NY_T 2052 菜豆象檢疫檢測與鑒定方法

1、NY_T 2052 菜豆象檢疫檢測與鑒定方法B 15中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY /T 2052?2011菜豆象檢疫檢測與鑒定方法Detection and identification for Acanthoscelides obtectus Say2011-09-01 發(fā)布 2011-12-01實施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部 發(fā)布NY /T 2052?2011前 言本標(biāo)準(zhǔn)按照 GB / T 1.1?20 09 給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部種植業(yè)管理司提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會 SAC / TC 271 歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:全國農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心、廣東省植物保

2、護總站、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:馮曉東、王琳、朱景全、陸永躍、李梅輝、劉慧、李小妮、曾玲、王玉璽。NY /T 2052?2011菜豆象檢疫檢測與鑒定方法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了菜豆象 Acanthoscelides obtectus Say 的檢疫檢測與鑒定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于豆類生產(chǎn)及貯存、調(diào)運過程中對菜豆象的檢疫檢測與鑒定。2 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。 GB 15569 農(nóng)業(yè)植物調(diào)運檢疫規(guī)程3 原理3.1分類地位 菜豆象屬鞘翅日 Coleop

3、tera ,豆象科 Bruchidae 。3.2 檢測原理 菜豆象主要借助被侵染的豆粒進(jìn)行傳播。菜豆象形態(tài)特征參見附錄 B 、附錄 C 和附錄 D ,分布、寄主范圍和為害特征參見附錄 E 。4 儀器、用具及試劑4.1 儀器、用具 儀器:生物顯微鏡、體視顯微鏡、測微尺、培養(yǎng)箱、農(nóng)用軟 X 光機、照相機等。 用具:玻璃瓶、白瓷盤、培養(yǎng)皿、鑷子、小燒杯、酒精燈、微型解剖刀、解剖針、載玻片、蓋玻片、吸管、吸水紙、濾紙、脫脂棉、紗布、指形管、小毛筆、記號筆、標(biāo)簽、各類孔徑樣品篩。4.2 試劑 食鹽或硝酸銨、 0. 5% 氫氧化鈉 NaOH 、 1% 碘化鉀 KI 、 2% 碘酒、 70% 乙醇、無水酒精

4、、 10% 氫氧化鉀 KOH 溶液或 10% 氫氧化鈉 NaOH 溶液、酸性品紅染色劑、植物油或機油 。5 檢測5.1 產(chǎn)地檢測5.1.1 檢測范圍 菜豆象寄主植物。5.1.2 檢測時期 日均氣溫在 15 以上,豆類作物成熟中后期。5.1.3 取樣方法2 在待檢測地塊內(nèi),隨機選取 30 個樣點,對每個樣點進(jìn)行 5 次掃網(wǎng),每次掃網(wǎng)面積約為 0. 25 m ,每個樣為采自 3 個樣點掃網(wǎng)所獲昆蟲樣本。 如需采集幼蟲進(jìn)行鑒定時,采用隨機取樣檢查法,樣點數(shù)量不少于 30 個點,每個點的面積為20. 25 m ,每個樣為采自 3 個樣點整株豆莢中的 500 g 豆類。5.2 調(diào)運檢測1NY /T 20

5、52?20115.2.1 檢測范圍 豆類產(chǎn)品及其盛裝、貯藏、運輸?shù)钠骶?豆類貨物的堆放處。5.2.2 檢測時期 豆類在倉庫內(nèi)儲存或者調(diào)運期間,可常年檢測。5.2.3 取樣方法 仔細(xì)檢查貨物包裝物外表、鋪墊材料、車、船、集裝箱的四壁、包裝袋的邊、角、縫隙等處,查看 是否有疑似菜豆象成蟲或受害豆粒、蛻、排泄物等,如有則取成蟲及受害豆粒。 抽取樣品按 GB 15569 的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。5.3 取樣結(jié)果及記錄 將取樣獲得的豆類置于樣品采集袋內(nèi) , 將收集的疑似菜豆象成蟲、幼蟲、蛹、卵及蛻等 保存于相關(guān)容器中,注明采集時間、采集地點、采集人、寄主后,送實驗室進(jìn)一步培養(yǎng)、檢測鑒定。 抽樣記錄于附錄 A 中

6、的表 A . 1 。6 檢查方法 根據(jù)實際 工 作條件,選擇以下 1 種或 1 種以上方法,檢查上述所抽樣品是否有為害狀或疑似菜豆象,并收集各蟲態(tài)標(biāo)本。6.1 肉眼檢查 檢查豆莢內(nèi)腹線上是否有狹縫或小孔,狹縫或小孔內(nèi)是否有卵。剝開豆莢檢查是否有幼蟲,仔細(xì)檢查豆粒上是否有蟲卵、豆粒上有無幼蟲蛀入孔、有無 “ 小窗 ” 或羽化孔,查看有無幼蟲、蛹或成蟲。6.2 過篩檢查 用黑色作 襯底,將檢驗樣品放入 4 mm 圓孔樣品篩內(nèi)回旋過篩,觀察篩下物。首先檢查篩下物內(nèi)有無成蟲、卵和幼蟲,然后用毛刷將篩下物掃入培養(yǎng)皿內(nèi),帶回實驗室內(nèi)鏡檢。6.3 飼養(yǎng)檢查 將 5.3 中抽樣獲得的豆類樣品,放人 25 30

