水產(chǎn)品中甲醛的測(cè)定

1、.XXX實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中心管理體系文件作業(yè)指導(dǎo)書（第A版 第0次修改）文件編號(hào)：編寫：審核：批準(zhǔn)：批準(zhǔn)日期：受控狀態(tài)： 受控 非受控正副版本： 正本 副本持有者：發(fā)布日期： 實(shí)施日期：作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第1頁(yè) 共8頁(yè)標(biāo) 題：水產(chǎn)品中甲醛的測(cè)定第A版 第0次修改頒布日期：2014年 月 日1. 目的使甲醛的測(cè)定處于受控狀態(tài)，保證甲醛檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性與一致性；規(guī)范參加本項(xiàng)目檢測(cè)工作人員的操作規(guī)程。2. 適用范圍適用于水產(chǎn)品中甲醛含量的定性篩選和定量測(cè)定。3. 引用標(biāo)準(zhǔn)食品中甲醛的快速測(cè)定方法 DB44/T 519-2008水產(chǎn)品中甲醛的測(cè)定 SC/T 3025-2006無公害食品 水發(fā)水產(chǎn)品 NY

2、5172-2002分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T 6682-2008食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 理化部分 總則 GB/T 5009.1-20034. 概述甲醛是一種具有防腐、抗菌、殺菌作用的化學(xué)物質(zhì)，與水混合成30%至40%濃度的甲醛溶液又稱為福爾馬林。甲醛腐蝕性強(qiáng)，有刺激性，味臭，能刺激鼻喉黏膜，具有防腐和凝固蛋白質(zhì)的作用。對(duì)人體神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、肝臟等有嚴(yán)重毒害，對(duì)嚙齒類動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證明甲醛的致癌作用。對(duì)水產(chǎn)品進(jìn)行甲醛檢測(cè)，可分為定性檢測(cè)和定量分析兩種，如采取先定性篩選，再定量確定其含量。5. 定性篩選（間苯三酚法）5.1. 原理利用水溶液中游離的甲醛與某些化學(xué)試劑的特異性反應(yīng)，形成特定的顏色

3、進(jìn)行鑒別。5.2. 儀器設(shè)備5.2.1. 組織搗碎機(jī)5.2.2. 振蕩器5.2.3. 離心機(jī)5.2.4. 百分天平5.2.5. 移液器5.2.6. 10ml比色管作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第2頁(yè) 共8頁(yè)標(biāo) 題：水產(chǎn)品中甲醛的測(cè)定第A版 第0次修改頒布日期：2014年 月 日5.3. 試劑5.3.1. 實(shí)驗(yàn)用水為GB/T 6682規(guī)定的二級(jí)水或去離子水；除非另外注明，本法所用試劑均為分析純。5.3.2. 甲醛參比液(5mg/kg)：吸取甲醛標(biāo)準(zhǔn)液（100ug/ml）2.5ml于50ml容量瓶中，定容。5.3.3. 1%間苯三酚溶液：稱取固體間苯三酚1g，溶于100mL12%氫氧化鈉溶液中。（此溶液臨時(shí)

4、現(xiàn)配現(xiàn)用）5.3.4. 10%甲醛配液。（此溶液臨時(shí)現(xiàn)配現(xiàn)用）5.3.5. 鹽酸溶液（1+9）：量取鹽酸100ml，加到900ml的水中。5.4. 操作步驟5.4.1. 取樣5.4.1.1. 鮮活水產(chǎn)品鮮活水產(chǎn)品取肌肉等可食部分測(cè)定。魚類去頭、去鱗，取背部和腹部肌肉；蝦去頭、去殼、去腸腺后取肉；貝類去殼后取肉；蟹類去殼、去性腺和肝臟后取肉。5.4.1.2. 冷凍水產(chǎn)品冷凍水產(chǎn)品經(jīng)半解凍直接取樣，不可用水清洗。5.4.1.3. 水發(fā)水產(chǎn)品水發(fā)水產(chǎn)品可取其水發(fā)溶液直接測(cè)定。或?qū)悠窞r水后，取可食部分測(cè)定。5.4.1.4. 干制水產(chǎn)品干制水產(chǎn)品取肌肉等可食部分測(cè)定。5.4.2. 制樣將取得的樣品用組

