浙大微生物大實驗報告

1、摘要：本實驗以土壤中的微生物作為原材料，根據(jù)微生物各自的生長特點，配制不同成分的微生物培養(yǎng)基。將微生物培養(yǎng)物或含有微生物的樣品在無菌條件下移植到培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在分離出相應(yīng)微生物后，對其進(jìn)行進(jìn)一步的純化，然后觀察其形態(tài)特征，并通過微生物的生理生化反應(yīng)對其種類進(jìn)行鑒定，最后研究環(huán)境條件對微生物生長的影響。 關(guān)鍵字：培養(yǎng)基，分離，純化，鑒定，環(huán)境條件1、 實驗材料1、分離細(xì)菌、真菌、放線菌的材料：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、馬鈴薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O等。新鮮土壤；培養(yǎng)基：滅菌的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、淀粉瓊脂培養(yǎng)

2、基、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基（10mL裝）；試劑：5000U/mL鏈霉素液、0.5重鉛酸鉀液。2、細(xì)菌、真菌、放線菌純化與鑒定的材料：菌種：大腸桿菌、枯草桿菌、熒光假單胞菌、金黃色葡萄球菌，前實驗分離的未知菌；培養(yǎng)基：淀粉培養(yǎng)基、硫化氫實驗培養(yǎng)基、石蕊牛乳培養(yǎng)基、油脂培養(yǎng)基；試劑：碘液。菌種：枯草桿菌斜面；靈桿菌菌液；黑曲霉斜面。培養(yǎng)基采用：牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（10mL）、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基（10mL）、淀粉瓊脂培養(yǎng)基（10mL）；供試藥劑：2.5碘酒，75酒精，0.1HgCl2，5石炭酸。二、實驗步驟1、分離細(xì)菌、真菌、放線菌的步驟（一）、培養(yǎng)基配制l. 培養(yǎng)基配制的一般方法

3、和步驟（1）稱量：按照培養(yǎng)基配方，正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。（2）溶化：在搪瓷杯中加入所需水量（根據(jù)實驗需要加入蒸餾水或自來水），用玻棒攪勻，加熱溶解。（3）調(diào)pH值（調(diào)pH也可以在加瓊脂后再調(diào)），用1N NaOH或1N HCl調(diào)pH，用pH試紙對照。（4）加瓊脂溶化，在瓊脂溶化過程中，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦，待完全溶化后，補足所失水分，一般數(shù)量少，時間短不必補水。（5）分裝：在漏斗架上分裝。根據(jù)不同的需要進(jìn)行分裝，一般制斜面的裝置為管高的15 特別注意不要使培養(yǎng)基粘污在管（瓶）口上以免浸濕棉塞，引起污染。（6）包扎成捆、掛上標(biāo)簽。培養(yǎng)基分裝好后，塞上棉塞，用防水紙包

4、扎成捆掛上所配培養(yǎng)基名稱的標(biāo)簽。（7）滅菌備用。滅菌后如需制成斜面的，應(yīng)在下磅后取出，擺成斜面（見圖6-1）。培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，必須放在37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h，如確無菌生長、方可使用。2三種培養(yǎng)基的配方及具體配制方法（1）. 牛肉膏蛋白陳瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)細(xì)菌，是一種天然培養(yǎng)基）。配方：牛肉膏 3g蛋白胨 5g氯化鈉3g瓊脂20g自來水1 000mLpH7.2 7.4滅菌l.05kgcm2，2530min本實驗將原配方配成各種濃縮液。各種濃度如下：30牛肉膏、50蛋白胨、30氯化鈉。以配制200mL培養(yǎng)基為例。吸取30牛肉膏2mL；50蛋白胨2mL；30氯化鈉2mL；加入有刻度的搪

