血清學(xué)診斷在結(jié)核病中的臨床應(yīng)用價(jià)值教學(xué)內(nèi)容

1、血清學(xué)診斷在結(jié)核病中的臨床血清學(xué)診斷在結(jié)核病中的臨床應(yīng)用價(jià)值應(yīng)用價(jià)值結(jié)核病的今天全球范圍內(nèi)結(jié)核病疫情急劇惡化全球范圍內(nèi)結(jié)核病疫情急劇惡化 結(jié)核病與艾滋病同時(shí)流行結(jié)核病與艾滋病同時(shí)流行 結(jié)核菌耐藥現(xiàn)象益發(fā)嚴(yán)重結(jié)核菌耐藥現(xiàn)象益發(fā)嚴(yán)重 人口大規(guī)模流動(dòng)人口大規(guī)模流動(dòng)我國(guó)是世界上僅低于印度的第二結(jié)核病大國(guó)我國(guó)是世界上僅低于印度的第二結(jié)核病大國(guó) 結(jié)核菌感染率結(jié)核菌感染率44.5% 新發(fā)活動(dòng)性結(jié)核患者新發(fā)活動(dòng)性結(jié)核患者130萬(wàn)萬(wàn)/年年 死亡死亡13萬(wàn)萬(wàn)/年年早期快速診斷與治療成為制約結(jié)核病控制的關(guān)鍵早期快速診斷與治療成為制約結(jié)核病控制的關(guān)鍵 常規(guī)實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)核病方法陽(yáng)性率不到常規(guī)實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)核病方法陽(yáng)性率不

2、到60%結(jié)核病的數(shù)字結(jié)核病的數(shù)字全世界約全世界約1/3的人口（近的人口（近20億）億）攜帶結(jié)核菌。攜帶結(jié)核菌。自自1882年以來(lái)已經(jīng)有年以來(lái)已經(jīng)有2億人億人死于死于結(jié)核病。結(jié)核病。每年有每年有2000萬(wàn)人萬(wàn)人患活動(dòng)性結(jié)核病。患活動(dòng)性結(jié)核病。每年約有每年約有300萬(wàn)人萬(wàn)人死于結(jié)核病。死于結(jié)核病。結(jié)核病每結(jié)核病每15秒鐘秒鐘就殺死就殺死1人。人。預(yù)計(jì)未來(lái)預(yù)計(jì)未來(lái)20年還將有年還將有3600萬(wàn)人萬(wàn)人死死于結(jié)核病。于結(jié)核病。結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)生物學(xué)主要特點(diǎn)：生物學(xué)主要特點(diǎn)：1. 細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)2.引起的疾病都呈慢性，并伴肉芽腫

3、引起的疾病都呈慢性，并伴肉芽腫3.抗酸染色陽(yáng)性抗酸染色陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)室檢查方法的歷史實(shí)驗(yàn)室檢查方法的歷史1880sTubercle bacilli的發(fā)現(xiàn) Ziehl-Neelsen染色方法1900sMantoux test (TST with tuberculin)1920sPetragnani medium Purified Protein Derivative（PPD）1930sLewenstein-Jensen 培養(yǎng)基1940sDubos agar, Ogawa 培養(yǎng)基1950sMiddlebrook 7H91990s核酸擴(kuò)增方法2000sELISPOT, QuantiFERON20XX?當(dāng)前

4、結(jié)核研究的熱點(diǎn)當(dāng)前結(jié)核研究的熱點(diǎn) 新型抗結(jié)核藥物新型抗結(jié)核藥物(50%) 新型快速診斷技術(shù)新型快速診斷技術(shù)(40%) 新型結(jié)核疫苗新型結(jié)核疫苗(10%)結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷 細(xì)菌學(xué)細(xì)菌學(xué)涂片：涂片：敏感性低敏感性低傳統(tǒng)固體培養(yǎng)：傳統(tǒng)固體培養(yǎng)：所需時(shí)間長(zhǎng)，所需時(shí)間長(zhǎng)，23月月 分子生物學(xué)分子生物學(xué)TB-DNATB-RNAHAIN技術(shù)技術(shù)Xpert MTB/RIFDNA微陣芯片微陣芯片 血清血清/免疫學(xué)免疫學(xué)IGRA：有望替代有望替代TST，但，但不能區(qū)分不能區(qū)分活動(dòng)性活動(dòng)性TB與潛伏感與潛伏感染染血清學(xué)：血清學(xué)：存在抗原存在抗原純度和特純度和特異性差等異性差等方面的問(wèn)方面的問(wèn)題題

5、液體培養(yǎng)及藥液體培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)：平均敏試驗(yàn)：平均時(shí)間時(shí)間20天天血清學(xué)診斷技術(shù)血清學(xué)診斷技術(shù)血清學(xué)診斷技術(shù)優(yōu)勢(shì)：是一種對(duì)疾病進(jìn)行早期診斷的理想方法。血清學(xué)診斷技術(shù)優(yōu)勢(shì)：是一種對(duì)疾病進(jìn)行早期診斷的理想方法。l 無(wú)需活細(xì)胞培養(yǎng)和特殊儀器設(shè)備無(wú)需活細(xì)胞培養(yǎng)和特殊儀器設(shè)備l 操作簡(jiǎn)便操作簡(jiǎn)便l 結(jié)果顯示快速結(jié)果顯示快速目前用于血清學(xué)診斷的主要方法目前用于血清學(xué)診斷的主要方法:l 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELlSA)l 斑點(diǎn)金免疫滲濾法斑點(diǎn)金免疫滲濾法(DIGFA)l 免疫印跡法免疫印跡法(Western Blotting)等等等等脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)抗原 脂阿拉伯甘露聚糖是分枝桿菌細(xì)胞

6、壁的重要組成部分，是屬特異性抗原，具脂阿拉伯甘露聚糖是分枝桿菌細(xì)胞壁的重要組成部分，是屬特異性抗原，具有較強(qiáng)的免疫原性和免疫調(diào)節(jié)功能，可刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，因而是結(jié)有較強(qiáng)的免疫原性和免疫調(diào)節(jié)功能，可刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，因而是結(jié)核病的血清學(xué)診斷應(yīng)用較廣的抗原。核病的血清學(xué)診斷應(yīng)用較廣的抗原。有關(guān)有關(guān)LAM抗原的應(yīng)用報(bào)道很多抗原的應(yīng)用報(bào)道很多, Antunes等用美國(guó)生產(chǎn)的結(jié)明等用美國(guó)生產(chǎn)的結(jié)明(MycoDot TM)試劑盒檢測(cè)活動(dòng)性肺結(jié)核病人的敏感性為試劑盒檢測(cè)活動(dòng)性肺結(jié)核病人的敏感性為63.0%，特異性為，特異性為92.4%，認(rèn)為檢，認(rèn)為檢測(cè)測(cè)LAM抗體是結(jié)核病一項(xiàng)有效的輔助診斷方法。

