醫(yī)學(xué)科研入門(mén)——科研設(shè)計(jì)和撰寫(xiě)申報(bào)書(shū)

1、醫(yī)學(xué)科學(xué)研究入門(mén)醫(yī)學(xué)科學(xué)研究入門(mén)2. 科研設(shè)計(jì)與課題申請(qǐng)書(shū)的撰寫(xiě)科研設(shè)計(jì)與課題申請(qǐng)書(shū)的撰寫(xiě)B(tài)ackground mini reviewUnclearControversialNot reportedFurther investigationShortcomingsHypothesisExperimentsConclusionFuture InvestigationSignificanceMethodResultsDiscussion科科 研研 設(shè)設(shè) 計(jì)計(jì)科科 研研 設(shè)設(shè) 計(jì)計(jì) 概論概論 醫(yī)學(xué)科研的基本要素醫(yī)學(xué)科研的基本要素 科研設(shè)計(jì)的基本原則科研設(shè)計(jì)的基本原則 科研設(shè)計(jì)的基本步驟科研設(shè)計(jì)的基本

2、步驟 統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)定定 義義 醫(yī)學(xué)科研設(shè)計(jì)是研究醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中如何科學(xué)、合理醫(yī)學(xué)科研設(shè)計(jì)是研究醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中如何科學(xué)、合理地安排實(shí)驗(yàn)因素，提高實(shí)驗(yàn)效應(yīng)，及如何排除影響實(shí)驗(yàn)的地安排實(shí)驗(yàn)因素，提高實(shí)驗(yàn)效應(yīng)，及如何排除影響實(shí)驗(yàn)的非處理因素。非處理因素?？紤]周全、設(shè)計(jì)合理的研究方案可收事半功考慮周全、設(shè)計(jì)合理的研究方案可收事半功倍之效，而設(shè)計(jì)不佳的研究方案常招致失敗及時(shí)間、經(jīng)費(fèi)倍之效，而設(shè)計(jì)不佳的研究方案常招致失敗及時(shí)間、經(jīng)費(fèi)的浪費(fèi)。的浪費(fèi)。 專(zhuān)業(yè)設(shè)計(jì)專(zhuān)業(yè)設(shè)計(jì)： 指運(yùn)用專(zhuān)業(yè)理論知識(shí)和技術(shù)進(jìn)行設(shè)計(jì)指運(yùn)用專(zhuān)業(yè)理論知識(shí)和技術(shù)進(jìn)行設(shè)計(jì), , 主主要是解決研究的有用性、獨(dú)創(chuàng)性和科學(xué)性要是解決研究的有用性

3、、獨(dú)創(chuàng)性和科學(xué)性, ,以回答、解決以回答、解決科學(xué)問(wèn)題，驗(yàn)證專(zhuān)業(yè)假說(shuō)?？茖W(xué)問(wèn)題，驗(yàn)證專(zhuān)業(yè)假說(shuō)。 統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)：運(yùn)用數(shù)理統(tǒng)計(jì)學(xué)理論和方法進(jìn)行設(shè)計(jì)：運(yùn)用數(shù)理統(tǒng)計(jì)學(xué)理論和方法進(jìn)行設(shè)計(jì), , 包括資料的收集、整理、分析全過(guò)程的統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)想和科學(xué)包括資料的收集、整理、分析全過(guò)程的統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)想和科學(xué)安排，以保證樣本的代表性和樣本間的可比性安排，以保證樣本的代表性和樣本間的可比性, ,以最少的以最少的調(diào)查、實(shí)驗(yàn)觀察例數(shù)進(jìn)行高效率的統(tǒng)計(jì)分析，得出準(zhǔn)確的調(diào)查、實(shí)驗(yàn)觀察例數(shù)進(jìn)行高效率的統(tǒng)計(jì)分析，得出準(zhǔn)確的結(jié)果和可靠的結(jié)論。結(jié)果和可靠的結(jié)論。 專(zhuān)業(yè)設(shè)計(jì)錯(cuò)誤專(zhuān)業(yè)設(shè)計(jì)錯(cuò)誤 蘇聯(lián)一神經(jīng)論權(quán)威設(shè)計(jì)了免疫抗體形成的神經(jīng)反

4、射機(jī)制的實(shí)驗(yàn)：他將動(dòng)物后肢與軀體分離，僅保留由肢體傳入軀體的神經(jīng)干，然后在“離體”后肢注射抗原，不久將該神經(jīng)干切斷。過(guò)些時(shí)候動(dòng)物血中出現(xiàn)特異性抗體。該權(quán)威認(rèn)為特異性抗體是由于抗原作用于神經(jīng)感受器經(jīng)反射而形成的。 設(shè)計(jì)用動(dòng)物急性感染實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯縏h1/Th2細(xì)胞在炎癥中的作用。定定 義義 醫(yī)學(xué)科研設(shè)計(jì)是研究醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中如何科學(xué)、合理醫(yī)學(xué)科研設(shè)計(jì)是研究醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中如何科學(xué)、合理地安排實(shí)驗(yàn)因素，提高實(shí)驗(yàn)效應(yīng)，及如何排除影響實(shí)驗(yàn)的地安排實(shí)驗(yàn)因素，提高實(shí)驗(yàn)效應(yīng)，及如何排除影響實(shí)驗(yàn)的非處理因素。非處理因素。考慮周全、設(shè)計(jì)合理的研究方案可收事半功考慮周全、設(shè)計(jì)合理的研究方案可收事半功倍之效，而設(shè)計(jì)不佳的

5、研究方案常招致失敗及時(shí)間、經(jīng)費(fèi)倍之效，而設(shè)計(jì)不佳的研究方案常招致失敗及時(shí)間、經(jīng)費(fèi)的浪費(fèi)。的浪費(fèi)。 專(zhuān)業(yè)設(shè)計(jì)專(zhuān)業(yè)設(shè)計(jì)： 指運(yùn)用專(zhuān)業(yè)理論知識(shí)和技術(shù)進(jìn)行設(shè)計(jì)指運(yùn)用專(zhuān)業(yè)理論知識(shí)和技術(shù)進(jìn)行設(shè)計(jì), , 主主要是解決研究的有用性、獨(dú)創(chuàng)性和科學(xué)性要是解決研究的有用性、獨(dú)創(chuàng)性和科學(xué)性, ,以回答、解決以回答、解決科學(xué)問(wèn)題，驗(yàn)證專(zhuān)業(yè)假說(shuō)。科學(xué)問(wèn)題，驗(yàn)證專(zhuān)業(yè)假說(shuō)。 統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)：運(yùn)用數(shù)理統(tǒng)計(jì)學(xué)理論和方法進(jìn)行設(shè)計(jì)：運(yùn)用數(shù)理統(tǒng)計(jì)學(xué)理論和方法進(jìn)行設(shè)計(jì), , 包括資料的收集、整理、分析全過(guò)程的統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)想和科學(xué)包括資料的收集、整理、分析全過(guò)程的統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)想和科學(xué)安排，以保證樣本的代表性和樣本間的可比性安排，以保證樣本的