5、瓷燒杯中，然后用自來水補足到200mL。用玻棒攪勻，在電爐上稍加熱，調(diào) pH至 7.4，加瓊脂4g，加熱熔化，用玻棒不斷攪拌，至瓊脂完全溶解為止，趁熱在漏斗架上裝試管，（見圖62）。裝帶有棉塞的無菌試管，裝置15的試管高度共12支，作斜面培養(yǎng)基、用鋁殼試管帽的里裝10mL。約試管高度的 12以上，用作分離時倒平板用。分裝完畢，以12支為一捆，用防水紙包扎成捆（圖6-3），掛上標(biāo)簽，滅菌備用。（2）. 馬鈴薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)真菌之用，是一種半合成培養(yǎng)基）。配方：去皮馬鈴薯（或鮮豆芽）200g蔗糖（或葡萄糖）20g自來水1000mL瓊脂20gpH天然滅菌（含蔗

6、糖）1.05kg/cm220min（含葡萄糖）0.1kg/cm2 30min制備方法配制200mL培養(yǎng)基為例取上皮馬鈴薯40g，切成小塊、放入無刻度的搪瓷杯中，加水200mL，置電爐上加熱煮沸10min，用4層紗布過濾至具刻度的搪瓷杯中，濾液加水補足至200mL。然后加蔗糖4g，加瓊脂4g，加熱熔化并用玻棒不斷攪拌直至瓊脂完全溶化分裝試管，下面一系例步驟同配細(xì)菌培養(yǎng)基相同。（3）. 淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏一號GauseI），用干分離和培養(yǎng)放線菌，是一種合成培養(yǎng)基。配方：可溶性淀粉 20.0gKNO31.0g K2HPO4 0.5gMgSO4·7H2O 0.5gNaCl 0.5gFeSO

7、4·7H2O 0.01g瓊脂20g自來水1 000mL滅菌1.05kg/cm230min制備方法配制（以配制200mL）培養(yǎng)基為例：吸取配方液：1KNO320mL；1K2 HPO410mL；1MgSO4·7H2 O10mL；lNaCl10mL；1FeSO4 7H2O0.02mL加水補足至 200mL，置電爐上加熱.用另一只搪瓷杯稱取可溶性淀粉4g，從200mL中取出少量加入淀粉中，用玻棒調(diào)成糊狀，待液體沸騰后將淀粉糊洗入培養(yǎng)液中，攪勻，調(diào)pH至 7.4，加瓊脂 4g，加熱至瓊脂完全溶化為止，趁熱分裝試管，以下一系例步驟同于配制細(xì)菌培養(yǎng)基的操作方法。3. 無菌水的制備無菌水，

8、為下一次微生物分離實驗中所需用而準(zhǔn)備。100mL三角瓶（裝有玻璃珠），裝自來水45mL，試管中裝9mL自來水，塞上棉塞，包扎滅菌備用。三角瓶和試管須預(yù)先塞好棉塞，并經(jīng)干熱滅菌。（二）分離培養(yǎng)微生物常用器皿的準(zhǔn)備1. 清洗一些玻璃儀器：如三角瓶試管，培養(yǎng)皿、吸管等。2. 棉塞的制作：裝培養(yǎng)基和分離培養(yǎng)需用的部分玻璃器皿，需加棉花塞梯塞的作用為過濾空氣，使試管內(nèi)外空氣可以流通，但外界空氣中雜菌不能進(jìn)入，避免污染、試管、三角瓶都要做棉塞。吸管上部也要塞入棉花，在管口約1-2mm處，用解剖針塞入少許棉花，（約1-1.5cm 長）以防止細(xì)菌吸入口中，井避免將口中細(xì)菌吹入管內(nèi)。棉花要塞得松緊適宜。吹時以能

9、通氣但不使棉花塞下滑為準(zhǔn)。3. 包裝培養(yǎng)皿和吸管等。為了使培養(yǎng)皿、吸管、三角玻棒等洗凈，干熱滅菌后，不讓表面暴露，以保證無菌狀態(tài)，為此干熱滅菌前先用舊報紙包裝妥當(dāng)（見示范），每組同學(xué)包培養(yǎng)皿6只（一包）。吸管的包裝，將塞好棉花的吸管尖端，放在45cm寬的長紙條的一端，約成45°角左右，折疊紙條，包住吸管尖部，用左手握住移液管身，右手將移液管壓緊，在桌面上向前搓轉(zhuǎn)，以螺旋式包扎起來。上端剩余紙條，折疊打結(jié)，準(zhǔn)備滅菌。（三）微生物的分離1. 用稀釋平板法（又名混菌法）從土壤中分離真菌。（1）制備土壤稀釋液無菌操作過程見教師示范。A. 取土壤5g，放入裝有45mL無菌水的三角瓶中，振蕩10

