TGFβ1及其Ⅱ型受體在涎腺黏液表皮樣癌中的表達

1、TGF1及其型受體在涎腺黏液表皮樣癌中的表達【摘要】 目的研究TGF1、TGFR在涎腺黏液表皮樣癌中的表達和意義。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測10例正常涎腺組織、45例黏液表皮樣癌中TGF1和TGFR的表達。結(jié)果正常涎腺組織、黏液表皮樣癌中均表達TGF1陽性，但正常組的染色強度明顯低于腫瘤組（P<0.05）；TGFR在正常涎腺組的陽性表達率為100，在腫瘤組的陽性表達率為42.22，兩者具有顯著性差異(P<0.05)，且高分化組TGFR的陽性表達顯著高于中、低分化組。 結(jié)論TGF1的高表達和TGFR的缺失在黏液表皮樣癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能起重要作用。 【關(guān)鍵詞】

2、黏液表皮樣癌免疫組織化學(xué)轉(zhuǎn)化生長因子1轉(zhuǎn)化生長因子受體 Expression of TGF1 and Its Receptor in Salivary Gland Mucoepidermoid Carcinoma Abstract: Purpose To investigate the expression and significance of TGF1 and its receptor (TGFR)in salivary gland mucoepidermoid carcinoma(MEC). MethodThe expression of TGF1 and TGFR protein in

3、 10 cases with normal salivary gland tissue and 45 cases with MEC was detected by the streptavidin-peroxidase (SP) immunohistochemical method. ResultsPositive expression of TGF2 / 121 was detected in both normal salivary gland and MEC, but positive stain intensity of normal salivary gland was signif

4、icantly weaker than that of MEC (P<0.05). The positive rate of TGFR expression in normal salivary group was 100% which was significantly heavier than that in MEC (42.22%, P<0.05). In MEC, compared with moderately and poorly differentiated groups, well differentiated group showed increa

5、sed positive rate of TGFR. Conclusion The high expression of TGF1 and the defect of TGFR may play an important role in carcinogenesis and progression of MEC. Key words: mucoepidermoid carcinoma; immunohistochemistry; TGF1, TGFR 黏液表皮樣癌是常見的涎腺惡性腫瘤，約占30%1，其組織結(jié)構(gòu)復(fù)雜，分化程度不一，在臨床病理診斷及預(yù)后判斷上存在一定難度。轉(zhuǎn)化生長因子1（trans

6、forming growth factor?鄄beta1, TGF1）是一組功能復(fù)雜的多肽生長因子，大量研究表明，TGF1直接或間接參與機體的各種生理、病理過程，對細(xì)胞的增殖和分化、細(xì)胞外基質(zhì)的形成、血管生成、免疫抑制、腫瘤形成等均起著重要作用。TGF1必須與細(xì)胞表面的特異性受體結(jié)合才能發(fā)揮效應(yīng)，轉(zhuǎn)化生長因子受體（transforming growth factor?鄄beta receptor , TGFR）是一種位于細(xì)胞膜表面的跨膜糖蛋白，具有自身磷酸化功能，在TGF1的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中發(fā)揮重要作用。我們旨在通過檢測這兩種蛋白在黏液表皮樣癌中的表達，探討其在黏液表皮樣癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用

7、和意義。 1 材料與方法 11 標(biāo)本來源 45例黏液表皮樣癌、10例癌旁正常涎腺組織標(biāo)本均來源于安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院及安徽省省立醫(yī)院病理科19982003年間存檔蠟塊。患者年齡為1368歲，男性28例，女性17例，發(fā)生部位包括腮腺、腭部、頜下腺、舌下腺、磨牙后區(qū)、舌部、頰部等。高、中、低分化黏液表皮樣癌分別為21、18、6例。其中發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移6例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例。腫瘤直徑5cm 10例，5cm 35例。 所有蠟塊經(jīng)4m連續(xù)切片后分別作HE及免疫組化（SP法）染色，結(jié)果均經(jīng)兩位有經(jīng)驗的病理科醫(yī)師雙盲法閱片并取得一致意見。黏液表皮樣癌的診斷及病理分級依據(jù)口腔組織病理學(xué)第5版1確定。 12

