當(dāng)前乳腺癌診治中的病理學(xué)新發(fā)展

1、當(dāng)前乳腺癌診治中的病理學(xué)新發(fā)展關(guān)鍵詞：乳腺癌；病理學(xué)乳腺癌是我國女性常見的一種惡性腫瘤，其死亡率僅次于肺癌 而位居第二位，且發(fā)病率呈直線上升趨勢。據(jù)XX市統(tǒng)計(jì)，乳腺癌 發(fā)病率已從1972年的17/10萬上升至1993年的37/10萬。近年來， 在有關(guān)乳腺癌的病因、診斷、治療、預(yù)后判斷與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展 過程中的分子生物學(xué)變化等的研究出現(xiàn)了許多新的進(jìn)展。關(guān)于乳腺癌的早期診斷乳腺癌的早期診斷需要病理科、外科和放射科醫(yī)師的緊密協(xié) 作：以往的早期乳腺癌病人多因能觸與腫塊，而腫塊較小，被認(rèn)為 尚處于臨床早期，實(shí)際上這并非真正意義上的早期診斷。早期診斷 應(yīng)是針對(duì)在臨床上觸與不到腫塊的乳腺癌病人而言，即亞臨

2、床狀 態(tài)。乳腺X線檢查是早期發(fā)現(xiàn)乳腺癌的重要方法。某些臨床觸與 不到的病變，在 X線片上可表現(xiàn)為小結(jié)節(jié)、微小鈣化或局限致密 區(qū)，結(jié)合病理學(xué)檢查可在這些病變中發(fā)現(xiàn)早期乳腺癌。乳腺X線 立體定位穿刺活檢是90年代開展起來的新技術(shù)。它是在常規(guī)乳腺 X線片的基礎(chǔ)上，通過在電子計(jì)算機(jī)立體定位儀的導(dǎo)引下，將乳腺 穿刺針直接刺入可疑病變區(qū)，取得活體組織標(biāo)本，進(jìn)行組織病理學(xué) 檢查。該技術(shù)具有先進(jìn)、定位準(zhǔn)確、操作簡單、安全可靠、病人痛 苦小，準(zhǔn)確率高的優(yōu)點(diǎn)。應(yīng)用此技術(shù)為常規(guī)檢查無法確診的某些乳 腺微小病變的早期診斷開辟了廣闊的前景。對(duì)病理醫(yī)師來說，該技 術(shù)的優(yōu)勢在于彌補(bǔ)了外科切取活檢和針吸細(xì)胞學(xué)檢查定位困難的

3、不足。由 于所取標(biāo)本有一定體積，組織量多，可進(jìn)行組織病理學(xué)檢 查，所 以價(jià)值頗大，既可為臨床基礎(chǔ)研究提供更多的資料，又可望 提高乳腺微小病變的早期診斷水平。立體定向進(jìn)行乳腺活檢的方法也在日益更新，如由傳統(tǒng)的傳統(tǒng) 針芯活檢(conve ntional core bi opsy , CCB ),真空輔助針芯活檢 (vacuum-assi sted core biopsy , VACB)發(fā)展到今 日 的高級(jí)乳腺活檢 (advanced breast bi opsy i n st rum ent at i on , A B BI) 1 。 A B B I 具有 一次性取材，組織塊大且結(jié)構(gòu)完整的特點(diǎn)，可

4、使病理診斷的準(zhǔn)確性 大大提高。相比較而言，傳統(tǒng)的細(xì)針穿刺活檢只能依據(jù)細(xì)胞學(xué)特征 做診斷。但需要注意的是，這些檢查不適用于判斷腫瘤邊緣是否切 除干凈以與不典型增生、放射狀疤痕的診斷。病理學(xué)上，導(dǎo)管上皮不典型增生(ADH)與導(dǎo)管內(nèi)癌(DCIS)、小葉不典型增生（A LH ）與小葉原位癌（LC I S）的鑒別一直是一個(gè) 難題。嚴(yán)格來說，A DH增生的單形性圓形細(xì)胞累與的導(dǎo)管或聚集 的小導(dǎo)管橫切面不應(yīng)超過2 mm,有時(shí)肌上皮也參與增生。當(dāng)增生 時(shí)導(dǎo)管內(nèi)有少量癌細(xì)胞特征出現(xiàn)，而整個(gè)結(jié)構(gòu)仍象典型的導(dǎo)管內(nèi)上 皮增生時(shí)，仍應(yīng)診斷為ADH。按Page等的標(biāo)準(zhǔn)2 , DCIS應(yīng)至 少在2個(gè)導(dǎo)管腔內(nèi)具有下列特點(diǎn)：（