10、min，即為稀釋10-1的土壤懸液。B. 另取裝有9mL無菌水試管5支，用記號筆編上10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。取已稀釋成10-1土壤液，振蕩后靜止 0.5min，用無菌吸管吸取 1mL土壤懸液加入 10的無菌水的試管中，并在試管內(nèi)輕輕反復(fù)吹吸數(shù)次，使之充分混勻，即成10-2土壤稀釋液。同法由10-2的試管中吸取1mL稀釋液加入編號為10-3的無菌水試管中，混勻后即為10-3土壤稀釋液，依次連續(xù)稀釋至10-4、10-5 、10-6土壤稀釋液。在土壤稀釋過程中，以用一支吸管由濃到稀，稀釋到底，稀釋方法見圖7-1。圖71 檢樣的稀釋方法（2）每組取無菌培養(yǎng)皿2付，即每個同學(xué)做

11、一只。學(xué)號單號學(xué)生用10-5稀釋度液，雙號學(xué)生用10-4稀釋度液。先在無菌培養(yǎng)皿底部貼上標(biāo)簽，注明分離菌名、稀釋度、組別、班級。取另一吸管，以無菌操作法吸取10-4或10-5土壤稀釋液1mL，加在無菌培養(yǎng)皿的一邊，在皿的另一邊加入 2滴 5 000U/mL的鏈霉素液。此時嚴(yán)防兩液相混。取已融化在水浴鍋中保溫50oC左右的馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基2 管（10mL裝，一管倒一皿），以不燙手為準(zhǔn)，倒入上述培養(yǎng)皿中（見圖7-2），輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使菌液、鏈霉素液、培養(yǎng)基充分混勻鋪平皿底，放在平坦的桌面上，凝固后，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)血，置2830oC恒溫培養(yǎng)養(yǎng)56d。觀察真菌菌落形態(tài)以及計數(shù)菌落數(shù)。并計算出每1g土壤

12、中真菌的數(shù)量。即用某一培養(yǎng)皿內(nèi)真菌的菌落數(shù)乘以該培養(yǎng)皿接種液的稀釋倍數(shù)即得。（3）挑取單個菌落接種到外面培養(yǎng)基上作純化和性能測定，若不純，需要繼續(xù)分離。2. 用平板涂抹法分離土壤中的放線菌（土壤稀釋液制備同上）。每組取無菌培養(yǎng)皿2付（每個同學(xué)各做一只）。各在培養(yǎng)皿底部貼上標(biāo)簽，注明分離菌名、稀釋度、組別、班級。以無菌操作法先在培養(yǎng)皿中加入0.5重鉛酸鉀溶液2滴，取已融化的淀粉瓊脂培養(yǎng)基2管，分別倒入2付培養(yǎng)皿中，輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基與重鉛酸鉀充分混勻，鋪平，制成平板。待平板凝固后，另取一支吸管吸取10-3（單學(xué)號學(xué)生）或10-4（雙學(xué)號學(xué)生）稀釋液0.2mL土壤稀釋液放在平板上。取無菌三角

13、玻棒，把上述稀釋液在平板表面涂抹均勻（見圖7-4）。在涂抹時不要弄破平板，以免影響菌落的生長。翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，置2830條件下培養(yǎng)67d，觀察放線菌菌落形態(tài)及計數(shù)菌落，并算出每g土壤中放線菌的數(shù)量（方法同上）。挑取單個菌落，接種于相應(yīng)的斜面培養(yǎng)基上，如果不純再移植或純化，直至得到純培養(yǎng)為止。3. 用平板劃線法分離土壤中的細(xì)菌（土壤稀釋液的制備同上）。（1）每組取無菌培養(yǎng)皿兩付，同上法在培養(yǎng)皿底部貼上標(biāo)簽。取已融化的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，倒入無菌培養(yǎng)血中，制成平板。（2）平板凝固后，用接種環(huán)取相應(yīng)的菌液一環(huán)（10-5或10-6）在平板上劃線（教師作示范）連續(xù)劃線法：將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面

