第12章乳多空病毒科(Papovaviridae)

1、第十二章 乳多空病毒科(Papovaviridae) 一、概述 二、乳頭狀瘤病毒屬三、多型瘤病毒屬 主要參考文獻(xiàn)一、概 述 乳多空病毒科由乳頭狀瘤病毒、多型瘤病毒和空泡病毒等三個(gè)病毒名稱的字頭組成。英文的“Papova”，相應(yīng)由PApilloma、POlyoma和VAcuolating agent等三個(gè)病毒名稱的前兩個(gè)字母構(gòu)成。乳多空病毒沒(méi)有囊膜，結(jié)構(gòu)比較簡(jiǎn)單。病毒粒子為球形，呈典型的二十面立體對(duì)稱。直徑為40nm55nm。CsCl中浮密度為1.34g/cm3。衣殼由72個(gè)中空殼粒組成，殼粒歪斜排列。每個(gè)殼粒的直徑為5nm8nm。衣殼內(nèi)含有高度纏繞的環(huán)狀雙股DNA，與組蛋白結(jié)合構(gòu)成核心。病毒基

2、因組G+C含量較低，僅為4050%。病毒DNA的分子量為3×1065×106，約占病毒粒子總重的10%13%。病毒粒子含69種多肽，分子量為382kDa，低分子量成分為細(xì)胞組蛋白。不含脂類和糖。圖12-1鼠多型瘤病毒衣殼結(jié)構(gòu)圖12-2 SV40(A)、PyV(B)和BPV()基因結(jié)構(gòu) 乳多空病毒在感染細(xì)胞核內(nèi)增殖。首先病毒粒子與細(xì)胞受體結(jié)合，然后以吞飲的方式進(jìn)入細(xì)胞到核內(nèi)，抑制宿主細(xì)胞酶類，刺激細(xì)胞DNA合成，病毒DNA進(jìn)行早期與晚期表達(dá)，在核內(nèi)包裝成成熟的病毒粒子。乳多空病毒對(duì)醚及酸有抵抗力，大多可耐5665加熱30分鐘。在50%甘油以及冰凍或凍干條件下穩(wěn)定。某些成員具有

3、血凝性。乳多空病毒科的成員都是腫瘤病毒，與宿主呈現(xiàn)極為復(fù)雜多樣的相互關(guān)系。乳多空病毒科包括乳頭狀瘤病毒和多型瘤病毒兩個(gè)屬。近年來(lái)分子生物學(xué)和基因組分析的研究表明，乳頭狀瘤病毒和多型瘤病毒在病毒粒子、基因組大小、基因表達(dá)調(diào)控等許多基本特征方面均不相同。乳頭狀瘤病毒粒子的直徑為55nm，而多型瘤病毒粒子的直徑僅為45nm；乳頭狀瘤病毒DNA長(zhǎng)度約為7 900bp，多型瘤病毒和SV40（猴空泡病毒）的DNA長(zhǎng)度5 300bp。更重要的是乳頭狀瘤病毒和多型瘤病毒的基因組在DNA序列、基因組成、RNA轉(zhuǎn)錄和加工方式等也不相同。乳頭狀瘤病毒主要ORF的早期和晚期轉(zhuǎn)錄和加工由散在的調(diào)控區(qū)控制，而多型瘤病毒的

4、早期和晚期轉(zhuǎn)錄、加工均從單一控制區(qū)開(kāi)始，沿DNA的相反鏈分叉進(jìn)行。此外，兩類病毒在生長(zhǎng)要求以及細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力等方面也不相同。乳頭狀瘤病毒大多只有單一宿主，只能在分化的上皮細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)，不引起細(xì)胞發(fā)生病變，而多型瘤病毒卻可在不同的臟器中生長(zhǎng)，并可在體外培養(yǎng)，使培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生病變。乳頭狀瘤病毒屬和多型瘤病毒屬在致瘤能力和細(xì)胞轉(zhuǎn)化方面也有許多不同。二、乳頭狀瘤病毒屬(Papillomavirus) 1907年Ciuffo發(fā)現(xiàn)人疣中存在一種傳染性因子，30年后Shope首次從美州棉尾兔(Cottontail rabbit)乳頭狀瘤中分離獲得第一個(gè)乳頭狀瘤病毒。迄今為止，在幾乎所有脊椎動(dòng)物中均發(fā)現(xiàn)有乳頭狀瘤病