7、 、相對濕度 50% 70% 的培養(yǎng)箱內(nèi)飼養(yǎng)觀察,逐日觀察是否有成蟲出現(xiàn)。6.4 染色檢驗 白色或近白色的豆粒樣品,用酸性品紅染色法將蟲蛀孔染成紅色,被害豆粒種皮下如呈現(xiàn)羽化孔,可進(jìn)一步檢查豆粒內(nèi)是否有老熟幼蟲和蛹。染色檢查過程可在以下兩種方法中選擇一種進(jìn)行: 50 g樣 品 樣品篩或紗 布 1% KI 或 2% 碘酒 2 min 0.5% NaOH 0 .5 min l min 水洗 0.5 min 挑 出 表面有褐色到深褐色點的豆粒 鏡檢; 50 g 樣品 樣品篩 30 水 1 min 酸性品紅2 min 水洗 0.5 min 挑出表面有粉紅色小點的豆粒 鏡檢。 褐色、紅色或其他深色豆粒樣

8、品,不必進(jìn)行染色檢驗。6.5 油脂檢驗 取過篩檢驗完的樣品 500 g l 000 g ,分成每 50 g 一 組,放在淺盤內(nèi)鋪成一薄層,按 l g 豆粒用植物油或機油 1 m L l.5 m L 的比例,將油倒入豆粒內(nèi)均勻浸潤, 0.5 h 后檢查。被油脂浸潤的豆粒變成琥珀色,幼蟲侵害處呈一小點,蟲孔處種皮呈現(xiàn)透 明斑。再將有上述癥狀的豆粒挑出,帶回實驗室內(nèi)鏡檢。 此法對白皮、黃皮、淡褐色皮的豆粒效果良好,對紅皮豆粒效果較差。6.6 比重檢驗 使用不同鹽類及濃度溶液,利用物理比重法將受蛀食豆粒與健康豆粒區(qū)分開來。方法是將 100 g樣品倒入 18. 8% 食鹽水或硝酸銨溶液中攪拌 10 s

9、15 s ,靜止 1 min 2 min ,撈出浮豆,剖檢被害豆粒。6.7 X 光檢驗2NY /T 2052?2011 用農(nóng)用軟 X 光機透視檢驗豆粒內(nèi)有無幼蟲、蛹或成蟲。3NY /T 2052?20117 鑒定 將檢查獲得的各蟲態(tài)標(biāo)本置于體視顯微鏡下,觀察是否符合附錄 B 和附錄 C 的鑒定特征。7.1 外部形態(tài)特征觀察 將卵、幼蟲和成蟲置于體視顯微鏡下直接觀察,描述外部形態(tài)特征并測量相關(guān)數(shù)據(jù)。7.2 內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)觀察 將成蟲若干頭置于適量 10% 氫氧化鉀 KOH 或 10% 氫氧化鈉 NaOH 溶液中,水浴加熱 3 min 5 min 后取出,置于體視顯微鏡下解剖,挑出完整的外生殖器制成

10、玻片,置于生物顯微鏡下觀察形態(tài)特征,如 需永久保存則可參照有關(guān)昆蟲外生殖器玻片制作方法制片。8 結(jié)果判定8.1 成蟲、幼蟲符合附錄 C 所描述特征鑒定為菜豆象。鑒定結(jié)果填人附錄 A 中的表 A.2 。8.2 如果樣品為卵、蛹,且分別符合附錄 C 所描述特征,需進(jìn)一步抽取成蟲、幼蟲標(biāo)本進(jìn)行鑒定。9 檔案保存 將采集到的菜豆象標(biāo)本置于小塑料瓶中,加入 70% 乙醇后密封,并貼上標(biāo)簽。標(biāo)簽上注明采集時間、采集地點、寄主、采集人。 原始記錄、標(biāo)本和鑒定結(jié)果等材料妥善保存于植物檢疫機構(gòu)。4NY /T 2052?2011 附 錄 A (規(guī)范性附錄 )植物有害生物抽樣調(diào)查和樣本鑒定表A . 1 植物有害生物

11、批樣調(diào)查記錄見表 A. 1。表 A. 1 植物有害生物抽樣調(diào)查記錄表編號 生產(chǎn)(經(jīng)營)者 地址及 聯(lián)系人 調(diào)查日期 抽樣地點 樣品編號 植物名稱 品種名稱 植物生育期 調(diào)查株數(shù)或面積 植物來源 癥狀描述 發(fā)生原因及 防控情況 抽樣方法、 部位、比例 備注抽樣單位(章): 生產(chǎn)、經(jīng)營單位(章):抽樣人: 負(fù)責(zé)人:年 月 日 年 月 日 注:本單一式兩聯(lián),第一聯(lián)抽樣單位留檔,第二聯(lián)交受檢單位。5NY /T 2052?2011A . 2 植物有害生物樣本鑒定報告見表 A. 2。表 A. 2 植物有害生物樣本鑒定報告 編號 植物名稱 品種名稱 植物生育期 樣品數(shù)量 取樣部位 樣品來源 送檢日期 送檢人