7、抗體是結(jié)核病一項(xiàng)有效的輔助診斷方法。A60(antigen 60) A60是從牛分枝桿菌胞漿中提取的一種大分子物質(zhì)，是脂質(zhì)蛋白和多是從牛分枝桿菌胞漿中提取的一種大分子物質(zhì)，是脂質(zhì)蛋白和多糖的復(fù)合抗原。糖的復(fù)合抗原。Wu等用等用ELISA法檢測(cè)了法檢測(cè)了178例活動(dòng)性肺結(jié)核患者和例活動(dòng)性肺結(jié)核患者和151例其他疾病患例其他疾病患者血清中的者血清中的IgG A60，根據(jù)受試者工作特性曲線，根據(jù)受試者工作特性曲線(ROC)取取261.2單位為單位為截切值截切值(cutoff point)，其敏感性和特異性分別為，其敏感性和特異性分別為49.4%和和79.5%，認(rèn)，認(rèn)為胸部為胸部X片異常的患者結(jié)合片異

8、常的患者結(jié)合IgG A60陽(yáng)性將有助于肺結(jié)核病的準(zhǔn)確臨陽(yáng)性將有助于肺結(jié)核病的準(zhǔn)確臨床診斷。床診斷。結(jié)核菌糖脂(TBGL)抗原 結(jié)核菌糖脂抗原是分枝桿菌細(xì)胞壁上的糖脂類物質(zhì)，具有菌屬特異性。近結(jié)核菌糖脂抗原是分枝桿菌細(xì)胞壁上的糖脂類物質(zhì)，具有菌屬特異性。近年來(lái)的研究表明，糖脂類抗原在診斷方面有很大的優(yōu)勢(shì)。年來(lái)的研究表明，糖脂類抗原在診斷方面有很大的優(yōu)勢(shì)。Maekura等建立了糖脂類抗原抗體快速檢測(cè)方法，并做了臨床評(píng)價(jià)，對(duì)痰等建立了糖脂類抗原抗體快速檢測(cè)方法，并做了臨床評(píng)價(jià)，對(duì)痰涂片陰性的活動(dòng)性肺結(jié)核的靈敏度為涂片陰性的活動(dòng)性肺結(jié)核的靈敏度為56.8，對(duì)痰培養(yǎng)陰性的活動(dòng)性肺結(jié)核，對(duì)痰培養(yǎng)陰性的活動(dòng)

9、性肺結(jié)核的靈敏度為的靈敏度為51.2。將。將TBGL與核酸擴(kuò)增方法與核酸擴(kuò)增方法(NAA)聯(lián)合用于檢測(cè)，檢出率聯(lián)合用于檢測(cè)，檢出率比兩者單獨(dú)使用時(shí)進(jìn)一步提高。比兩者單獨(dú)使用時(shí)進(jìn)一步提高。Tiwari等用脂質(zhì)體顆粒作為載體，利用純化等用脂質(zhì)體顆粒作為載體，利用純化的的TBGL抗原特異的與結(jié)核病患者血清中的抗原特異的與結(jié)核病患者血清中的TBGL抗體結(jié)合，形成藍(lán)色凝集抗體結(jié)合，形成藍(lán)色凝集顆粒來(lái)診斷活動(dòng)性結(jié)核病，其敏感性、特異性分別達(dá)顆粒來(lái)診斷活動(dòng)性結(jié)核病，其敏感性、特異性分別達(dá)94%和和98.3%。該方法。該方法快速快速(4min)、經(jīng)濟(jì)，且可以區(qū)別活動(dòng)性肺結(jié)核、卡介苗、經(jīng)濟(jì)，且可以區(qū)別活動(dòng)性肺結(jié)

10、核、卡介苗(BCG)免疫接種者與免疫接種者與健康人群，可用于人群大規(guī)模篩選肺結(jié)核病人。健康人群，可用于人群大規(guī)模篩選肺結(jié)核病人。38kDa蛋白 38kDa蛋白是一定位在質(zhì)膜上的磷酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，只在分枝桿菌復(fù)合體中表蛋白是一定位在質(zhì)膜上的磷酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，只在分枝桿菌復(fù)合體中表達(dá)，達(dá)，BCG合成合成38kDa蛋白的量?jī)H為結(jié)核分枝桿菌的十分之一。蛋白的量?jī)H為結(jié)核分枝桿菌的十分之一。38kDa 蛋白為一分泌蛋白，可刺激蛋白為一分泌蛋白，可刺激T細(xì)胞和細(xì)胞和B細(xì)胞免疫反應(yīng)，廣泛應(yīng)用于結(jié)細(xì)胞免疫反應(yīng)，廣泛應(yīng)用于結(jié)核病的血清學(xué)試驗(yàn)。核病的血清學(xué)試驗(yàn)。英國(guó)公司生產(chǎn)的英國(guó)公司生產(chǎn)的OMEGA結(jié)核抗體定量檢測(cè)結(jié)核

11、抗體定量檢測(cè)Myco G、A、M試劑盒聯(lián)合應(yīng)用試劑盒聯(lián)合應(yīng)用38kDa和脂多糖和脂多糖(LPS)抗原，而抗原，而TB Complex Plus試劑盒選用的是試劑盒選用的是38kDa和和16kDa抗原?？乖utt等對(duì)等對(duì)OMEGA試劑盒進(jìn)行了評(píng)價(jià)，認(rèn)為具有種特異性的試劑盒進(jìn)行了評(píng)價(jià)，認(rèn)為具有種特異性的TB Complex Plus和有屬特異性的和有屬特異性的Myco M聯(lián)合應(yīng)用可取得最好的效果，檢測(cè)肺聯(lián)合應(yīng)用可取得最好的效果，檢測(cè)肺結(jié)核的敏感性和特異性分別為結(jié)核的敏感性和特異性分別為87%和和93%。38kDa對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核的診斷非對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核的診斷非常有效，但和大腸埃希菌同源蛋白有常有效

12、，但和大腸埃希菌同源蛋白有 30%以上的交叉，所以對(duì)不同人群的以上的交叉，所以對(duì)不同人群的靈敏度波動(dòng)較大，尤其對(duì)涂片陰性和合并靈敏度波動(dòng)較大，尤其對(duì)涂片陰性和合并HIV感染的結(jié)核病患者效果較差。感染的結(jié)核病患者效果較差。Ag85 抗原85復(fù)合體(Ag85) 是一組具有較強(qiáng)細(xì)胞免疫及體液免疫活性的分枝桿菌分泌性蛋白，分子量約是一組具有較強(qiáng)細(xì)胞免疫及體液免疫活性的分枝桿菌分泌性蛋白，分子量約為為3032kDa。分枝桿菌各菌株均可分泌。分枝桿菌各菌株均可分泌Ag85。結(jié)核分枝桿菌。結(jié)核分枝桿菌Ag85中至少包中至少包括三種蛋白成分括三種蛋白成分Ag85A、Ag85B和和Ag85C，其中有免疫作用的主