5、毒感染，包括牛乳頭狀瘤病毒(BPV)、兔乳頭狀瘤病毒(CRPV)、馬乳頭狀瘤病毒(EPV)、人乳頭狀瘤病毒(HPV)、鹿乳頭狀瘤病毒(DPV)、猴乳頭狀瘤病毒(RhPV)以及綿羊、山羊、倉(cāng)鼠和禽類等的乳頭狀瘤病毒。 乳頭狀瘤病毒規(guī)律地使其自然宿主發(fā)生腫瘤，但注射異種動(dòng)物，卻不引起腫瘤。乳頭狀瘤病毒主要通過(guò)破損的皮膚、 粘膜感染上皮細(xì)胞?？梢鹪S多動(dòng)物和人的良性表皮瘤， 包括尋常疣(common warts)、扁平疣(flat warts)、濕疣(condylomas)和乳頭狀瘤(papilloma)。這些瘤一般均可自動(dòng)消失，有時(shí)也可持續(xù)存在，有的病毒可引起惡性變，有的病毒則只在其他因素的參與下

6、，偶而誘發(fā)惡性變。乳頭狀瘤病毒具有高度的宿主、組織特異性，可轉(zhuǎn)化鱗狀上皮或粘膜的基底層細(xì)胞，只能在其自然宿主體內(nèi)引起腫瘤。根據(jù)其誘導(dǎo)腫瘤形成的能力及特征，可將乳頭狀瘤病毒分為纖維乳頭狀瘤病毒、上皮乳頭狀瘤病毒和粘膜乳頭狀瘤病毒。纖維乳頭狀瘤病毒包括牛乳頭狀瘤病毒（BPV1、BPV2、BPV5）、鹿乳頭狀瘤病毒(DPV)、馴鹿乳頭狀瘤病毒(RPV)和歐州麋鹿乳頭狀瘤病毒(EEPV)。纖維乳頭狀瘤病毒既可轉(zhuǎn)化皮膚角質(zhì)細(xì)胞，又可轉(zhuǎn)化真皮成纖維細(xì)胞，能有效地誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的嚙齒類成纖維細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變和腫瘤轉(zhuǎn)化，并可誘導(dǎo)倉(cāng)鼠發(fā)生腫瘤。而其它乳頭狀瘤病毒則不能轉(zhuǎn)化成纖維細(xì)胞。 乳頭狀瘤病毒有許多型，且型與

7、型之間的免疫交叉反應(yīng)性各不相同。已發(fā)現(xiàn)人乳頭狀瘤病毒有67個(gè)型，牛乳頭狀瘤病毒至少有6個(gè)型。乳頭狀瘤病毒各型之間的細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力和致瘤能力也不相同， 有些型與癌變有關(guān)，有些型卻很少引起惡性變，有些型只能引起良性腫瘤。乳頭狀瘤病毒呈大致的園形，呈典型二十面立體對(duì)稱。直徑約為5055nm，偶見(jiàn)長(zhǎng)絲狀衣殼。72個(gè)殼粒以T=7排列，其中60個(gè)為六鄰體，12個(gè)為五鄰體。殼粒主要由L1和L2組成。雙股DNA分子量約為5×106，呈高度纏繞的閉環(huán)狀。G+C=40%50%。核酸約占病毒粒子總重的12%。衣殼蛋白占病毒粒子總重的75%以上，由56種多肽組成。多肽亞單位（分子量約為70 000）的總數(shù)估計(jì)