14、作連續(xù)劃法（圖7-5），勿劃破培養(yǎng)基。劃線完畢后，倒置28oC30oC溫室培養(yǎng)。分區(qū)劃線法：用接種環(huán)以無菌操作挑取土壤稀釋液1環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第1次平行劃線3- 4條，再轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿約60”角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過第1次劃線部分作第2次平行劃線，再用同法通過第2次平行劃線部分作第3次平行劃線和通過第3次平行劃線部分作第4次平行劃線（見圖7-5）劃線完畢，蓋上皿蓋，倒置于28-30溫室中培養(yǎng)。（3）挑取單個菌落接種子斜面培養(yǎng)基上，如果不純再移植成純化，最后得到純培養(yǎng)。用上述分離土壤中真菌、放線菌和細(xì)菌的方法，也可用于分離病蟲、病蠶或果蔬上的病原菌。以劃線法從病蠶分離黑胸敗

15、血病病原菌為例，先用75酒精棉球進(jìn)行表面消毒（注意病蟲、病蠶、果蔬等分離的樣品不要過份腐爛，便于進(jìn)行材料的處理。取滅菌手術(shù)剪剪去病蠶的一只腹足，流出體液作為劃線分離的材料，若是分離蘋果炭疽病病原菌，則用無菌鑷子揭下有炭疽病蘋果的果皮，再從此處切取米粒大小果皮1塊，放入盛有1mL無菌水的試管中，用無菌玻棒搗碎制成懸浮液，劃線法分離病原菌。圖75 平板分離劃線的方法A. 連續(xù)劃線法B. 分區(qū)劃線法2、細(xì)菌、真菌、放線菌純化與鑒定的步驟（一）淀粉水解試驗?zāi)承┘?xì)菌可以產(chǎn)生淀粉酶（胞外酶），使淀粉水解為麥芽糖和葡萄糖，再被細(xì)菌吸收利用。淀粉水解后遇碘不再變藍(lán)色。試驗時將裝有淀粉培養(yǎng)基的三角瓶置于洗水浴中

16、融化，然后取出冷卻至約50左右，即傾入培養(yǎng)皿中，待凝固后制成平板。每個同學(xué)用接種環(huán)取少量菌涂在平板上，每個菌種涂片 0.30.5cm大小的圓（見圖 9-1）、其中一種應(yīng)以枯草桿菌（Bacillus subtilis）作為對照菌。圖91 淀粉水解試驗接種示意圖1. 枯草芽孢桿菌 2. 試驗菌1 3. 大腸桿菌 4. 試驗菌2將培養(yǎng)皿倒置于37恒溫箱中培養(yǎng)24h，觀察時打開皿蓋滴加少量碘液于平板上，輕輕旋轉(zhuǎn)，使碘液均勻鋪滿整個平板。如菌體周圍出現(xiàn)無色透明圈，則說明淀粉已被水解。透明圈的大小，說明該菌水解淀粉能力的強弱。（二）硫化氫的產(chǎn)生試驗許多細(xì)菌能從培養(yǎng)基中的含硫有機化合物產(chǎn)生硫化氫。硫化氫遇鉛