13、要為，其中有免疫作用的主要為Ag85A和和Ag85B。Ag85具有分枝菌酸轉(zhuǎn)移酶的活性，在分枝桿菌細(xì)胞壁合成的最后階段發(fā)揮具有分枝菌酸轉(zhuǎn)移酶的活性，在分枝桿菌細(xì)胞壁合成的最后階段發(fā)揮必要的作用。它還能和人纖連蛋白必要的作用。它還能和人纖連蛋白(FN)相結(jié)合，有助于結(jié)核菌入侵宿主細(xì)胞。相結(jié)合，有助于結(jié)核菌入侵宿主細(xì)胞。Ag85可能發(fā)展成為結(jié)核病的血清學(xué)診斷抗原。活動(dòng)性結(jié)核病人血清中的可能發(fā)展成為結(jié)核病的血清學(xué)診斷抗原。活動(dòng)性結(jié)核病人血清中的Ag85抗體平均水平比其他分枝桿菌疾病患者和健康對(duì)照者高抗體平均水平比其他分枝桿菌疾病患者和健康對(duì)照者高50150倍，可倍，可通過(guò)檢測(cè)血循環(huán)中通過(guò)檢測(cè)血循環(huán)中

14、Ag85抗體，對(duì)活動(dòng)性結(jié)核加以診斷。抗體，對(duì)活動(dòng)性結(jié)核加以診斷。Kashyap等用間接等用間接ELISA法檢測(cè)法檢測(cè)89%疑似結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液中存在疑似結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液中存在Ag85抗體，認(rèn)為檢測(cè)抗體，認(rèn)為檢測(cè)Ag85抗體為結(jié)核性腦膜炎的早期和確定性診斷提供了一個(gè)更靈敏的選擇?？贵w為結(jié)核性腦膜炎的早期和確定性診斷提供了一個(gè)更靈敏的選擇。ESAT-6和CFP10 ESAT-6即即6kDa早期分泌性抗原，是從結(jié)核分枝桿菌短期培養(yǎng)濾液中分離純?cè)缙诜置谛钥乖菑慕Y(jié)核分枝桿菌短期培養(yǎng)濾液中分離純化出的一種低分子量分泌性蛋白，具有較強(qiáng)的細(xì)胞免疫活性，在抗結(jié)核感染化出的一種低分子量分泌性蛋白，

15、具有較強(qiáng)的細(xì)胞免疫活性，在抗結(jié)核感染的免疫回憶應(yīng)答中起重要作用。的免疫回憶應(yīng)答中起重要作用。ESAT-6僅存在于致病性分枝桿菌中，包括人型結(jié)核桿菌、牛型結(jié)核桿菌、僅存在于致病性分枝桿菌中，包括人型結(jié)核桿菌、牛型結(jié)核桿菌、非洲分枝桿菌以及蘇爾加分枝桿菌、海水分枝桿菌和堪薩斯分枝桿菌等非典非洲分枝桿菌以及蘇爾加分枝桿菌、海水分枝桿菌和堪薩斯分枝桿菌等非典型分枝桿菌，而型分枝桿菌，而B(niǎo)CG及其他非致病性分枝桿菌缺失。及其他非致病性分枝桿菌缺失。CFP-10即培養(yǎng)濾液蛋白即培養(yǎng)濾液蛋白10，與，與ESAT-6位于同一基因簇上，兩者分布相同，位于同一基因簇上，兩者分布相同，都是都是RDl區(qū)編碼的。區(qū)編碼

16、的。ESAT-6和和CFP10能刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性能刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性IgG，利用，利用ESAT-6和和CFP10蛋白抗原能與結(jié)核分枝桿菌感染者血中特異性蛋白抗原能與結(jié)核分枝桿菌感染者血中特異性 IgG結(jié)合的特結(jié)合的特點(diǎn)，采用點(diǎn)，采用ELISA等方法可特異性區(qū)分是真正的結(jié)核分枝桿菌感染或是接種等方法可特異性區(qū)分是真正的結(jié)核分枝桿菌感染或是接種BCG后所致敏，該方法明顯優(yōu)于后所致敏，該方法明顯優(yōu)于PPD作包被抗原的作包被抗原的ELISA法。法。陳全等以陳全等以CFP10-ESAT-6融合蛋白為抗原，用融合蛋白為抗原，用ELISA法檢測(cè)豚鼠血清中抗結(jié)法檢測(cè)豚鼠血清中抗結(jié)核分枝桿菌抗體，核分枝桿菌抗

17、體，11份份H37Rv感染豚鼠血清全部呈陽(yáng)性反應(yīng)，感染豚鼠血清全部呈陽(yáng)性反應(yīng)，11 份份BCG免免疫豚鼠血清僅疫豚鼠血清僅1份呈陽(yáng)性反應(yīng)。份呈陽(yáng)性反應(yīng)。U1蛋白 Mukherjee等收集結(jié)核分枝桿菌等收集結(jié)核分枝桿菌H37Rv株靜脈感染株靜脈感染C57BL/6小鼠早期小鼠早期(1014d) 尿液分離到一種結(jié)核抗原，氨基酸測(cè)序鑒定后，克隆并表達(dá)相應(yīng)的基因，純化尿液分離到一種結(jié)核抗原，氨基酸測(cè)序鑒定后，克隆并表達(dá)相應(yīng)的基因，純化得到可溶的重組蛋白命名為得到可溶的重組蛋白命名為U1蛋白蛋白(Urine Protein 1)，分子量大約為，分子量大約為16.8kDa。進(jìn)一步用進(jìn)一步用ELISA法檢測(cè)肺

18、結(jié)核病人血清中法檢測(cè)肺結(jié)核病人血清中U1抗體的敏感性為抗體的敏感性為60%，檢測(cè)合并，檢測(cè)合并HIV感染的結(jié)核病患者其敏感性為感染的結(jié)核病患者其敏感性為 87%，而正常人血清不與，而正常人血清不與U1蛋白反應(yīng)。將蛋白反應(yīng)。將U1蛋白與蛋白與Mtb81聯(lián)合用于檢測(cè)合并聯(lián)合用于檢測(cè)合并HIV感染的結(jié)核病患者的敏感性為感染的結(jié)核病患者的敏感性為93.6%。同時(shí)檢測(cè)了同時(shí)檢測(cè)了12名名HIV感染的非結(jié)核病人，其中感染的非結(jié)核病人，其中9名患者血清中無(wú)可檢測(cè)的名患者血清中無(wú)可檢測(cè)的U1抗體，抗體，另外另外3名名U1抗體的水平處于抗體的水平處于ELISA法檢測(cè)的臨界點(diǎn)。因此認(rèn)為，檢測(cè)法檢測(cè)的臨界點(diǎn)。因此認(rèn)