8、為420。乳頭狀瘤病毒感染動(dòng)物后，血液中可產(chǎn)生中和抗體，但循環(huán)抗體不能使腫瘤消退，機(jī)體體液免疫機(jī)能下降并不能增加機(jī)體對(duì)乳頭狀瘤病毒感染的敏感性。腫瘤的自行消退主要是細(xì)胞介導(dǎo)免疫的作用。在牛和人皮膚疣組織自行消退過(guò)程中有單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和郎罕氏細(xì)胞浸潤(rùn)。疣組織的消退具有型特異性，說(shuō)明其免疫反應(yīng)是針對(duì)特異性的病毒抗原。病毒晚期基因產(chǎn)物是病毒疫苗產(chǎn)生保護(hù)所必需。不同乳頭狀瘤病毒的基因結(jié)構(gòu)十分相似，主要由三部分組成，即早期區(qū)、晚期區(qū)和上游調(diào)節(jié)區(qū)（URR，upstream regulatory region），又稱非編碼區(qū)(NCR，nonconding region）。早期區(qū)主要編碼調(diào)節(jié)

9、病毒DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞轉(zhuǎn)化的蛋白，包括E18；近來(lái)在鹿乳頭狀瘤病毒中又發(fā)現(xiàn)E9，后者編碼由40個(gè)氨基酸組成的多肽，具有弱轉(zhuǎn)化作用。相同的基因在不同病毒中的作用不盡相同。E1和E2主要調(diào)節(jié)病毒的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，病毒DNA整合時(shí)在E1或E2處斷開(kāi)。晚期區(qū)主要編碼病毒結(jié)構(gòu)蛋白，主要有L1和L2。L1是衣殼的主要蛋白，分子量約57kDa 。L1是所有乳頭狀瘤病毒最為保守的基因， 其產(chǎn)物在不同的乳頭狀瘤病毒中約有40%的氨基酸同源。L1重組蛋白可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，并起免疫保護(hù)作用，具有B細(xì)胞特異抗原表位。L2是衣殼的次要蛋白，分子量約72kDa。L2重組蛋白可使腫瘤部位發(fā)生淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，促進(jìn)腫

10、瘤消退，具有T細(xì)胞特異抗原表位。L2的另一個(gè)作用可能與宿主范圍有關(guān)。URR區(qū)在早期ORF上游，長(zhǎng)約1 000bp，含有病毒基因啟動(dòng)子和增強(qiáng)子，可順式或反式調(diào)節(jié)病毒基因的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。 乳頭狀瘤病毒具有不同的細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力（表12-1）。有的病毒不需要其它致癌因子的共同作用即可完全轉(zhuǎn)化原代細(xì)胞，這些病毒主要有BPV1、BPV2等纖維乳頭狀瘤病毒；有的病毒則需要其它致癌因子，特別是ras基因的共同作用方可完全轉(zhuǎn)化嚙齒類腎細(xì)胞，這類病毒主要有人的高危生殖道乳頭狀瘤病毒、猴乳頭狀瘤病毒（RhPV）；另外，有的病毒如BPV4轉(zhuǎn)化細(xì)胞能力很低，或本身沒(méi)有轉(zhuǎn)化細(xì)胞的能力，細(xì)胞的轉(zhuǎn)化需要激活的ras基因參與，且轉(zhuǎn)

11、化細(xì)胞為非腫瘤性細(xì)胞。細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作用主要由病毒基因早期區(qū)負(fù)責(zé)，但CRPV晚期區(qū)L1的3'端對(duì)轉(zhuǎn)化作用也有很大的影響。乳頭狀瘤病毒通常有2個(gè)癌基因參與轉(zhuǎn)化，不同病毒的轉(zhuǎn)化基因不同，如BPV1為E5、E6，HPV16為E6、E7，BPV4為E7，可能還有E8，CRPV主要為E6、E7。表12-1 不同乳頭狀瘤病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞的能力 病毒是否需要其它因素 轉(zhuǎn)化能力BPV1原代牛和嚙齒類成纖維細(xì)胞 完全轉(zhuǎn)化RHPV1原代幼鼠腎細(xì)胞 需要激活的ras基因完全轉(zhuǎn)化HPV16原代幼鼠腎細(xì)胞、人角質(zhì)細(xì)胞、需要激活的ras基因原代人成纖維細(xì)胞部分轉(zhuǎn)化BPV4 原代牛成纖維細(xì)胞 需要激活的ras基因 部分轉(zhuǎn)化