5、1）細(xì)胞一致性；（2）細(xì)胞之間腔 隙圓而規(guī)則或形成微乳頭的細(xì)胞形態(tài)一致；（3）細(xì)胞核深染。A LH 與LC I S相比細(xì)胞較粘著。ALH往往只是部分小葉單元被累與，而 LC I S常累與1個(gè)或多個(gè)小葉單元的大部分。ALH腺泡腔不完全消 失，仍清晰可見，而LC IS腺泡腔常完全消失。不典型增生與原位 癌在形態(tài)上有許多相似之處，且有報(bào)道在ADH中發(fā)現(xiàn)部分上皮細(xì) 胞的克隆性增殖，因此從形態(tài)上鑒別不典型增生與原位癌往往帶有 一定的主觀性。乳腺癌的早期診斷依賴分子生物學(xué)和分子流行病學(xué)新技術(shù)：通 過傳統(tǒng)病理形態(tài)來早期診斷乳腺癌的概念已逐步發(fā)生了改變。隨著 科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，乳腺癌的研究由細(xì)胞病理學(xué)進(jìn)入分子病

6、理學(xué)領(lǐng) 域：乳腺癌中越來越多的分子缺陷被揭示，許多分子生物學(xué)技術(shù)被 用于乳腺癌的早期診斷，分子病理診斷已逐步成為乳腺癌診斷的一 個(gè)重要內(nèi)容。國外已有報(bào)道，通過針吸活檢組織或細(xì)胞學(xué)穿刺進(jìn)行 乳腺可疑病變中微量DNA或RNA的提取，并從分子水平檢測基因 異常，可早期發(fā)現(xiàn)乳腺癌。較多的報(bào)道還包括對(duì)有家族性乳腺癌病 史的特定人群進(jìn)行BRCA1、BRCA2基因異常的檢測3,對(duì)高 危人群進(jìn)行端粒酶活性、8q染色體短臂缺失的檢測4等。有家 族性乳腺癌病史的女性，如果攜帶BRCA 1基因突變，在40歲左右 約2 0%發(fā)生乳腺癌，到50歲左右達(dá)51%, 70歲左右達(dá)87%。檢測 BRCA 1基因的胚系突變，有利

7、于高危人群的早期發(fā)現(xiàn)和早期治療， 降低乳腺癌的死亡率。但從我國國情來看，大規(guī)模普查費(fèi)用昂貴， 且有家族史的乳腺癌病人BRCA1、BRCA2基因突變率報(bào)道不一， 因此某些檢測的實(shí)用價(jià)值還需探討。對(duì)普查陽性者如何進(jìn)一步處 理、對(duì)這些人由此產(chǎn)生的心理壓力與某些倫理問題該如何解決等還 需進(jìn)行大量深入的工作。乳腺癌的預(yù)后指標(biāo)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移仍是目前判斷預(yù)后和制定治療方案的主要參考指 標(biāo)。然而單靠淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況來評(píng)估病人的預(yù)后，將影響對(duì)相當(dāng)數(shù) 量病人的正確判斷。目前已經(jīng)明確，不利于乳腺癌預(yù)后的因素包括 Ki-67、增殖細(xì)胞核抗原（PA）等增殖指數(shù)增高，c-erbB-2蛋白的 過度表達(dá)、p53基因突變、癌胚抗原（

8、CEA）、組織蛋白酶D陽性 等；有利于預(yù)后的因素有雌激素受體（ER）、PS2陽性、nm23高表 達(dá)、p27高表達(dá)等。國際上最新報(bào)道抗細(xì)胞凋亡的多功能蛋白BAG-15、纖維蛋白溶酶原激活抑制劑-1（PA I-1） 6、血漿血小板反 應(yīng)蛋白（PT SP）也是與乳腺癌預(yù)后獨(dú)立相關(guān)的因素。但是直到目 前為止，即使某些出現(xiàn)頻率較高的染色體、基因結(jié)構(gòu)改變或蛋白表 達(dá)的異常，也還沒完全成為適合于臨床常規(guī)應(yīng)用的檢測指標(biāo)。其原 因有如下幾方面：（1）乳腺癌的組織學(xué)類型較多，而各種報(bào)道中 分析的腫瘤類型不盡相同。（2 ）檢測的預(yù)后指標(biāo)種類廣泛，包括 蛋白或其他抗原、染色體、mRNA、DNA等。（3）各種檢測技術(shù)

9、的規(guī)X性還欠隹。（4）研究標(biāo)本來自新鮮組織還是細(xì)胞系，是否 甲醛固定、石蠟包埋組織，也可能造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的差異。預(yù)后因素 研究的種種復(fù)雜性，要求我們立足于大樣本材料，用統(tǒng)一的診斷標(biāo) 準(zhǔn)和規(guī)X化的技術(shù)進(jìn)行分析，必要時(shí)可開展多單位、多部門的協(xié) 作。我 們認(rèn)為c-erbB-2、ER、Ki-67、DNA倍體數(shù)這 幾個(gè)指 標(biāo)的臨 床意義明確，檢測方法穩(wěn)定可靠、簡便易行，一般病理醫(yī)師均能掌 握，應(yīng)加以開展普與。三、乳腺癌的淋巴結(jié)清掃一一前哨淋巴結(jié)的組織病理學(xué)檢測早期診斷手段的提高使得大量早期乳腺癌病人被發(fā)現(xiàn)。對(duì)于早 期乳腺癌，腋窩淋巴結(jié)檢查雖然可以了解乳腺癌的預(yù)后情況，但意 義不大，尤其是對(duì)于那些體檢未捫與