5、織搗碎機(jī)搗碎，稱取10g于50ml離心管中，加入20ml蒸餾水，震蕩30min，離心后取上清液作為樣品制備液進(jìn)行定性測(cè)定。也可直接取用水發(fā)水品的水發(fā)溶液澄清液作為樣品制備液進(jìn)行定性篩選實(shí)驗(yàn)。5.5. 測(cè)定取樣品制備液5ml于10ml納氏比色管中，然后加入1mL1%間苯三酚溶液，兩分鐘內(nèi)觀察顏色變化。溶液若呈橙紅色，則有甲醛存在，且甲醛含量較高；溶液若呈淺紅色，則含有甲醛，且含量較低。對(duì)照甲醛參比液反應(yīng)后的顏色，如接近或比之顏色要深則該樣品須做定量測(cè)定，溶液若無顏色變化，甲醛未檢出。水發(fā)魷魚、水發(fā)蝦仁等樣品的制備液因帶淺紅色，不適合此法。作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第3頁(yè) 共8頁(yè)標(biāo) 題：水產(chǎn)品中甲醛的測(cè)

6、定第A版 第0次修改頒布日期：2014年 月 日6. 定量測(cè)定6.1. 分光光度法6.1.1. 原理水產(chǎn)品中的甲醛在磷酸介質(zhì)中經(jīng)水蒸氣加熱蒸餾，冷凝后經(jīng)水溶液吸收，再用乙酰丙酮與蒸餾液中甲醛反應(yīng)，生成黃色的二乙酰基二氫二甲基吡啶，用分光光度計(jì)在413nm處比色定量。6.1.2. 儀器設(shè)備6.1.2.1. KjeltecTM8200定氮儀6.1.2.2. 722N可見分光光度計(jì)6.1.2.3. 萬分天平6.1.2.4. 組織搗碎機(jī)6.1.2.5. 移液器6.1.2.6. 比色管，容量瓶等玻璃儀器6.1.3. 試劑6.1.3.1. 實(shí)驗(yàn)用水為GB/T 6682規(guī)定的二級(jí)水或去離子水；除非另外注明，

7、本法所用試劑均為分析純6.1.3.2. 磷酸溶液（10%）：移取磷酸10 mL，用水稀釋至100 mL。6.1.3.3. 乙酰丙酮溶液：稱取乙酸銨25 g，溶于100 mL蒸餾水中，加冰乙酸3 mL和乙酸丙酮0.4 mL，混勻，儲(chǔ)存于棕色瓶，在2-8冰箱內(nèi)存放，可用20至30天。6.1.3.4. 甲醛標(biāo)準(zhǔn)液（100ug/ml）6.1.3.5. 甲醛標(biāo)準(zhǔn)使用液：精確吸取12.50ml甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（100ug/ml）于250ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻備用（此溶液應(yīng)當(dāng)天配制）6.1.4. 樣品處理將按5.4.1要求取得樣品，用組織搗碎機(jī)搗碎，混合均勻后稱取10.00g，移入定氮儀消化管中，用

8、20ml蒸餾水浸泡30min后加入磷酸溶液后立即將消化管接回蒸餾頭，開啟定氮儀內(nèi)置蒸餾程序，開始蒸餾。以三角錐瓶接收蒸餾液。將所有蒸餾液移入250ml容量瓶中，定容，混勻。6.1.5. 操作方法6.1.5.1. 甲醛標(biāo)準(zhǔn)液的標(biāo)定本實(shí)驗(yàn)用的甲醛標(biāo)準(zhǔn)液（6.3.4）為環(huán)境保護(hù)部標(biāo)準(zhǔn)樣品研究所簽發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)樣品，相對(duì)不確定度為3%。見附錄1作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第4頁(yè) 共8頁(yè)標(biāo) 題：水產(chǎn)品中甲醛的測(cè)定第A版 第0次修改頒布日期：2014年 月 日6.1.5.2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確吸取甲醛標(biāo)準(zhǔn)使用液0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml于20ml比色管中，加水至10ml；加入

