卵巢上皮性癌PTEN和PCNA的表達

1、卵巢上皮性癌PTEN和PCNA的表達 作者：何茵芳，吳智玉，韓欽瑋【關鍵詞】 卵巢腫瘤 Expression and significance of PTEN and PCNA in ovarian epithelial carcinoma【Abstract】 AIM: To investigate the expression of PTEN and PCNA in ovarian epithelial carcinoma and their relationship with clinicopathology. METHODS: The expression of PTEN and PCN

2、A in 128 cases of ovarian epithelial carcinoma, 46 cases of benign tumors and 20 cases of normal ovarian tissue were determined and compared by SABC immunohistochemical method. RESULTS: The positive rate of PTEN in ovarian carcinoma tissues was lower than that in benign tumor tissues and normal ovar

3、ian tissues and the expression trend of PCNA was opposite to that of PTEN (P<0.05). In ovarian carcinoma, a negative correlation between expression PTEN and PCNA was observed (r=-0.511, P=0.000). The expression of PTEN and PCNA was relative to the pathological stages and clinical stages. CONC

4、LUSION: The downregulation of PTEN expression in ovarian carcinoma is associated with the genesis and development of ovarian carcinoma and the upregulation of PCNA expression is associated with the proliferation and pathological differentiation of the tumor tissues.2 / 13【Keywords】 ovarian neoplasms

5、; PTEN; PCNA; expression【摘要】 目的: 探討卵巢上皮性癌中PTEN和PCNA蛋白的表達及相關性. 方法: 采用免疫組織化學SABC法檢測了128例卵巢上皮性癌，46例卵巢良性腫瘤和20例正常卵巢組織中PTEN和PCNA的蛋白表達，分析不同組織中PTEN及PCNA表達的差異及二者的相關性. 結(jié)果: 卵巢上皮性惡性腫瘤中PTEN蛋白表達水平明顯低于卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織，而PCNA蛋白表達水平與PTEN相反，隨正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤和卵巢惡性上皮性腫瘤順序依次增，兩者表現(xiàn)出明顯的負相關(r=-0.511, P=0.000)，且PTEN和PCNA蛋白表達與病理分化程

6、度及臨床分期有關(P<0.05). 結(jié)論: PTEN蛋白的表達下降與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展相關，而PCNA蛋白的表達增強則與卵巢癌組織的增殖及惡性程度有關.【關鍵詞】 卵巢腫瘤；PTEN基因；增殖細胞核抗原；表達0引言PTEN (phosphatase and tensinhomology deleted on chromosome ten, PTEN)作為一種抑癌基因在許多研究中已被證實. 人們發(fā)現(xiàn)由于PTEN基因的突變和缺失導致組織中PTEN蛋白表達的異常，并與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及腫瘤的組織分化相聯(lián)系1-4. 但在卵巢癌中有關PTEN的研究很少，結(jié)果不一. 我們利用SABC免疫組織

7、化學方法檢測卵巢上皮性癌及正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤中PTEN及PCNA (proliferating cell nuclear antigen)的表達，探討不同卵巢組織中PTEN和PCNA的表達差異及意義，并分析PTEN及PCNA蛋白表達之間的相關性.1材料和方法1.1材料卵巢上皮性腫瘤128例、卵巢良性腫瘤46例和20例正常卵巢組織為陜西省商洛地區(qū)中心醫(yī)院婦產(chǎn)科、陜西省西安市兵器工業(yè)部521醫(yī)院婦產(chǎn)科、第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院婦產(chǎn)科199801/200406手術切除之組織標本. 128例卵巢上皮性腫瘤患者年齡2568（中位數(shù)54.3）歲. 128例卵巢上皮性腫瘤患者中，初發(fā)97例，二次手術(第

8、1次手術在初診醫(yī)院完成) 31例，組織標本切取前未行化療. 正常卵巢組織于子宮肌瘤患者切除卵巢中獲取. 全部標本均有明確的病理診斷. 卵巢上皮性腫瘤按FIGO分期標準分期：期26例;期47例;期37例;期18例. 漿液性囊腺癌77例;黏液性囊腺癌41例，其他類型上皮癌10例. 病理分化：高分化35例，中分化39例，低分化54例.1.2方法全部組織標本均用40 g/L甲醛浸泡固定，常規(guī)石蠟包埋，4 m連續(xù)切片. PTEN鼠源性mAb購于北京中山生物技術公司; PCNA mAb 購于美國Sigma公司;生物素化mAb及SABC(strept avidinbiotin complex method)

9、免疫組化試劑盒購于博士德生物技術公司.石蠟組織切片常規(guī)脫蠟至水，室溫孵育，消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，蒸餾水沖洗，PBS浸泡. 抗PTEN,PCNA mAb的工作濃度1100, 生物素化mAb和SABC試劑的工作濃度1100和1100. 方法如下： 石蠟切片經(jīng)抗原修復后, 滴加1100 抗PTEN 或PCNA抗體, 4 過夜, 次日滴加1100生物素標記的山羊抗小鼠IgG及HIGH2 SABC, DAB顯色, 蘇木素復染. 以不加一抗的組織切片作陰性對照, 以已知陽性反應片作陽性對照. 胞質(zhì)中出現(xiàn)明顯棕黃色顆粒為PTEN蛋白陽性. 無陽性或陽性細胞<10%為(-)，陽性細胞10%5