10、腋窩淋巴結(jié)者需要尋找新的預(yù) 后判斷方法。前哨淋巴結(jié)活檢是應(yīng)運(yùn)而生的一種新方法7, 8。 所謂前哨淋巴結(jié)即引流某一原發(fā)性腫瘤的第一站淋巴結(jié)（乳腺癌中 包括腋窩淋巴結(jié)或內(nèi)側(cè)象限乳腺癌病人的乳內(nèi)淋巴結(jié)）。它接受淋 巴液的引流量最大，最容易含有轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞。由于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 是一個(gè)逐步的過程，因此前哨淋巴結(jié)的情況可以反映整個(gè)腋窩淋巴 結(jié)的狀態(tài)。如果前哨淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移，則應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行腋窩淋巴結(jié)清 掃，如果前哨淋巴結(jié)陰性，則不進(jìn)行清掃。具體操作步驟如下：向 腫瘤四周注射一種放射性物質(zhì)或藍(lán)色染料，一定時(shí)間后在腫瘤同側(cè) 腋窩下部作一切口，切除攝取了藍(lán)色染料或放射性物質(zhì)的淋巴結(jié) （即前哨淋巴結(jié)），進(jìn)行石蠟切片判斷

11、有無轉(zhuǎn)移9 o前哨淋巴 結(jié)的狀態(tài)與整個(gè)腋窩淋巴結(jié)是否有轉(zhuǎn)移高度一致，兩者的吻合率可 達(dá)95%98%。而且在某些情況下，對(duì)前哨淋巴結(jié)進(jìn)行連續(xù)切片、 免疫組織化學(xué)檢測和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測，可在 常規(guī)腋窩淋巴結(jié)清掃沒有發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中找到轉(zhuǎn)移。不過在應(yīng) 用前哨淋巴結(jié)活檢進(jìn)行冷凍切片診斷時(shí)可出現(xiàn)一定的假陰性，因?yàn)?一些微小的轉(zhuǎn)移癌可能會(huì)被忽略。國際上對(duì)該項(xiàng)工作的開展已較為廣泛，但在國內(nèi)僅少數(shù)醫(yī)療單 位剛起步。我們倡議用前哨淋巴結(jié)切除來代替常規(guī)的淋巴結(jié)清掃 術(shù)。這樣可以使某些不必要進(jìn)行淋巴結(jié)清掃的病人避免因此而帶來 的一些并發(fā)癥，使腋窩淋巴結(jié)切除由原來的治療性切除轉(zhuǎn)變?yōu)樵\斷 性取

12、材。四、乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移的檢測骨髓是乳腺癌轉(zhuǎn)移的常見部位，而且常常是乳腺癌發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn) 移首先累與的器官。目前常規(guī)的骨髓細(xì)胞學(xué)檢查往往不能發(fā)現(xiàn)早期 病人骨髓中的微轉(zhuǎn)移，骨掃描、骨骼的X線檢查等對(duì)早期骨髓微 轉(zhuǎn)移的檢測意義也不大。如何提高骨髓微轉(zhuǎn)移的檢出率具有重要意 義。1 .應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移：乳腺癌為 上皮性腫瘤，而骨髓屬間葉來源，本身無上皮性抗原的表達(dá)，故可 應(yīng)用針對(duì)上皮抗原如細(xì)胞角蛋白、上皮膜抗原（EMA）等單克隆抗 體進(jìn)行染色。Osborne等10以乳腺癌細(xì)胞系（MCF-7）按不同 細(xì)胞濃度與正常骨髓細(xì)胞相混合，然后進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，能 檢測出2 X 105骨髓

13、細(xì)胞中的一個(gè)癌細(xì)胞。利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢 測乳腺癌微轉(zhuǎn)移有一定的局限性，如某些正常骨髓細(xì)胞可能會(huì)出現(xiàn) 不同程度的交叉反應(yīng)，腫瘤細(xì)胞表面抗原表達(dá)的不均一性也可能影 響對(duì)轉(zhuǎn)移細(xì)胞的正確評(píng)判。故在實(shí)際應(yīng)用中，目前用多種抗體組成 所謂的雞尾酒方法”，既可降低假陰性率，又可減少假陽性。2 .禾I用RT-PCR技術(shù)檢測乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移：RT-PCR在檢測 腫瘤隱匿性微小轉(zhuǎn)移灶方面，無論是敏感性還是特異性均優(yōu)于以往 的方法。與免疫組織化學(xué)染色相比，敏感性可增加10100倍。 Datta等11運(yùn)用 RT-PC R檢測外周血和骨髓中細(xì)胞角蛋白19 （CK19）的 mRNA,結(jié)果6例淋巴結(jié)陰性的W期乳腺癌病人中