9、1ml乙酰丙酮溶液，混勻，置沸水浴中加熱10min，取出用水冷卻至室溫；以空白液作參比，于波長(zhǎng)413nm處，以1cm比色皿進(jìn)行比色，測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（吸光度含甲醛濃度）【大約2030天繪制一次】6.1.6. 樣品測(cè)定準(zhǔn)確吸取定容后的樣品蒸餾液10ml，加入1ml乙酰丙酮溶液，混勻，置沸水浴中加熱10min，取出用水冷卻至室溫；以空白液作參比，于波長(zhǎng)413nm處，以1cm比色皿進(jìn)行比色，記錄測(cè)得吸光度。（每個(gè)樣品應(yīng)作兩個(gè)平衡測(cè)定，取其算術(shù)平均值）6.1.7. 結(jié)果計(jì)算試樣中甲醛含量按下式計(jì)算，計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。式中：X水產(chǎn)品中甲醛含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；C查曲線結(jié)果

10、，單位為微克每毫升（ug/ml）；10顯色溶液的總體積，單位為毫升（ml）；m樣品質(zhì)量，單位為克（g）；V用于測(cè)定所吸取的樣品蒸餾液體積，單位為毫升（ml）；200樣品蒸餾液定容體積，單位為毫升（ml）。6.1.8. 回收率、檢出限及精密度6.1.8.1. 回收率60%。6.1.8.2. 樣品中的甲醛檢出限為0.50 mg/kg。6.1.8.3. 在重復(fù)性條件下獲得兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果：樣品中甲醛含量5 mg/kg時(shí)，相對(duì)偏差10%；樣品中甲醛含量5 mg/kg時(shí)，相對(duì)偏差5%。作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第5頁(yè) 共8頁(yè)標(biāo) 題：水產(chǎn)品中甲醛的測(cè)定第A版 第0次修改頒布日期：2014年 月 日6.2. 高效

11、液相色譜法6.2.1. 原理甲醛在酸性條件下與2，4-二硝基苯肼在60水浴衍生化生成2，4-二硝基苯腙，經(jīng)二氯甲烷反復(fù)分離提取后，經(jīng)無水硫酸鈉脫水，水浴蒸干，甲醛溶解殘?jiān)?18柱分離，紫外檢測(cè)器338nm檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，根據(jù)峰面積定量，測(cè)定甲醛含量，甲醛含量高效液相色譜圖見附錄6.2.2. 儀器6.2.2.1. 高效液相色譜，附紫外檢測(cè)器6.2.2.2. 高速離心機(jī)6.2.2.3. 10mm×150mm具塞玻璃層析柱6.2.2.4. 恒溫水浴鍋6.2.2.5. 旋渦混合器6.2.2.6. 移液器：1m；微量進(jìn)樣器；20具塞比色管6.2.2.7. 0.22m濾膜6.2.3. 試劑

12、6.2.3.1. 甲醇：色譜純，經(jīng)過濾、脫氣后使用6.2.3.2. 二氯甲烷6.2.3.3. 2，4-二硝基苯肼溶液:稱取100mg2，4-二硝基苯肼溶解于24mL濃鹽酸中，加水定容至100mL6.2.3.4. 甲醛標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：配制及標(biāo)定見本標(biāo)準(zhǔn)6.1.3.8條，臨用時(shí)稀釋至20g/L6.2.3.5. 無水硫酸鈉：經(jīng)550高溫灼燒，干燥器中貯存冷卻后使用6.2.4. 測(cè)定步驟6.2.4.1. 樣品處理 取6.1.4制備水蒸氣蒸餾液0.1mL1.0mL，置于5mL具塞比色管中，補(bǔ)充蒸餾水至1.0mL，加入0.2mL2，4-二硝基苯肼溶液，置60水浴15min，然后在流水中快速冷卻，加入2mL二