12、CRPV 棉尾兔角質(zhì)細(xì)胞兩步轉(zhuǎn)化自Campo等（一）牛乳頭狀瘤病毒(Bovine papillomavirus) 世界各地養(yǎng)牛地區(qū)均有乳頭狀瘤的發(fā)生，并因損害皮革質(zhì)量和降低動(dòng)物體質(zhì)而造成經(jīng)濟(jì)損失。牛乳頭狀瘤病毒（BPV）至少有6個(gè)型， 其中BPV1、BPV2和BPV5屬于纖維乳頭狀瘤病毒。主要結(jié)構(gòu)蛋白具有共同的抗原位點(diǎn)，其基因組也具有較高的同源性。BPV3、BPV4和BPV6為真性上皮乳頭狀瘤病毒。.形態(tài)和理化學(xué)特性 病毒粒子主要存在于病牛皮膚的粒層和角質(zhì)層細(xì)胞的核內(nèi)。電鏡檢查牛皮膚乳頭狀瘤病毒的超薄切片，可在角化的上皮細(xì)胞內(nèi)看到園形的典型病毒粒子。負(fù)染標(biāo)本中的病毒粒子直徑為4753nm。 衣

13、殼由72個(gè)清晰的向右歪斜排列的中空殼粒構(gòu)成。每個(gè)殼粒約長(zhǎng)7.5nm，寬56nm。BPV1、BPV2、 BPV5的基因組大小約為7 900bp，而B(niǎo)PV3、BPV4、BPV6的基因組較小，僅為約7 200bp。（二）兔乳頭狀瘤病毒(Cottontail rabbit papillomavirus) 同義名：肖普氏（Shope）乳頭狀瘤病毒 兔乳頭狀瘤病毒(CRPV)是第一個(gè)分離成功的乳頭狀瘤病毒。1933年，Shope證明美國(guó)中西部野兔（棉尾兔，Cottontail rabbit)頸、肩和腹部皮膚上的腫瘤是由病毒引起的。將腫瘤濾液涂檫于棉尾兔和家兔的劃破皮膚上，很易導(dǎo)致腫瘤。但將腫瘤濾液直接注入

14、兔體肌肉或粘膜下，卻不導(dǎo)致腫瘤。接種小鼠、大鼠、豚鼠、貓、犬、豬和山羊，不能引起人工感染。一個(gè)使人感到迷惑不解的現(xiàn)象是：在棉尾兔的乳頭狀瘤中很易看到病毒，相反，在家兔的乳頭狀瘤中卻大多不能發(fā)現(xiàn)病毒，即使這些腫瘤是由同一份腫瘤濾液引起的。在棉尾兔，應(yīng)用熒光抗體和電鏡檢查，可以發(fā)現(xiàn)乳頭狀瘤病毒主要存在于乳頭狀瘤頂端的角質(zhì)化細(xì)胞的核內(nèi)。這些病毒看來(lái)已完成了其發(fā)育周期，并且很易感染新的宿主。而在乳頭狀瘤的基底層中，則存在無(wú)感染性的不成熟病毒，電鏡觀察不能見(jiàn)到完整病毒粒子。這些不成熟病毒雖然不能感染新的宿主，但是它似乎可以感染病畜體內(nèi)的其他細(xì)胞，維持著乳頭狀瘤新的增生，并在乳頭狀瘤中的許多細(xì)胞開(kāi)始角質(zhì)化

15、時(shí)，因病毒蛋白的合成而產(chǎn)生完整的病毒粒子。但是這種無(wú)感染性病毒，無(wú)論在野兔和家兔，卻都是在8小時(shí)后消失。在野兔，形成乳頭狀瘤時(shí)，病毒又重新出現(xiàn)；而在家兔，即使在接種后721天也產(chǎn)生形態(tài)相同的乳頭狀瘤，但用感染性試驗(yàn)和電鏡檢查，仍不能發(fā)現(xiàn)病毒，只在血清學(xué)方法上可以證明其存在，顯然是以未成熟的無(wú)感染形式出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞內(nèi)含有感染性DNA和新合成的酶類，例如精氨酸酶。關(guān)于病毒不能在美國(guó)家兔中成熟的機(jī)理，一直未能充分闡明?？磥?lái)并不完全決定于宿主的遺傳敏感性，似乎與其地理以及氣候等環(huán)境條件也有密切關(guān)系。因?yàn)镾hope曾將兔乳頭狀瘤病毒提供給前蘇聯(lián)。病毒在前蘇聯(lián)傳代適應(yīng)幾年后，可以容易地在家兔中傳代，而且在家