6、代表性和樣本間的可比性, ,以最少的以最少的調(diào)查、實(shí)驗(yàn)觀察例數(shù)進(jìn)行高效率的統(tǒng)計(jì)分析，得出準(zhǔn)確的調(diào)查、實(shí)驗(yàn)觀察例數(shù)進(jìn)行高效率的統(tǒng)計(jì)分析，得出準(zhǔn)確的結(jié)果和可靠的結(jié)論。結(jié)果和可靠的結(jié)論。 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)主要為了保證科研結(jié)果符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)主要為了保證科研結(jié)果符合四個(gè)性：四個(gè)性：有用性：目的性和可行性有用性：目的性和可行性獨(dú)創(chuàng)性：先進(jìn)性獨(dú)創(chuàng)性：先進(jìn)性可重復(fù)性可重復(fù)性經(jīng)濟(jì)性經(jīng)濟(jì)性科科 研研 設(shè)設(shè) 計(jì)計(jì) 概論概論 醫(yī)學(xué)科研的基本要素醫(yī)學(xué)科研的基本要素 科研設(shè)計(jì)的基本原則科研設(shè)計(jì)的基本原則 科研設(shè)計(jì)的基本步驟科研設(shè)計(jì)的基本步驟 統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)是否主動(dòng)施加干預(yù)是否主動(dòng)施加干預(yù)?1. 實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)研

7、究(干預(yù)干預(yù)): 受試對(duì)象：人受試對(duì)象：人臨床試驗(yàn)臨床試驗(yàn)（clinical trial） 動(dòng)物動(dòng)物動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（ animal experiment ） 臨床試驗(yàn)：治療臨床試驗(yàn)：治療臨床療效實(shí)驗(yàn)臨床療效實(shí)驗(yàn) 預(yù)防預(yù)防社區(qū)干預(yù)實(shí)驗(yàn)社區(qū)干預(yù)實(shí)驗(yàn)（community intervention trial） 2. 調(diào)查研究調(diào)查研究(無(wú)干預(yù)無(wú)干預(yù)):被動(dòng)地觀察、如實(shí)記錄被動(dòng)地觀察、如實(shí)記錄 聯(lián)系聯(lián)系： 調(diào)查研究可為實(shí)驗(yàn)研究提供線索，而實(shí)驗(yàn)研究還調(diào)查研究可為實(shí)驗(yàn)研究提供線索，而實(shí)驗(yàn)研究還需要通過(guò)調(diào)查研究加以證實(shí)。需要通過(guò)調(diào)查研究加以證實(shí)。降壓藥降壓藥高血壓病人高血壓病人血壓值血壓值處理因素處理因素受

8、試對(duì)象受試對(duì)象實(shí)驗(yàn)效應(yīng)實(shí)驗(yàn)效應(yīng)三要素：三要素：1.處理因素；處理因素；2.受試對(duì)象；受試對(duì)象；3.實(shí)驗(yàn)效應(yīng)實(shí)驗(yàn)效應(yīng)其他因素其他因素其他效應(yīng)其他效應(yīng)處理因素處理因素(study factor，treatment) 例：藥劑、手術(shù)方法、毒物例：藥劑、手術(shù)方法、毒物 抓住主要處理因素抓住主要處理因素 區(qū)分處理與非處理因素區(qū)分處理與非處理因素 處理因素必須標(biāo)準(zhǔn)化處理因素必須標(biāo)準(zhǔn)化 處理因素是指外界施加于受試對(duì)象的因素，處理因素是指外界施加于受試對(duì)象的因素，是在實(shí)驗(yàn)中需觀察并闡明其效應(yīng)功能的因素。是在實(shí)驗(yàn)中需觀察并闡明其效應(yīng)功能的因素。單因素單水平單因素單水平表表3-1細(xì)菌脂多糖對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞干擾

9、素細(xì)菌脂多糖對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞干擾素分泌的影響分泌的影響組別組別 目目 的的LPS 觀察觀察LPS（1g/ml）刺激后人外周血單個(gè)核細(xì)胞干）刺激后人外周血單個(gè)核細(xì)胞干 擾素?cái)_素分泌水平分泌水平 對(duì)照對(duì)照 溶劑（溶劑（PBS），其他條件與實(shí)驗(yàn)組一致，排除非處），其他條件與實(shí)驗(yàn)組一致，排除非處 理因素引起的變化理因素引起的變化單因素多水平單因素多水平孕激素對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)的影響 組別 目 的孕激素110-7 mol/L 觀察不同濃度的孕激素對(duì)滋養(yǎng)細(xì)孕激素110-6 mol/L 胞表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶-9的影響 孕激素110-5 mol/L 空白對(duì)照 排除非處理因素的干擾多因素單水平

10、多因素單水平 美托康對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用 組別 腦缺血再灌注 美托康 目 的 處理組 + + 觀察美托康對(duì)大鼠腦缺血再 灌注損傷的保護(hù)作用 對(duì)照A 假手術(shù) + 觀察美托康的影響對(duì)照B + - 觀察腦缺血再灌注的影響 對(duì)照C 假手術(shù) - 排除手術(shù)的影響 對(duì)照D 不手術(shù) - 排除其他因素的影響 多因素多水平 地塞米松抗過(guò)敏效應(yīng)實(shí)驗(yàn)研究地塞米松抗過(guò)敏效應(yīng)實(shí)驗(yàn)研究 組別 口服 肌注 目的處理組A 0.1 mg/kg 口服小劑量地塞米松對(duì)過(guò)敏反應(yīng)的作用 處理組B 0.5 mg/kg 口服中劑量地塞米松對(duì)過(guò)敏反應(yīng)的作用 處理組C 1.0 mg/kg 口服大劑量地塞米松對(duì)過(guò)敏反應(yīng)的作用 處理組D

11、 0.1 mg/kg 肌注小劑量地塞米松對(duì)過(guò)敏反應(yīng)的作用 處理組E 0.5 mg/kg 肌注中劑量地塞米松對(duì)過(guò)敏反應(yīng)的作用 處理組F 1.0 mg/kg 肌注大劑量地塞米松對(duì)過(guò)敏反應(yīng)的作用 對(duì)照組G 溶劑 排除口服因素造成的影響 對(duì)照組H 生理鹽水 排除肌注因素造成的影響 對(duì)照組I 排除其他因素的影響 受試對(duì)象受試對(duì)象(study subjects)病例病例的選擇：納入標(biāo)準(zhǔn)、剔除標(biāo)準(zhǔn)的選擇：納入標(biāo)準(zhǔn)、剔除標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物動(dòng)物的選擇：種類(lèi)、品系、年齡、體重、的選擇：種類(lèi)、品系、年齡、體重、窩別、營(yíng)養(yǎng)窩別、營(yíng)養(yǎng)離體器官、組織離體器官、組織 細(xì)胞細(xì)胞 分子分子 須對(duì)處理因素敏感須對(duì)處理因素敏感 反應(yīng)須穩(wěn)定反

12、應(yīng)須穩(wěn)定 體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)相結(jié)合體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)相結(jié)合 in vitro， in vivo， ex vivo人體實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)的設(shè)計(jì)類(lèi)型人體實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)的設(shè)計(jì)類(lèi)型 病例報(bào)告病例報(bào)告 為疾病的發(fā)病表現(xiàn)、機(jī)理及診治提供詳盡的感性資為疾病的發(fā)病表現(xiàn)、機(jī)理及診治提供詳盡的感性資料。病例報(bào)告往往是識(shí)別新出現(xiàn)或不常見(jiàn)的料。病例報(bào)告往往是識(shí)別新出現(xiàn)或不常見(jiàn)的疾病疾病或疾病罕見(jiàn)表或疾病罕見(jiàn)表現(xiàn)的第一線索?，F(xiàn)的第一線索。 橫斷面研究橫斷面研究 包括普查和抽樣調(diào)查。包括普查和抽樣調(diào)查。 病例對(duì)照研究病例對(duì)照研究 回顧病例組暴露因素，通過(guò)與對(duì)照組進(jìn)行比較，回顧病例組暴露因素，通過(guò)與對(duì)照組進(jìn)行比較，研究這些暴露因素的發(fā)生頻率與某疾病之間的

