UT對PQ中毒后損傷肺成纖維細胞的修復作用研究ppt課件

1、Company Logo 內容引見研討背景123估計結果與展望4立項根據與創(chuàng)新實驗技術及過程Company Logo 研討背景-百草枯簡介v 百草枯(paraquat,PQ)，20%，250mL裝；是一種有機雜環(huán)類廣譜非選擇性接觸性除草劑及脫葉劑。v PQ對人畜具有較強毒性，人口服致死量約為13g。v 中毒后致急性肺損傷及肺纖維化改動為其特異表現v 短少特效解毒劑和可以在血液或組織中與PQ結合的螯合劑，PQ中毒的病死率高達60%80%。Company Logo 研討背景-烏司他丁簡介v 烏司他丁烏司他丁 (Ulinastain ,UT) (Ulinastain ,UT)，本品是從，本品是從安康

2、成年男性新穎尿液中分別純化出來安康成年男性新穎尿液中分別純化出來的一種糖蛋白，由的一種糖蛋白，由143143個氨基酸組成，個氨基酸組成，相對分子質量約相對分子質量約67006700。本品屬蛋白酶。本品屬蛋白酶抑制劑，對胰蛋白酶、抑制劑，對胰蛋白酶、-糜蛋白酶等絲糜蛋白酶等絲氨酸蛋白酶及粒細胞彈性蛋白酶、透明氨酸蛋白酶及粒細胞彈性蛋白酶、透明質酸酶、巰基酶、纖溶酶等多種酶有抑質酸酶、巰基酶、纖溶酶等多種酶有抑制造用。另具有穩(wěn)定溶酶體膜，抑制溶制造用。另具有穩(wěn)定溶酶體膜，抑制溶酶體酶的釋放，抑制心肌抑制因子酶體酶的釋放，抑制心肌抑制因子MDFMDF產生，去除氧自在基及抑制產生，去除氧自在基及抑制炎

3、癥介質釋放的作用。炎癥介質釋放的作用。 Company Logo 研討背景-肺成纖維細胞v 正常情況下，正常情況下，MRC-5MRC-5存在存在準確調控，分泌的細胞外準確調控，分泌的細胞外基質基質ECMECM處于動態(tài)平處于動態(tài)平衡。衡。v 膠原蛋白是主要的膠原蛋白是主要的ECMECM蛋蛋白，占肺干重白，占肺干重1/51/5、。v 肺損傷后，肺損傷后，MRC-5MRC-5及膠原及膠原蛋白過度合成，參與病理蛋白過度合成，參與病理修復。修復。v 膠原蛋白的生成和堆積將膠原蛋白的生成和堆積將導致肺纖維化導致肺纖維化 Company Logo 肺成纖維細胞炎癥介質炎癥介質百草枯百草枯細胞因子細胞因子力學

4、刺激力學刺激缺氧缺氧肺成纖維細胞肺成纖維細胞Company Logo 研討背景-結締組織生長因子CTGFvCTGF屬于TGF-家族，作為TGF-的下游因子，主要促進細胞增殖、粘附，ECM異常沉淀v早期即刻蛋白，主要表達于活化的肺纖維細胞，見于肺纖維變性早期，晚期極弱。v可作為纖維化病變早期診斷標志物。v促纖維化作用呈劑量依賴，可被抗CTGF抗體拮抗。 Company Logo 研討背景-細胞力學特性v 力學特性粘彈性是細胞的一種本質屬性，細胞所處的生理/病理形狀、組織環(huán)境和力環(huán)境不同，所表現的力學特性也不盡一樣。v 解釋一些組織器官的生理、病理變化以及解釋疾病的發(fā)病與治療機理等具有重要的意義。

5、 v 目前為止，國內外尚未見有關百草枯中毒過程中肺成纖維細胞生物力學特性變化的報道。 Company Logo 前期任務 課題組在這方面已有一定的任務根底。部分任務人員，曾在吉林省科技開展方案工程20210百草枯致中毒性肺纖維化發(fā)病機理的力學生物學研討的支持下，研討了百草枯致中毒后短時間內肺成纖維細胞的 CTGF 的表達、細胞增殖情況及細胞粘彈性的變化等，實驗結果闡明百草枯影響了細胞的生物學特性和生物力學特性。并已發(fā)表文章2篇。 1. Guohui Wang，Yongpeng Xie，Dan Shi，Nan Zhang. The Effects ofmechanical stimulation

6、 on proliferation and CTGF expression of human lung fibroblast. The 4th International Conference on Image and Signal Processing, (2021年10月發(fā)表，EI收錄) 2. Guohui Wang，Yongpeng Xie，Nan Zhang. The Study of CTGF Expression of Lung Fibroblasts After Treated by Paraquat，第十六屆亞太呼吸年會.( 2021年11月發(fā)表，SCI收錄)Company L