8、 主要試劑 兔抗人TGF1多克隆抗體、兔抗人TGFR多克隆抗體（使用濃度均為150，購自Santa Cruz公司），即用型免疫組織化學(xué)超敏SP試劑盒（廣譜），DAB染色劑等購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。 13 實驗方法 按邁新公司提供的染色程序進行SP免疫組織化學(xué)染色。用乳腺癌組織的TGF1和TGFR陽性片作為陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。14 結(jié)果判定 光鏡下觀察，TGF1、TGFR陽性表達均定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，以出現(xiàn)清晰的淺黃色棕褐色顆粒判定為陽性，細(xì)胞核不表達。反應(yīng)結(jié)果根據(jù)胞質(zhì)、胞膜的著色程度分為：胞質(zhì)、胞膜無著色（），淡黃色為（），棕黃色為（），棕褐色為（）。（）以上為TGF

9、1、TGFR高表達。 15 統(tǒng)計學(xué)處理 各組數(shù)據(jù)結(jié)果以Fishers精確概率法或2檢驗進行顯著性差異分析，以P0.05為顯著性界限。 2 結(jié) 果 21 TGF1在黏液表皮樣癌中的表達 10例正常涎腺組織和45例黏液表皮樣癌組織中，TGF1陽性表達率均為100，正常組中主要定位于各級導(dǎo)管上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及涎腺間質(zhì)，表現(xiàn)為胞質(zhì)和胞膜呈淡黃色或棕黃色，陽性顆粒粗細(xì)不等，腺泡上皮細(xì)胞未見表達（圖1）；腫瘤組定位于腫瘤細(xì)胞，胞質(zhì)、胞膜的陽性著色均勻、分布廣泛，黏液細(xì)胞、表皮樣細(xì)胞和中間細(xì)胞的染色強度無明顯差異（圖2）。實驗可見黏液表皮樣癌組TGF1的陽性染色強度較正常組明顯增強，其高表達率為84.

10、44，與正常組（30.00）相比具有顯著性差異（P0.05），但其高表達與腫瘤的組織學(xué)分級無關(guān)（見表1）。 22 TGFR在黏液表皮樣癌中的表達 TGFR在正常涎腺和黏液表皮樣癌的陽性表達部位與TGF1基本相似（圖3、4），正常組的陽性表達率為100（10/10），腫瘤組的陽性表達率為42.22（19/45），兩者具有顯著性差異（P0.001）。隨著腫瘤分化程度的降低，TGFR的陽性表達率呈逐漸降低的趨勢，高分化組與中、低分化組分別為61.90（13/21）、25.00（6/24），經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，顯示兩者間的差異有顯著性（26.25，P0.05）。TGFR的高表達率在正常組和腫瘤組間差異無顯著

11、性，且腫瘤組中不同分化程度的黏液表皮樣癌間也未見明顯差異（見表2）。 3 討 論 TGF是Assoian等2在1983年首次發(fā)現(xiàn)的，分子量為25kD，成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等幾乎所有體內(nèi)細(xì)胞都能合成TGF，且所有正常細(xì)胞都有這個家族的膜結(jié)合受體。TGF在生物體內(nèi)大部分以前體形式存在，以無活性或潛活形式分泌，必須由其相應(yīng)的受體介導(dǎo)后才能發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，TGF與TGFR形成復(fù)合物，被TGFR識別并結(jié)合，使TGFR中的激酶活化，TGFR磷酸化，細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路激活，阻止細(xì)胞由G1期進入S期，從而抑制細(xì)胞增殖。在人與哺乳動物中，TGF包括三種亞型：即TGF13，以TGF