19、為，檢測(cè)U1抗體可抗體可增加結(jié)核病血清學(xué)診斷的敏感性，尤其對(duì)合并增加結(jié)核病血清學(xué)診斷的敏感性，尤其對(duì)合并HIV感染的結(jié)核病患者。感染的結(jié)核病患者。其它抗原 Weldingh等在大腸埃希菌中克隆表達(dá)了等在大腸埃希菌中克隆表達(dá)了4種超抗原種超抗原TB9.7、TB15.3、TB16.3和和TB51，并用它們來(lái)檢測(cè)痰涂片陽(yáng)性和涂片陰性的結(jié)核病人，靈敏度為，并用它們來(lái)檢測(cè)痰涂片陽(yáng)性和涂片陰性的結(jié)核病人，靈敏度為36%93%，而特異性超過(guò)，而特異性超過(guò)97%，其中，其中TB16.3最為有效，最為有效，TB16.3與與TB9.7聯(lián)聯(lián)合檢測(cè)合并合檢測(cè)合并HIV感染的結(jié)核病患者其敏感性超過(guò)感染的結(jié)核病患者其敏感

20、性超過(guò)85%。Bahk等基因重組表達(dá)等基因重組表達(dá)Rv3369和和Rv3874兩個(gè)基因，并用它們做抗原檢測(cè)結(jié)核兩個(gè)基因，并用它們做抗原檢測(cè)結(jié)核病患者的敏感性分別為病患者的敏感性分別為60%、74%, 特異性分別為特異性分別為96%、97%，表明是有價(jià)，表明是有價(jià)值的結(jié)核病血清學(xué)診斷抗原。值的結(jié)核病血清學(xué)診斷抗原。其它抗原，如其它抗原，如MPT64、P90、TB4等，也曾被做為快速血清學(xué)檢測(cè)的侯選抗等，也曾被做為快速血清學(xué)檢測(cè)的侯選抗原加以研究，但大都未達(dá)到診斷靈敏度的要求。原加以研究，但大都未達(dá)到診斷靈敏度的要求。摘自：陽(yáng)幼榮等結(jié)核分枝桿菌12 種抗原在結(jié)核病血清學(xué)診斷中應(yīng)用價(jià)值的研究結(jié)核分枝

21、桿菌結(jié)核分枝桿菌12 種抗原在結(jié)核病血清學(xué)診斷中應(yīng)用價(jià)值的研究種抗原在結(jié)核病血清學(xué)診斷中應(yīng)用價(jià)值的研究l血清學(xué)診斷的關(guān)鍵是尋找靈敏度高、特異性強(qiáng)的理想抗原。但這方面的應(yīng)用似乎并血清學(xué)診斷的關(guān)鍵是尋找靈敏度高、特異性強(qiáng)的理想抗原。但這方面的應(yīng)用似乎并不理想。對(duì)于結(jié)核病的血清學(xué)診斷技術(shù)的研發(fā)，到現(xiàn)在已經(jīng)有不理想。對(duì)于結(jié)核病的血清學(xué)診斷技術(shù)的研發(fā)，到現(xiàn)在已經(jīng)有100多年的歷史，但至多年的歷史，但至今還沒(méi)有一種血清學(xué)診斷方法可以替代結(jié)核病痰涂片鏡檢。今還沒(méi)有一種血清學(xué)診斷方法可以替代結(jié)核病痰涂片鏡檢。lWHO對(duì)來(lái)自不同國(guó)家的對(duì)來(lái)自不同國(guó)家的19種試劑盒產(chǎn)品進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果表明：與痰培養(yǎng)相比，這些種試劑盒

22、產(chǎn)品進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果表明：與痰培養(yǎng)相比，這些試劑盒檢測(cè)的靈敏度為試劑盒檢測(cè)的靈敏度為1%60%，特異度為，特異度為5399% 1 。原因：由于所用的測(cè)定方法、使用的試劑種類或抗原、抗體的不同等，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果原因：由于所用的測(cè)定方法、使用的試劑種類或抗原、抗體的不同等，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果差異較大，并且缺乏可比性。差異較大，并且缺乏可比性。lWHO認(rèn)為現(xiàn)有的血清學(xué)診斷試劑的敏感度和特異度都有待進(jìn)一步提高，不推薦其作認(rèn)為現(xiàn)有的血清學(xué)診斷試劑的敏感度和特異度都有待進(jìn)一步提高，不推薦其作為一種快速診斷的方法在臨床使用。為一種快速診斷的方法在臨床使用。1WHO World Health Organization.

23、 Diagnosis evaluation series No.2: laboratory-based evalution of 19 commercially available rapid diagnostic tests for tuberculosis.2008.血清學(xué)檢測(cè)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)核抗體測(cè)定存在的問(wèn)題結(jié)核抗體測(cè)定存在的問(wèn)題1. 假陽(yáng)性假陽(yáng)性：3%15%。假陽(yáng)性的發(fā)生原因：假陽(yáng)性的發(fā)生原因：1)共同抗原所致的交叉反應(yīng)；共同抗原所致的交叉反應(yīng)；2)隱性結(jié)核菌感染包括初染、再染、非結(jié)核分支桿菌感染、隱性結(jié)核菌感染包括初染、再染、非結(jié)核分支桿菌感染、卡介苗接種、結(jié)核桿菌卡介苗接種、結(jié)核桿菌

24、L型感染等，結(jié)果均可致結(jié)核抗體型感染等，結(jié)果均可致結(jié)核抗體短期或較長(zhǎng)時(shí)期的升高；短期或較長(zhǎng)時(shí)期的升高；3)實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作/試劑質(zhì)量。試劑質(zhì)量。 2. 假陰性假陰性：30%2%。假陰性發(fā)生的假陰性發(fā)生的原因：原因：1)機(jī)體方面所致的假陰性：如某些臨床確診的活動(dòng)性結(jié)核患者，而體液免疫測(cè)定結(jié)果則為機(jī)體方面所致的假陰性：如某些臨床確診的活動(dòng)性結(jié)核患者，而體液免疫測(cè)定結(jié)果則為陰性，其原因可能與個(gè)體的免疫功能異常有關(guān)。上述原因均可導(dǎo)致機(jī)體不產(chǎn)生或僅產(chǎn)陰性，其原因可能與個(gè)體的免疫功能異常有關(guān)。上述原因均可導(dǎo)致機(jī)體不產(chǎn)生或僅產(chǎn)生少量特異性結(jié)核抗體，以致于無(wú)法與正常人群的結(jié)核抗體水平相區(qū)分。生少量特異性結(jié)核抗