16、兔的乳頭狀瘤中顯然也產(chǎn)生了感染性病毒。再者，即使在美國(guó)，乳頭狀瘤的發(fā)生地區(qū)也較狹窄（中西部），多年來(lái)未向其它地區(qū)廣泛傳播。有人認(rèn)為，這可能與發(fā)病地區(qū)存在有利于病毒成熟的微量元素有關(guān)。CRPV只感染上皮細(xì)胞。CRPV在體外可轉(zhuǎn)化兔上皮細(xì)胞Sf1Ep，首先使細(xì)胞生長(zhǎng)加快，然后發(fā)生形態(tài)改變。將細(xì)胞培養(yǎng)物接種裸鼠不產(chǎn)生腫瘤。CRPV在正常情況下不轉(zhuǎn)化小鼠NIH3T3細(xì)胞，然而缺失L2基因5'端300bp片段后卻可轉(zhuǎn)化NIH3T3 細(xì)胞，將轉(zhuǎn)化細(xì)胞注射裸鼠后可產(chǎn)生腫瘤，說(shuō)明L2 5'端具有抑制轉(zhuǎn)化的作用。CRPV DNA具有感染性，可產(chǎn)生成熟病毒粒子，并導(dǎo)致腫瘤。而將CRPV裸DNA注射

17、到家兔，則不產(chǎn)生感染性病毒粒子，卻可誘發(fā)腫瘤。CRPV誘導(dǎo)產(chǎn)生的乳頭狀瘤一般可在3個(gè)月左右自行消退，在感染后815個(gè)月棉尾兔乳頭狀瘤卻有高達(dá)25%的惡化性可能，在家兔這一比例更高一些。這一特性使CRPV成為研究腫瘤發(fā)生中乳頭狀瘤病毒作用的良好模型。.形態(tài)和理化特性 兔乳頭狀瘤病毒的殼粒向左歪斜排列，內(nèi)含環(huán)狀雙股DNA。衣殼大多呈二十面立體對(duì)稱，但也有呈絲狀的。不凝集動(dòng)物紅細(xì)胞。病毒可在50%甘油中存活20年之久。 （三）兔口腔乳頭狀瘤病毒(Rabbit oral papillomavirus) 病毒形態(tài)類似于兔乳頭狀瘤病毒，但與后者的抗原性不同。在感染胞核內(nèi)經(jīng)常呈結(jié)晶狀排列。對(duì)熱有抵抗力，于5

18、0%甘油中可活存數(shù)年。本病是自然發(fā)生于家兔的另一種乳頭狀瘤，發(fā)生于齒齦、舌下等口腔粘膜，但絕不出現(xiàn)于皮膚上，是一種灰色的小型良性腫瘤，直徑約5mm。將腫瘤乳劑注入家兔或野兔的口腔粘膜內(nèi)，易于引起人工感染，于接種后68天出現(xiàn)腫瘤?；謴?fù)動(dòng)物具有免疫性，并可持續(xù)幾個(gè)月之久，它與兔乳頭狀瘤病毒沒(méi)有交叉免疫性。（四）犬口腔乳頭狀瘤病毒(Canine oral papillomavirus) 1898年，Penberthy等描述了幼犬中一次口腔疣狀瘤的地方性流行。40只幼犬中只有3只沒(méi)有受到感染。隨后M'Fadyyean等用腫瘤抽提液涂擦健康幼犬的頰粘膜，成功地引起人工感染。潛伏期為46周。電鏡檢