14、5 例發(fā)現(xiàn)骨髓微轉(zhuǎn)移。Schoenfeld等12將MCF-7細(xì)胞與正常骨 髓細(xì)胞按不同濃度混合，結(jié)果免疫組織化學(xué)能檢測出1/105的 M CF-7細(xì)胞，而 RT-PCR方法能測出1/106的 MC F-7細(xì)胞，其檢 測敏感性比免疫組織化學(xué)提高10倍。當(dāng)然，RT-PCR檢測最好能 與免疫組織化學(xué)相結(jié)合，這樣可以給腫瘤細(xì)胞以正確的定位，排除 上皮細(xì)胞污染所導(dǎo)致的假陽性。骨髓微轉(zhuǎn)移與乳腺癌的預(yù)后、復(fù)發(fā)、 轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性。確定具有早期復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移危險(xiǎn)的高危人群，在 其發(fā)展為臨床轉(zhuǎn)移之前，給予積極輔助治療，可以降低乳腺癌病人 的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率。此外，骨髓微轉(zhuǎn)移檢測還可作為判定治療療效的 指標(biāo)和預(yù)測復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)

15、移的依據(jù)。五、乳腺癌治療的新方法抗HER2/neu單克隆抗體除傳統(tǒng)治療方式外，目前國際上最新的治療方式是針對(duì)HER2/neu基因（即 c-erbB2基因）位點(diǎn)的生物治療。20%30%乳腺癌病人有HER2/neu基因的過度表達(dá)，此類腫瘤更具浸潤性， 對(duì)化療較不敏感且容易轉(zhuǎn)移12。美國已推出經(jīng)FDA批準(zhǔn)的新 藥Herceptin,這是第一個(gè)已在臨床應(yīng)用的人抗HER2/neu單克隆抗 體13。臨床研究顯示它能有效抑制體內(nèi)HER2/neu高表達(dá)乳腺 癌細(xì)胞納裨獸饗匝映域ER2/neu陽性乳腺癌病人的生存期。每周白后對(duì)用作注射抗細(xì)胞外 HER2/neu蛋白的 單克隆抗體，對(duì)于13%HER2/neu 過度

16、表達(dá)的乳腺癌有效。若同時(shí)給予HER2/neu抗體和順粕治療， 總有效率提高至25% ,且部分療效將保持一年以上。Burris總結(jié)了 Hercepti n與 D ocetaxel聯(lián)合應(yīng)用的效果，總有效率可達(dá)85.7%。 HER2/neu單克隆抗體新治療方式的出現(xiàn)既給乳腺癌病人帶來了希 望，同時(shí)也對(duì)病理醫(yī)師提出了嚴(yán)峻的要求。該項(xiàng)治療費(fèi)用昂貴，病 理醫(yī)師應(yīng)盡可能提供準(zhǔn)確的HER2/neu基因狀態(tài)，以指導(dǎo)選用最隹 的治療方案。目前常用的HER2/neu基因檢測方法有免疫組織化學(xué)、 熒光原位雜交（FI SH ）和酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA） 14。FISH能 直接和準(zhǔn)確地判斷HER2/neu基因是否存

17、在擴(kuò)增，但較為昂貴和繁 瑣。免疫組織化學(xué)因其簡便、快速、經(jīng)濟(jì)，已成為最常規(guī)的檢測方 法，但其中有許多問題應(yīng)該引起注意：首先免疫組化的判斷標(biāo)準(zhǔn)不 一，使HER2/neu基因蛋白表達(dá)的檢測結(jié)果不一致，而且是否蛋 表達(dá)陽性就可進(jìn)行H erceptin治療，還是需達(dá)到一定的陽性程度 再進(jìn)行，目前尚無一致的結(jié)論。其次石蠟包埋，甲醛固定可能會(huì) 免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果產(chǎn)生一定的影響，造成假陰性。第三，采 不同公司的HER2/neu抗體，檢測結(jié)果也不完全相同。因此，要 出準(zhǔn)確的HER2/neu基因狀態(tài)判斷，首先要對(duì)上述問題進(jìn)行統(tǒng)一Hercepti n治療具有一定的心臟毒性，而且就我國研究現(xiàn)狀來看， 要開展此項(xiàng)治

18、療在人力、物力和財(cái)力上消耗較大，有待進(jìn)一步的研 究。參考文獻(xiàn)1 Wong AY , Sa l i sbu ry E, B i l ous M. Recent devel opments i n stereotactic breast biopsy methodol ogies: an update for the surgi cal pathologist. Adv Anat Pathol, 2000,7:26-35.2 Page D L, D upont WD , Roge rs LW , et al. Atyp ical hyp erplasti c l esi ons of the fe

19、male breast. A l ong -term fol l ow-up st udy. Cancer 1985,55:2698-2708.3 N euhause n SL, Ost rander EA. M utati on test i ng of earl y-onset breast cancer genes BRCA 1 and B RCA 2. Genet Test, 1997,1: 75-83.Y arem ko M L, Recant WM , We st bro ok CA. Lo ss of heterozyg osi ty f rom the sh ort arm o

20、 f c hromosome 8 i s an earl y e vent i n breast cancers. Genes Chromosomes Cancer, 1 995, 1 3:1 86-1 91.5 Tang S C, S haheta N, C hernen ko G , et a l. E xpressi on o f B A G -1 i n i nva si ve breast carci nomas. J Clin O n co l, 1999,1 7:1 71 0-1 719.6 Foekens JA , Peters HA, Look MP, et al. The