25、體，以致于無(wú)法與正常人群的結(jié)核抗體水平相區(qū)分。2)特異性免疫復(fù)合物的形成：由于活動(dòng)性結(jié)核患者體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體，可與結(jié)核抗原特異性免疫復(fù)合物的形成：由于活動(dòng)性結(jié)核患者體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體，可與結(jié)核抗原結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，從而導(dǎo)致結(jié)核抗體測(cè)定為陰性。結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，從而導(dǎo)致結(jié)核抗體測(cè)定為陰性。3)方法方面的因素所致的假陰性：如測(cè)定方法本身靈敏度不夠、儀器不夠靈敏和影響技術(shù)方法方面的因素所致的假陰性：如測(cè)定方法本身靈敏度不夠、儀器不夠靈敏和影響技術(shù)條件的各種因素均可導(dǎo)致假。條件的各種因素均可導(dǎo)致假。4)試劑質(zhì)量和操作因素：試劑靈敏度偏低是造成假陰性的主要原因之一，操作人員的業(yè)務(wù)試劑質(zhì)量和

26、操作因素：試劑靈敏度偏低是造成假陰性的主要原因之一，操作人員的業(yè)務(wù)素質(zhì)也是影響因素之一。素質(zhì)也是影響因素之一。WHO不推薦血清學(xué)檢測(cè)方法不推薦血清學(xué)檢測(cè)方法診斷活動(dòng)性結(jié)核病診斷活動(dòng)性結(jié)核病2011年年WHO正式公告：正式公告：由于目前的商由于目前的商業(yè)血清學(xué)試劑在結(jié)核檢測(cè)中存在較大差業(yè)血清學(xué)試劑在結(jié)核檢測(cè)中存在較大差異，且檢測(cè)結(jié)果很高比例的假陽(yáng)性和假異，且檢測(cè)結(jié)果很高比例的假陽(yáng)性和假陰性，因此不建議使用血清學(xué)方法作為陰性，因此不建議使用血清學(xué)方法作為結(jié)核桿菌的診斷實(shí)驗(yàn)結(jié)核桿菌的診斷實(shí)驗(yàn)1 。1WHO Commercial Serodiagnostic Tests for Diagnosis o

27、f Tuberculosis. /publications/2011/9789241502054_eng.pdf不能早期診斷！容易漏診、不能早期診斷！容易漏診、誤診！誤診！2012年年4月月16日，日，SFDA發(fā)布了發(fā)布了關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)結(jié)核病血液檢測(cè)試關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)結(jié)核病血液檢測(cè)試劑監(jiān)管有關(guān)事宜的通知?jiǎng)┍O(jiān)管有關(guān)事宜的通知（食藥監(jiān)辦械（食藥監(jiān)辦械【2012】48號(hào)），要求各省、號(hào)），要求各省、自治區(qū)、直轄市食品藥品監(jiān)督管理局按照通知要求對(duì)行政區(qū)域內(nèi)有自治區(qū)、直轄市食品藥品監(jiān)督管理局按照通知要求對(duì)行政區(qū)域內(nèi)有關(guān)結(jié)核病血液檢測(cè)試劑的注冊(cè)審評(píng)情況開(kāi)展檢查，

28、試圖通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)關(guān)結(jié)核病血液檢測(cè)試劑的注冊(cè)審評(píng)情況開(kāi)展檢查，試圖通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)生產(chǎn)結(jié)核病診斷血清學(xué)制品的企業(yè)進(jìn)行一次背景調(diào)查。生產(chǎn)結(jié)核病診斷血清學(xué)制品的企業(yè)進(jìn)行一次背景調(diào)查。分析目前國(guó)內(nèi)核病血清學(xué)檢測(cè)試劑在生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)量控制和在臨床評(píng)分析目前國(guó)內(nèi)核病血清學(xué)檢測(cè)試劑在生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)量控制和在臨床評(píng)價(jià)中存在的問(wèn)題及解決問(wèn)題的方法。價(jià)中存在的問(wèn)題及解決問(wèn)題的方法。我國(guó)目前結(jié)核病血清學(xué)檢測(cè)試劑的情況 1.我國(guó)結(jié)核病血清學(xué)檢測(cè)試劑現(xiàn)狀我國(guó)結(jié)核病血清學(xué)檢測(cè)試劑現(xiàn)狀 市場(chǎng)上銷售的結(jié)核病血清學(xué)診斷試劑有近百家，經(jīng)國(guó)家食品藥品市場(chǎng)上銷售的結(jié)核病血清學(xué)診斷試劑有近百家，經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的國(guó)產(chǎn)診斷制品抗體檢測(cè)試劑盒

29、監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的國(guó)產(chǎn)診斷制品抗體檢測(cè)試劑盒29個(gè)，其中經(jīng)國(guó)家個(gè)，其中經(jīng)國(guó)家級(jí)批準(zhǔn)的級(jí)批準(zhǔn)的26個(gè)，省級(jí)批準(zhǔn)的個(gè)，省級(jí)批準(zhǔn)的1個(gè)，進(jìn)口制品個(gè)，進(jìn)口制品1個(gè)。抗原檢測(cè)試劑盒個(gè)。抗原檢測(cè)試劑盒3個(gè)，個(gè)，其中省級(jí)批準(zhǔn)的其中省級(jí)批準(zhǔn)的1個(gè)。個(gè)。 大多數(shù)未經(jīng)批準(zhǔn)的結(jié)核病血清學(xué)診斷試劑游離于國(guó)家監(jiān)管范圍之大多數(shù)未經(jīng)批準(zhǔn)的結(jié)核病血清學(xué)診斷試劑游離于國(guó)家監(jiān)管范圍之外，值得引起國(guó)家有關(guān)部門及人員的關(guān)注與重視。外，值得引起國(guó)家有關(guān)部門及人員的關(guān)注與重視。 2. 結(jié)核病血清學(xué)診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)背景調(diào)查情況結(jié)核病血清學(xué)診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)背景調(diào)查情況 調(diào)查資料的內(nèi)容主要包括試劑盒背景資料、試劑盒成品檢測(cè)、試劑盒檢測(cè)調(diào)查資料的

30、內(nèi)容主要包括試劑盒背景資料、試劑盒成品檢測(cè)、試劑盒檢測(cè)參考品制備與標(biāo)化，參考品使用情況及臨床研究等方面；參考品制備與標(biāo)化，參考品使用情況及臨床研究等方面； 通過(guò)對(duì)各生產(chǎn)企業(yè)報(bào)送的資料進(jìn)行分析，共收回調(diào)查問(wèn)卷通過(guò)對(duì)各生產(chǎn)企業(yè)報(bào)送的資料進(jìn)行分析，共收回調(diào)查問(wèn)卷29份份.我國(guó)目前結(jié)我國(guó)目前結(jié)核病血清學(xué)診斷制品的品種與近核病血清學(xué)診斷制品的品種與近3年的數(shù)量見(jiàn)下表年的數(shù)量見(jiàn)下表. 由于無(wú)法掌握未經(jīng)批準(zhǔn)的結(jié)核病血清學(xué)診斷試劑的非法銷售情況，結(jié)果并不由于無(wú)法掌握未經(jīng)批準(zhǔn)的結(jié)核病血清學(xué)診斷試劑的非法銷售情況，結(jié)果并不能代表國(guó)內(nèi)實(shí)際銷售狀況。能代表國(guó)內(nèi)實(shí)際銷售狀況。存在的問(wèn)題： 1.陽(yáng)性參考品的選擇陽(yáng)性參考品