17、鹽（或鐵鹽）則形成黑色硫化鉛（或黑色硫化鐵）。試驗常用胱氨酸或半胱氨酸作為含硫有機物。1方法接種與觀察：用新鮮斜面培養(yǎng)物（菌種）接種到硫化氫試驗培養(yǎng)基中。接種后，用無菌鑷子夾取醋酸鉛濾紙條用棉塞塞緊，使懸掛于管中，下端接進(jìn)培養(yǎng)基表面，不接觸液面，適溫培養(yǎng)。于接種后3、7、14天觀察，紙條變黑者為陽性，不變者為陰性。2. 注意事項a. 此方法比較敏感，本培養(yǎng)基不適用于腸桿菌科。b. 紙條高度應(yīng)放置適當(dāng)，離液面太遠(yuǎn)影響靈敏度，太近容易被濺濕。同時移動試管時也要平穩(wěn)。c. 除空白對照外，應(yīng)放陰性對照。（三）石蕊牛奶試驗牛乳中通常含有蔗糖、乳糖、蛋白質(zhì)、酪蛋白等成分。細(xì)菌對牛乳的利用主要是指對乳糖及酪

18、蛋白的分解和利用。牛乳中常加入石蕊作為酸堿指示劑和氧化還原指示劑。中性時石蕊呈淡紫色，酸性時呈紅色，堿性時呈藍(lán)色，還原時則部分或全部脫色。細(xì)菌對牛乳的利用可分三種情況：1. 酸凝固作用細(xì)菌發(fā)酵乳糖后，產(chǎn)生許多酸，使石蕊牛乳變紅，當(dāng)酸度很高時，可使牛乳凝固，此稱為酸凝固。2. 凝乳酸凝固作用某些細(xì)菌能分泌凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，這種凝固在中性環(huán)境中發(fā)生。通常這種細(xì)菌還具有水解蛋白質(zhì)的能力，因而產(chǎn)生一些堿性物質(zhì)，使石蕊變藍(lán)。3. 胨化作用酪蛋白被水解，使牛乳變成清亮透明的液體。胨化作用可以在酸性條件下或堿性條件下進(jìn)行，一般石蕊色素被還原脫色。接種大腸桿菌或熒光假單胞菌于石蕊牛乳培養(yǎng)基中，置于

19、37恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)7d。另外保留1支不接種的石蕊牛乳培養(yǎng)基作為對照。（四）溫度對微生物的影響微生物生長需要一定的溫度條件，不同的微生物，各有其不同的生長溫度范圍。在生長溫度范圍內(nèi)有最高、最適、最低三種生長溫度。如果超過最低和最高生長溫度時，微生物均不能生長，或處于休眠狀態(tài)，甚至死亡。每組取牛肉膏蛋白胨細(xì)菌外面培養(yǎng)基6支，貼上標(biāo)簽，注明班級、組號、培養(yǎng)溫度等，在無菌操作下，用枯草桿菌斜面菌種進(jìn)行斜面接種。備取2支標(biāo)記28、60、4（冰箱）分別放入相應(yīng)溫度下培養(yǎng)，48h后觀察記錄并做實驗報告。（五）紫外線對微生物的影響紫外線對微生物有明顯的致死作用，波長260nm左右紫外線具有最高的殺菌效應(yīng)。紫外線

20、對細(xì)菌生長的影響是隨著紫外線對微生物照射劑量、照射時間及照射距離的不同，對微生物的生理活動也相應(yīng)地產(chǎn)生不同的效果。劑量高、時間長、距離短時就易殺死它們，劑量低時間短、距離長時就會有少量個體殘存下來。其中一些個體的遺傳特性發(fā)生變異。可以利用這種特性來進(jìn)行滅菌和菌種選育工作。細(xì)胞中核酸等物質(zhì)對紫外線的吸收能力特強，吸收的能量能破壞DNA的結(jié)構(gòu)，抑制了DNA的復(fù)制。輕則誘使細(xì)胞發(fā)生變異，重則導(dǎo)致死亡。經(jīng)紫外線照射后受損害的細(xì)胞，如立即暴露在可見光下，則有一部分仍可恢復(fù)正?；盍?，稱為光復(fù)活現(xiàn)象。紫外線雖有較強的殺菌力，但穿透力弱，即使一薄層黑紙，就能將大部分紫外線濾除。本實驗即證明紫外線的殺菌作用及穿