19、查負(fù)染標(biāo)本，可見(jiàn)病毒粒子呈園形，直徑4050nm，病毒粒子中央為一核心，其外為衣殼，殼粒清晰可見(jiàn)。 病毒可在50%甘油鹽水中長(zhǎng)期活存。58加熱30分鐘使其滅活。 三、多型瘤病毒屬(Polyomavirus) 多型瘤病毒比乳頭狀瘤病毒略小，病毒粒子直徑約4045nm。72個(gè)殼粒向右歪斜，排列為二十面立體對(duì)稱。有時(shí)出現(xiàn)絲狀病毒?？找職ひ草^多見(jiàn)。 病毒衣殼內(nèi)為高度纏繞的雙股環(huán)狀DNA，分子量為3×1063.4×106。G+C=40%48%。病毒DNA與組蛋白八聚物結(jié)合構(gòu)成核心。 DNA大多具有感染性和細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力。3種衣殼蛋白，即VP1、VP2和VP3構(gòu)成病毒粒子外殼。其中VP1

20、約占75%。 迄今為止，已分離鑒定了12種多型瘤病毒。有鼠多型瘤病毒(PyV)、猴空泡病毒(SV40)、兔腎空泡病毒(RKV)、 猴嗜淋巴多型瘤病毒(LPV)、牛多型瘤病毒(BPyV)、倉(cāng)鼠多型瘤病毒(HaPV)、鼠KV、禽BFDV、SA12、RPV及人JC和BK病毒。這些多型瘤病毒的宿主范圍、 基因組大小和病毒編碼的多肽見(jiàn)表12-2。表12-2多型瘤病毒 病毒基因組大小(bp) 病毒編碼多肽(氨基酸數(shù)目)LTMTVP2VP3 JCV5 130 172 354225 BKV 5 153 172 362232 SV405 243174364234 LPV 5 270 189 368237 BPy

21、V 4 967124365232 HaPV5 366194373221 PyV 5 392195385204 KV 4 754158373222 BFDV4 980145343235 SA12NR172NRNR RKVNRNRNRNR RPVNRNRNRNR注：LT：大T抗原；ST：小t抗原；MT：中T抗原；NR：未見(jiàn)報(bào)道。自Pipas,J.M.等 盡管各種多型瘤病毒的宿主范圍和細(xì)胞嗜性不同，基因組大小及同源性也存在較大差異，但這些病毒有著相同的病毒復(fù)制、轉(zhuǎn)錄調(diào)控方式。病毒基因組分為早期區(qū)、 晚期區(qū)及調(diào)控區(qū)。調(diào)控區(qū)位于早期區(qū)和晚期區(qū)之間?；蜣D(zhuǎn)錄由調(diào)控區(qū)開(kāi)始向兩個(gè)方向進(jìn)行。 早期區(qū)主要編碼大T

22、抗原和小t抗原，PyV和HaPV還編碼中T抗原。早期基因產(chǎn)物的主要作用是參與病毒DNA復(fù)制和激活晚期轉(zhuǎn)錄以及早期啟動(dòng)子反饋調(diào)節(jié)與病毒的有效裝配，除此之外，大T抗原還與癌癥發(fā)生有關(guān)。大T抗原是由多個(gè)功能域組成的多功能蛋白，其氨基酸組成的同源性為15%80%，其中SV40、SA12、JC和BK的大T抗原同源性最高，約為75%；PyV、LPV、HaPV、KV和SV40的大T抗原的同源性約為45%55%。大T抗原主要有氨基端功能域、 DNA結(jié)合功能域、鋅指結(jié)構(gòu)、ATPasep53結(jié)合域及宿主范圍功能域。大T抗原最為保守的功能域是DNA結(jié)合功能域，其氨基酸同源性為35%86%。根據(jù)大T抗原功能結(jié)構(gòu)的不同

23、，可將多型瘤病毒分為兩型：PyV型和SV40型。PyV型包括PyV、HaPV、LPV、KV、BPyV和BFDV。這些病毒大T抗原的氨基端功能域中插入一段核苷酸，此外還缺少與病毒裝配有關(guān)的羧基端功能域。氨基端功能域與細(xì)胞蛋白相互作用，調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞增生和基因表達(dá)。SV40型包括SV40、JCV、BKV和SA12，含有病毒裝配必需的羧基端功能域。小t抗原可能具有刺激宿主DNA合成的作用。中T抗原可與許多細(xì)胞蛋白結(jié)合，參與細(xì)胞轉(zhuǎn)化作用。晚期區(qū)主要編碼病毒衣殼蛋白即VP1、VP2和VP3。其中VP1是構(gòu)成衣殼的主要蛋白，且其核苷酸順序在多型瘤病毒之間也是最為保守的。調(diào)控區(qū)含有病毒DNA復(fù)制的起點(diǎn)（ori

