微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌

1、微生物培養(yǎng)基的配制和微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌滅菌微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌目的要求目的要求實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序目目 的的 要要 求求了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程。配制過程。了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法和了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法和加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。熟悉分離、培養(yǎng)微生物前的有關(guān)準(zhǔn)備工熟悉分離、培養(yǎng)微生物前的有關(guān)準(zhǔn)備工作及操作方法。作及操作方法。實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 材材 料料藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、馬鈴薯、蔗糖；藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、馬鈴薯

2、、蔗糖；可溶性淀粉、可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO47H2O、FeSO47H2O等等。高壓蒸汽滅菌器、恒溫干熱滅菌箱、細(xì)菌過濾器、紫外線高壓蒸汽滅菌器、恒溫干熱滅菌箱、細(xì)菌過濾器、紫外線殺菌燈。殺菌燈。其它：天平、牛角匙、電爐、其它：天平、牛角匙、電爐、1N HCl、1N NaOH、pH試紙、試紙、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、帶玻璃珠的三刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、帶玻璃珠的三角瓶、帶棉塞的無菌試管、無棉塞的空試管、培養(yǎng)皿、吸角瓶、帶棉塞的無菌試管、無棉塞的空試管、培養(yǎng)皿、吸管、各種包裝紙、防水紙、繩索、棉花、標(biāo)簽等。管、各種包裝紙、防水紙、繩索、棉花、標(biāo)簽等

3、。實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 程程 序序培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制分離培養(yǎng)微生物常用器皿的準(zhǔn)備分離培養(yǎng)微生物常用器皿的準(zhǔn)備培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 程程 序序1 （培養(yǎng)基的配制）（培養(yǎng)基的配制）培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的配制方法和步驟培養(yǎng)基的配制方法和步驟三種培養(yǎng)基的配方及配制三種培養(yǎng)基的配方及配制無菌水的制備無菌水的制備實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 程程 序序2 （培養(yǎng)基的種類）（培養(yǎng)基的種類）據(jù)組成成分可分為據(jù)組成成分可分為: 1.合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。 2.半合成培養(yǎng)基：有一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分天然物質(zhì)

4、配制半合成培養(yǎng)基：有一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分天然物質(zhì)配制而成。而成。 3.天然培養(yǎng)基：利用天然來源的有機(jī)物配制而成。天然培養(yǎng)基：利用天然來源的有機(jī)物配制而成。從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為 1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。 2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2%左右的凝固劑的固體狀左右的凝固劑的固體狀態(tài)的培養(yǎng)基或農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。態(tài)的培養(yǎng)基或農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。 3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.20.5%凝固劑而成凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。的半固體狀培養(yǎng)基。

5、實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 程程 序序3 （培養(yǎng)基的種類）（培養(yǎng)基的種類）常用凝固劑為瓊脂（其次為明膠），又叫洋菜、凍粉。常用凝固劑為瓊脂（其次為明膠），又叫洋菜、凍粉。實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 程程 序序4 （培養(yǎng)基的配制方法和步驟）（培養(yǎng)基的配制方法和步驟）稱量：按照配方正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。稱量：按照配方正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解。調(diào)調(diào)pH值：用值：用1N NaOH或或1N HCl調(diào)調(diào)pH，用用pH試紙對(duì)照。試紙對(duì)照。加瓊脂溶化：加熱過程中要不斷攪拌，可適當(dāng)補(bǔ)水。加瓊脂溶化：加熱過程中要不斷攪拌，可適當(dāng)補(bǔ)水。

6、分裝：注意不要污染棉塞。分裝：注意不要污染棉塞。包扎成捆，掛上標(biāo)簽（必須用鉛筆寫），注明何種培養(yǎng)基。包扎成捆，掛上標(biāo)簽（必須用鉛筆寫），注明何種培養(yǎng)基。滅菌備用：培養(yǎng)基滅菌后必須在滅菌備用：培養(yǎng)基滅菌后必須在370C下恒溫培養(yǎng)下恒溫培養(yǎng)24h，確定無確定無菌生長，方可使用。菌生長，方可使用。實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 程程 序序5 （培養(yǎng)基的配制方法和步驟）（培養(yǎng)基的配制方法和步驟）實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序6 （培養(yǎng)基的配制方法和步驟）（培養(yǎng)基的配制方法和步驟）實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 程程 序序7 （三種培養(yǎng)基的配方及配制）（三種培養(yǎng)基的配方及配制）牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)細(xì)牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)細(xì)