21、u rok i nase sys tem of pl asmi nogen activati on and prognosi s i n 2780 breast cancer pati ents. Cancer Res, 2000,60:636-643.7 T u rner RR, 011 i l a DW, Stern S, et al. Opt i m al hi stopathol ogi c exam i nati on o f t he se n t i nel l ym ph n ode for b reast carci noma stag i ng. Am J Surg Pat

22、hol, 1999, 23:263-267.8 Sn ider H , D owl at shahi K , F an M , et al. Senti nel node b i opsy i n the stagi ng of breast cancer. Am J Su rg, 1 998,1 76: 305-31 0.9 Crossi n JA, Johnson A C, Stewart PB, et al. Gamma-probe-guided resection of t he senti nel lym ph node i n breast cancer. A m Surg, 19

23、98, 64: 666-668 ; discussion 669.10 Osborne MP , Wong GY, A si na S, et al. Sensiti v i ty of i mm u nocyt ochemi cal detecti on of breast cancer cel l s i n h uman bone marrow. Cancer Res, 1 991, 51: 2706-2709.11 1 D atta Y H , A dams PT , D robys ki WR , et al. Sensi ti ve d etection o f occul t b

24、reast cancer by the reve rse-transcri ptase polym erase chai n reaction. J Cli n Oncol, 1994,12: 475-482.12 2 Schoenfe l d A , Kruge r K H , Gom m J, et al. The detecti on of mi crometastases i n t he p er i pheral blood and bone m ar row o f p ati ents wi th breast cancer usi ng immunohistochemistr

25、y and reverse transcri ptase p ol ym erase c hai n r eacti on for k erati n 1 9. E ur J C ancer, 1997, 33: 854-861.13 3 Shak S. Overv i ew of the trastuzumab ( Hercepti n) anti - H E R2 monocl onal anti body cl i n i cal prog ram i n H E R2 -overex pressi ng metast ati c breast c ancer. H ercepti n

26、Mu l ti national In vesti gator Study Group. Semin Oncol, 1999,26(Suppl 12): 71-77.14 4 Ji menez RE, Wa 11 is T, Tabasczka P, et al. Determi nati on of Her-2/N eu st at u s i n breast carci noma: parati ve an al ys is of i mmunohi stochemi stry and fl uorescent i n si tu hyb ridizati on. M od Pathol

27、, 2000,1 3:37-45VEGF、CD34在乳腺癌中的表達(dá)研究時(shí)間：2007-11-22 14:19:00來源：論文天下論文網(wǎng)姜乃光李秋霞單景軍X玉英石青嶺【關(guān)鍵詞】免疫組織化學(xué)【摘要】 目的 探討血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascular endothelial growth factor , VEGF )與乳腺癌血管生成與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。方法 采用S-P免疫組化法，檢測54例乳腺癌石蠟標(biāo)本中 VEGF蛋白的表達(dá)與平均微血管密度( miscrovessel density, MVD )。結(jié)果 癌 組織中VEGF表達(dá)陽性率為 75.93%。VEGF表達(dá)與MVD值與組織學(xué)分級(jí) (P<

28、;0.05)和淋巴 結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.01),而與組織學(xué)分型無關(guān)(P>0.05) ;VEGF陽性組MVD值明顯高 于VEGF陰性組(t=2.220, P<0.05)。結(jié)論 VEGF與乳腺癌血管生成密切相關(guān)，并能促進(jìn) 其生長、浸潤與轉(zhuǎn)移。檢測 VEGF和MVD可作為反映乳腺癌生物學(xué)行為的指標(biāo)之一。關(guān)鍵詞 乳腺腫瘤 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子血管生成 免疫組織化學(xué)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟的復(fù)雜過程，在很大程度上依賴于腫瘤血管生成。目前的研究認(rèn)為：血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascular endothelial growth factor , VEGF)是腫瘤血管 生成過程中作用

29、最強(qiáng)、特異性最高的促血管生長因子1。筆者應(yīng)用免疫組化法檢測乳腺癌組織中 VEGF和MVD的表達(dá)情況，分析 VEGF與微血管密度(miscroressel density, MVD )與乳腺癌各臨床病理參數(shù)的關(guān)系，并為臨床預(yù)后判定和治療提供進(jìn)一步的理論根據(jù)。1材料與方法1.1 標(biāo)本來源 選取我院普外科 19962003年乳腺癌根治術(shù)或改良根治術(shù)切除標(biāo)本54例。病理與臨床資料分析結(jié)果：浸潤T癌40例，其他特殊類型癌 14例。組織學(xué)分級(jí)：1級(jí)9例，n級(jí)32例，出級(jí)13例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者 30例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者24例?；颊呔鶠榕?， 年齡2368歲(平均52歲)，術(shù)前均未經(jīng)任何治療。1.2 主要試劑