21、透能力。方法將牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基按無菌操作制成平板1付，用無菌移液管吸取 0.1mL靈桿菌（或培養(yǎng)8h的金黃色葡萄球菌）菌液于平板上，用無菌三角玻棒涂均勻。在皿底部貼上標(biāo)簽，注明組號、班級、處理，再移至無菌室內(nèi)，打開皿蓋，將無菌五角星黑紙放置于平板，在距離紫外燈的30cm處照射20min，去除黑紙，加上皿蓋（圖20-1）。于2830溫箱中倒置培養(yǎng)48h后記錄結(jié)果。圖201 紫外線對微生物生長的影響試驗1. 擋紫外線照射的黑紙2. 紫外線直接照射處3. 培養(yǎng)后細(xì)菌生長4. 培養(yǎng)后細(xì)菌不生長（六）化學(xué)藥劑對微生物的影響一些化學(xué)藥劑對微生物生長有抑制效殺死作用，因此在實驗室中及生產(chǎn)上常利用某些化

22、學(xué)藥劑進(jìn)行滅菌或消毒。不同化學(xué)藥劑對不同微生物的殺菌能力并不相同。而一種化學(xué)藥劑對不同微生物的殺菌效果也不一致。因此，使用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒或滅菌時，應(yīng)注意藥品的濃度及使用時其它因素的干擾和影響。每組的無菌培養(yǎng)皿兩付在皿底注明處理方法及菌種名稱。取枯草桿菌和金黃色葡萄球菌各1支，各注入4mL無菌水，以無菌操作用接種環(huán)將菌苔括下，制成菌懸液。用無菌吸管各吸取枯草桿菌和金黃色葡萄球菌 0.2mL相應(yīng)的培養(yǎng)皿中。將已融化冷卻至 50左右的細(xì)菌培養(yǎng)基（不燙手為宜）分別倒入上述的培養(yǎng)皿中、混勻后凝固成平板。用鑷子將備滴有兩滴0.1HgCI2、2.5碘酒，75酒精，5石炭酸的小圓形濾紙片，放于每一平板上，蓋

23、上皿蓋于2830的溫箱中培養(yǎng)48h后記錄結(jié)果。如果有抑制作用，則濾紙片四周出現(xiàn)無菌生長的抑菌圈，圈的大小可表示消毒劑抑菌的強弱（如圖20-2）。圖 202 園濾紙片法檢測藥物的殺菌作用1. 濾紙片2. 有菌區(qū)3. 抑菌區(qū)（七）抗生素對微生物的影響 某些微生物，特別是放線菌，在生命活動過程中產(chǎn)生了一些對其本身無害而能抑制或殺死另外一些微生物的特異性的代謝產(chǎn)物，這些特異性的代謝產(chǎn)物稱為抗生素。產(chǎn)生抗生素的微生物稱為抗生菌?？股卦跇O低濃度下即能抑制或殺死某些微生物。在抗生菌的篩選中常以其對某些微生物產(chǎn)生的拮抗作用所形成的抑菌圈的大小來衡量抗生菌作用的強弱和抗生素的有效濃度。方法與步驟：將枯草桿菌斜

24、面和黑曲霉斜面各用4mL無茵水，以無菌操作法制成菌懸液備用。取兩付無菌培養(yǎng)皿，皿底貼上標(biāo)簽，注明組別及處理，各自用無菌吸管吸取上述菌懸液各1mL，分別加入相應(yīng)培養(yǎng)皿內(nèi)。取已融化并已保持在50左右的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基各1管，倒入相應(yīng)的培養(yǎng)皿中，輕輕搖勻，制成含菌平板用無菌打孔器在長有5406放線菌的培養(yǎng)皿中無菌操作垂直鉆取連有培養(yǎng)基的菌塊。用滅菌鑷子將“5406”菌塊移至平板上、每個平板放四塊。培養(yǎng)皿正放在2830溫箱中培養(yǎng)2-3d觀察菌塊周圍的透明圈（抑菌圈）大小、并寫實驗報告。三、實驗結(jié)果1、細(xì)菌、真菌和放線菌菌落的形態(tài)特征細(xì)菌菌落特征：一般呈現(xiàn)較濕潤、較光滑、較透明、較粘稠、易挑取、質(zhì)地均勻