13、關(guān)系。研究這些暴露因素的發(fā)生頻率與某疾病之間的關(guān)系。(由果到由果到因）因） 隊(duì)列研究隊(duì)列研究 按照所研究人群是否暴露于某種因素將受試對(duì)象分按照所研究人群是否暴露于某種因素將受試對(duì)象分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，隨訪觀察兩組人群某病的發(fā)病率，判斷暴為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，隨訪觀察兩組人群某病的發(fā)病率，判斷暴露因素與疾病發(fā)病率的關(guān)系。分為前瞻性隊(duì)列研究露因素與疾病發(fā)病率的關(guān)系。分為前瞻性隊(duì)列研究(由因到果）由因到果）和回顧性隊(duì)列研究。和回顧性隊(duì)列研究。 臨床試驗(yàn)臨床試驗(yàn) 臨床試驗(yàn)中的受試對(duì)象一般采用隨機(jī)化原則分為治臨床試驗(yàn)中的受試對(duì)象一般采用隨機(jī)化原則分為治療組和對(duì)照組，觀察治療手段的療效。療組和對(duì)照組，觀察治療

14、手段的療效。 動(dòng)動(dòng) 物物 分類(lèi)分類(lèi) 按微生物學(xué)要求，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可分為按微生物學(xué)要求，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可分為4個(gè)等級(jí)個(gè)等級(jí) ：I級(jí)：普通動(dòng)物 II級(jí)：清潔動(dòng)物 III級(jí)：無(wú)特殊病原體動(dòng)物 （SPF）IV級(jí)：無(wú)菌動(dòng)物 （GF） 按照遺傳學(xué)特性要求，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物也可分為按照遺傳學(xué)特性要求，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物也可分為4類(lèi)：類(lèi)：I類(lèi)：近交系或稱(chēng)為純系動(dòng)物II類(lèi)：突變系動(dòng)物，包括轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和基因敲除動(dòng)物III類(lèi)：遠(yuǎn)交系動(dòng)物，又稱(chēng)封閉群 IV類(lèi)：雜交群或稱(chēng)異系雜交 家兔對(duì)體溫變化十分敏感，宜選用做發(fā)熱、解熱及致熱源檢查實(shí)驗(yàn)。家兔對(duì)體溫變化十分敏感，宜選用做發(fā)熱、解熱及致熱源檢查實(shí)驗(yàn)。觀察避孕藥對(duì)排卵影響的實(shí)驗(yàn)宜選用兔、貓；對(duì)具有雌

15、激素活性的藥觀察避孕藥對(duì)排卵影響的實(shí)驗(yàn)宜選用兔、貓；對(duì)具有雌激素活性的藥物進(jìn)行避孕藥效研究，不能選用小鼠與大鼠。物進(jìn)行避孕藥效研究，不能選用小鼠與大鼠。以高膽固醇膳食飼喂兔、雞、豬、狗、猴等動(dòng)物，均可誘發(fā)高脂血癥以高膽固醇膳食飼喂兔、雞、豬、狗、猴等動(dòng)物，均可誘發(fā)高脂血癥或動(dòng)脈粥樣硬化，而猴和豬的心臟冠狀動(dòng)脈前降支還形成斑塊及大片或動(dòng)脈粥樣硬化，而猴和豬的心臟冠狀動(dòng)脈前降支還形成斑塊及大片心肌梗死，情況與人更為相似，故動(dòng)脈粥樣硬化實(shí)驗(yàn)多選用豬、猴及心肌梗死，情況與人更為相似，故動(dòng)脈粥樣硬化實(shí)驗(yàn)多選用豬、猴及兔。兔。家犬的胰腺、胃較小，宜用于胰腺摘除術(shù)及胃腸道生理的研究。家犬的胰腺、胃較小，宜用

16、于胰腺摘除術(shù)及胃腸道生理的研究。大鼠無(wú)膽囊，不會(huì)嘔吐，故不能用于膽功能觀察；狗、貓、猴等動(dòng)物大鼠無(wú)膽囊，不會(huì)嘔吐，故不能用于膽功能觀察；狗、貓、猴等動(dòng)物嘔吐反應(yīng)敏感，適宜用于嘔吐實(shí)驗(yàn)。嘔吐反應(yīng)敏感，適宜用于嘔吐實(shí)驗(yàn)。BALB/cBALB/c小鼠與其他近交系相比，肝、脾與體重的比值較大，對(duì)放射線小鼠與其他近交系相比，肝、脾與體重的比值較大，對(duì)放射線甚為敏感，故常用于制備單克隆抗體。甚為敏感，故常用于制備單克隆抗體。C57BL/6C57BL/6小鼠具有干擾素產(chǎn)量高、對(duì)放射物質(zhì)中等耐受、補(bǔ)體活性高、小鼠具有干擾素產(chǎn)量高、對(duì)放射物質(zhì)中等耐受、補(bǔ)體活性高、易誘發(fā)免疫耐受等特性，是腫瘤學(xué)及免疫學(xué)研究的常用

17、品系。易誘發(fā)免疫耐受等特性，是腫瘤學(xué)及免疫學(xué)研究的常用品系。如遺傳性高血壓大鼠、糖尿病小鼠、自身免疫病小鼠等。如遺傳性高血壓大鼠、糖尿病小鼠、自身免疫病小鼠等。還可利用某些特殊缺陷型小鼠，如胸腺缺陷的裸鼠，由于缺乏還可利用某些特殊缺陷型小鼠，如胸腺缺陷的裸鼠，由于缺乏T T細(xì)胞，細(xì)胞，故可接種人腫瘤，用以篩選抗腫瘤藥等。故可接種人腫瘤，用以篩選抗腫瘤藥等。細(xì) 胞 原代細(xì)胞 ：經(jīng)特殊分離方法從胚胎、組織器官及外周血等初分離的細(xì)胞在體外培養(yǎng) 。 傳代細(xì)胞：經(jīng)傳代方式進(jìn)行再次培養(yǎng)的細(xì)胞稱(chēng)為傳代細(xì)胞。 細(xì)胞株：?jiǎn)渭?xì)胞大量擴(kuò)增后形成生物學(xué)特性穩(wěn)定的克隆化細(xì)胞群，稱(chēng)為細(xì)胞株 。包括正常細(xì)胞株和腫瘤細(xì)胞株。

18、 基因缺陷和轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株。 懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞。用細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)用細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn) 不受機(jī)體內(nèi)環(huán)境因素影響，從而避免個(gè)體差異，有利于探討各種物理、化學(xué)和生物因素對(duì)腫瘤細(xì)胞生命活動(dòng)的影響。 便于同時(shí)從細(xì)胞、分子與基因三個(gè)水平研究腫瘤細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能及癌變發(fā)生機(jī)制。 能長(zhǎng)期傳代、保存，便于觀察腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性和遺傳行為的改變。 能快速篩選抗癌藥物，適宜進(jìn)行耐藥機(jī)制、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究。 研究周期較短，經(jīng)濟(jì)。 缺點(diǎn)： 不能完全反映體內(nèi)狀況，常與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)互相驗(yàn)證。 長(zhǎng)期培養(yǎng)易改變?cè)械男誀睢?易發(fā)生支原體感染。優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：細(xì)胞庫(kù)資源細(xì)胞庫(kù)資源ATCC (American Type Culture

19、Collection) ，即美國(guó)細(xì)胞、菌種保藏中心，目前能提供 3000余種細(xì)胞系、15000余種細(xì)菌和噬菌體、2500余種動(dòng)植物病毒、700余種人癌細(xì)胞系。Cascade Biologics, Inc.：該公司主要產(chǎn)品為人原代細(xì)胞，包括正常人皮膚細(xì)胞、心血管內(nèi)皮細(xì)胞、角膜上皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞等。網(wǎng)址：http:/第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心：該中心保存多種腫瘤細(xì)胞株。網(wǎng)址：http:/ 中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù)：是國(guó)內(nèi)較大且保存品種較多的細(xì)胞保藏中心。網(wǎng)址：http:/ 分子研究分子研究 DNA、RNA和蛋白質(zhì)常用的重要數(shù)據(jù)庫(kù)為： 基因數(shù)據(jù)庫(kù)（http:/www.ncbi.nlm.