12、 送檢單位 檢測鑒定方法:檢測鑒定結(jié)果:備注:鑒定人(簽名):審核人(簽名):鑒定單位(蓋章):年 月 日 注:本單位一式三份,檢測單位、受檢單位和檢疫機構(gòu) 各一份。6NY /T 2052?20117NY /T 2052?2011 附 錄 C (資料性附錄) 菜豆象主要鑒定特征C . 1 豆象科的主要鑒定特征體表:體覆鱗片,鞘翅毛有白色、棕色,常形成斑紋,末端截形。 頭部:頭略伸長,復(fù)眼大,前緣強烈凹入。 觸角:觸角 11 節(jié),鋸齒狀,櫛齒狀。 后足:后腿節(jié)常具尖齒,跗節(jié) 5 節(jié),第 4 節(jié)小。C . 2 菜豆象的主要鑒定特征C . 2.1 成蟲 體長 2.0 mm 4.5 mm ,長橢圓形

13、, 頭、前胸背板及鞘翅表皮黑色,密披黃褐色毛,背面暗灰 色,僅鞘翅端部紅褐色;腹板、臀板及足大部紅褐色,僅局部黑色,密披白色毛,雜以黃色毛。頭部長而寬,密布刻點,額中線光滑。觸角 11 節(jié) , 向后伸達(dá)肩部;基部 4 節(jié)絲狀,第 5 節(jié) 10 節(jié)鋸齒狀,末節(jié)呈桃形,端部尖。基部4 節(jié)(有時也包括第 5 節(jié)基半部)及末節(jié)紅褐色 , 其余節(jié)深褐色或黑色。前胸背板圓錐形,中區(qū)布刻點,端部及邊緣刻點變小。小盾片黑色 , 方形 , 端部 2 裂,密布倒伏狀黃色毛。鞘翅行紋深,行紋 3 、 4 及行紋 5 、 6 分別在基部靠近;近基部、近中部及近端部散布褐色毛斑。臀板隆起,被淡色毛。雄蟲第 5 腹板后緣

14、明顯凹人,雌蟲稍 凹 入 。后足腿節(jié)端部與基部縊縮,呈梭形,中部約與后足基節(jié)等寬;腹面近端部有 1 長而尖的大齒 , 其后為 2 個(偶爾 3 個)小齒,大齒長度約為前 2 個小齒的 2 倍,約為后足脛節(jié)寬度 1.2 倍;后足脛節(jié)具前縱脊、前側(cè)縱脊、側(cè)縱脊及后縱脊 ; 后足脛節(jié)端部前的刺長約為第 1 跗節(jié)長的 1 / 6 。雄蟲外生殖器的陽基側(cè)突端部膨大,兩側(cè)突在基部 1 / 5 愈合;外陽莖瓣端部鈍尖,兩側(cè)緣稍凹人;內(nèi)陽莖有多數(shù)細(xì)的毛狀骨化刺,向囊區(qū)方向骨化刺變大變稀,囊區(qū) 2 個骨化刺團。雌蟲第八腹節(jié)背板呈狹梯形,基緣深凹,端部疏生少量剛毛,從背板基部兩側(cè)角向端緣方向有 兩條近平行的骨化條

15、紋,第八腹節(jié)腹板呈 “ Y” 形。C . 2.2 幼蟲 1 齡幼蟲體長約 0.8 mm ,寬約 0.3 mm ,呈圓柱形,中胸及后胸最寬,向腹部漸細(xì)。頭的兩側(cè)各有 1個小眼,位于上顎和觸角之間。觸角 1 節(jié),基節(jié)有 1 個圓筒狀突起向外傾斜,末節(jié)有 1 根長剛毛。前胸盾呈 “ x” 或 “ H” 形,上面著生齒突。第 8 、第 9 腹節(jié)背板具卵圓形的骨化板。足 2 節(jié),第 1 節(jié)末端有刺 2根,第 2 節(jié)末端扁平,近各足的基部內(nèi)側(cè)有長剛毛 1 根;腹面著生小刺。 老熟幼蟲體長 2.4 mm 3.5 mm , 體寬 1.6 mm 2.3 mm 。體粗壯,彎曲呈 “ C ” 形;足退化。上唇半圓形 , 密布小刺毛;前半部膜質(zhì),具剛毛 8 根,其中 6 根靠近前緣排成弧形 , 2 根位于中央稍后;后半部骨化 , 呈橫橢圓形,每側(cè)具剛毛 1 根。第 8 、第 9 腹節(jié)背板無骨化板。下唇略呈 i 角形,兩側(cè)門入,后緣后凸,下唇須缺如。