10、0%為(+)，>50%為(). 核內(nèi)出現(xiàn)明顯棕黃色顆粒為PCNA蛋白陽性. 細胞核內(nèi)無染色顆粒為(-)，陽性細胞25%為(+)，25%50%為()，50%為().統(tǒng)計學處理: 采用SPSS 11.5軟件包處理實驗數(shù)據(jù). 采用2檢驗和精確概率法及相關分析方法進行分析，以P<0.05為有統(tǒng)計學意義.2結(jié)果2.1PTEN蛋白的表達PTEN蛋白在正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤及卵巢上皮性癌組織中的表達陽性率依次分別為95.0%,78.3%和52.3%. 卵巢上皮性癌組織中PTEN的表達與正常卵巢組織和良性卵巢組織相比均有顯著性差異(P=0.000). 而正常卵巢組織與良性卵巢腫

11、瘤組織PTEN表達陽性率相比則差異不明顯(P=1.000). 在卵巢上皮性癌組織中的表達水平在不同上皮病理組織類型中未表現(xiàn)出差異性(P=0.797)；而在病理分級中，G1G2級組和G3級組分別為71.6%和25.9%，兩組PTEN表達水平比較有明顯差異(P=0.001). 而在不同臨床分期中，期和期PTEN表達水平分別為65.8%和34.4%，兩組比較則差異十分顯著(P=0.000，Tab1).表1PTEN蛋白表達與卵巢癌臨床分期和分化程度的關系（略）2.2PCNA蛋白的表達PCNA蛋白在正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤及卵巢上皮性癌組織中的表達陽性率依次分別為5.0%，7.0%和89.1%. 卵巢

12、上皮性癌組織中PCNA的表達與正常卵巢組織、良性卵巢組織相比均有顯著性差異(P=0.000). 而正常卵巢組織與良性卵巢腫瘤組織PCNA表達陽性率相比則差異不明顯(P=1.000). PCNA蛋白在卵巢上皮性癌組織中的表達水平在不同上皮病理組織類型中分別為漿漿液性上皮癌89.6%，黏液性87.8%，其他上皮類型為87.8%，未表現(xiàn)出差異性(P>0.05)；而在病理分級中，G1,G2級組和G3級組分別為88.6%,89.7%和88.9%. 在不同臨床分期中，期PCNA表達水平分別為88.5%，87.2%，89.2%和94.4%，組內(nèi)比較均無顯著性差異(P>0.05，T

13、ab 2). 卵巢上皮癌PTEN及PCNA蛋白表達的水平有明顯的負相關關系（r=-0.511, P=0.000）.表2不同臨床分期卵巢上皮性癌PCNA蛋白的表達（略）3討論PTEN 基因定位于染色體10q23.3，全長21 kb，由9個外顯子和8個內(nèi)含子組成，共計1209個核苷酸，編碼403個氨基酸組成的蛋白質(zhì)3. PTEN蛋白包括氨基酸的磷酸酶結(jié)構(gòu)域，脂質(zhì)結(jié)合C2結(jié)構(gòu)域和一個50個氨基酸組成的羧基端結(jié)構(gòu)域. PTEN蛋白是一個多功能蛋白，在細胞生命過程中起著重要作用3-5.PTEN蛋白在卵巢上皮性腫瘤的表達及表達水平變化，目前研究結(jié)果不一. 一些學者認為6卵巢上皮性癌中不存在PTEN基因的突

14、變，或突變比例很低，但該基因突變在卵巢上皮性癌的發(fā)生發(fā)展中無重要作用. 而另一些學者的研究則顯示，卵巢上皮性癌中存在著較為普遍的雜合性缺失. 認為PTEN表達缺失可能在卵巢癌的發(fā)病中僅是一個晚發(fā)事件. 本研究顯示，在卵巢上皮性腫瘤中PTEN表達明顯低于正常卵巢組織及良性卵巢上皮性腫瘤，且有明顯的統(tǒng)計學意義. 卵巢上皮性癌各種組織類型中均有PTEN蛋白的表達缺失. 表達水平、比率與腫瘤組織類型無關. 但與臨床分期、病理分級有關. 隨臨床期別、病理分級的增加，PTEN表達下降. 提示對PTEN蛋白的檢測可能間接反映腫瘤的惡性程度，從而判斷患者的預后.PCNA是目前公認的反映核增殖水平的標志性基因.

15、 PCNA蛋白檢測可直接反映細胞合成代謝及增殖狀態(tài)，眾多研究都客觀一致地顯示了這一點. 本研究中PTEN與PCNA的表達表現(xiàn)出明顯的負相關關系. 提示在卵巢上皮性癌發(fā)生發(fā)展過程中，PTEN蛋白表達的缺失和減少可能增加了腫瘤的增殖活性，從而使PCNA表達增加.【參考文獻】1 Hirai Y, Tanaka N, Furuta R,et al. Somatic mutations of the PTEN/MMAC1 gene associated with frequent chromosomal loss detected using comparative genomic hybridizat

16、ion in endometrial cancerJ. Gynecol Oncol, 2001;83(1):81-88.2 Nakako S, Hajime T, Masato N. Loss of heterozygosity on 10q 23.3 and mutation of the tumor suppressor gene PTEN in benign endometrial cyst of the ovary: Possible sequence progression from benign endometrial cyst to endometrial carcinoma a

17、nd clear cell carcinoma of ovaryJ. Cancer Res, 2000; 60(18):7052-7056.3 Li J, Yen C, Liaw D, et al. PTEN, a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain, breast and prostate cancerJ. Science, 1997;275(8):1943-1949.4 Steck PA, Pershouse MA, Jasser SA,et al. Identification of a candidate tumor suppressor gene, MMAC1, at chromosome 10q23.3 that is mutated in multiple advanced cancerJ. Nat Genet, 1997; 15(2):356-362.5 Li DM, Sun H. Encoded by a candidate tumor suppressor locus, is a novel protein tyrosine phosphatase regulated by transforming growth factorJ.