13、氯甲烷，旋渦混合器震蕩萃取1min，3000r/min，離心2min，取上清液再用1mL二氯甲烷萃取兩次，合并3次萃取的下層黃色溶液，將萃取液經(jīng)無水硫酸鈉柱脫水，60水浴蒸干，放冷，取1.0mL色譜純甲醇溶解殘?jiān)?，?jīng)孔徑0.22m濾膜過濾后做液相色譜分析用。作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第6頁(yè) 共8頁(yè)標(biāo) 題：水產(chǎn)品中甲醛的測(cè)定第A版 第0次修改頒布日期：2014年 月 日6.2.4.2. 色譜條件6.2.4.2.1. 色譜柱：ODS-C18柱，5m，4.6nm×250nm6.2.4.2.2. 色譜柱溫度：406.2.4.2.3. 流動(dòng)相：甲醇+水（60+40），0.5mL/min6.2.4.2

14、.4. 檢測(cè)器波長(zhǎng)：338nm6.2.4.3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別取20g/mL的甲醛應(yīng)用液0.0mL，0.1mL，0.25 mL，0.5 mL，0.75 mL，1.0 mL（相當(dāng)于0g，2g，5g，10g，15g，20g）于5mL具塞比色管中，加蒸餾水至1.0mL，按6.2.4.1處理后取20L進(jìn)樣。根據(jù)出現(xiàn)時(shí)間定性（5.1min），峰面積定量，每個(gè)濃度做兩次，取平均值，用峰面積與甲醛含量做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取樣品處理液20L注入液相色譜測(cè)得積分面積后從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度。6.2.5. 結(jié)果計(jì)算 樣品中甲醛的含量按式（3）計(jì)算，計(jì)算結(jié)果保留兩位小數(shù)。式中：X3水產(chǎn)品中甲醛含量，單位為毫

15、克每千克（mg/kg）； C3查曲線結(jié)果，單位為微克每毫升（g/mL）；M3樣品質(zhì)量，單位為克（g）；V3樣品測(cè)定取蒸餾液的體積，單位為毫升（mL）；200蒸餾液總體積，單位為毫升（mL）。6.2.6. 回收率樣品蒸餾液中添加甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液計(jì)算得到的回收率90%。6.2.7. 精密度在重復(fù)性條件下獲得兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果：當(dāng)樣品中甲醛含量5mg/kg時(shí)，相對(duì)偏差10%；不樣品中甲醛含量5mg/kg時(shí)，相對(duì)偏差5%。6.2.8. 檢出限樣品中甲醛的檢出限為0.20mg/kg。作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第7頁(yè) 共8頁(yè)標(biāo) 題：水產(chǎn)品中甲醛的測(cè)定第A版 第0次修改頒布日期：2014年 月 日7. 相關(guān)文件Kjel

16、tecTM8200凱氏定氮儀操作規(guī)程天平稱量操作規(guī)程722N可見光分光光度計(jì)操作規(guī)程8. 注意事項(xiàng)當(dāng)發(fā)生蒸餾過程水溫過高，或其他原因造成停機(jī)（定氮儀），該樣須重新稱樣再做。蒸餾液接收處要加冰塊冷凝，防止蒸餾液高溫致使甲醛揮發(fā)。收集蒸餾液完成時(shí)，必須用少量蒸餾水沖洗收集管。進(jìn)行比色時(shí)，要注意樣品之間的交叉污染，要清洗好每個(gè)比色皿。附錄1鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定液配制及標(biāo)定1. 規(guī)定1.1. 本法所用試劑的純度應(yīng)在分析純以上，實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)該符合GB/T 6682-1992中三級(jí)水的規(guī)格1.2. 本法配制及標(biāo)定的鹽酸溶液濃度指的是20時(shí)的濃度，在標(biāo)準(zhǔn)滴定液配制、滴定使用時(shí)若溫度有差異，應(yīng)按照附錄1.1補(bǔ)正。2. 配制2.1. 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定液（0.1mol/L）：量取