31、的選擇 多數(shù)企業(yè)在陽(yáng)性參考品選擇時(shí)通常只選擇菌陽(yáng)患者抗體強(qiáng)陽(yáng)性血清，如果多數(shù)企業(yè)在陽(yáng)性參考品選擇時(shí)通常只選擇菌陽(yáng)患者抗體強(qiáng)陽(yáng)性血清，如果試劑某批次質(zhì)量出現(xiàn)問(wèn)題，敏感度偏低時(shí)，若陽(yáng)性參考品中全部使用強(qiáng)陽(yáng)性試劑某批次質(zhì)量出現(xiàn)問(wèn)題，敏感度偏低時(shí)，若陽(yáng)性參考品中全部使用強(qiáng)陽(yáng)性血清，所有陽(yáng)性參考品反應(yīng)均呈陽(yáng)性，則無(wú)法反映該試劑的真實(shí)敏感度。如血清，所有陽(yáng)性參考品反應(yīng)均呈陽(yáng)性，則無(wú)法反映該試劑的真實(shí)敏感度。如標(biāo)準(zhǔn)品中有弱陽(yáng)性血清的反應(yīng)可能呈陰性，提示試劑敏感度可能存在問(wèn)題。標(biāo)準(zhǔn)品中有弱陽(yáng)性血清的反應(yīng)可能呈陰性，提示試劑敏感度可能存在問(wèn)題。因此，血清學(xué)抗體檢測(cè)試劑在質(zhì)量控制中需要強(qiáng)、中、弱三種不同效價(jià)的血因

32、此，血清學(xué)抗體檢測(cè)試劑在質(zhì)量控制中需要強(qiáng)、中、弱三種不同效價(jià)的血清用于敏感度的質(zhì)量控制。同理，在試劑制備過(guò)程出現(xiàn)問(wèn)題，可能產(chǎn)生假陽(yáng)清用于敏感度的質(zhì)量控制。同理，在試劑制備過(guò)程出現(xiàn)問(wèn)題，可能產(chǎn)生假陽(yáng)性時(shí)。如果陰性參考血清都選擇本底極低的樣品，可能無(wú)法檢出，因此陰性性時(shí)。如果陰性參考血清都選擇本底極低的樣品，可能無(wú)法檢出，因此陰性參考品應(yīng)含有臨界陰性參考血清。參考品應(yīng)含有臨界陰性參考血清。 2.參考品的標(biāo)化參考品的標(biāo)化 為獲得陽(yáng)性與陰性不同效價(jià)的血清，獲得血清后應(yīng)先進(jìn)行初篩，再用不同的為獲得陽(yáng)性與陰性不同效價(jià)的血清，獲得血清后應(yīng)先進(jìn)行初篩，再用不同的方法學(xué)對(duì)血清進(jìn)行效價(jià)標(biāo)定，確定血清的效價(jià)，從中選

33、擇不同反應(yīng)強(qiáng)度的樣方法學(xué)對(duì)血清進(jìn)行效價(jià)標(biāo)定，確定血清的效價(jià)，從中選擇不同反應(yīng)強(qiáng)度的樣本，作為陽(yáng)性或陰性參考品。但多數(shù)企業(yè)未進(jìn)行細(xì)致的效價(jià)標(biāo)化，通常以試本，作為陽(yáng)性或陰性參考品。但多數(shù)企業(yè)未進(jìn)行細(xì)致的效價(jià)標(biāo)化，通常以試劑盒篩選后就作為檢測(cè)參考品。劑盒篩選后就作為檢測(cè)參考品。 標(biāo)準(zhǔn)品的建立應(yīng)有規(guī)范的操作細(xì)則，至少樣品采集、檢測(cè)與標(biāo)化的過(guò)程中所標(biāo)準(zhǔn)品的建立應(yīng)有規(guī)范的操作細(xì)則，至少樣品采集、檢測(cè)與標(biāo)化的過(guò)程中所有的實(shí)驗(yàn)操作均需先制定有的實(shí)驗(yàn)操作均需先制定SOP，再，再 嚴(yán)嚴(yán) 格格 遵遵 循循SOP進(jìn)行操作，并有對(duì)應(yīng)的原進(jìn)行操作，并有對(duì)應(yīng)的原始記錄。從已收到的資料來(lái)看，多數(shù)企業(yè)存在不足之處始記錄。從已收

34、到的資料來(lái)看，多數(shù)企業(yè)存在不足之處。 3.參考品的制備參考品的制備 結(jié)核病體外診斷試劑參考品通常由陽(yáng)性參考品、陰性參考品、最低檢出量或結(jié)核病體外診斷試劑參考品通常由陽(yáng)性參考品、陰性參考品、最低檢出量或最低檢出限參考品和精密性或重復(fù)性參考品組成，用來(lái)控制試劑盒的敏感度、最低檢出限參考品和精密性或重復(fù)性參考品組成，用來(lái)控制試劑盒的敏感度、特異度、檢出限和精密度等。但部分試劑廠家僅有陽(yáng)性與陰性檢測(cè)參考品。特異度、檢出限和精密度等。但部分試劑廠家僅有陽(yáng)性與陰性檢測(cè)參考品。 由于參考品用于體外診斷試劑質(zhì)量控制，所以參考物質(zhì)原料的選擇取決于診由于參考品用于體外診斷試劑質(zhì)量控制，所以參考物質(zhì)原料的選擇取決于

35、診斷試劑的預(yù)期用途。原料應(yīng)與試劑盒的使用要求相一致或盡可能接近，這樣斷試劑的預(yù)期用途。原料應(yīng)與試劑盒的使用要求相一致或盡可能接近，這樣可以消除方法基體效應(yīng)引入的系統(tǒng)誤差，陽(yáng)性參考品應(yīng)包括痰菌陰性和痰菌可以消除方法基體效應(yīng)引入的系統(tǒng)誤差，陽(yáng)性參考品應(yīng)包括痰菌陰性和痰菌陽(yáng)性患者的血清，但個(gè)別企業(yè)僅采用采血站篩選的抗體陽(yáng)性血清作為陽(yáng)性參陽(yáng)性患者的血清，但個(gè)別企業(yè)僅采用采血站篩選的抗體陽(yáng)性血清作為陽(yáng)性參考品。考品。 4.參考品的穩(wěn)定性參考品的穩(wěn)定性參考物質(zhì)的均一性和穩(wěn)定性：參考物質(zhì)的均一性和穩(wěn)定性：均一性可保證一批原料所制備的參考品均勻一致，即在不同空間檢測(cè)結(jié)果的一致性和均一性可保證一批原料所制備的參