24、）以及早、晚期基因啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和多個(gè)大T抗原結(jié)合位點(diǎn)。多型瘤病毒主要誘發(fā)腮腺腫瘤，但也可誘發(fā)許多其它惡性腫瘤。多型瘤病毒可在許可性細(xì)胞上發(fā)生溶細(xì)胞感染，產(chǎn)生新的感染性病毒粒子； 并使非許可性細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化。病毒DNA共價(jià)整合于宿主細(xì)胞的染色體內(nèi)，使宿主細(xì)胞呈現(xiàn)某些新的特性，例如轉(zhuǎn)化細(xì)胞出現(xiàn)病毒特異性抗原以及細(xì)胞表面發(fā)生改變等等。轉(zhuǎn)化細(xì)胞可對(duì)新生倉(cāng)鼠和其它一些異種動(dòng)物呈現(xiàn)致瘤性。多型瘤病毒的抵抗力較強(qiáng)，可在4活存好幾個(gè)月。6030分鐘不能使其滅活。能耐乙醚、2%石碳酸和50%乙醇，且不易被福爾馬林滅活。多型瘤病毒的大多數(shù)成員具有凝集紅細(xì)胞作用，但發(fā)生血凝反應(yīng)的溫度條件不盡相同。（一）鼠多型瘤

25、病毒（PyV)(Murine polymavirus) 鼠多型瘤病毒在野生小鼠和實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)小鼠中呈地方性流行，但在自然條件下大多呈隱性或隱慝性感染。.形態(tài)和理化學(xué)特性 病毒粒子呈圓形，直徑45nm。形成于細(xì)胞核內(nèi)，常呈結(jié)晶狀堆積。但也常見(jiàn)絲狀型。衣殼由72個(gè)向右歪斜排列的殼粒組成。 病毒核酸由環(huán)狀的雙股DNA組成，占病毒粒子總重的123%。G+C=48%。 DNA具有感染性和細(xì)胞轉(zhuǎn)化作用。 病毒粒子中含有7種不同多肽，其分子量由1247kDa不等，以分子量為40kDa以上的多肽為主，約占病毒粒子蛋白質(zhì)的70%90%。.增殖和病原性 多型瘤病毒可在小鼠和其它嚙齒類動(dòng)物的組織培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)增殖，包括原代

26、細(xì)胞和繼代細(xì)胞。在小鼠胚和小鼠腎細(xì)胞等“容許性”細(xì)胞內(nèi)發(fā)生生產(chǎn)性溶細(xì)胞感染，感染細(xì)胞死亡，形成蝕斑，并產(chǎn)生感染性病毒粒子。于大鼠和倉(cāng)鼠胚細(xì)胞等非容許性細(xì)胞內(nèi)，則只引起頓挫性感染，細(xì)胞不死亡，但常可導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化，在轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)很難發(fā)現(xiàn)病毒。但Fogel等（1970年）應(yīng)用紫外線照射或絲裂霉素C，成功地誘使轉(zhuǎn)化細(xì)胞合成完整的病毒粒子。將感染細(xì)胞培養(yǎng)物接種新生的小鼠、大鼠或倉(cāng)鼠（呈免疫缺陷狀態(tài)），可在幾個(gè)月后使其發(fā)生組織學(xué)上不同性質(zhì)的腫瘤，多達(dá)20種以上。多型瘤病毒的名稱，即由此而來(lái)。在小鼠中，以腮腺瘤為最多，倉(cāng)鼠則以肉瘤最為常見(jiàn)。應(yīng)用來(lái)源自細(xì)胞培養(yǎng)物上一個(gè)蝕斑的純化病毒進(jìn)行接種，即可引起極其多