7、ogo 人胚肺成纖維細胞MRC-5Olympus倒置相差顯微鏡:培育皿中細胞正常生長，形狀呈長梭形。 Company Logo 百草枯處置前后MRC-5細胞顯微圖片 A A：正常：正常MRC-5MRC-5細胞細胞 B B：50mg/LPQ50mg/LPQ培育液處置后培育液處置后 C C：100mg/LPQ100mg/LPQ培育液處置后培育液處置后 D D：200mg/LPQ200mg/LPQ培育液處置后培育液處置后 Company Logo PQ PQ對對MRC-5 CTGFMRC-5 CTGF表達的影響表達的影響 各組細胞CTGF濃度比較*P0.05 Company Logo 肺成纖維細胞在

8、肺成纖維細胞在30mm水柱負壓下吸入長度隨時間變化情況水柱負壓下吸入長度隨時間變化情況Company Logo v 經過經過PQPQ處置后處置后MRC-5MRC-5細胞的粘彈細胞的粘彈性各項參數均明顯小于正常性各項參數均明顯小于正常MRC-5MRC-5細胞細胞 v 也就是說經過也就是說經過PQPQ處置后的處置后的MRC-5MRC-5生物力學特性降低，變得較生物力學特性降低，變得較“軟軟 v 在經過在經過100mg/L100mg/L和和200mg/L200mg/L百草百草枯處置后枯處置后MRC-5MRC-5粘彈性要小于粘彈性要小于50mg/L50mg/Lv 而而100mg/L100mg/L和和2

9、00mg/L200mg/L百草枯處百草枯處置組之間細胞的粘彈性無明顯置組之間細胞的粘彈性無明顯差別差別 各組細胞粘彈性參數比較各組細胞粘彈性參數比較 Company Logo 實驗目的 經過實驗研討烏司他丁對百草枯中毒后損經過實驗研討烏司他丁對百草枯中毒后損傷肺成纖維細胞的修復作用，得到烏司他傷肺成纖維細胞的修復作用，得到烏司他汀對百草枯致肺損傷的治療效果及治療原汀對百草枯致肺損傷的治療效果及治療原理。理。 Company Logo 實驗內容運用烏司他汀注射液處置經不同濃度百草枯損傷的肺成纖維細胞，檢測細胞CTGF的表達及細胞的粘彈性，闡明烏司他汀對百草枯中毒后損傷肺成纖維細胞的修復作用，研討

10、烏司他汀對百草枯致肺損傷的治療效果并解釋其治療原理。Company Logo 實驗器材v儀器及資料 v細胞：人胚肺成纖維細胞MRC-5，中科院細胞庫。v試劑：胎牛血清培育基、胰蛋白酶、CTGF ELISA 試劑盒。v主要儀器：二氧化碳培育箱、 高低速離心機、微管吸吮系統(tǒng) 、流式細胞儀、ELx-800 NB酶標儀及配套洗板機等。Company Logo 本實驗我們采用微管吸吮技術檢測肺成纖維細胞在一定負壓下吸入長度隨時間的變化，結合規(guī)范線性固體粘彈性模型得到了正常及百草枯處置后肺成纖維細胞的生物力學特性粘彈性參數，研討百草枯對人肺成纖維細胞生物力學特性的影響。 Company Logo 實驗方法

11、 1.用含不同濃度百草枯的細胞培育液50mg/L、100mg/L、200mg/L處置常規(guī)培育的肺成纖維細胞12h。12h后換含烏司他丁的細胞培育液繼續(xù)培育，在烏司他丁處置后0h、12h、24h、36h、48h獲取細胞進展檢測。2.經過PCR技術及酶聯免疫吸附實驗技術檢測肺成纖維細胞CTGF的表達。3.結合規(guī)范線性黏彈性模型，采用微管吸吮技術測試細胞的力學特性粘彈性參數 Company Logo 技術流程圖 肺成纖維細胞的常規(guī)培育不同濃度百草枯處置細胞12h不同濃度烏司他汀處置細胞0h、12h、24h、36h、48h獲取細胞PCR及ELISA法檢測CTGF的表達微管吸吮技術檢測細胞粘彈性烏司他汀對百草枯中毒后損傷肺成纖維細胞的修復作用及治療肺損傷的機理Company Logo 擬處理的技術難題 第二 第三步第一選擇適宜的力學刺激波形、拉伸幅度、頻率、時間，模擬在體肺細胞的力學環(huán)境，對人胚肺成纖維細胞進展體外力學環(huán)境培育； 選用適宜的百草枯劑量處置人胚肺成纖維細胞；并選擇適宜的烏司他汀治療劑量處置中毒的人胚肺成纖維細胞。對實驗結果從生物學-醫(yī)學-力學角度進展綜合分析 Company Logo 擬采集數據結果UTUT對對PQPQ處置后處置后MRC-5MRC-5增殖的影增殖的影響響 Company Logo 創(chuàng)新點va.從細胞層次來研討烏司他汀治療百草枯致肺損傷的效果及治療原理。vb