20、/Genbank/） 非編碼RNA數(shù)據(jù)庫(kù)（http:/biobases.ibch.poznan.pl/ncRNA/） 蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)（http:/www.expasy.ch/ spot/或http:/www.ebi.ac.uk/swissprot/） 蛋白質(zhì)組分析數(shù)據(jù)庫(kù)（http:/www.ebi.ac.uk/proteome/） 分子研究分子研究 基因與蛋白分子的檢測(cè)：?jiǎn)蝹€(gè)、幾個(gè)與芯片基因與蛋白分子的檢測(cè)：?jiǎn)蝹€(gè)、幾個(gè)與芯片的檢測(cè)；的檢測(cè)； 基因多態(tài)性研究、基因多態(tài)性研究、SNP、微衛(wèi)星等、微衛(wèi)星等 基因組、蛋白組和代謝酶組的變化基因組、蛋白組和代謝酶組的變化 基因和蛋白的調(diào)控、分

21、子表觀遺傳學(xué)基因和蛋白的調(diào)控、分子表觀遺傳學(xué) 基因和蛋白的結(jié)構(gòu)基因和蛋白的結(jié)構(gòu) 基因和蛋白的關(guān)系、蛋白與蛋白的相互作用基因和蛋白的關(guān)系、蛋白與蛋白的相互作用 實(shí)驗(yàn)效應(yīng)實(shí)驗(yàn)效應(yīng) (experimental effect) 處理因素作用于受試對(duì)象的結(jié)果，通過(guò)處理因素作用于受試對(duì)象的結(jié)果，通過(guò)觀察指標(biāo)觀察指標(biāo)表達(dá)。觀表達(dá)。觀察指標(biāo)應(yīng)相關(guān)聯(lián)、客觀、精確、靈敏、特異。察指標(biāo)應(yīng)相關(guān)聯(lián)、客觀、精確、靈敏、特異。1. 客觀性客觀性：主觀指標(biāo)和客觀指標(biāo)。：主觀指標(biāo)和客觀指標(biāo)。2. 精確性精確性： 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度(accuracy)或真實(shí)性（或真實(shí)性（validity） ：觀察值與真值的接：觀察值與真值的接近程度，

22、受近程度，受系統(tǒng)誤差系統(tǒng)誤差的影響的影響(如靈敏度、特異度如靈敏度、特異度)。 精密度精密度(precision)或可靠性（或可靠性（reliabiliy）或重復(fù)性）或重復(fù)性（repeatability） ：重復(fù)觀察時(shí)觀察值與其均值的接近程度，受：重復(fù)觀察時(shí)觀察值與其均值的接近程度，受隨機(jī)誤差隨機(jī)誤差的影響（如一致百分率、的影響（如一致百分率、Kappa值）。值）。3. 靈敏性和特異性：靈敏性和特異性： 指標(biāo)的互補(bǔ)性、可靠性和穩(wěn)定性（標(biāo)準(zhǔn)化）指標(biāo)的互補(bǔ)性、可靠性和穩(wěn)定性（標(biāo)準(zhǔn)化）科科 研研 設(shè)設(shè) 計(jì)計(jì) 概論概論 醫(yī)學(xué)科研的基本要素醫(yī)學(xué)科研的基本要素 科研設(shè)計(jì)的基本原則科研設(shè)計(jì)的基本原則 科研設(shè)

23、計(jì)的基本步驟科研設(shè)計(jì)的基本步驟 統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則試驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則 對(duì)照的原則：對(duì)照的原則：-意義：消除系統(tǒng)誤差，鑒別處理和非處理因素的差異意義：消除系統(tǒng)誤差，鑒別處理和非處理因素的差異-類(lèi)型：空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、自身對(duì)照、類(lèi)型：空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、自身對(duì)照、相互對(duì)照相互對(duì)照 隨機(jī)的原則：隨機(jī)的原則：- 對(duì)照組和處理組除處理因素不同外，其余應(yīng)全部相同。對(duì)照組和處理組除處理因素不同外，其余應(yīng)全部相同。- 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分組；觀察切片也應(yīng)隨機(jī)選擇視野動(dòng)物實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分組；觀察切片也應(yīng)隨機(jī)選擇視野 重復(fù)的原則：重復(fù)的原則：- 隨機(jī)原則可排除大部分非處理因素的影響，但不能全

24、隨機(jī)原則可排除大部分非處理因素的影響，但不能全部消除；因此，有必要重復(fù)，以反映客觀真實(shí)性。部消除；因此，有必要重復(fù)，以反映客觀真實(shí)性。- 表現(xiàn)為一定的試驗(yàn)樣本數(shù)（人、動(dòng)物、細(xì)胞株）表現(xiàn)為一定的試驗(yàn)樣本數(shù)（人、動(dòng)物、細(xì)胞株）對(duì)照對(duì)照(control)的原則的原則 對(duì)照的意義對(duì)照的意義 ：區(qū)分處理因素與非處理因素的效應(yīng)，是區(qū)分處理因素與非處理因素的效應(yīng)，是比較比較的必要基礎(chǔ)的必要基礎(chǔ) 藥物治療藥物治療例例: 老年性慢性支氣管炎老年性慢性支氣管炎氣候轉(zhuǎn)暖氣候轉(zhuǎn)暖,自然緩解自然緩解消除和減少實(shí)驗(yàn)誤差消除和減少實(shí)驗(yàn)誤差 處理組處理組：對(duì)照組對(duì)照組：比較結(jié)果比較結(jié)果處理因素處理因素非處理因素非處理因素+處

25、理效應(yīng)處理效應(yīng) +非處理效應(yīng)非處理效應(yīng)非處理因素非處理因素非處理效應(yīng)非處理效應(yīng)處理因素處理因素處理效應(yīng)處理效應(yīng)直接凝集和間直接凝集和間接凝集試驗(yàn)接凝集試驗(yàn) 診斷血吸蟲(chóng)、診斷血吸蟲(chóng)、RARA、鉤端螺旋體、鉤端螺旋體陽(yáng)性對(duì)照和陰陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照可監(jiān)控性對(duì)照可監(jiān)控方法的正確性方法的正確性和特異性和特異性對(duì)照的形式對(duì)照的形式 空白對(duì)照空白對(duì)照(blank control)：對(duì)照組不加任何處理因素。對(duì)照組不加任何處理因素。 例如：試劑空白、血樣空白、無(wú)酶解空白、底物空白等。例如：試劑空白、血樣空白、無(wú)酶解空白、底物空白等。包括：空白對(duì)照、實(shí)驗(yàn)對(duì)照、標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照、自身對(duì)照、包括：空白對(duì)照、實(shí)驗(yàn)對(duì)照、標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照