7、菌，是一種天然培養(yǎng)基）配方如下：菌，是一種天然培養(yǎng)基）配方如下： 牛肉膏牛肉膏 3g 蛋白胨蛋白胨 5g 氯化鈉氯化鈉 3g 瓊脂瓊脂 20g 自來水自來水 1000mL pH 7.27.4 滅菌滅菌 1.05kg/cm2，2530min實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 程程 序序8 （三種培養(yǎng)基的配方及配制）（三種培養(yǎng)基的配方及配制）馬鈴薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）瓊脂培養(yǎng)基馬鈴薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)真菌之用，是一種半合成培養(yǎng)基），（用于分離和培養(yǎng)真菌之用，是一種半合成培養(yǎng)基），其配方如下：其配方如下： 去皮馬鈴薯（或鮮豆芽）去皮馬鈴薯（或鮮豆芽） 200g 蔗糖（或葡萄糖）蔗

8、糖（或葡萄糖） 20g 自來水自來水 1000mL 瓊脂瓊脂 20g pH 自然自然 滅菌：（含蔗糖）滅菌：（含蔗糖）1.05kg/cm2 20min （含葡萄糖）含葡萄糖）0.1kg/cm2 30min實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 程程 序序9 （三種培養(yǎng)基的配方及配制）（三種培養(yǎng)基的配方及配制）淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏一號(hào)淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏一號(hào)Gause 1），），用于分離用于分離和培養(yǎng)放線菌，是一種合成培養(yǎng)基。配方如下：和培養(yǎng)放線菌，是一種合成培養(yǎng)基。配方如下：可溶性淀粉可溶性淀粉 20.0g KNO3 1.0g K2HPO4 0.5g MgSO4 7H2O 0.5g NaCl 0.5g FeSO4 7H2

9、O 0.01g 瓊脂瓊脂 20g 自來水自來水 1000mL 滅菌：滅菌： 1.05kg/cm2 30min 實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序10 （三種培養(yǎng)基的配方及配制）（三種培養(yǎng)基的配方及配制）無菌水的制備無菌水的制備 無菌水為下一次微生物分離無菌水為下一次微生物分離實(shí)驗(yàn)中所需要的材料。實(shí)驗(yàn)中所需要的材料。 100mL三角燒瓶（裝有玻璃珠），裝自來水三角燒瓶（裝有玻璃珠），裝自來水45.0mL，試管中裝試管中裝9.0mL自來水，塞上棉塞，自來水，塞上棉塞，包扎、滅菌備用。三角燒瓶和試管須預(yù)先塞好包扎、滅菌備用。三角燒瓶和試管須預(yù)先塞好棉塞，并經(jīng)干熱滅菌。棉塞，并經(jīng)干熱滅菌。實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序11 （分離培

10、養(yǎng)微生物常用器皿的準(zhǔn)備）（分離培養(yǎng)微生物常用器皿的準(zhǔn)備）清洗一些玻璃儀器：如三角燒瓶、試管、培養(yǎng)皿、吸管等。清洗一些玻璃儀器：如三角燒瓶、試管、培養(yǎng)皿、吸管等。棉塞的制作棉塞的制作 包裝培養(yǎng)皿和吸管等。包裝培養(yǎng)皿和吸管等。 實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序12 （培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法（培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法）干熱滅菌法：電熱烘箱作為干熱滅菌器干熱滅菌法：電熱烘箱作為干熱滅菌器加壓蒸汽滅菌法加壓蒸汽滅菌法 其步驟如下：其步驟如下： 1.滅菌器內(nèi)加入一定量的水，將用防水紙包扎好的物品放入其中。滅菌器內(nèi)加入一定量的水，將用防水紙包扎好的物品放入其中。2.接通電源，進(jìn)行加熱。接通電源，進(jìn)行加熱。 3. 排除