30、所用VEGF、CD34單克隆抗體與超敏(鼠)S-P試劑盒，均購自 XX邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。1.3 S-P免疫組化染色 操作步驟從略。其中鼠抗人 VEGF單克隆抗體采用高溫高壓進(jìn)行 抗原修復(fù)。每次試驗(yàn)以 PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，以已知 VEGF陽性的切片作為 陽性對(duì)照。1.4 結(jié)果判定1.4.1 VEGF表達(dá)根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)與染色強(qiáng)度進(jìn)行綜合判定，即按5%以上細(xì)胞漿或細(xì)胞膜呈棕黃色染色者為 VEGF蛋白表達(dá)陽性。1.4.2 MVD計(jì)數(shù) 參照Maeda等報(bào)道 2的方法，即低倍鏡下，全面觀察CD34染色陽性的血管，選取腫瘤微血管密度最高區(qū)域，然后在高倍鏡下（X200）選取5個(gè)不重復(fù)視野進(jìn)行

31、計(jì)數(shù)，求其平均數(shù)即作為該病例的MVD值。統(tǒng)計(jì)的微血管標(biāo)準(zhǔn)：單個(gè)的棕黃色內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)均計(jì)數(shù)為一個(gè)血管；肌層較厚與管腔紅細(xì)胞數(shù) >8個(gè)的血管不被計(jì)數(shù)。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用x 2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)、F檢驗(yàn)與q檢驗(yàn)。2結(jié)果1 .1 VEGF蛋白表達(dá) VEGF蛋白定位于腫瘤細(xì)胞胞漿與胞膜，陽性表達(dá)為胞漿或胞膜染為棕黃色，呈彌漫或散在的顆粒狀。 在54例乳腺癌組織中，VEGF表達(dá)陽性41例（75.93%）, 癌間質(zhì)內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)或呈弱陽性表達(dá)，癌旁組織幾乎不表達(dá)。2 .2 MVD檢測CD34定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿，呈棕黃色。所有的病例的血管內(nèi)皮細(xì) 胞均為CD34染色陽性。癌組織 MVD值111

32、06個(gè)不等，平均為（49.5 ± 25.4）個(gè)。3 .3 VEGF蛋白表達(dá)與 MVD與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系3.1.1 組織學(xué)分級(jí) VEGF表達(dá)陽性率與MVD值隨組織學(xué)分級(jí)增高而逐漸增加。VEGF表達(dá)在I級(jí)與n級(jí)、I級(jí)與出級(jí)間，差異具有顯著性（ P均<0.05）。單因素方差分析顯示， 三組間MVD值比較差異具有非常顯著性（P<0.01）。兩組間比較：1級(jí)與n級(jí)、I級(jí)與出級(jí)間差異有顯著性（P<0.05和P<0.01 ）。而n級(jí)與出級(jí)間 VEGF表達(dá)陽性率與 MVD值差異均 無顯著性（P>0.05）。3.1.2 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移VEGF表達(dá)陽性率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯

33、高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P<0.01）。MVD值在兩組間差異也具有非常顯著性（P<0.01）。3.1.3 組織學(xué)類型 VEGF表達(dá)陽性率和 MVD值在兩個(gè)不同組織學(xué)類型間差異無顯著性 （P>0.05）。4 .4 VEGF表達(dá)與MVD值的關(guān)系 VEGF表達(dá)陽性組的 MVD值明顯高于 VEGF表達(dá)陰 性組（P<0.05）。3討論VEGF是目前研究較為深入的促血管生成因子，對(duì)腫瘤基質(zhì)血管形成與腫瘤生物學(xué)行為均有重要影響。VEGF也稱血管滲透因子（VPF）,是特異性的血管內(nèi)皮細(xì)胞刺激因子，它 與血管內(nèi)皮細(xì)胞的相應(yīng)受體結(jié)合，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，同時(shí)還可促進(jìn)血管內(nèi)物質(zhì)的泄露，導(dǎo)致血

34、管形成和新的基質(zhì)形成，為腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移提供了合適的基礎(chǔ)。大量的實(shí)驗(yàn)研究證實(shí) 35，幾乎所有的惡性腫瘤都表達(dá)較高水平的VEGF ,而在周圍正常組織中無或僅有極低水平的表達(dá)6,因此可以說 VEGF對(duì)腫瘤組織具有良好的特異性。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在54例乳腺癌中，VEGF表達(dá)陽性率占75.93%,而癌旁組織陰性，提示腫瘤細(xì)胞可分泌VEGF ,通過VEGF刺激微血管形成，腫瘤增殖速度加快，反映了惡性腫瘤的特征。 Toi等的研究也證實(shí)了 VEGF表達(dá)與血管生成過程與乳腺癌預(yù)后不良有關(guān)。另外，我們發(fā)現(xiàn) 血管內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)或個(gè)別呈弱陽性表達(dá)，與文獻(xiàn)一些報(bào)道相似，進(jìn)一步證實(shí)了VEGF主要以旁分泌途徑作用于血管內(nèi)