26、、自身對(duì)照、相互對(duì)照相互對(duì)照 、歷史對(duì)照、歷史對(duì)照對(duì)照的形式對(duì)照的形式 實(shí)驗(yàn)對(duì)照實(shí)驗(yàn)對(duì)照(experimental control)：施加每一因施加每一因素均需設(shè)置對(duì)照素均需設(shè)置對(duì)照+非處理因素對(duì)照（安慰劑對(duì)照）非處理因素對(duì)照（安慰劑對(duì)照）。含含賴(lài)氨酸賴(lài)氨酸面包面包+非處理因素非處理因素賴(lài)氨酸賴(lài)氨酸效應(yīng)效應(yīng) + 面包效應(yīng)面包效應(yīng)+非處理因素效應(yīng)非處理因素效應(yīng) 面包面包+非處理因素非處理因素 面包效應(yīng)面包效應(yīng)+非處理因素效應(yīng)非處理因素效應(yīng)賴(lài)氨酸賴(lài)氨酸 賴(lài)氨酸賴(lài)氨酸效應(yīng)效應(yīng) 非處理因素非處理因素 +非處理因素效應(yīng)非處理因素效應(yīng)對(duì)照的形式對(duì)照的形式 標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照對(duì)照(standard control

27、)：以現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)或正常以現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)或正常值作對(duì)照。值作對(duì)照。 例某種新的方法能否代替?zhèn)鹘y(tǒng)方法的研究；例某種新的方法能否代替?zhèn)鹘y(tǒng)方法的研究； 某病患者與正常人的某生理、生化指標(biāo)是否相同。某病患者與正常人的某生理、生化指標(biāo)是否相同。 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用較多實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用較多 對(duì)照的形式對(duì)照的形式 自身自身對(duì)照對(duì)照：實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)在同一受試對(duì)象上進(jìn)行在同一受試對(duì)象上進(jìn)行特點(diǎn)：特點(diǎn)： 簡(jiǎn)單易行，使用廣泛。但若試驗(yàn)前后某些簡(jiǎn)單易行，使用廣泛。但若試驗(yàn)前后某些環(huán)境或自身因素發(fā)生改變，并且會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)環(huán)境或自身因素發(fā)生改變，并且會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果，就難以說(shuō)明問(wèn)題。果，就難以說(shuō)明問(wèn)題。 對(duì)照的形式對(duì)照的形式 相互相互對(duì)照對(duì)照 ：幾

28、個(gè)實(shí)驗(yàn)組互相對(duì)照幾個(gè)實(shí)驗(yàn)組互相對(duì)照例如：比較例如：比較幾種藥物幾種藥物治療同一疾病的療效治療同一疾病的療效常用半數(shù)有效量、半數(shù)致死量比較幾種藥物之間常用半數(shù)有效量、半數(shù)致死量比較幾種藥物之間的效應(yīng)和毒性。的效應(yīng)和毒性。對(duì)照的形式對(duì)照的形式 歷史歷史對(duì)照對(duì)照：以過(guò)去的研究結(jié)果作對(duì)照。以過(guò)去的研究結(jié)果作對(duì)照。 與本人或他人過(guò)去的研究結(jié)果作比較與本人或他人過(guò)去的研究結(jié)果作比較 不好！不好！對(duì)照設(shè)置方法對(duì)照設(shè)置方法 配對(duì)對(duì)照法配對(duì)對(duì)照法：節(jié)省樣本數(shù)，抽樣誤差最小，統(tǒng)計(jì)效率最高 自體配對(duì)自體配對(duì)：指在同一個(gè)體處理前后或不同部位作：指在同一個(gè)體處理前后或不同部位作為對(duì)照組和處理組，比較兩組間差異。為對(duì)照組

29、和處理組，比較兩組間差異。 異體配對(duì)異體配對(duì)：選擇同窩，性別、體重一致的動(dòng)物，：選擇同窩，性別、體重一致的動(dòng)物，或相同疾病、性別、年齡、病情等相當(dāng)?shù)牟∪伺浠蛳嗤膊　⑿詣e、年齡、病情等相當(dāng)?shù)牟∪伺鋵?duì)，在每個(gè)對(duì)子內(nèi)部隨機(jī)分至對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)，在每個(gè)對(duì)子內(nèi)部隨機(jī)分至對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，比較兩組間差異。比較兩組間差異。 組間對(duì)照法組間對(duì)照法：組間對(duì)照是將條件基本一致的不同：組間對(duì)照是將條件基本一致的不同個(gè)體隨機(jī)分組，分別接受對(duì)照處理與實(shí)驗(yàn)處理，個(gè)體隨機(jī)分組，分別接受對(duì)照處理與實(shí)驗(yàn)處理，比較兩組或幾組間差異。比較兩組或幾組間差異。 交叉對(duì)照法交叉對(duì)照法：即先接受對(duì)照處理的個(gè)體隨后接受：即先接受對(duì)照處理的

30、個(gè)體隨后接受試驗(yàn)處理，先接受試驗(yàn)處理的個(gè)體隨后接受對(duì)照試驗(yàn)處理，先接受試驗(yàn)處理的個(gè)體隨后接受對(duì)照處理，通過(guò)交叉而減少個(gè)體差異。處理，通過(guò)交叉而減少個(gè)體差異。 試驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則試驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則 對(duì)照的原則：對(duì)照的原則：-意義：消除系統(tǒng)誤差，鑒別處理和非處理因素的差異意義：消除系統(tǒng)誤差，鑒別處理和非處理因素的差異-類(lèi)型：空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、自身對(duì)照、類(lèi)型：空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、自身對(duì)照、相互對(duì)照相互對(duì)照 隨機(jī)的原則：隨機(jī)的原則：- 對(duì)照組和處理組除處理因素不同外，其余應(yīng)全部相同。對(duì)照組和處理組除處理因素不同外，其余應(yīng)全部相同。- 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分組；觀察切片也應(yīng)隨機(jī)選擇視野動(dòng)物實(shí)驗(yàn)隨機(jī)

31、分組；觀察切片也應(yīng)隨機(jī)選擇視野 重復(fù)的原則：重復(fù)的原則：- 隨機(jī)原則可排除大部分非處理因素的影響，但不能全隨機(jī)原則可排除大部分非處理因素的影響，但不能全部消除；因此，有必要重復(fù)，以反映客觀真實(shí)性。部消除；因此，有必要重復(fù)，以反映客觀真實(shí)性。- 表現(xiàn)為一定的試驗(yàn)樣本數(shù)（人、動(dòng)物、細(xì)胞株）表現(xiàn)為一定的試驗(yàn)樣本數(shù)（人、動(dòng)物、細(xì)胞株）隨機(jī)化隨機(jī)化(randomization)(randomization)分組的原則分組的原則 隨機(jī)化原則：隨機(jī)隨機(jī)化原則：隨機(jī)“隨便隨便”, 指每個(gè)受試對(duì)象指每個(gè)受試對(duì)象以以機(jī)會(huì)均等機(jī)會(huì)均等的原則隨機(jī)地分配到試驗(yàn)組和對(duì)照組。的原則隨機(jī)地分配到試驗(yàn)組和對(duì)照組。 目的是使目的

