四種糖的測(cè)定方法

1、4 種糖的測(cè)定方法總結(jié)：1、 直接滴定法。原理為 糖還原天藍(lán)色的氫氧化銅為紅色的氧化亞銅。缺點(diǎn)：水樣中的還原性物質(zhì)能對(duì)糖的測(cè)定造成影響。2、 高錳酸鉀滴定法。所用原理同直接滴定法。缺點(diǎn)：水樣中的還原性物質(zhì)能對(duì)糖的測(cè)定造成影響，過(guò)程較為復(fù)雜，誤差大。3、硫酸苯酚法。糖在濃硫酸作用下，脫水形成的糠醛和羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在 10-100mg 范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長(zhǎng)下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長(zhǎng)下測(cè)定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測(cè)定，方法簡(jiǎn)單，靈敏度高，實(shí)驗(yàn)時(shí)基本不受蛋白質(zhì)存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定160min 以上。缺點(diǎn)：如

2、果水樣呈橙紅色（大部分水樣為黃色），會(huì)對(duì)比色法造成較大的干擾。4、蒽酮法糖在濃硫酸作用下， 可經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛和羥甲基糠醛， 生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應(yīng)生成藍(lán)綠色糠醛衍生物， 在一定范圍內(nèi)， 顏色的深淺與糖的含量成正比， 故可用于糖的測(cè)定。缺點(diǎn)：，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺。綜合比較；采用蒽酮法能將最為準(zhǔn)確地測(cè)定尾水中糖的含量。（一）直接滴定法（本法是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法）中華人民共和國(guó)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)( 果汁總糖的測(cè)定直接滴定法)SB/T10203-1994、原理一定量的堿性酒石酸銅甲、乙液等量混合，立即生成天藍(lán)色的氫氧化銅

3、沉淀，這種沉淀很快與酒石酸鈉反應(yīng)，生成深藍(lán)色的可溶性酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物。在加熱條件下，以次甲基藍(lán)作為指示劑，用標(biāo)液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應(yīng)，生成紅色的氧化亞銅沉淀，待二價(jià)銅全部被還原后，稍過(guò)量的還原糖把次甲基藍(lán)還原，溶液由藍(lán)色變?yōu)闊o(wú)色，即為滴定終點(diǎn)。根據(jù)樣液消耗量可計(jì)算出還原糖含量。樣品經(jīng)除去蛋白質(zhì)后， 在加熱條件下， 以次甲基藍(lán)做指示劑， 滴定標(biāo)定過(guò)的堿性酒石酸銅溶液 （用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液），根據(jù)樣品溶液消耗體積計(jì)算還原糖量。、儀器和試劑1儀器酸式滴定管，可調(diào)電爐（帶石棉板），250ml 容量瓶。2試劑1. 鹽酸。2. 堿性酒石酸銅甲液：稱取15g 硫酸銅（

4、CuSO4·5H2O）及次甲基藍(lán)，溶于水中并稀釋至1000mL。3.堿性酒石酸銅乙液：稱取50g 酒石酸鉀鈉與 75g氫氧化鈉，溶于水中，再加入4g 亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至1000 ml ，貯存于橡膠塞玻璃瓶?jī)?nèi)。4.乙酸鋅溶液：稱取g 乙酸鋅，加3ml 冰乙酸，加水溶解并稀釋至100ml 。5.亞鐵氰化鉀溶液：稱取亞鐵氰化鉀，用水溶解并稀釋至100ml 。6.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取經(jīng)過(guò)96± 2干燥 2h 的純葡萄糖， 加水溶解后加入 5ml 鹽酸，并以水稀釋至1000L。此溶液相當(dāng)于1mg/ml 葡萄糖（注：加鹽酸的目的是防腐，標(biāo)準(zhǔn)溶液也可用飽和苯甲酸溶液配

5、制）。7.果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：按操作，配制每毫升標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于1mg 的果糖。8.乳糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：按操作，配制每毫升標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于1mg 的乳糖。9.轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取純蔗糖，用100ml 水溶解，置于具塞三角瓶中加5ml 鹽酸（ 1+1），在 68 70水浴中加熱15min ，放置至室溫定容至1000ml ，每 ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于轉(zhuǎn)化糖。、實(shí)驗(yàn)步驟1樣品處理 乳類、乳制品及含蛋白質(zhì)的食品：稱取約固體樣品（吸取ml 容量瓶中，加50 ml 水，搖勻。邊搖邊慢慢加入5ml25 50ml 液體樣品），置于乙酸鋅溶液及5ml 亞鐵氫化鉀溶液，加250水至刻度，混勻。靜置30 min，用干燥濾紙過(guò)濾，

