版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、右心室肥大時心肌間質(zhì)膠原改建及其前膠原基因的表達(dá) 【摘要】目的了解法樂四聯(lián)癥肥大右室心肌間質(zhì)、型膠原的改建及與前膠原基因mRNA表達(dá)的關(guān)系,為防治心肌間質(zhì)膠原改建提供新的依據(jù)和途徑。方法用生化方法定量分析了22例法樂四聯(lián)癥患者和8例非心血管及膠原系統(tǒng)疾病尸檢者的右室心肌間質(zhì)中的膠原含量和、型膠原比值,以及用斑點雜交法測定法樂四聯(lián)癥患者右室心肌間質(zhì)、型前膠原基因mRNA的表達(dá)。結(jié)果法樂四聯(lián)癥組心肌間質(zhì)膠原含量為(14.85±2.48)g/mg總蛋白,較對照組(7.55±1.89) g/mg總蛋白明顯增多(P0.05);其/型膠原比值為5.10±1.84,較對照組2.
2、27±0.58顯著增高(P0.05);法樂四聯(lián)癥組右室心肌間質(zhì)膠原含量與、型前膠原基因表達(dá)強度的相關(guān)系數(shù)分別為0.80(P0.001)、-0.277(P0.10)。右室心肌間質(zhì)膠原/型比值與/ 型前膠原基因表達(dá)強度比值呈正相關(guān),r=0.47(P0.05)。結(jié)論提示法樂四聯(lián)癥肥大右室心肌間質(zhì)存在以膠原含量增多和/型比值增高為特點的膠原改建,且主要與型前膠原基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)有關(guān)。 Remodeling of myocardial interstitial collagen and procollagen gene expression 1 / 14【Abstract】Object
3、iveTo investigate the characteristics and procollagen gene expression of myocardial interstitial collagen of right ventricle in tetralogy of Fallot (TOF).MethodsSamples of the infundibular septum from 22 patients with TOF and 8 patients without cardiovascular disease and collagen system disease as c
4、ontrol were studied. Collagen was determined by biochemical methods, Pro (I) mRNA, Pro (III) mRNA levels were determined by dot blot hybridization.ResultsThe hydroxyproline concentration and the ratio of type / collagen in the right ventricle with TOF were significantly higher than those in controls
5、 14.85±2.48 (±s) g/mg total protein vs 7.55±1. 89 g/mg total protein, respectively, P0.05; 5.10±1.84 vs 2.27±0.58, P0.05, respectively. The correlation between the hydroxyproline concentration with the level of Pro ()mRNA, Pro () mRNA were 0.80 (P0.001) and -0.277 (P0.10), r
6、espectively. The correlation between the ratio of type I/III collagen and the ratio of type / procollagen mRNA was positive (r=0.47, P0.05).ConclusionIncreased collagen and the ratio of type / collagen are the characteristics in collagen remodeling of the hypertrophic right ventricle in TOF. Enhance
7、d type procollagen gene expression may be the cause of the increased collagen synthesis. 【Key words】tetralogy of Fallotmyocardiumcollagenfibrosis 左室心肌間質(zhì)纖維化已日漸引起人們的重視,心肌間質(zhì)纖維化是心力衰竭(心衰)進展中的有害因素之一1。右室肥大是否和左室肥大一樣面臨同樣的問題? Bishop等2對動物右室肥大模型的研究結(jié)果表明:早期間質(zhì)膠原不一定增加,后期則有明顯增加,/型膠原比值亦升高,其原因是由于膠原基因mRNA的水平上調(diào)。對于人類,Sch