27、樣的腫瘤，一般認(rèn)為這種“腫瘤多樣性”可能主要是由于感染細(xì)胞性質(zhì)的不同。但是必須強(qiáng)調(diào)指出，多型瘤病毒在其自然感染的宿主體內(nèi)極少導(dǎo)致腫瘤。這是因?yàn)樽匀桓腥緯r(shí)的病毒攝入量不高，以致不能致發(fā)腫瘤?抑或是因?yàn)檩^老齡動(dòng)物的免疫機(jī)構(gòu)已經(jīng)比較成熟，不易發(fā)生腫瘤?目前尚無(wú)令人信服的直接證據(jù)。 自然感染小鼠大多呈現(xiàn)不顯型經(jīng)過(guò)，極少出現(xiàn)腫瘤。但胸腺切除的大鼠在接觸感染后可能發(fā)生腫瘤。接種新生仔兔，常可使其形成多發(fā)性纖維瘤，但多自行消散，發(fā)生轉(zhuǎn)移性纖維肉瘤者極少。（二）猴空泡病毒40(Sinian virus 40) 同義名：SV40病毒 本病毒是在1960年于未接種病毒的恒河猴腎細(xì)胞培養(yǎng)物中分離獲得的，培養(yǎng)物本身沒(méi)

28、有細(xì)胞病變。SV40病毒可在非洲綠猴腎細(xì)胞系（Vero和BSC1）中良好增殖，并使感染細(xì)胞發(fā)生病變胞核染色質(zhì)邊緣化，胞漿空泡化。在倉(cāng)鼠、小鼠、家兔、牛、豬和人等非容許性細(xì)胞培養(yǎng)物中，則可誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化。病毒DNA具有同樣的轉(zhuǎn)化作用。 SV40病毒是小型球狀病毒， 直徑nm。在感染的綠猴腎細(xì)胞的胞核內(nèi)，病毒粒子常呈結(jié)晶狀排列。于感染后的第天，細(xì)胞核內(nèi)經(jīng)常充滿病毒粒子，同時(shí)細(xì)胞漿內(nèi)也有病毒粒子出現(xiàn)。 SV40病毒能抵抗酸和乙醚，并對(duì)福爾馬林具有較高抵抗力，在脊髓灰質(zhì)炎的弱毒疫苗和以福爾馬林處理的滅活疫苗中均已多次發(fā)現(xiàn)SV40病毒。幼齡兒童在口服脊髓灰質(zhì)炎疫苗后發(fā)生感染，并隨腎排毒周。SV40可長(zhǎng)期活

29、存在氣溶膠中。M的雙價(jià)離子鹽類，例如MgCl2，可以提高50加熱對(duì)SV40病毒的滅活作用，故被用于脊髓灰質(zhì)炎弱毒疫苗中污染的SV40的排除，因脊髓灰質(zhì)炎病毒可以耐受這樣的加熱處理。 給未離乳倉(cāng)鼠注射SV40病毒，可以引起肉瘤。但對(duì)人及其它動(dòng)物，似乎沒(méi)有致瘤作用，或者尚未證明有致瘤作用。 在SV40病毒的衣殼多肽上具有兩個(gè)不同的抗原決定簇。在病毒轉(zhuǎn)化的細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)出現(xiàn)T抗原和移植抗原。用移植抗原進(jìn)行免疫注射的小鼠，具有排斥SV40腫瘤細(xì)胞的能力。在健康恒河猴血清中常有中和抗體存在。人群中也有少數(shù)具有血清抗體。有謂T抗原是轉(zhuǎn)化細(xì)胞保持轉(zhuǎn)化狀態(tài)的必要條件。SV40病毒的抗原性較強(qiáng)。注射家兔，可以使其

30、產(chǎn)生高價(jià)免疫血清。應(yīng)用中和試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)，極易加以檢出。于中和試驗(yàn)中，感染組織培養(yǎng)液中的致瘤作用可被特異性抗血清完全中和，或其產(chǎn)生細(xì)胞病變（胞漿空泡化）的能力被完全抑制。此外，應(yīng)用PCR也可檢出培養(yǎng)物或血清中的病毒DNA。 主要參考文獻(xiàn)候云德，1990。分子病毒學(xué)。北京：學(xué)苑出版社。Amalfitano, A., et al.,1992. Different roles for two enhancer domains in the organ and age specific pattern of polyomavirus replication in the mouse.Mol.Cel

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