6、棄去初濾液，濾液備用。（注意：乙酸鋅可去除蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹(shù)脂等，使它們形成沉淀，經(jīng)過(guò)濾除去。如果鈣離子過(guò)多時(shí)，易與葡萄糖、果糖生成絡(luò)合物，使滴定速度緩慢；從而結(jié)果偏低，可向樣品中加入草酸粉，與鈣結(jié)合，形成沉淀并過(guò)濾。） 酒精性飲料：吸取100ml 樣品，置于蒸發(fā)皿中，用1 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發(fā)至原體積1/4 后，移入250ml 容量瓶中，加水至刻度。 含多量淀粉的食品： 稱取樣品， 置于 250ml 容量瓶中， 加 200ml 水，在 45水浴中加熱 1h，并時(shí)時(shí)振搖 （注意： 此步驟是使還原糖溶于水中， 切忌溫度過(guò)高， 因?yàn)榈矸墼诟邷貤l件下可糊化、水解，影響檢測(cè)結(jié)果

7、。 ）。冷后加水至刻度， 混勻， 靜置，沉淀。 吸取 200ml 上清液于另一 250ml 容量瓶中，慢慢加入 5ml 乙酸鋅溶液及 5ml 亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻，沉淀，靜置30 min ，用干燥濾紙過(guò)濾，棄去初濾液，濾液備用。 汽水等含有二氧化碳的飲料：吸取100ml 樣品置于蒸發(fā)皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入 250ml 容量瓶中，并用水洗滌蒸發(fā)皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻后備用。（注意：樣品中稀釋的還原糖最終濃度應(yīng)接近于葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的濃度。）2.標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液：吸取堿性酒石酸銅甲液及乙液，置于150ml 錐形瓶中（注意：甲液與乙液混合可生成氧化亞銅沉淀，

8、應(yīng)將甲液加入乙液，使開(kāi)始生成的氧化亞銅沉淀重溶），加水10 ml，加入玻璃珠2 粒，從滴定管滴加約9 ml 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液或其他還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液蘭色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄消耗的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液或其他還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液總體積，平行操作三份，取其平均值，計(jì)算每10 ml（甲、乙液各5 ml）堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量或其他還原糖的質(zhì)量（ mg）。（注意：還原的次甲基藍(lán)易被空氣中的氧氧化，恢復(fù)成原來(lái)的藍(lán)色，所以滴定過(guò)程中必須保持溶液成沸騰狀態(tài)，并且避免滴定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。）3. 樣品溶液預(yù)測(cè)：吸取ml 堿性酒石酸銅甲液及ml 乙液，置于 150 ml 錐形瓶中，加水 10 ml ，加入玻璃珠 2

9、粒，控制在 2 min 內(nèi)加熱至沸， 趁沸以先快后慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，并保持溶液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時(shí)，以每?jī)擅? 滴的速度滴定， 直至溶液藍(lán)色褪去， 出現(xiàn)亮黃色為終點(diǎn)。如果樣品液顏色較深，滴定終點(diǎn)則為蘭色褪去出現(xiàn)明亮顏色（如亮紅），記錄消耗樣液的總體積。（注意：如果滴定液的顏色變淺后復(fù)又變深，說(shuō)明滴定過(guò)量，需重新滴定。）當(dāng)試樣溶液中還原糖濃度過(guò)高時(shí)應(yīng)適當(dāng)稀釋，再進(jìn)行正式測(cè)定， 使每次滴定消耗試樣溶液的體積控制在與標(biāo)定堿性酒石酸酮溶液時(shí)所消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相近，約在10ml 左右。當(dāng)濃度過(guò)低時(shí)則采取直接加入10ml 樣品溶液，免去加水10ml ，再用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定

10、至終點(diǎn)，記錄消耗的體積與標(biāo)定時(shí)消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液體積之差相當(dāng)于10ml 試樣溶液中所含還原糖的量。4.樣品溶液測(cè)定：吸取ml 堿性酒石酸銅甲液及ml 乙液，置于150 ml 錐形瓶中，加水10 ml ，加入玻璃珠2 粒，在 2 min內(nèi)加熱至沸，快速?gòu)牡味ü苤械渭颖阮A(yù)測(cè)體積少1 ml 的樣品溶液，然后趁沸繼續(xù)以每?jī)擅?1 滴的速度滴定直至終點(diǎn)。 記錄消耗樣液的總體積， 同法平行操作兩至三份，得出平均消耗體積。5. 計(jì)算樣品中還原糖的含量（以某種還原糖計(jì)）按下式計(jì)算。X=A/(m×V/250×1000)× 100式中： X- 樣品中還原糖的含量( 以某種還原糖計(jì))

11、 ，單位 g/100g ；A堿性酒石酸銅溶液（甲、乙液各半）相當(dāng)于某種還原糖的質(zhì)量，單位mg；m- 樣品質(zhì)量，單位g ；V- 測(cè)定時(shí)平均消耗樣品溶液的體積，單位ml ；計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后一位。注意：滴定結(jié)束，錐形瓶離開(kāi)熱源后，由于空氣中氧的氧化，使溶液又重新變藍(lán)，此時(shí)不應(yīng)再滴定。（二）高錳酸鉀滴定法原理將樣液與一定量過(guò)量的堿性酒石酸銅溶液反應(yīng)，還原糖將二價(jià)銅還原為氧化亞銅，經(jīng)過(guò)濾，得到氧化亞銅沉淀，加入過(guò)量的酸性硫酸鐵溶液將其氧化溶解，而三價(jià)鐵鹽被定量地還原為亞鐵鹽，用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定所生成的亞鐵鹽，根據(jù)高錳酸鉀溶液消耗量可計(jì)算出氧化亞銅的量，再?gòu)臋z索表中查出氧化亞銅量相當(dāng)?shù)倪€原糖量，即

