的蛋白質(zhì)電泳幾種重要的蛋白質(zhì)電泳*SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳，常用于蛋白質(zhì)，常用于蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定。分子量的測(cè)定。*等電聚焦電泳等電聚焦電泳，通過(guò)蛋白質(zhì)等

35、電點(diǎn)的差異，通過(guò)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的差異而分離蛋白質(zhì)的電泳方法。而分離蛋白質(zhì)的電泳方法。*雙向凝膠電泳雙向凝膠電泳是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要技是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要技術(shù)。術(shù)。十二烷基磺酸鈉十二烷基磺酸鈉原態(tài)蛋白質(zhì)變性？磺酸基磺酸基 極性親水極性親水烷基烷基 親油親油（蛋白質(zhì)疏水區(qū)）（蛋白質(zhì)疏水區(qū)）遷移率與電荷和形狀無(wú)關(guān)，僅取決于遷移率與電荷和形狀無(wú)關(guān)，僅取決于相對(duì)分子質(zhì)量相對(duì)分子質(zhì)量巰基乙醇破壞二硫鍵等電聚焦電泳等電聚焦電泳雙向電泳雙向電泳離子交換層析離子交換層析（四）利用蛋白質(zhì)選擇性吸附的性質(zhì)四）利用蛋白質(zhì)選擇性吸附的性質(zhì) 羥磷石灰層析羥磷石灰層析 疏水作用層析疏水作用層析（五）利用對(duì)配體的特異生物學(xué)

36、五）利用對(duì)配體的特異生物學(xué) 親和力的純化方法親和力的純化方法親和色譜顆粒親和色譜顆粒具有極強(qiáng)的專(zhuān)一性具有極強(qiáng)的專(zhuān)一性六、蛋白質(zhì)含量測(cè)定和純度鑒定（一）測(cè)定蛋白質(zhì)總量（一）測(cè)定蛋白質(zhì)總量 1、凱氏定氮法、凱氏定氮法 2、雙縮脲法、雙縮脲法 3、Folin-酚試劑法酚試劑法 4、BCA 法（法（4,4-二羧二羧-2,2-二喹啉二喹啉 bicinchoninic acid） 5、Bradford法法 6、膠體金法、膠體金法 7、紫外吸收法、紫外吸收法 （二）測(cè)定蛋白質(zhì)混合物中某一特定（二）測(cè)定蛋白質(zhì)混合物中某一特定 蛋白質(zhì)的含量蛋白質(zhì)的含量 （三）鑒定蛋白質(zhì)制品的純度（三）鑒定蛋白質(zhì)制品的純度 1.

37、電泳分析電泳分析 2.沉淀分析沉淀分析 3.擴(kuò)散分析擴(kuò)散分析 （1）英國(guó)科學(xué)家英國(guó)科學(xué)家Sanger測(cè)序測(cè)序（20世紀(jì)世紀(jì)50年代）。年代）。（2）建立色譜技術(shù)和定量氨基酸分析技術(shù)建立色譜技術(shù)和定量氨基酸分析技術(shù)（ 20世紀(jì)世紀(jì)50年年代）。代）。（3）Edman降解降解（20世紀(jì)世紀(jì)70年代出現(xiàn)）。年代出現(xiàn)）。 儀器自動(dòng)化：液相自動(dòng)測(cè)序儀和固相蛋白質(zhì)自動(dòng)測(cè)序儀器自動(dòng)化：液相自動(dòng)測(cè)序儀和固相蛋白質(zhì)自動(dòng)測(cè)序儀。儀。 進(jìn)入進(jìn)入20世紀(jì)世紀(jì)80年代，氣相測(cè)序技術(shù)出現(xiàn)并實(shí)現(xiàn)了年代，氣相測(cè)序技術(shù)出現(xiàn)并實(shí)現(xiàn)了儀器自動(dòng)化。靈敏度顯著提高，樣品量只需儀器自動(dòng)化。靈敏度顯著提高，樣品量只需10pmol以以下，一

38、次連續(xù)測(cè)定的順序甚至可超過(guò)下，一次連續(xù)測(cè)定的順序甚至可超過(guò)80個(gè)殘基。樣品個(gè)殘基。樣品處理遠(yuǎn)比固相方法簡(jiǎn)單和操作方便。處理遠(yuǎn)比固相方法簡(jiǎn)單和操作方便。 （4）20世紀(jì)世紀(jì)70年代，華裔學(xué)者張瑞耀提出的年代，華裔學(xué)者張瑞耀提出的有色有色Edman試試劑劑DABITC，使手工測(cè)序技術(shù)更加靈敏可靠使手工測(cè)序技術(shù)更加靈敏可靠。蛋白質(zhì)測(cè)序的發(fā)展：蛋白質(zhì)測(cè)序的發(fā)展：（5 5）對(duì)對(duì)2-2-D D膠上的點(diǎn)進(jìn)行測(cè)序膠上的點(diǎn)進(jìn)行測(cè)序：將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印到：將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印到PVDFPVDF（聚偏二氟乙烯）膜上，然后將膜片放入測(cè)序儀的反應(yīng)聚偏二氟乙烯）膜上，然后將膜片放入測(cè)序儀的反應(yīng)室中進(jìn)行室中進(jìn)行EdmanEdman降解。

39、降解。（6 6）毛細(xì)管電泳技術(shù)毛細(xì)管電泳技術(shù)（2020世紀(jì)世紀(jì)9090年代發(fā)展起來(lái)的微量分析年代發(fā)展起來(lái)的微量分析技術(shù)）的采用，是蛋白質(zhì)技術(shù)）的采用，是蛋白質(zhì)N N端微量順序測(cè)定方法學(xué)一個(gè)端微量順序測(cè)定方法學(xué)一個(gè)引人注目的發(fā)展。其靈敏度比引人注目的發(fā)展。其靈敏度比HPLCHPLC高兩個(gè)數(shù)量級(jí)?？稍诟邇蓚€(gè)數(shù)量級(jí)?？稍?010fmolfmol的水平檢測(cè)氨基酸。微型測(cè)序儀與毛細(xì)管電泳聯(lián)的水平檢測(cè)氨基酸。微型測(cè)序儀與毛細(xì)管電泳聯(lián)用的微量蛋白質(zhì)測(cè)序方法已經(jīng)呈現(xiàn)很好的前景。用的微量蛋白質(zhì)測(cè)序方法已經(jīng)呈現(xiàn)很好的前景。（7）蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)C端測(cè)序端測(cè)序：C端測(cè)序的重要性：端測(cè)序的重要性：為為PCR擴(kuò)增出某擴(kuò)增出某一蛋白的完整基因提供合成一蛋白的完整基因提供合成C端引物的重要依據(jù)端引物的重要依據(jù)；以及以及為基因表達(dá)的蛋白質(zhì)的鑒定提供關(guān)鍵的證據(jù)為基因表達(dá)的蛋白質(zhì)的鑒定提供關(guān)鍵的證據(jù)等。等。 最成功的方法是在最成功的方法是在Schlack早年提出的異硫氰酸法的基早年提出的異硫氰酸法的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。 直到直到20世紀(jì)世紀(jì)90年代初由于發(fā)展出一些新的偶聯(lián)和裂解年