36、考品均勻一致，即在不同空間檢測(cè)結(jié)果的一致性和可比性；可比性；穩(wěn)定性可使一批參考品長(zhǎng)期分發(fā)使用，為企業(yè)或科研院所提供用于質(zhì)量評(píng)價(jià)的參考品，穩(wěn)定性可使一批參考品長(zhǎng)期分發(fā)使用，為企業(yè)或科研院所提供用于質(zhì)量評(píng)價(jià)的參考品，保證在不同時(shí)間檢測(cè)結(jié)果的一致性和可比性。穩(wěn)定性考察一般需要觀察在不同溫度下保證在不同時(shí)間檢測(cè)結(jié)果的一致性和可比性。穩(wěn)定性考察一般需要觀察在不同溫度下放置不同時(shí)間，或經(jīng)過(guò)反復(fù)凍融后，觀察效價(jià)降低的情況。通過(guò)測(cè)定不同溫度，不同放置不同時(shí)間，或經(jīng)過(guò)反復(fù)凍融后，觀察效價(jià)降低的情況。通過(guò)測(cè)定不同溫度，不同凍融次數(shù)時(shí)特征活性的降低速率，從而確定貯存的適宜溫度和時(shí)間，或反復(fù)凍融的次凍融次數(shù)時(shí)特征活性

37、的降低速率，從而確定貯存的適宜溫度和時(shí)間，或反復(fù)凍融的次數(shù)。數(shù)。臨床檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題：1.敏感度與特異度虛高敏感度與特異度虛高WHO評(píng)估結(jié)果顯示，市售不同廠家的血液（血清學(xué)診斷）試劑的敏感度和評(píng)估結(jié)果顯示，市售不同廠家的血液（血清學(xué)診斷）試劑的敏感度和特異度變化很大，敏感度變化范圍為特異度變化很大，敏感度變化范圍為0100%，特異度變化范圍為，特異度變化范圍為31100%。根據(jù)收集的各企業(yè)臨床資料顯示，我國(guó)血液診斷試劑的敏感度平均值為根據(jù)收集的各企業(yè)臨床資料顯示，我國(guó)血液診斷試劑的敏感度平均值為80%左右，高于左右，高于70%的占的占79%；特異度平均值為；特異度平均值為92%，高于，高于90

38、%的占的占95%。2. 臨床評(píng)價(jià)僅采用與同類制品進(jìn)行比較評(píng)價(jià)的缺陷臨床評(píng)價(jià)僅采用與同類制品進(jìn)行比較評(píng)價(jià)的缺陷 部分企部分企 業(yè)業(yè) 根根 據(jù)據(jù) 體體 外外 診診 斷斷 試試 劑劑 臨臨 床床 研研 究究 技技 術(shù)術(shù) 指指 導(dǎo)導(dǎo) 原則原則，“已已有同品種批準(zhǔn)上市有同品種批準(zhǔn)上市”品的臨床研究可采用已批準(zhǔn)上市品的臨床研究可采用已批準(zhǔn)上市質(zhì)量較好的產(chǎn)品作為質(zhì)量較好的產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究。對(duì)比試劑，進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究。3.臨床研究的規(guī)范性臨床研究的規(guī)范性 多數(shù)未規(guī)范進(jìn)行臨床研究，不能隨機(jī)入選客觀評(píng)價(jià)，數(shù)據(jù)經(jīng)處理修改痕多數(shù)未規(guī)范進(jìn)行臨床研究，不能隨機(jī)入選客觀評(píng)價(jià)，數(shù)據(jù)經(jīng)處理修改痕跡明顯，這是導(dǎo)

39、致臨床研究的特異度與敏感度不真實(shí)的主要因素。跡明顯，這是導(dǎo)致臨床研究的特異度與敏感度不真實(shí)的主要因素。31/45近期結(jié)核病診斷方法的相關(guān)研究近期結(jié)核病診斷方法的相關(guān)研究JID 2012:205 (Suppl 2), S147.結(jié)核感染者體內(nèi)存在特異的效應(yīng)結(jié)核感染者體內(nèi)存在特異的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，效應(yīng)淋巴細(xì)胞，效應(yīng)T淋巴細(xì)胞再次受到結(jié)核抗淋巴細(xì)胞再次受到結(jié)核抗原刺激時(shí)會(huì)分泌多種細(xì)胞因子（原刺激時(shí)會(huì)分泌多種細(xì)胞因子（IFN-）。因此，檢測(cè)效應(yīng)）。因此，檢測(cè)效應(yīng)T淋巴細(xì)胞可用于淋巴細(xì)胞可用于結(jié)核病或結(jié)核潛伏感染者的診斷。結(jié)核病或結(jié)核潛伏感染者的診斷。由于效應(yīng)由于效應(yīng)T細(xì)胞細(xì)胞存活時(shí)間很短存活時(shí)間很短，

40、而且，而且具有特異性具有特異性，因此可以作為機(jī)體是否正，因此可以作為機(jī)體是否正處于被感染的指標(biāo)，無(wú)論是否有臨床癥狀。處于被感染的指標(biāo)，無(wú)論是否有臨床癥狀。基于基于IGRA原理的產(chǎn)品目前已被原理的產(chǎn)品目前已被美國(guó)、加拿大、英國(guó)、德國(guó)、意大利、瑞士、美國(guó)、加拿大、英國(guó)、德國(guó)、意大利、瑞士、法國(guó)、荷蘭、日本法國(guó)、荷蘭、日本等二十余個(gè)國(guó)家寫(xiě)入本國(guó)的結(jié)核診療指南中等二十余個(gè)國(guó)家寫(xiě)入本國(guó)的結(jié)核診療指南中。目前應(yīng)用的進(jìn)口目前應(yīng)用的進(jìn)口IGRA主要有兩種商品化的試劑主要有兩種商品化的試劑：1）澳大利亞澳大利亞Cellestis公司的公司的 Quanti FERON-TB GOLD In Tube（QFT-GI

41、T）2）英國(guó)英國(guó)Oxford Immunotec公司的公司的T-SPOT.TB蛋白水平分子診斷:-干擾素釋放實(shí)驗(yàn)（干擾素釋放實(shí)驗(yàn)（IGRA)-干擾素釋放實(shí)驗(yàn)（干擾素釋放實(shí)驗(yàn)（IGRA） 干擾素干擾素檢測(cè)陰性檢測(cè)陰性干擾素干擾素檢測(cè)陽(yáng)性檢測(cè)陽(yáng)性TB抗原多肽T細(xì)胞活化T細(xì)胞 干擾素T-SPOT.TB原理原理T-SPOT.TB是以擁有專利的特異抗原（是以擁有專利的特異抗原（ESAT-6/CFP-10），通過(guò)酶聯(lián)免），通過(guò)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)（疫斑點(diǎn)技術(shù)（ELISPOT）檢測(cè)受試者體內(nèi)是否存在結(jié)核效應(yīng)）檢測(cè)受試者體內(nèi)是否存在結(jié)核效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，從而判斷目前該受試者是否感染結(jié)核桿菌（現(xiàn)癥感染）的新