12、可計(jì)算出樣品中還原糖含量。（三）硫酸苯酚法、原理糖在濃硫酸作用下，脫水形成的糠醛和羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在 10-100mg 范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長(zhǎng)下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長(zhǎng)下測(cè)定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測(cè)定，方法簡(jiǎn)單，靈敏度高，實(shí)驗(yàn)時(shí)基本不受蛋白質(zhì)存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定160min 以上。多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測(cè)定。、試劑1濃硫酸：分析純，%280%苯酚：80 克苯酚（分析純重蒸餾試劑）加20 克水使之溶解，可置冰箱中避光長(zhǎng)期儲(chǔ)存。3

13、6%苯酚：臨用前以80%苯酚配制。（每次測(cè)定均需現(xiàn)配）4標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖（Dextran,瑞典 Pharmacia ） , 或分析純葡萄糖。5 15%三氯乙酸（ 15%TCA）： 15 克 TCA加 85 克水使之溶解，可置冰箱中長(zhǎng)期儲(chǔ)存。65%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475 克水使之溶解，可置冰箱中長(zhǎng)期儲(chǔ)存。786mol/L 6mol/L氫氧化鈉：鹽酸120 克分析純氫氧化鈉溶于500ml水。、操作。1制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖（或葡萄糖）20mg 于500ml容量瓶中，加水至刻度，分別吸取、及, 各以蒸餾水補(bǔ)至，然后加入 6%苯酚及濃硫酸 , 搖勻冷卻， 室溫放置 20 分鐘

14、以后于 490nm 測(cè)光密度，以水按同樣顯色操作為空白，橫坐標(biāo)為多糖微克數(shù)，縱坐標(biāo)為光密度值，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。2樣品含量測(cè)定：取樣品1 克（濕樣）加1ml 15%TCA 溶液研磨，再加少許5TCA溶液研磨，倒上清液于10 毫升離心管中，再加少許5 TCA溶液研磨，倒上清液，重復(fù)3 次。最后一次將殘?jiān)黄鸬饺腚x心管。注意：總的溶液不要超出10 毫升。 （既不要超出離心管的容量）。離心，轉(zhuǎn)速3000兩次各 5 分鐘取上清液到轉(zhuǎn) / 分鐘，共三次。第一次15 分鐘，取上清液。后25 毫升錐形比色管中。最后濾液保持18 毫升左右。（ 測(cè)肝胰腺樣品時(shí)，每次取上清液時(shí)應(yīng)過(guò)濾。因?yàn)槠渲竞看笕菀讑A帶殘?jiān)?）

15、水浴，在向比色管中加入2 毫升 6mol/L鹽酸之后搖勻，在96水浴鍋中水浴2 小時(shí)。定容取樣。 水浴后，用流水冷卻后加入2 毫升 6mol/L氫氧化鈉搖勻。定容至 25 毫升的容量瓶中。吸取ml的樣品液，以蒸餾補(bǔ)至，然后加入苯酚及濃硫酸, 搖勻冷卻室溫放置20 分鐘以后于490nm 測(cè)光密度。每次測(cè)定取雙樣對(duì)照。以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖含量。、注意6%（ 1）此法簡(jiǎn)單、快速、靈敏、重復(fù)性好，對(duì)每種糖僅制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，顏色持久。（ 2）制作標(biāo)準(zhǔn)線宜用相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)多糖，如用葡萄糖，應(yīng)以校正系數(shù)校正 g數(shù)。（ 3）對(duì)雜多糖，分析結(jié)果可根據(jù)各單糖的組成比及主要組分單糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線的校正系數(shù)加以校正計(jì)算。（

16、4）測(cè)定時(shí)根據(jù)光密度值確定取樣的量。光密度值最好在之間。比如：小于之下可以考慮取樣品時(shí)取 2 克，仍取樣品液，如大于可以減半取的樣品液測(cè)定。（四）蒽酮法、實(shí)驗(yàn)原理糖在濃硫酸作用下， 可經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛和羥甲基糠醛， 生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應(yīng)生成藍(lán)綠色糠醛衍生物， 在一定范圍內(nèi)， 顏色的深淺與糖的含量成正比， 故可用于糖的測(cè)定。該法的特點(diǎn)是幾乎可以測(cè)定所有的碳水化合物，不但可以測(cè)定戊糖和己糖，而且可以測(cè)所有的寡糖類和多糖類，其中包括淀粉、 纖維素等 （因反應(yīng)液中的濃硫酸可以把多糖水解成單糖而發(fā)生反應(yīng)。所以， 用蒽酮法測(cè)出的碳水化合物含量，實(shí)際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。在沒(méi)有必要細(xì)致劃分各