35、皮細(xì)胞的推測。腫瘤細(xì)胞的微血管數(shù)量是患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素。Wei-dner等的研究發(fā)現(xiàn)：乳腺浸潤性癌間質(zhì)中，具有突出的血管成分者更具有侵襲性。本研究顯示 VEGF表達(dá)和MVD值均隨組織學(xué)分級(jí)的增高和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而明顯增加，與多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致，反映了 VEGF、MVD與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系極為密切，提示血管形成是乳腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要條件。已有研究表明VEGF與MVD值呈正相關(guān)。本研究中 46例乳腺癌組織 VEGF陽性表達(dá)組 MVD值明 顯高于陰性表達(dá)組，顯示了腫瘤組織中VEGF狀態(tài)與MVD值的密切關(guān)系，說明 VEGF可以通過促進(jìn)乳腺癌血管形成，從而在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用，這不

36、僅為我們進(jìn)一步認(rèn)識(shí)腫瘤生長、浸潤提供了理論依據(jù)，對(duì)進(jìn)一步探討腫瘤的預(yù)后與治療也具有重 要的意義。綜上所述，VEGF可促進(jìn)乳腺癌血管形成，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移。VEGF、 MVD可作為反映乳腺癌生物學(xué)行為的指標(biāo)之一。聯(lián)合檢測VEGF和MVD可以更好地為臨床判斷預(yù)后與治療提供參考依據(jù)。參考文獻(xiàn)5 Deroanne CF, Hajiton A , Calberg CM , et al.Angiogenesis by fibroblast growth facter4is mediated through an autocrin up-regulation of vascu-lar end

37、othelial growth factor expression.Cancer Res, 1997, 57 (24) :5590-5597.6 Maedak, Chung YS , Orana Y, et al.Prognostic value of vascular en-dothelial growth factor experession in gastric carcinoma.Cancer, 1996, 77:858-863.7 Takanami I , Tanaka F, Hashizume T, et al.Vascular endothelial growth factor

38、and its receptor with angiogenesis and survova in pulmonary ade-nocarcionma.Anti Cancer Res , 1997 , 17 (4A) :2811-2814.8 Suzuki K, Hagashy N , Miyamoto Y , et al.Expression of vascular perme-ability factor vascular endothelial growth factor in human hepatocellular carcinoma.Cancer Res, 1996, 56 (13

39、) :3004-3009.9 Da Silva ID , De Lime GR , Gerbrim LH , et al.Invasive ductal carcinoma fibroadenoma and adjacent breast stroma-angiogenesis:an immunohis-tochemical and morphometricoal study.BullVEGF、CD34在乳腺癌中的表達(dá)研究時(shí)間：2007-11-22 14:19:00來源：論文天下論文網(wǎng)Google提供的廣告四年腦萎縮老年癡呆治好了.naoweisuo.國內(nèi)首個(gè)治療腦萎縮老年癡呆專用藥益智康腦丸

40、原名腦萎縮丸成功問世心腦血管檢測儀 一利康醫(yī)電.swd123.心腦血管檢測儀 一亞健康檢測專家 全科亞健康檢測儀，各類亞健康檢測儀 化學(xué)定量.watson-marlow.全球大型蠕動(dòng)泵和軟管泵廠商擁有專業(yè)的知識(shí)、服務(wù)和產(chǎn)品姜乃光李秋霞單景軍X玉英石青嶺【關(guān)鍵詞】免疫組織化學(xué)【摘要】 目的 探討血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascular endothelial growth factor , VEGF )與乳腺癌血管生成與 臨床病理參數(shù)的關(guān)系。方法 采用S-P免疫組化法，檢測 54例乳腺癌石蠟標(biāo)本中 VEGF蛋白的表達(dá)與平均微血管密度( miscrovessel density, MVD )。 結(jié)果

41、 癌 組織中VEGF表達(dá)陽性率為 75.93%。VEGF表達(dá)與MVD值與組織學(xué)分級(jí) (P<0.05)和淋巴 結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.01),而與組織學(xué)分型無關(guān)(P>0.05) ;VEGF陽性組MVD值明顯高 于VEGF陰性組(t=2.220, P<0.05)。結(jié)論 VEGF與乳腺癌血管生成密切相關(guān)，并能促 進(jìn)其生長、浸潤與轉(zhuǎn)移。檢測 VEGF和MVD可作為反映乳腺癌生物學(xué)行為的指標(biāo)之一。關(guān)鍵詞 乳腺腫瘤 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子血管生成 免疫組織化學(xué)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟的復(fù)雜過程，在很大程度上依賴于腫瘤血管生成。目前的研究認(rèn)為：血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascular

42、 endothelial growth factor , VEGF)是腫瘤血管 生成過程中作用最強(qiáng)、特異性最高的促血管生長因子1。筆者應(yīng)用免疫組化法檢測乳腺癌組織中 VEGF和MVD的表達(dá)情況，分析 VEGF與微血管密度(miscroressel density, MVD )與乳腺癌各臨床病理參數(shù)的關(guān)系，并為臨床預(yù)后判定和治療提供進(jìn)一步的理論根據(jù)。1材料與方法1.1 標(biāo)本來源 選取我院普外科19962003年乳腺癌根治術(shù)或改良根治術(shù)切除標(biāo)本54例。病理與臨床資料分析結(jié)果：浸潤T癌40例，其他特殊類型癌 14例。組織學(xué)分級(jí)：1級(jí)9例，n級(jí)32例，出級(jí)13例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者 30例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者