32、是使各組非實(shí)驗(yàn)因素的條件均衡各組非實(shí)驗(yàn)因素的條件均衡一致，一致，以消除對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。以消除對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。隨機(jī)化分組方法隨機(jī)化分組方法1. 抽簽等抽簽等2. 隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)數(shù)字表3. 計(jì)算器或計(jì)算機(jī)計(jì)算器或計(jì)算機(jī)隨機(jī)數(shù)字表分組隨機(jī)數(shù)字表分組例例 試將試將10頭動(dòng)物應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表分配到甲、乙兩組。頭動(dòng)物應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表分配到甲、乙兩組。按動(dòng)物體重按動(dòng)物體重編號(hào)編號(hào)從隨機(jī)表的第從隨機(jī)表的第21行，第行，第21列往上查列往上查10個(gè)隨機(jī)數(shù)個(gè)隨機(jī)數(shù)規(guī)定雙號(hào)為甲組，單號(hào)為乙組規(guī)定雙號(hào)為甲組，單號(hào)為乙組 動(dòng)物編號(hào)動(dòng)物編號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 隨機(jī)數(shù)字隨機(jī)數(shù)字 6 9 2 6 4

33、7 2 9 9 8 組組 別別 甲甲 乙乙 甲甲 甲甲 甲甲 乙乙 甲甲 乙乙 乙乙 甲甲 調(diào)整：再接著查一個(gè)調(diào)整：再接著查一個(gè)“6”以內(nèi)的隨機(jī)數(shù)，以決定甲組以內(nèi)的隨機(jī)數(shù)，以決定甲組中哪一號(hào)撥到乙組。本例查得隨機(jī)數(shù)為中哪一號(hào)撥到乙組。本例查得隨機(jī)數(shù)為4，將甲組第，將甲組第4個(gè)個(gè)（5號(hào)）調(diào)到乙組。號(hào)）調(diào)到乙組。 計(jì)算計(jì)算(器器)機(jī)隨機(jī)化分組機(jī)隨機(jī)化分組試驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則試驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則 對(duì)照的原則：對(duì)照的原則：-意義：消除系統(tǒng)誤差，鑒別處理和非處理因素的差異意義：消除系統(tǒng)誤差，鑒別處理和非處理因素的差異-類(lèi)型：空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、自身對(duì)照、相類(lèi)型：空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、自身對(duì)照、相互

34、對(duì)照互對(duì)照 隨機(jī)的原則：隨機(jī)的原則：- 對(duì)照組和處理組除處理因素不同外，其余應(yīng)全部相同。對(duì)照組和處理組除處理因素不同外，其余應(yīng)全部相同。- 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分組；觀察切片也應(yīng)隨機(jī)選擇視野動(dòng)物實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分組；觀察切片也應(yīng)隨機(jī)選擇視野 重復(fù)的原則：重復(fù)的原則：- 隨機(jī)原則可排除大部分非處理因素的影響，但不能全部隨機(jī)原則可排除大部分非處理因素的影響，但不能全部消除；因此，有必要重復(fù)，以排除偶然因素的影響。消除；因此，有必要重復(fù)，以排除偶然因素的影響。- 表現(xiàn)為一定的試驗(yàn)樣本數(shù)（人、動(dòng)物、細(xì)胞株）表現(xiàn)為一定的試驗(yàn)樣本數(shù)（人、動(dòng)物、細(xì)胞株）重復(fù)的原則重復(fù)的原則 重復(fù)重復(fù)(replication)是指各處理組與

35、對(duì)照組要有是指各處理組與對(duì)照組要有一定一定樣本含量樣本含量(sample sizes)。 無(wú)限地?zé)o限地增加樣本含量增加樣本含量，將加大實(shí)驗(yàn)規(guī)模，延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，將加大實(shí)驗(yàn)規(guī)模，延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)間，浪費(fèi)人力物力，反而增加系統(tǒng)誤差出現(xiàn)的可能性。時(shí)間，浪費(fèi)人力物力，反而增加系統(tǒng)誤差出現(xiàn)的可能性。 樣本含量不足樣本含量不足，檢驗(yàn)效能（，檢驗(yàn)效能（Power，1）偏低，）偏低，導(dǎo)致總體中本來(lái)具有的差異無(wú)法檢驗(yàn)出來(lái)。導(dǎo)致總體中本來(lái)具有的差異無(wú)法檢驗(yàn)出來(lái)。nX科科 研研 設(shè)設(shè) 計(jì)計(jì) 概論概論 醫(yī)學(xué)科研的基本要素醫(yī)學(xué)科研的基本要素 科研設(shè)計(jì)的基本原則科研設(shè)計(jì)的基本原則 科研設(shè)計(jì)的基本步驟科研設(shè)計(jì)的基本步驟 統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)統(tǒng)計(jì)

36、學(xué)設(shè)計(jì)最有成就的實(shí)驗(yàn)家常常是這樣的人：他們事先對(duì)課題加以周密思考，并將課題分成若干關(guān)鍵的問(wèn)題，然后，精心設(shè)計(jì)為這些問(wèn)題提供答案的實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)步驟實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)步驟 研究目標(biāo)研究目標(biāo) 主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 實(shí)驗(yàn)路線的設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)路線的設(shè)計(jì) 實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì) 確定研究目標(biāo)確定研究目標(biāo)：即該課題解決的科學(xué)問(wèn)題：即該課題解決的科學(xué)問(wèn)題-不要定的目標(biāo)太大：如解決腫瘤治療問(wèn)題不要定的目標(biāo)太大：如解決腫瘤治療問(wèn)題-不要定的目標(biāo)太多：最多不要定的目標(biāo)太多：最多2-3個(gè)目標(biāo)。一個(gè)課題個(gè)目標(biāo)。一個(gè)課題最好集中解決某個(gè)問(wèn)題（總目標(biāo)），如最好集中解決某個(gè)問(wèn)題（總目標(biāo)），如TNF在內(nèi)在內(nèi)毒素性休克中的作用毒素性休

37、克中的作用-不要定不可達(dá)到的目標(biāo)不要定不可達(dá)到的目標(biāo) 主要研究?jī)?nèi)容主要研究?jī)?nèi)容：善于把要解決的問(wèn)題分支成若干：善于把要解決的問(wèn)題分支成若干小的問(wèn)題，從不同角度進(jìn)行研究。小的問(wèn)題，從不同角度進(jìn)行研究。如研究某因素殺瘤作用：殺傷腫瘤譜、殺傷效率、如研究某因素殺瘤作用：殺傷腫瘤譜、殺傷效率、誘導(dǎo)死亡方式，體內(nèi)外試驗(yàn)、殺傷機(jī)制等。誘導(dǎo)死亡方式，體內(nèi)外試驗(yàn)、殺傷機(jī)制等。 研究路線的設(shè)計(jì)：研究路線的設(shè)計(jì)：根據(jù)研究?jī)?nèi)容不同而不同：根據(jù)研究?jī)?nèi)容不同而不同：對(duì)某基因表達(dá)的研究：對(duì)某基因表達(dá)的研究：mRNA、蛋白表達(dá)、定位及功能、蛋白表達(dá)、定位及功能基因調(diào)控：基因調(diào)控：EMSA、報(bào)告基因等、報(bào)告基因等新基因的研究

