銀屑病皮損中TIG1mRNA表達及其與異常分化的關系

1、銀屑病皮損中TIG1 mRNA表達及其與異常分化的關系【摘要】 目的 檢測銀屑病中抑癌基因TIG1的表達變化以揭示其在尋常型銀屑病發(fā)病機制中的作用。方法 用原位雜交的方法檢測正常組皮膚組織、銀屑病組未受累皮膚組織和皮損中TIG1m RNA的表達。結果 在正常組皮膚組織中，TIG1表達于表皮全層；在銀屑病組未受累皮膚組織和銀屑病邊緣皮損中，可見TIG1表達于基底上層，在銀屑病中間皮損中無表達。TIG1在銀屑病邊緣皮損和未受累組織基底層中的表達低于其在正常組皮膚基底層中的表達(P<0.01)；TIG1在銀屑病中間皮損基底上層中的表達低于其在未受累皮膚和正常組皮膚的表達(P&l

2、t;0.01)。結論 TIG1可保持表皮正常分化功能，TIG1的降低可能與銀屑病角質形成細胞的異常分化相關。 【關鍵詞】 銀屑病 tazarotene誘導基因1 tazaroteneABSTRACT: Objective To detect alteration of antioncogene TIG1 mRNA in order to reveal the mechanism of TIG1 in psoriasis vulgaris. Methods Expression of TIG1 mRNA in normal tissues, uninvolved skin tissues and

3、 psoriatic lesions was detected by in situ hybridization. Results TIG1 mRNA was expressed in all layers of normal epidermis. In uninvolved tissues and the marginal part of psoriatic lesions, TIG1 expression could be observed in the suprabasal layers of epidermis, and there was no expression in the c

4、entral part of psoriatic lesions. TIG1 expression was less in the basal layer of the marginal part of psoriasis and uninvolved tissues compared with that of the normal skin (P<0.01). TIG1 expression was also less in the suprabasal layers of the central part of psoriasis compared with that of

5、the normal skin and the uninvolved tissues (P<0.01). Conclusion TIG1 may maintain the normal differentiation of epidermal keratinocytes and may be associated with the abnormal differentiation of psoriatic keratinocytes.2 / 13KEY WORDS: psoriasis; tazaroteneinduced gene 1; tazarotene維A酸通過與核內兩類

6、受體結合而調節(jié)表皮增生、誘導分化，并抑制表皮腫瘤的形成。Tazarotene作為一類合成的RAR/選擇性炔類維A酸，可誘導角質形成細胞(keratinocyte, KC)表達抑癌基因tazarotnene誘導基因(TIG)1，2和313。TIG1于1996年克隆成功1，在體內及體外可被tazarotene誘導KC表達，在維A酸治療后的銀屑病皮損中，TIG1的表達升高。TIG1的強烈表達可誘導維A酸受體(retinoid acid receptor, RAR)特異性因子表達，且TIG1可類似于一種免疫細胞中的維酸反應分子CD384。在正常皮膚組織中，KC在表皮中從基底層到角質層，逐漸分化脫落，而

7、鱗癌組織中，出現(xiàn)大量分化不良的KC。由于TIG1與細胞的增殖和分化狀態(tài)有關，又可被維A酸誘導，而銀屑病為復發(fā)性慢性炎癥性皮膚病，其主要治療方法為維A酸，故我們檢測TIG1在尋常性銀屑病中的表達以了解其作用機制。1 材料與方法1.1 研究對象和分組 收集臨床和病理確診的進行期尋常型銀屑病28例(男17例，女11例；年齡16-48歲，平均33.8歲)為銀屑病組。18例正常組織(男12例，女6例，年齡18-51歲，平均36.1歲)為正常組。此兩組一般狀況統(tǒng)計學分析差異無統(tǒng)計學意義。1.2 材料 原位雜交試劑盒購自武漢博士德生物公司，TIG1的探針序列：5>AAAGT TCACG TGG

8、TC TTCAG CACAG AGCGC TACAA<3，5>ATAGT CAGCA TACCT GATAA TCATG GACAT ATTGA<3， 5>AATCA GA AAC CCAGA CCAAC CATCA ATGTA ACTTG<3，5地高辛標記，與人類其他基因無同源性。1.3 方法 原位雜交方法如文獻5所述。銀屑病組外科無菌包切開取皮損及皮損周圍組織(距皮損小于0.5cm)，正常組織仍用無菌包切開取皮膚組織，100mL/L福爾馬林(DEPC配制)固定標本，石蠟包埋組織，切片脫蠟水化后用30mL/L雙氧水(DEP

9、C配制)孵育10min，DEPC水洗6min；蛋白酶K37消化30min，以去除阻礙探針結合的表面蛋白；PBS和DEPC各水洗6min；每片加預雜交液20L，42孵育2h；其后加入濃度為13pmol/L的寡核苷酸探針20L，42雜交22h；2×SSC和1×SSC液各洗15min，羊血清封閉液37封閉30min，生物素化的鼠抗地高辛37孵育30min，辣根過氧化物酶標記的鏈霉素復合物37孵育30min，DAB染色，蘇木素復染。陰性對照用預雜交液(寡核苷酸不加入探針)代替雜交液。陽性判斷標準：角質形成細胞中有棕黃色顆粒沉著，陰性無此沉著。1.4 統(tǒng)計學處理 應用卡方檢驗和精確概