42、方法。從而判斷目前該受試者是否感染結(jié)核桿菌（現(xiàn)癥感染）的新方法。結(jié)核桿菌特異抗原：結(jié)核桿菌特異抗原：早期分泌抗原靶早期分泌抗原靶6（Early Secreted Antigenic Rarget 6，ESAT-6）培養(yǎng)濾液蛋白培養(yǎng)濾液蛋白10（Culture Filtrate Protein 10，CFP 10）結(jié)核桿菌特異抗原結(jié)核桿菌特異抗原 由結(jié)核桿菌基因組RD1區(qū)相同的操縱子編碼的蛋白 所有的卡介苗（BCG）均丟失該基因序列 絕大多數(shù)的環(huán)境分枝桿菌也不存在RD1區(qū)ESAT-6與與CFP-10抗原抗原結(jié)核桿菌特異抗原結(jié)核桿菌特異抗原蘇氏海堪薩斯戈登牛非洲酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)結(jié)合

43、了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（即結(jié)合了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（即ELISA技術(shù)），技術(shù)），能夠在能夠在單細(xì)胞水平單細(xì)胞水平檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌情況，檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌情況，靈敏度高靈敏度高。準(zhǔn)確準(zhǔn)確T-SPOT.TB臨床性能指標(biāo)臨床性能指標(biāo) 特異性特異性只針對(duì)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群敏感，與絕大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌和卡介苗（BCG）無(wú)交叉反應(yīng) 美國(guó)FDA數(shù)據(jù)：特異性97.1%(297/306) 國(guó)內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：特異性94.1%(478/508) 靈敏度靈敏度基本不受免疫力低下/受抑制影響，在肺外結(jié)核患者中有很高的檢出率 美國(guó)FDA數(shù)據(jù)：靈敏度95.6%(175/183) 國(guó)內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：靈敏度95

44、.3%(624/655)靈靈 敏敏 度度ReferenceSensitivity Jafari et al 2006 AJRCCM 174;9:1048-53100.0% (12/12) Ferrara et al Lancet 2006 376;1328-34*83.3% (20/24) Lee et al Eur Respir J 2006 28;24-30*96.6% (84/87) Goletti et al Clin Microbiol Infect 2006 12;6:544-50*91.3% (21/23) Meier et al EJCMID 2005 24;529-53695

45、.9% (70/73) Kang et al Chest. 2007 Sep;132(3):959-65*92.2% (59/64) Janssens et al ERJ 2007 30(4):722-898.3% (57/58) Clarke et al Clin Exp Immunol 2007 150(2):238-44.90.0% (27/30) Detjen et al CID 2007 1;45(3):322-8*92.9% (26/28) Ozekinci et al J Int Med Res 2007;35:696-70392.9% (26/28) Soysal et al

46、IJTLD 2008 12(1):50-56*80.8% (80/99) Dominguez et al Clin Vacc Immunol 2008 15(1);168-71*85.7% (36/42) Chee et al J Clin Microbiol. 2008 Apr 9*94.1% (254/270) Vincenti et al Clin Exp Immunol. 2007 Oct;150(1):91-8*84.6% (11/13) Wang et al Emerging Infect Dis 2007 13;4:553-887.2% (34/39) Losi et al Eu

47、r Respir J. 2007 Dec;30(6):1173-9100.0% (10/10) Kim et al Arch Intern Med 167;20:2255-2259100.0% (22/22) Connell et al PLoS ONE 2008. 3; 7:e2624*100.0% (9/9) Kobashi et al. Scand J Infect Dis 2008. 40; 8: 629-34*87.5% (42/48) Kobashi et al. J Infect. 2008 Epub ahead of print.*90.0% (36/40) Domnguez

48、et al. Diagn Microbiol Infect Dis. 2008.* Epub ahead of print84.2% (32/38) Goletti et al. PLoS ONE. 2008. 3; 10: e3417.*89.9% (62/69) Bosshard et al. Respir Med. 2008. Epub ahead of print98.4% (62/63) Higuchi Med Microbiol Immunol. 2008. Epub ahead of print*95.9% (47/49) TOTAL92.0% (1139/1238) 特特 異異

49、 性性可信可信 T-SPOT.TB國(guó)外指南國(guó)外指南T-SPOT.TB是采用是采用-干擾素釋放試驗(yàn)（干擾素釋放試驗(yàn)（IGRA）原理，獲得美國(guó)）原理，獲得美國(guó)FDA認(rèn)證、歐盟認(rèn)證、歐盟CE認(rèn)證和中國(guó)認(rèn)證和中國(guó)SFDA認(rèn)證的唯一商業(yè)化產(chǎn)品認(rèn)證的唯一商業(yè)化產(chǎn)品列入美國(guó)、英國(guó)等歐美列入美國(guó)、英國(guó)等歐美25個(gè)國(guó)家結(jié)核診療指南個(gè)國(guó)家結(jié)核診療指南 2011年英國(guó)NICE指南、2010年美國(guó)最新結(jié)核診療指南、2010年加拿大結(jié)核指南美國(guó)美國(guó)CDC推薦推薦卡介苗（卡介苗（BCG）接種人群結(jié)核感染檢測(cè)首選）接種人群結(jié)核感染檢測(cè)首選各國(guó)對(duì)潛伏感染風(fēng)險(xiǎn)人群的篩查指南各國(guó)對(duì)潛伏感染風(fēng)險(xiǎn)人群的篩查指南風(fēng)險(xiǎn)人群風(fēng)險(xiǎn)人群美國(guó)指

50、南美國(guó)指南加拿大指南加拿大指南英國(guó)指南英國(guó)指南免疫力抑制人群（例如，HIV感染者，使用強(qiáng)的松或TNF-抑制劑治療）TST或IGRA；如果是陰性或高度懷疑的，TST和IGRA都要檢查TST，如果TST陰性要用IGRA確認(rèn)TST或IGRABCG接種者（如果也屬于其它風(fēng)險(xiǎn)人群）推薦用IGRA沒(méi)有特定的推薦TST或IGRA與傳染性肺結(jié)核患者密切接觸TST或IGRATST，用IGRA進(jìn)一步確認(rèn)TST陽(yáng)性TST，用IGRA進(jìn)一步確認(rèn)TST陽(yáng)性醫(yī)務(wù)工作者TST或IGRA推薦用TSTTST或IGRA，視情況而定無(wú)法再來(lái)確認(rèn)TST結(jié)果的人群（例如，流浪漢，注射吸毒者或交通不方便）推薦用IGRA沒(méi)有特定的推薦推薦用IGRA國(guó)外出生的人群只篩查過(guò)去5年內(nèi)移民的人群；TST或者IGRA只篩查過(guò)去2年內(nèi)小于15歲的移民；TST，用IGRA進(jìn)一步確認(rèn)TST陽(yáng)性只篩查新移民；TST篩查5至15歲