38、：差顯表達(dá)、新基因的研究：差顯表達(dá)、 RACE、基因克隆、蛋白表、基因克隆、蛋白表達(dá)、功能研究達(dá)、功能研究蛋白組研究：二維電泳、資料比對(duì)、消化、酶解、質(zhì)譜蛋白組研究：二維電泳、資料比對(duì)、消化、酶解、質(zhì)譜 實(shí)驗(yàn)方案：實(shí)驗(yàn)方案：試驗(yàn)對(duì)象（包括試驗(yàn)?zāi)Ｐ停喝?、?dòng)物、細(xì)胞、分子等試驗(yàn)對(duì)象（包括試驗(yàn)?zāi)Ｐ停喝?、?dòng)物、細(xì)胞、分子等處理因素：高糖、處理因素：高糖、LPS、激素、細(xì)胞因子等；單因素、激素、細(xì)胞因子等；單因素多水平、多因素單水平、多因素多水平多水平、多因素單水平、多因素多水平檢測(cè)指標(biāo)：關(guān)聯(lián)性、客觀性、靈敏性、精確性、穩(wěn)定性檢測(cè)指標(biāo)：關(guān)聯(lián)性、客觀性、靈敏性、精確性、穩(wěn)定性尼科爾屬于那種在制定實(shí)驗(yàn)方

39、案之前周密考慮，精心構(gòu)思，從而取得成功的人他絕不象第二流人物，做那種心思來(lái)潮而常常是考慮不周的實(shí)驗(yàn)，自己急得如熱鍋螞蟻。相對(duì)來(lái)說(shuō)，尼科爾做的實(shí)驗(yàn)很少，很簡(jiǎn)單。但是，他做的每一個(gè)實(shí)驗(yàn)都是長(zhǎng)時(shí)間智力孕育的結(jié)果，要考慮到一切可能的因素，并要在最后的實(shí)驗(yàn)中加以檢驗(yàn)。然后，他單刀直入，不做虛功。這就是巴斯德的方法，也是我們這個(gè)職業(yè)中所有偉大人物的方法。他們簡(jiǎn)單的、結(jié)論明確的實(shí)驗(yàn)，對(duì)于那些能夠欣賞的人來(lái)說(shuō)，是一種莫大的精神享受。津澤（美國(guó)細(xì)菌學(xué)家）試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案 簡(jiǎn)述Fas和FasL的作用。請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案，說(shuō)明腫瘤細(xì)胞表達(dá)FasL后，可逃避免疫系統(tǒng)的攻擊。 Tumor cells induce apop

40、tosis in T lymphocytes via FAS activation1) Cancer cells express FAS ligand2) Bind to FAS receptor on T lymphocytes leading to apoptosis 腫瘤細(xì)胞表達(dá)FasL后，可逃避免疫系統(tǒng)的攻擊。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模罕磉_(dá)FasL的腫瘤細(xì)胞可逃避免疫攻擊 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：腫瘤細(xì)胞是否表達(dá)FasL腫瘤細(xì)胞對(duì)活化的淋巴細(xì)胞是否具有殺傷作用體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察表達(dá)和不表達(dá)FasL的腫瘤細(xì)胞的致瘤率 實(shí)驗(yàn)方案：FACS: 檢測(cè)腫瘤細(xì)胞是否表達(dá)FasL 凋亡檢測(cè)：腫瘤細(xì)胞對(duì)活化的淋巴細(xì)胞是否具有殺傷作用（

41、活化淋巴細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞活化淋巴細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞非活化淋巴細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞活化淋巴細(xì)胞抗FasL抗體） 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)課題申請(qǐng)書(shū)課題申請(qǐng)書(shū)（開(kāi)題報(bào)告）的撰寫(xiě)（開(kāi)題報(bào)告）的撰寫(xiě)課題設(shè)計(jì)書(shū)的撰寫(xiě)課題設(shè)計(jì)書(shū)的撰寫(xiě) 對(duì)課題評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)課題評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn) 立論依據(jù)立論依據(jù) 研究目的與研究?jī)?nèi)容研究目的與研究?jī)?nèi)容 研究路線和研究方案研究路線和研究方案 項(xiàng)目的創(chuàng)新性和特色項(xiàng)目的創(chuàng)新性和特色 研究的前期工作研究的前期工作 研究團(tuán)隊(duì)和研究條件研究團(tuán)隊(duì)和研究條件 1. 基礎(chǔ)理論研究基礎(chǔ)理論研究2. 應(yīng)用基礎(chǔ)研究應(yīng)用基礎(chǔ)研究國(guó)家自然科學(xué)基金的評(píng)審程序國(guó)家自然科學(xué)基金的評(píng)審程序課題設(shè)計(jì)書(shū)的撰寫(xiě)課題設(shè)計(jì)書(shū)的撰寫(xiě) 對(duì)課題評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)課題評(píng)

42、價(jià)的標(biāo)準(zhǔn) 立論依據(jù)立論依據(jù) 研究目的與研究?jī)?nèi)容研究目的與研究?jī)?nèi)容 研究路線和研究方案研究路線和研究方案 項(xiàng)目的創(chuàng)新性和特色項(xiàng)目的創(chuàng)新性和特色 研究的前期工作研究的前期工作 研究團(tuán)隊(duì)和研究條件研究團(tuán)隊(duì)和研究條件 立立 項(xiàng)項(xiàng) 依依 據(jù)據(jù) （2-2.5張）張） 該研究項(xiàng)目的重要性：該研究項(xiàng)目的重要性：2-3行即可行即可 常見(jiàn)問(wèn)題：寫(xiě)得太多！常見(jiàn)問(wèn)題：寫(xiě)得太多！介紹在這個(gè)領(lǐng)域的國(guó)內(nèi)外進(jìn)展介紹在這個(gè)領(lǐng)域的國(guó)內(nèi)外進(jìn)展 ，包括自己的工作，并引，包括自己的工作，并引用自己發(fā)表的用自己發(fā)表的SCI文獻(xiàn)（注意圍繞主題）文獻(xiàn)（注意圍繞主題） 常見(jiàn)問(wèn)題：寫(xiě)得太多常見(jiàn)問(wèn)題：寫(xiě)得太多/太少、重點(diǎn)不突出、介紹與主題無(wú)太少、

43、重點(diǎn)不突出、介紹與主題無(wú)關(guān)的進(jìn)展關(guān)的進(jìn)展凝練科學(xué)問(wèn)題，提出假說(shuō)凝練科學(xué)問(wèn)題，提出假說(shuō) （創(chuàng)新性、科學(xué)性及實(shí)用性）（創(chuàng)新性、科學(xué)性及實(shí)用性） 常見(jiàn)問(wèn)題：不知道問(wèn)題在哪兒？或提與主題無(wú)關(guān)的問(wèn)題常見(jiàn)問(wèn)題：不知道問(wèn)題在哪兒？或提與主題無(wú)關(guān)的問(wèn)題 根據(jù)自己前期工作（最好已發(fā)表根據(jù)自己前期工作（最好已發(fā)表SCI文章）提出假說(shuō)文章）提出假說(shuō) 常見(jiàn)問(wèn)題：沒(méi)有形成假說(shuō)、無(wú)邏輯性常見(jiàn)問(wèn)題：沒(méi)有形成假說(shuō)、無(wú)邏輯性簡(jiǎn)介本項(xiàng)目擬開(kāi)展的工作、思路及意義簡(jiǎn)介本項(xiàng)目擬開(kāi)展的工作、思路及意義 常見(jiàn)問(wèn)題：不寫(xiě)常見(jiàn)問(wèn)題：不寫(xiě)科學(xué)問(wèn)題凝練過(guò)程 問(wèn)項(xiàng)：科學(xué)問(wèn)題是在一定科學(xué)知識(shí)背景下, 存在于科學(xué)知識(shí)體系內(nèi)和科學(xué)實(shí)踐中有待解決的疑難，需