43、24例?；颊呔鶠榕?， 年齡2368歲(平均52歲)，術(shù)前均未經(jīng)任何治療。1.2 主要試劑 所用VEGF、CD34單克隆抗體與超敏(鼠)S-P試劑盒，均購自 XX邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。1.3 S-P免疫組化染色 操作步驟從略。其中鼠抗人 VEGF單克隆抗體采用高溫高壓進(jìn)行 抗原修復(fù)。每次試驗(yàn)以 PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，以已知 VEGF陽性的切片作為 陽性對(duì)照。1.4 結(jié)果判定1.4.1 VEGF表達(dá) 根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)與染色強(qiáng)度進(jìn)行綜合判定，即按5%以上細(xì)胞漿或細(xì)胞膜呈棕黃色染色者為 VEGF蛋白表達(dá)陽性。1.4.2 MVD計(jì)數(shù) 參照Maeda等報(bào)道 2的方法，即低倍鏡下，全面觀察CD3

44、4染色陽性的血管，選取腫瘤微血管密度最高區(qū)域，然后在高倍鏡下（X200）選取5個(gè)不重復(fù)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，求其平均數(shù)即作為該病例的MVD值。統(tǒng)計(jì)的微血管標(biāo)準(zhǔn)：單個(gè)的棕黃色內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)均計(jì)數(shù)為一個(gè)血管；肌層較厚與管腔紅細(xì)胞數(shù) >8個(gè)的血管不被計(jì)數(shù)。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用x 2僉驗(yàn)、t檢驗(yàn)、F檢驗(yàn)與q檢驗(yàn)。2結(jié)果1 .1 VEGF蛋白表達(dá) VEGF蛋白定位于腫瘤細(xì)胞胞漿與胞膜，陽性表達(dá)為胞漿或胞膜染為棕黃色，呈彌漫或散在的顆粒狀。 在54例乳腺癌組織中，VEGF表達(dá)陽性41例（75.93%）, 癌間質(zhì)內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)或呈弱陽性表達(dá)，癌旁組織幾乎不表達(dá)。2 .2 MVD檢測CD34定位于血管

45、內(nèi)皮細(xì)胞胞漿，呈棕黃色。所有的病例的血管內(nèi)皮細(xì) 胞均為CD34染色陽性。癌組織 MVD值11106個(gè)不等，平均為（49.5 =25.4）個(gè)。3 .3 VEGF蛋白表達(dá)與MVD與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系3.1.1 組織學(xué)分級(jí) VEGF表達(dá)陽性率與 MVD值隨組織學(xué)分級(jí)增高而逐漸增加。VEGF表達(dá)在I級(jí)與n級(jí)、I級(jí)與出級(jí)間，差異具有顯著性（P均<0.05）。單因素方差分析顯示，三組間MVD值比較差異具有非常顯著性（P<0.01）。兩組間比較：1級(jí)與n級(jí)、I級(jí)與出級(jí) 間差異有顯著性（P<0.05和P<0.01 ）。而n級(jí)與出級(jí)間 VEGF表達(dá)陽性率與 MVD值差異 均無顯著性（P

46、>0.05）。3.1.2 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 VEGF表達(dá)陽性率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P<0.01）。MVD值在兩組間差異也具有非常顯著性（P<0.01）。3.1.3 組織學(xué)類型 VEGF表達(dá)陽性率和 MVD值在兩個(gè)不同組織學(xué)類型間差異無顯著性 （P>0.05）。4 .4 VEGF表達(dá)與MVD值的關(guān)系 VEGF表達(dá)陽性組的 MVD值明顯高于 VEGF表達(dá)陰 性組（P<0.05）。3討論VEGF是目前研究較為深入的促血管生成因子，對(duì)腫瘤基質(zhì)血管形成與腫瘤生物學(xué)行為均有重要影響。VEGF也稱血管滲透因子(VPF),是特異性的血管內(nèi)皮細(xì)胞刺激因子，它 與血管內(nèi)皮細(xì)胞的相應(yīng)受體結(jié)合，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，同時(shí)還可促進(jìn)血管內(nèi)物質(zhì)的泄露，導(dǎo)致血管形成和新的基質(zhì)形成，為腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移提供了合適的基礎(chǔ)。大量的實(shí)驗(yàn)研究證實(shí) 35，幾乎所有的惡性腫瘤都表達(dá)較高水平的VEGF ,而在周圍正常組織中無或僅有極低水平的表達(dá)6,因此可以說 VEGF對(duì)腫瘤組織具有良好的特異性。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在54例乳腺癌中，VEGF表達(dá)陽性率占75.93%,而癌旁組織陰性，提示腫瘤細(xì) 胞可分泌VEGF ,通過VEGF刺激微血管形成，腫瘤增殖速度加快，反映了惡性腫瘤的特征。 Toi等的研究也證實(shí)了V