直接Coombs試驗

1、2021/3/111直接直接CoombsCoombs試驗試驗2021/3/112Coombs試驗概述直接Coombs試驗原理及方法直接Coombs試驗臨床意義2021/3/113一一.Coombs.Coombs試驗概述試驗概述 1945年，英國免疫學(xué)家Coombs等人發(fā)明的一種能檢測紅細(xì)胞表面抗體的新試驗，故稱之Coombs試驗，亦稱抗人球蛋白試驗。 抗人球蛋白試驗是抗人球蛋白參與的一種間接血凝試驗，利用抗人球蛋白抗體作為第二抗體起到橋梁的作用，連接與紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合的不完全抗體，使紅細(xì)胞凝集。2021/3/114不完全抗體 能夠與相應(yīng)的抗原牢固結(jié)合,但因其分子量較小,體積小,不能起到橋聯(lián)作

2、用,在一般條件下不出現(xiàn)可見反應(yīng)。Coombs試驗用于檢測不完全抗體 直接Coombs試驗：檢查紅細(xì)胞上有無不完全抗體。 間接Coombs試驗：檢查血清中有無游離的不完全抗體。 2021/3/115二二. .直接直接CoombsCoombs試驗試驗（一）直接（一）直接CoombsCoombs試驗基本原理試驗基本原理 若紅細(xì)胞在體內(nèi)被不完全抗體吸附，由于不完全抗體分子量小，體積小，不能起到橋聯(lián)作用，僅使紅細(xì)胞處于致敏狀態(tài)，在一般條件下不出現(xiàn)可見反應(yīng)。加入抗球蛋白試劑，與紅細(xì)胞上吸咐的不完全抗體結(jié)合，在致敏紅細(xì)胞之間搭橋，出現(xiàn)肉眼可見的凝集。2021/3/116待檢紅細(xì)胞待檢紅細(xì)胞不完全抗體不完全抗

3、體抗人球蛋白抗人球蛋白直接直接coombscoombs試驗原理示意圖試驗原理示意圖2021/3/117（二）直接（二）直接CoombsCoombs試驗方法試驗方法1.洗滌紅細(xì)胞：取50L受檢者全血，以0.9%生理鹽水洗滌3次 （1500r/min離心1min）；2.配制3%-5%紅細(xì)胞鹽水懸液；3.編號：分別取三個試管，標(biāo)記為IgG、C3d、IgG/C3d；4.三管中分別加入50L3%-5%紅細(xì)胞鹽水懸液，加入兩滴相應(yīng)的抗人球蛋白試劑（抗IgG、C3d、IgG/C3d）；5.輕輕混勻后3000r/min離心15s，輕輕搖動試管，觀察結(jié)果。2021/3/118（三）直接（三）直接CoombsCoombs試驗結(jié)果判讀試驗結(jié)果判讀 陽性結(jié)果-出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，表示紅細(xì)胞上有 相應(yīng)抗體存在； 陰性反應(yīng)-紅細(xì)胞不凝集，表示紅細(xì)胞上沒有相應(yīng)抗體存在。2021/3/119（四）注意事項（四）注意事項1.標(biāo)本采集后應(yīng)立即進(jìn)行試驗，延遲試驗可使抗體從細(xì)胞上丟失；2.受檢紅細(xì)胞一定要洗滌充分，否則紅細(xì)胞懸液中混雜的血清蛋白會中和抗人球蛋白；3.直接抗人球蛋白試驗在初讀結(jié)果后，放在室溫中5-10分鐘，再次離心觀察。這樣孵育之后，若紅細(xì)胞被C3d致敏時，重新離心觀察結(jié)果可使陰性結(jié)果轉(zhuǎn)變?yōu)殛栃越Y(jié)果，而IgG致敏的紅細(xì)胞在孵育后反應(yīng)更弱。2021/3/1110三.直接直接CoombsCoombs試