8、wartz等3報道嬰兒時期法樂四聯(lián)癥的右室膠原面積百分比與正常對照組相差無異,而李新民等4觀察到法樂四聯(lián)癥患者右室心肌間質(zhì)有纖維化,但缺乏定量研究。鑒于此,筆者著重研究法樂四聯(lián)癥患者右室肥大時心肌間質(zhì)纖維化的主要組成部分即膠原的改建和前膠原基因mRNA的表達(dá),為進一步研究心肌間質(zhì)膠原改建的防治提供依據(jù)和新的途徑。 資料與方法 1.病例:術(shù)前和術(shù)中確診并行法樂四聯(lián)癥根治術(shù)的患者共22例,年齡 1.529歲,平均(8.7±6.4)歲;同期非心血管病及膠原系統(tǒng)疾病死亡者為對照組共8例,平均年齡(6.4±5.7)歲,兩組間年齡差異無顯著性(P0.05)。 2.膠原分析:法樂四聯(lián)癥組
9、和對照組切取右室流出道心肌組織塊,剪去心內(nèi)膜,預(yù)冷 PBS沖洗后液氮速凍,貯存于-70。用TRIzol試劑盒一步法提取總蛋白,用改良堿水解法測定羥脯氨酸(標(biāo)準(zhǔn)羥脯氨酸購自中國科學(xué)院上海生化所東風(fēng)生化技術(shù)公司),按Lowry法測定總蛋白濃度,然后參照Tanaka和Honda的方法提取膠原,經(jīng)SDS-PAGE電泳并以對應(yīng)于標(biāo)準(zhǔn)、型膠原蛋白(Sigma產(chǎn)品)區(qū)帶的積分值進行膠原/型比值分析。 3.探針:(1)含型前膠原1鏈cDN A探針簡稱 pro 1()探針的PUC 18重組質(zhì)粒由美國康涅狄格大學(xué)健康中心兒科的U. Rowe和B.E Kream惠贈,經(jīng)轉(zhuǎn)化、抽提、酶切、純化,得到1.3kb pro
10、 1() 探針;(2)pro 1()探針為 4.5 kb cDNA(由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院勞動衛(wèi)生與職業(yè)病研究所劉秉慈老師提供);(3)內(nèi)對照選用雞的磷酸-3-甘油醛脫氫酶(GAPDH)探針,片段大小為0.6 kb(由湖南醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所江寧博士提供)。 4.心肌組織總RNA的提取和雜交:用TRIzol試劑盒一步法提取心肌組織總的RNA,以放射性同位素32P為標(biāo)記物,隨機引物試劑盒標(biāo)記探針,各點上樣量為20 g,用斑點雜交法檢測 mRNA,將膜上各點pro 1()、pro 1()的灰度面積積分除以同一膜上GAPDH的灰度面積積分即為各型mRNA的表達(dá)強度。 5.數(shù)據(jù)計算及統(tǒng)計學(xué)分析:實驗數(shù)據(jù)以
11、±s表示,組間比較采用方差分析,t檢驗和t檢驗, 法樂四聯(lián)癥組膠原含量與前膠原基因表達(dá)的關(guān)系采用直線相關(guān)分析。 結(jié)果 1.法樂四聯(lián)癥組心肌間質(zhì)膠原含量(以羥脯氨酸含量代表)平均(14.85±2.48) g/mg總蛋白,較對照組平均(7.55±1.89) g/mg總蛋白明顯增多,P0.05; 法樂四聯(lián)癥/型膠原比值5.10±1.84,較對照組2.27±0.58顯著增高,P0.05。 2.法樂四聯(lián)癥組右室心肌間質(zhì)膠原含量與型膠原基因表達(dá)強度相關(guān)性分析顯示,兩者呈正相關(guān), r=0.80,P0.001;與型膠原基因表達(dá)強度的相關(guān)分析顯示,其相關(guān)系數(shù)為-
12、0.277, P0.10,差異無顯著性。右室心肌間質(zhì)膠原/型比值與/ 型膠原基因表達(dá)強度比值的相關(guān)分析顯示,兩者呈正相關(guān)(r=0.47,P0.05)。 討論 心肌組織包括心肌細(xì)胞和間質(zhì),間質(zhì)約占心肌組織體積的25%,由細(xì)胞和基質(zhì)組成,其中含有內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞及成纖維細(xì)胞等5。膠原為間質(zhì)基質(zhì)的主要成分,由型和型膠原構(gòu)成,其中80%以上為型,型僅占11%左右,此外還有少量型及型膠原等6。 Eghbail 等7用原位雜交法在離體心臟細(xì)胞上檢測、型膠原mRNA,發(fā)現(xiàn)只在成纖維細(xì)胞上表達(dá),而心肌細(xì)胞未見表達(dá)?,F(xiàn)一般認(rèn)為,心成纖維細(xì)胞合成分泌心肌間質(zhì)膠原,一些文獻報道在動物的右室肥大模型中觀察到右
