異型淋巴細(xì)胞檢查操作規(guī)程

1、1原理把血液制成細(xì)胞分布均勻的薄膜涂片，用瑞氏染液染色，根據(jù)各類異型淋巴 細(xì)胞形態(tài)特征予以分類計(jì)數(shù)，得出相對(duì)比植包分率），以觀察數(shù)量、形態(tài)和質(zhì)量 的變化，對(duì)疾病有輔助診斷意義。2. 標(biāo)本的采集及其注意事項(xiàng)2. 1靜脈采血2. 1. 1.方法：采用真空采血管含ee5m2 （3. （w.（m ,按抗凝劑與血液的 比例從肘靜脈采血，采血后輕輕顛倒混勻，室溫保存，4小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。2. 1. 2.注意事項(xiàng)2. 1. 2. l防止溶血，淤血，標(biāo)本不能從輸液管中或輸液手的同側(cè)靜脈采集。2. 1. 2. 2.抗凝管瓶）應(yīng)貼有標(biāo)簽，并清楚注明病人姓名、病區(qū)、住院號(hào)、 wo標(biāo)本應(yīng)與申請(qǐng)單一起及時(shí)送檢，室溫保存不

2、得大于4小時(shí)。2. 1. 2. 3當(dāng)肘靜脈不明顯時(shí)，可采用手背部，手腕部，？窩部和外踝部靜 脈。幼兒可采用頸外靜脈采血。2. 2.毛細(xì)血管采血2. 2. 1.方法2. 2. 1. 1采血部位：成人左手中指或無名指尖內(nèi)側(cè)為宜，半歲以上兒童 以中指為好，半歲以下嬰幼兒通常自拇指或足在底部外側(cè)緣采血。2. 2. 1. 2.輕輕按摩采血部位，使其自然充血，用759乙醇棉球消毒局部皮膚待 干。2. 2. 1. 3.緊捏刺血部位，用無菌采血針穿刺，取血?jiǎng)幼鲬?yīng)迅速，深度約 2-nn）以稍加擠壓血液能流出為宜。2. 2. 1. 4.用干棉球擦去第一滴血，按實(shí)驗(yàn)需要依次采血。2. 2. 1. 5.采血完畢，用干

3、棉球壓住傷口片刻。2. 2. 2.注意事項(xiàng)2. 2. 2. 1.末梢采血要避開凍瘡、發(fā)炎、水腫等部位，以避免影響結(jié)果。2. 2. 2. 2.皮膚消毒一定要待乙醇揮發(fā)干燥后采血，否則流出的血液1四處擴(kuò)散 而不成滴。2. 2. 2. 3.嚴(yán)格按照無菌技術(shù)操作，保證一人一針一管，杜絕交叉感染。3. 試劑與儀器3. 1試劑:瑞氏染液3. 1. 1瑞氏染液配制：瑞氏染料830卵或lg甲醇閔500ml或600ml先稱干燥事先放入溫箱干燥過夜）瑞氏染料放置乳缽內(nèi)，用乳棒輕輕敲碎染料 成粉末，再行研磨至聽不到研芝麻聲即呈細(xì)粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨， 使染料在乳缸內(nèi)顯“一面鏡”光澤，而無染料粉粒沉著。再加

4、較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入一淸潔儲(chǔ)存瓶 內(nèi)最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨,重復(fù)數(shù)次，至乳缽內(nèi)染料及甲醇用完為止， 搖勻，密封瓶口。存室溫暗處，儲(chǔ)存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲(chǔ)存 3個(gè)月以上為佳。3. 1. 2.緩沖液：3. 1. 2. 1.緩沖液作用：染色對(duì)氫離子濃度是十分敏感的，據(jù)觀察ph值的改 變，可使蛋白質(zhì)與染料形成的化合物重新離解。緩沖液須保持一定的ph使染色 穩(wěn)定，pbs的ph般在6.0. 8,偏堿性染料可與緩沖液中酸基起中和作用， 偏酸性染料則與緩沖液中的堿基起中和作用，使ph恒定。3. 1. 2. 2.緩沖液配制（ph6. o. 8,弱酸性）：k

5、h2km 死水）.64gna2hpd 無水）.56glh2o 斷鮮）至 1000ml3. 2.儀器:顯微鏡、松柏油4. 操作4. 1.采血后推制厚薄適宜的血膜片，血膜應(yīng)呈舌狀，頭、體、尾清晰可分。4. 2.推好的血膜在空氣屮晃動(dòng)，以促使快干。天氣寒冷或潮濕時(shí)，應(yīng)于37c 溫箱中保溫促干，以免細(xì)胞變形縮小。4. 3.染色：采用瑞氏染色法染色平置玻片于染色架上，滴加染液15滴，使其迅速蓋滿血朕，約lmin后，滴 加緩沖液5-10滴，輕輕搖動(dòng)玻片或?qū)?zhǔn)血片吹氣，于染液充分混合，5-10min 后用水沖去染液，待干。4. 4.選擇涂片的體尾交界處染色良好的區(qū)域，在油鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，按其形態(tài)特征

6、進(jìn)行分類計(jì)數(shù)，求出異淋所占比值百分率）。5異型淋巴細(xì)胞分型downey將異型淋巴細(xì)胞分為三型：5. 1. i型飽沫型或漿細(xì)胞型）細(xì)胞中等大小，細(xì)胞多呈現(xiàn)圓形或部分不規(guī) 則形或阿米巴型，胞質(zhì)嗜堿性強(qiáng)，呈深藍(lán)色，含有大小不等的空泡或呈泡沫狀, 無顆?；蛴猩兕w粒，胞核偏位，呈橢圓形、腎形或分葉形，染色質(zhì)粗糙，呈粗網(wǎng) 狀或成堆排列。5. 2. ii型不規(guī)則型或單核細(xì)胞樣型）細(xì)胞胞體較1型大，形態(tài)不規(guī)則，胞質(zhì) 量多，呈淺灰藍(lán)色，但靠胞膜邊緣處較深染且不整齊，無空泡，可有少數(shù)天青胺 藍(lán)顆粒，胞核呈圓形、橢圓形或不規(guī)則形，染色質(zhì)較i型細(xì)致，亦呈網(wǎng)狀。5.3.m型 幼稚型或幼淋巴細(xì)胞樣型）細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，胞質(zhì)呈藍(lán)色，可有 分布較均勻的小空泡，一般無顆粒，胞核圓形或卵圓形，可見核仁12個(gè)，染 色質(zhì)細(xì)致、均勻，呈