11、高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥打開，待排出大氣后關(guān)排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥打開，待排出大氣后關(guān)閉排氣閥；或關(guān)閉排氣閥，待壓力上升到閉排氣閥；或關(guān)閉排氣閥，待壓力上升到0.5kg/cm2時(shí)再打開時(shí)再打開排氣閥，待壓力回復(fù)到排氣閥，待壓力回復(fù)到0時(shí)再關(guān)閉排氣閥。時(shí)再關(guān)閉排氣閥。 4.當(dāng)壓力達(dá)當(dāng)壓力達(dá)15bl/in2（即即1.05kg/cm2）時(shí)，此時(shí)滅菌器內(nèi)的溫時(shí)，此時(shí)滅菌器內(nèi)的溫度為度為1210C，維持維持30min。對(duì)熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、對(duì)熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、氨基酸等物時(shí)，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延長時(shí)間。氨基酸等物時(shí)，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延長時(shí)間。 5.滅菌時(shí)間一到，切斷電源，

12、待壓力降至零時(shí)，才能打開排氣閥，滅菌時(shí)間一到，切斷電源，待壓力降至零時(shí)，才能打開排氣閥，然后打開滅菌器蓋，取出物品。然后打開滅菌器蓋，取出物品。實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 程程 序序13實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 程程 序序14實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序15 （培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法）（培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法）間歇滅菌法：間歇滅菌法： 待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天蒸煮待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天蒸煮1次，每次，每次煮沸次煮沸1h，連續(xù)連續(xù)3d重復(fù)進(jìn)行。在每?jī)纱握糁笾g，將重復(fù)進(jìn)行。在每?jī)纱握糁笾g，將物品（指培養(yǎng)基）放在物品（指培養(yǎng)基）放在370C恒溫條件下培養(yǎng)過夜，這恒溫條件下培養(yǎng)過夜，這樣可以使每次蒸煮后未

13、殺死殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體，樣可以使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體，以便下次蒸煮時(shí)殺滅。以便下次蒸煮時(shí)殺滅。過濾除菌法：過濾除菌法： 不能用加熱滅菌的液體物質(zhì)（如維生素、血清），一般不能用加熱滅菌的液體物質(zhì)（如維生素、血清），一般可用細(xì)菌過濾器進(jìn)行除菌。（教師示范）可用細(xì)菌過濾器進(jìn)行除菌。（教師示范）實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序16 （培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法）（培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法）實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序17 （培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法）（培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法）紫外線滅菌法：紫外線滅菌法： 一般一般30W燈管，燈管，9m3空間，距地面空間，距地面2m每次打開紫外線照射每次打開紫外線照射

14、0.5h，就使室內(nèi)空氣滅菌。若照射紫外線時(shí)先噴灑石炭酸等化學(xué)消毒劑，就使室內(nèi)空氣滅菌。若照射紫外線時(shí)先噴灑石炭酸等化學(xué)消毒劑，可增強(qiáng)滅菌效果。紫外線雖有較強(qiáng)的殺菌力，但穿透力弱，即使可增強(qiáng)滅菌效果。紫外線雖有較強(qiáng)的殺菌力，但穿透力弱，即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用于空氣一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用于空氣及表面殺菌。及表面殺菌。化學(xué)藥劑消毒滅菌：化學(xué)藥劑消毒滅菌： 微生物實(shí)驗(yàn)室中常用的化學(xué)殺菌劑有升汞、甲醛、高錳酸鉀、酒微生物實(shí)驗(yàn)室中常用的化學(xué)殺菌劑有升汞、甲醛、高錳酸鉀、酒精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、漂白粉、新潔爾滅、煤酚皂溶液，精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、漂白粉、新潔爾滅、煤酚皂溶液，它們有的是殺菌劑，有的是抑菌劑，詳見表它們有的是殺菌