13、室肥大時其心肌間質(zhì)膠原有一動態(tài)改建過程:早期間質(zhì)膠原不一定增加,后期則有明顯增加,/型膠原比值亦升高, 其原因是由于成纖維細(xì)胞膠原基因mRNA的水平上調(diào)2。 Schwartz則在研究主動脈閉鎖嬰兒(58個月)的右室心肌間質(zhì)膠原并與法樂四聯(lián)癥(1天9個月)、主動脈閉鎖(14天)及正常嬰兒(19個月)相比較,發(fā)現(xiàn)前者較后三者的右室心肌間質(zhì)膠原明顯增加, 而后三者間無明顯差異;認(rèn)為:嬰兒早期單純壓力負(fù)荷過重并不引起心肌間質(zhì)膠原的堆積,隨后并有容量負(fù)荷過重,冠脈缺血、RAA系統(tǒng)激活及膠原基因mRNA上調(diào),才導(dǎo)致心肌間質(zhì)膠原增生。本研究進一步證實了法樂四聯(lián)癥組膠原含量較對照組明顯增多,且觀察到膠原含量增
14、加時/型膠原比值升高, 表明是以型膠原增多為主。、型膠原基因表達(dá)的改變亦與之平行,說明是由于型前膠原基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平上調(diào),合成分泌型膠原增多,導(dǎo)致了膠原的異常堆積,產(chǎn)生了心肌間質(zhì)纖維化。 心肌間質(zhì)纖維化與心臟的僵硬度異常有關(guān), 逆轉(zhuǎn)心肌間質(zhì)纖維化能使肥大心室的異常僵硬度正?;?。如何來逆轉(zhuǎn)法樂四聯(lián)癥業(yè)已存在的右室心肌間質(zhì)纖維化,改善右室的僵硬度,進一步提高根治術(shù)后患者的生存質(zhì)量,尚待進一步研究。 參考文獻 1Robert V, Van Thiem N, Cheav SL, et al. Increased cardiac types I and III collagen mRNAs in
15、aldosterone- salt hypertension. Hypertension, 1994,24:30-36. 2Bishop JE, Rhodes S, Laurent GJ,et al . Increased collagen synthesis and decreased collagen degradation in right ventricular hypertrophy induced by pressure overload. Cardiovascular Reserarch, 1994,28:1581-1585. 3Schwartz SM, Gordon D, Mo
16、sca RS,et al. Collagen content in normal, pressure, and pressur-volume overloaded developing human hearts. Am J Cardial, 1996,77:734-738. 4李新民,汪曾煒,朱洪玉.法樂氏四聯(lián)癥心肌細(xì)胞病理改變與心功能的關(guān)系.中華胸心血管外科雜志,1993,9:210-211. 5Weber KT,Brilla CG. Pathological hypertrophy and cardiac interstitium: fibrosis and renin-angiotensin-aldosterone system. Circulation, 1991, 83: 1849-1865. 6Eghbali M, Weber KT. Collagen and the myocardium: fibrillar structure, biosynthesis and degradation in relation to hypertrophy and its regression. Mol Cell Biochem, 1990, 96: 1-14. 7Eghbali M, Blumenfeld OO, Seifter S,et al. Localiz
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2025年萬維網(wǎng)服務(wù)器購買合同模板(2篇)
- 2025年婚姻登記合同解約聲明
- 2025年上海市公有非居住房屋租賃合同經(jīng)典版(三篇)
- 2025家庭居室裝飾裝修施工合同工程質(zhì)量驗收單
- 2025年知識產(chǎn)權(quán)戰(zhàn)略咨詢及布局委托代理合同
- 2025年個人土地買賣合同協(xié)議格式范文(2篇)
- 2025國際土木建筑工程承包合同(II)
- 2025礦山股份制合同范本
- 農(nóng)業(yè)項目投資合同
- 大藥房藥品采購合同書
- 2024版《建設(shè)工程開工、停工、復(fù)工安全管理臺賬表格(流程圖、申請表、報審表、考核表、通知單等)》模版
- 2024年廣州市高三一模普通高中畢業(yè)班高三綜合測試一 物理試卷(含答案)
- 部編版《道德與法治》六年級下冊教材分析萬永霞
- 粘液腺肺癌病理報告
- 酒店人防管理制度
- 油田酸化工藝技術(shù)
- 上海高考英語詞匯手冊列表
- 移動商務(wù)內(nèi)容運營(吳洪貴)任務(wù)五 其他內(nèi)容類型的生產(chǎn)
- 上海石油化工股份有限公司6181乙二醇裝置爆炸事故調(diào)查報告
- 例說相機誘導(dǎo)在語文教學(xué)中的運用 相機誘導(dǎo)
- 浙江省紹興市2023年中考科學(xué)試題(word版-含答案)
評論
0/150
提交評論