12、1最具代表性。由于其分布的廣泛性和作用的復(fù)雜性，國內(nèi)外學(xué)者在這一領(lǐng)域的研究一直非?；钴S，大量研究表明，TGF1對多種上皮性腫瘤的體外增殖起負(fù)性調(diào)節(jié)作用，但目前有關(guān)TGF1在人類腫瘤中表達的報道并不一致35。本研究結(jié)果顯示，TGF1在腫瘤組的陽性表達率同正常組（100），TGFR在腫瘤組的陽性表達率為42.22，顯著低于正常組（100），且高分化組的陽性表達明顯高于中、低分化組，提示可能是由于TGFR的缺失、突變或不表達，使得TGF1不能被激活發(fā)揮其生長抑制功能，導(dǎo)致腫瘤上皮細(xì)胞的無限制增殖形成腫瘤，而TGFR的陽性表達與腫瘤的分化程度相關(guān)，則說明TGFR的表達缺失不僅與黏液表皮樣癌的發(fā)生有關(guān)，

13、還與其發(fā)展關(guān)系密切。 實驗中我們還發(fā)現(xiàn)TGF1在腫瘤組的高表達率明顯高于正常組，說明TGF1在黏液表皮樣癌中的表達量有所增加，我們認(rèn)為這是當(dāng)腫瘤細(xì)胞逃逸了TGF1的生長抑制作用后，細(xì)胞的過度增殖、浸潤、破壞周圍正常組織，激發(fā)機體免疫反應(yīng)，淋巴細(xì)胞在局部聚集并產(chǎn)生大量TGF1，且形成的腫瘤細(xì)胞也能自分泌大量無活性的TGF1，所以在黏液表皮樣癌中能檢測到TGF1的高表達，這一結(jié)果與Dillard等6的報道一致。TGF1的高表達與腫瘤的組織學(xué)分級無關(guān)，提示TGF1的表達強度與腫瘤的惡性程度關(guān)系不大，但因為TGF1具有促細(xì)胞外間質(zhì)細(xì)胞的增殖作用，它的高水平表達可促進結(jié)締組織粘連、血管生成及增強癌細(xì)胞的

14、浸潤和轉(zhuǎn)移，所以有待進一步研究其與黏液表皮樣癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及生存期的關(guān)系。本研究中，正常組與腫瘤組間TGFR的高表達無顯著性差異，且不同分化程度的腫瘤間也未見明顯差異，說明黏液表皮樣癌的發(fā)生發(fā)展主要與TGFR的缺失有關(guān)，而與其表達強度無關(guān)。 從以上研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TGF1的高表達和TGFR的缺失在黏液表皮樣癌的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用，因此通過增加TGFR的表達恢復(fù)癌細(xì)胞對TGF1負(fù)性生長的敏感性，解除TGF1引起的免疫抑制，抑制高表達TGF1促進癌轉(zhuǎn)移的作用，將為腫瘤的治療開辟新的途徑，Turco等7的實驗也提示增加TGFR的表達可降低人神經(jīng)膠質(zhì)瘤的惡型性并誘導(dǎo)其分化。所以進一步探討

15、TGF1及其受體在黏液表皮樣癌中的調(diào)控機制，可為有效防治黏液表皮樣癌提供新思路?！緟⒖嘉墨I】 1于世鳳. 口腔組織病理學(xué)M. 第5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003.287-290.2 Assoian RK. Transforming growth factor?鄄 in human plateletsJ. J Biol Chem, 1983,258:7155.3 Park C, Kim WS, Choi Y, et al. Effects of transforming growth factor?鄄beta(TGF?鄄) receptor on lung carcinogenesisJ.

16、Lung Cancer,2002,38(2):143-147.4Saji H,Nakamura H,Awut I,et al.Significance of expression of TGF?鄄beta in pulmonar metastasis in non?鄄small cell lung cancer tissuesJ.Ann Thorac Cardiovasc Surg,2003, 9(5):295-300.5 Paik SY, Park YN, Kim H, et al. Expression of transforming growth factor?鄄beta 1 and transforming growth factor?鄄beta receptors in hepatocellular carcinoma and dysplastic nodulesJ. Mod Pathol, 2003,16(1):86-96.6 Dillard DG, Muller S, Cohen C, et al. High tumor grade in salivary gland mucoepidermoid carcinomas and loss of expression of transforming growth factor beta receptor