44、要深層思考及高度凝練。 答域：是對(duì)求解范圍的限定。 - 全域：對(duì)解答范圍不給予任何限制的科學(xué)問(wèn)題。（瘧疾是什么引起的？） - 類(lèi)域：若對(duì)某科學(xué)問(wèn)題有了初步認(rèn)識(shí), 希望能進(jìn)一步深入, 問(wèn)題的解答范圍即相應(yīng)有了一定程度的限定。（清除污水為何減少瘧疾的發(fā)生？） - 特域：一旦科學(xué)問(wèn)題的答域限定為某個(gè)具體答案，此時(shí)的答域稱(chēng)為特域。研究者根據(jù)科學(xué)推理給出嘗試性解答或假說(shuō)。（瘧疾是由蚊子傳播的。）課題設(shè)計(jì)書(shū)的撰寫(xiě)課題設(shè)計(jì)書(shū)的撰寫(xiě) 對(duì)課題評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)課題評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn) 立論依據(jù)景立論依據(jù)景 研究目的與研究?jī)?nèi)容研究目的與研究?jī)?nèi)容 研究路線和研究方案研究路線和研究方案 項(xiàng)目的創(chuàng)新性和特色項(xiàng)目的創(chuàng)新性和特色 研究的前

45、期工作研究的前期工作 研究團(tuán)隊(duì)和研究條件研究團(tuán)隊(duì)和研究條件 研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題和擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題 研究目標(biāo)：明確、集中，用研究目標(biāo)：明確、集中，用2-3句話描述。句話描述。 常見(jiàn)問(wèn)題：太大、分散或不明確常見(jiàn)問(wèn)題：太大、分散或不明確 研究?jī)?nèi)容：根據(jù)假說(shuō)，將研究問(wèn)題分支，從不同研究?jī)?nèi)容：根據(jù)假說(shuō)，將研究問(wèn)題分支，從不同側(cè)面或角度進(jìn)行研究；每一分支就組成一個(gè)研究側(cè)面或角度進(jìn)行研究；每一分支就組成一個(gè)研究?jī)?nèi)容。注意研究?jī)?nèi)容要集中，圍繞假說(shuō)從不同角內(nèi)容。注意研究?jī)?nèi)容要集中，圍繞假說(shuō)從不同角度（平行）及不同層次（縱深）開(kāi)展研究。度（平行）及不同層次（縱深）開(kāi)展研究。 常

46、見(jiàn)問(wèn)題：太細(xì)、與研究方案混淆常見(jiàn)問(wèn)題：太細(xì)、與研究方案混淆 擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題：包括解決的關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題、擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題：包括解決的關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題、整個(gè)研究中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)及技術(shù)難點(diǎn)整個(gè)研究中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)及技術(shù)難點(diǎn) （如模型的（如模型的制備、分子表達(dá)率和純化等）制備、分子表達(dá)率和純化等） 常見(jiàn)問(wèn)題：找不準(zhǔn)常見(jiàn)問(wèn)題：找不準(zhǔn)課題設(shè)計(jì)書(shū)的撰寫(xiě)課題設(shè)計(jì)書(shū)的撰寫(xiě) 對(duì)課題評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)課題評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn) 立論依據(jù)景立論依據(jù)景 研究目的與研究?jī)?nèi)容研究目的與研究?jī)?nèi)容 研究路線和研究方案研究路線和研究方案 項(xiàng)目的創(chuàng)新性和特色項(xiàng)目的創(chuàng)新性和特色 研究的前期工作研究的前期工作 研究團(tuán)隊(duì)和研究條件研究團(tuán)隊(duì)和研究條件 研究路線和研

47、究方案研究路線和研究方案 研究路線：整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程及線路，可以用線路圖表示，研究路線：整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程及線路，可以用線路圖表示，但要簡(jiǎn)明易懂。但要簡(jiǎn)明易懂。 常見(jiàn)問(wèn)題：未寫(xiě)，或線路圖畫(huà)得太復(fù)雜常見(jiàn)問(wèn)題：未寫(xiě)，或線路圖畫(huà)得太復(fù)雜 研究方案：研究對(duì)象、處理因素、分組、用某種技術(shù)檢測(cè)研究方案：研究對(duì)象、處理因素、分組、用某種技術(shù)檢測(cè)某種指標(biāo)等?？砂凑昭芯?jī)?nèi)容在分標(biāo)題下描述。某種指標(biāo)等。可按照研究?jī)?nèi)容在分標(biāo)題下描述。 常見(jiàn)問(wèn)題：將方法寫(xiě)得太細(xì)、檢測(cè)指標(biāo)太多，不突出重點(diǎn)；常見(jiàn)問(wèn)題：將方法寫(xiě)得太細(xì)、檢測(cè)指標(biāo)太多，不突出重點(diǎn)；或不寫(xiě)具體檢測(cè)哪種信號(hào)分子；未設(shè)計(jì)正確對(duì)照；臨床病或不寫(xiě)具體檢測(cè)哪種信號(hào)分子；未設(shè)計(jì)正確

48、對(duì)照；臨床病例要排除和納入標(biāo)準(zhǔn)及樣本數(shù)；僅做平行檢測(cè)，無(wú)深度；例要排除和納入標(biāo)準(zhǔn)及樣本數(shù)；僅做平行檢測(cè)，無(wú)深度； 注意問(wèn)題：設(shè)計(jì)巧妙、盡量使用先進(jìn)技術(shù)、盡量從不同角注意問(wèn)題：設(shè)計(jì)巧妙、盡量使用先進(jìn)技術(shù)、盡量從不同角度去驗(yàn)證一個(gè)問(wèn)題、注意合理應(yīng)用抑制性、促進(jìn)性和排除度去驗(yàn)證一個(gè)問(wèn)題、注意合理應(yīng)用抑制性、促進(jìn)性和排除性實(shí)驗(yàn)手段性實(shí)驗(yàn)手段肝臟缺血再灌注損傷及藥物的保護(hù)肝臟缺血再灌注損傷及藥物的保護(hù)（技術(shù)路線）（技術(shù)路線）活性氧NOMMPs研究路線和研究方案研究路線和研究方案 研究路線：整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程及線路，可以用線路圖表示，研究路線：整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程及線路，可以用線路圖表示，但要簡(jiǎn)明易懂。但要簡(jiǎn)明易懂。 常見(jiàn)問(wèn)題：未寫(xiě)，或線路圖畫(huà)得太復(fù)雜常見(jiàn)問(wèn)題：未寫(xiě)，或線路圖畫(huà)得太復(fù)雜 研究方案：研究對(duì)象、處理因素、分組、用某種技術(shù)檢測(cè)研究方案：研究對(duì)象、處理因素、分組、用某種技術(shù)檢測(cè)某種指標(biāo)等?？砂凑昭芯?jī)?nèi)容在分標(biāo)題下描述。某種指標(biāo)等?？砂凑昭芯?jī)?nèi)容在分標(biāo)題下描述。 常見(jiàn)問(wèn)題：將方法寫(xiě)得太細(xì)；檢測(cè)指標(biāo)太多，不突出重點(diǎn)，常見(jiàn)問(wèn)題：將方法寫(xiě)得太細(xì)；檢測(cè)指標(biāo)太多，不突出重點(diǎn)，不相關(guān)；或不寫(xiě)具體檢測(cè)哪種信號(hào)分子；未設(shè)計(jì)正確對(duì)照；不相關(guān)；或不寫(xiě)具