25、、小而突起或大而平坦、菌落正反面或邊緣與中央部位的顏色一致、一般有臭味或酸敗味等。放線菌菌落特征：干燥、不透明，小而緊密，呈放射狀；菌落初期表面光滑或呈致密的絲絨狀，當(dāng)產(chǎn)生孢子之后，其菌落表面呈粉狀、顆粒狀；菌落和培養(yǎng)基連接緊密，難以挑取，或者整個菌落被挑起而不致破碎；菌落顏色多樣，菌落正反面顏色常不一致，在菌落邊緣的瓊脂平面有變形的現(xiàn)象；帶有泥腥味。霉菌菌落特征: 由于霉菌的菌絲較粗而長，因而霉菌的菌落較大，有的霉菌的菌絲蔓延，沒有局限性，其菌落可擴展到整個培養(yǎng)皿，有的種則有一定的局限性，直徑1-2厘米或更小。菌落質(zhì)地一般比放線菌疏松，外觀干燥，不透明，呈現(xiàn)或緊或松的蛛網(wǎng)狀、絨毛狀或棉絮狀；

26、菌落與培養(yǎng)基的連接緊密，不易挑取；菌落正反面的顏色和邊緣與中心的顏色常不一致。2、 細(xì)菌、真菌和放線菌個體的形態(tài)特征細(xì)菌個體特征：個體較?。恍螤钣袟U狀，螺旋狀，球狀；沒有細(xì)胞核，但有DNA集中區(qū)域，有的細(xì)菌還有鞭毛，作用是運動；細(xì)菌的個體非常小，目前已知最小的細(xì)菌只有0.2微米長，因此大多只能在顯微鏡下看到它們。細(xì)菌一般是單細(xì)胞，細(xì)胞結(jié)構(gòu)簡單，缺乏細(xì)胞核、細(xì)胞骨架以及膜狀胞器，例如粒線體和葉綠體?？筛鶕?jù)形狀分為三類，即：球菌、桿菌和螺旋菌（包括弧菌、螺菌、螺桿菌）。放線菌個體特征：放線菌是原核生物的一個類群。因在固體培養(yǎng)基上呈輻射狀生長而得名。大多數(shù)有發(fā)達(dá)的分枝菌絲。菌絲纖細(xì)，寬度近于桿狀細(xì)菌

27、，約0.51微米?？煞譃椋籂I養(yǎng)菌絲，又稱基質(zhì)菌絲，主要功能是吸收營養(yǎng)物質(zhì)，有的可產(chǎn)生不同的色素，是菌種鑒定的重要依據(jù)；氣生菌絲，疊生于營養(yǎng)菌絲上，又稱二級菌絲。放線菌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與細(xì)菌相似，都具備細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、擬核等基本結(jié)構(gòu)。個別種類的放線菌也具有細(xì)菌鞭毛樣的絲狀體，但一般不形成莢膜、菌毛等特殊結(jié)構(gòu)。放線菌的孢子在某些方面與細(xì)菌的芽孢有相似之處，都屬于內(nèi)源性孢子，但細(xì)菌的芽孢僅是休眠體，不具有繁殖作用，而放線菌產(chǎn)生孢子則是一種繁殖方式。真菌個體特征： 真菌都有明顯的細(xì)胞壁，通常不能運動，以孢子的方式進(jìn)行繁殖。真菌通常又分為三類，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌），它們歸屬于不同的亞門。真