10、率法進行統(tǒng)計學分析(SPSS13.0)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2 結果2.1 原位雜交檢測TIG1 mRNA在各組織中的表達結果 正常組中TIG1的棕黃染色位于正常表皮全層(圖1A)；在銀屑病組未受累皮膚組織中，其陽性主要表達于基底上層，部分區(qū)域基底層著色(圖1B)，在邊緣皮損中，TIG1表達于棘層上部，在棘層下部及基底層中無表達(圖1C)，而在中間皮損中無表達(圖1D)。圖1 原位雜交檢測TIG1 mRNA在各皮膚組織中的表達（略）Fig.1 Expression of TIG1 mRNA in different skin tissues by in situ h

11、ybridizationA: Normal skin: there was brown staining in all layers of epidermis (×200); B: Uninvolved skin tissues: brown expression could be observed in suprabasal layers of epidermis (×400); C: The marginal part of psoriatic tissues: TIG1 expression could be observed in the upper or midd

12、le layers of stratum spinosum (×200); D: The central part of psoriatic tissues: there was no staining (×100)2.2 TIG1 mRNA在各組皮膚組織表皮基底層內的表達比較 TIG1在正常組皮膚基底層中的表達高于其在銀屑病組未受累組織和邊緣皮損基底層中的表達：TIG1在正常組皮膚基底層中的陽性率為12/18(66.7%)，而在銀屑病組未受累組織和邊緣皮損中表達分別為4/28(14.3%)，2/28(7.1%)，前者與后兩者差異有統(tǒng)計學意義(2=13.3, 2=18.3,

13、 P<0.01)。2.3 TIG1 mRNA在各組皮膚的表達比較 TIG1在正常組皮膚和在銀屑病組未受累皮膚中的表達高于其在銀屑病中間皮損中的表達：TIG1在正常組皮膚和銀屑病組未受累皮膚中的陽性率分別為12/18(66.7%)，而在銀屑病組中間皮損中的表達為1/28(3.6%)，前者與后者差異有統(tǒng)計學意義(2=21.5, P<0.01)。3 討論 我們的結果表明TIG1可能與角質形成細胞的分化狀態(tài)有關。正常表皮各層KC均可產生TIG1，故TIG1具有保持正常皮膚組織分化增殖的功能67。本研究結果顯示，在銀屑病患者的未受累表皮中，高分化角質形成細胞如棘層上部和顆粒層

14、均表達TIG1，銀屑病邊緣皮損中TIG1的表達下降，且只表達于棘層上部。在銀屑病患者未受累組織和邊緣皮損的表達類似于involucrin的表達8，而后者是高分化角質形成細胞的標志，其陽性表達處說明細胞分化較好。在銀屑病中間皮損中，細胞周期加快，表皮經過時間很短，細胞尚未分化好就經歷凋亡9，故TIG1也未見著色，說明TIG1也有望作為一種與KC分化狀態(tài)有關的指標。 作為一種抑癌基因，TIG1的啟動基因可以超甲基化，且TIG1基因表達與啟動子超甲基化狀態(tài)有關，當用5AzadCyd處理后，TIG1的表達可恢復10。這些均說明，啟動子超甲基化狀態(tài)抑制了TIG1的基因表達，而TIG1基因的乙酰化狀態(tài)并不

15、能導致其基因沉默。TIG1基因表達依賴于RAR2促進子的甲基化狀態(tài)，在某些腫瘤細胞系中，由于啟動子超甲基化所致的TIG1基因的缺失可導致對維A酸治療的反應性喪失10。最近的研究表明：TIG1作為抑癌基因，在前列腺癌細胞系及活體腫瘤組織中表達均下降，通過轉染表達載體而恢復TIG1的表達后，在很大程度上減弱了腫瘤對裸鼠的侵襲性及致瘤性(2.4倍)11。如前所述，在某些腫瘤細胞系中，由于啟動子超甲基化所致的TIG1基因的缺失可導致對維A酸治療的反應性喪失7，故TIG1的表達也與角質形成細胞的增殖狀態(tài)有關，其基因缺失可導致異常性增生。 故在正常皮膚組織中TIG1可保持角質形成細胞正常增殖和分化的功能，

16、在銀屑病早期，角質形成細胞經歷異常分化，導致角質形成細胞分泌的分化因子改變，且TIG1啟動基因可以超甲基化而影響其基因表達，形成異常增殖和分化?！緟⒖嘉墨I】 1Nagpal S, Patel S, Asano AT, et al. Tazaroteneinduced gene 1, a novel retinoid acid receptorresponsive gene in skin J. J Invest Dermatol, 1996, 106:269274.2Nagpal S, Patel S, Jacobe H, et al. Tazaroteneinduced gene 2 (TI

17、G2), a novel retinoidresponsive gene in skin J. J Invest Dernatol, 1997, 109(1):9195.3Duvic M, Helekar B, Schulz C, et al. Expression of a retinoidinducible tumor suppressor, Tazaroteneinducible gene3, is decreased in psoriasis and skin cancer J. Clin Cancer Res, 2000, 6(8):32493259.4Nagpal S, Chand

18、raratna RA. Recent developments in receptorselective retinoids J. Curr Pharm Des, 2000, 6:919931.5鄭焱，彭振輝，譚升順，等. 維甲酸誘導前后異維甲酸受體在銀屑病中的變化 J. 西安交通大學學報(醫(yī)學版), 2003, 24(3):258260.6Youssef EM, Chen XQ, Higuchi E, et al. Hypermethylation and silencing of the putative tumor suppressor Tazaroteneinduced gene 1 in human cancers J. Cancer Res, 2004, 64(7):24112417.7陳建麗，曹婷婷. 全反式維甲酸對A549細胞株增殖和Caspase3蛋白表達的影響 J. 鄭州大學學報(醫(yī)學版), 2007, 42(3):531533.8Youssef EM, Chen XQ, Higuchi E, et al. Hypermeth