28、菌的細(xì)胞既不含葉綠體，也沒有質(zhì)體，是典型異養(yǎng)生物。它們從動物、植物的活體、死體和它們的排泄物，以及斷枝、落葉和土壤腐殖質(zhì)中、來吸收和分解其中的有機物，作為自己的營養(yǎng)。真菌的異養(yǎng)方式有寄生和腐生。真菌常為絲狀和多細(xì)胞的有機體，其營養(yǎng)體除大型菌外，分化很小。高等大型菌大都有定型的子實體。3、細(xì)菌、真菌、放線菌個體生理生化反應(yīng)（1）淀粉水解實驗結(jié)果 從圖中可以看出，試驗菌周圍的無色透明圈最大，其次是枯草桿菌，最小的是大腸桿菌。說明細(xì)菌產(chǎn)生淀粉酶的能力較強，水解淀粉的能力也較強，其次是枯草桿菌，水解能力最弱的是大腸桿菌。（2）硫化氫的產(chǎn)生實驗 由圖中可以看出，只有接種有枯草桿菌的培養(yǎng)基中的紙條變黑，表

29、明枯草桿菌為陽性，細(xì)菌和金黃色葡萄球菌為陰性。（3）石蕊牛奶實驗 根據(jù)實驗現(xiàn)象，可以看出大腸桿菌的試管沒有變色，說明沒有產(chǎn)生酸性或堿性的物質(zhì)?？莶輻U菌發(fā)生酸凝固現(xiàn)象，且變紅，兩支細(xì)菌所在的試管已脫色，也出現(xiàn)胨化現(xiàn)象，有分層，下面的為灰黑色。4、環(huán)境條件對微生物生長的影響 （1） 溫度對微生物的影響培養(yǎng)溫度菌名4oC28oC60oC枯草桿菌+大腸桿菌+注：不生長 +：生長一般 +：生長良好 以上結(jié)果看出，大腸桿菌的最適溫度（30度左右）比枯草桿菌的最適溫度（60度左右）。高溫和低溫對微生物生長均有抑制作用，只有最適溫度才適合微生物的生長和繁殖。（2）紫外線對微生物的影響1.在加黑紙的培養(yǎng)皿中，黑

30、紙區(qū)域內(nèi)的菌落分布比較均勻，而且菌種長勢較好，但是黑紙區(qū)域外的幾乎沒有菌落，說明在有六角星黑紙下的細(xì)菌沒有被紫外線照射抑制和殺死。2.在有光照射的培養(yǎng)皿中，菌落在一部分區(qū)域較集中，在另一部分區(qū)域均勻分布，而且長勢較好。說明光下因為有修復(fù)作用，多數(shù)細(xì)菌未被紫外線殺死。 3.在無光照射的培養(yǎng)皿中，菌落在邊緣分布較集中，在中心處數(shù)量明顯較少，而且部分菌落發(fā)黃，說明長勢較差，基本上被紫外線殺死。說明暗處多數(shù)細(xì)菌因為沒有修復(fù)作用被紫外線殺死。（3）化學(xué)藥劑對微生物的影響處理菌名A0.1HgCI2B2.5碘酒C75酒精D5石炭酸靈桿菌+枯草桿菌+注：沒有 +：較小 +：較大 +：抑制圈最大 從總體上看，靈

31、桿菌的抑制圈均大于枯草桿菌，說明化學(xué)藥劑對靈桿菌的抑制作用大于枯草桿菌。（4）抗生素對微生物的影響被抑制菌名稱抑制效果有無黑曲霉枯草芽孢桿菌細(xì)黃鏈霉菌“5406”+注：無抑制菌 +：有抑制菌實驗結(jié)果表明，抗生素對黑曲霉沒有抑制作用，對枯草芽孢桿菌有抑制作用。4、 實驗總結(jié)與實驗心得1、 對細(xì)菌、真菌、放線菌的簡單總結(jié)（1）細(xì)菌細(xì)菌是所有生物中數(shù)量最多的一類，據(jù)估計，其總數(shù)約有 5×1030個。細(xì)菌的個體非常小，目前已知最小的細(xì)菌只有0.2微米長，因此大多只能在顯微鏡下看到它們。細(xì)菌是生物的主要類群之一，屬于細(xì)菌域。細(xì)菌一般是單細(xì)胞，細(xì)胞結(jié)構(gòu)簡單，缺乏細(xì)胞核、細(xì)胞骨架以及膜狀胞器，例如線粒體和葉綠體。基于這些特征，細(xì)菌屬于原核生物。原核生物中還有另一