臨床檢驗(yàn)技術(shù)床旁分析技術(shù)ppt課件

1、第十七章床旁分析技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)lPOCTPOCT的概念的概念: :“POCTPOCT的組成包括：的組成包括： point point 地點(diǎn)、時(shí)間地點(diǎn)、時(shí)間) ) care care保健、照料保健、照料 testing testing檢驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)、實(shí)驗(yàn) point-of-care testing point-of-care testing即即: :即時(shí)檢測(cè)或床邊檢測(cè)即時(shí)檢測(cè)或床邊檢測(cè), ,主要主要是指可以遠(yuǎn)離中心實(shí)驗(yàn)室，在患者身邊快速進(jìn)展并能快速獲是指可以遠(yuǎn)離中心實(shí)驗(yàn)室，在患者身邊快速進(jìn)展并能快速獲取準(zhǔn)確結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室檢查取準(zhǔn)確結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室檢查 lPOCTPOCT的運(yùn)用的運(yùn)用 早期：尿

2、液分析、血糖分析早期：尿液分析、血糖分析 目前：血?dú)夥治?、電解質(zhì)分析、血液目前：血?dú)夥治?、電解質(zhì)分析、血液分析、藥物運(yùn)用監(jiān)測(cè)、抗凝測(cè)定、心肌損分析、藥物運(yùn)用監(jiān)測(cè)、抗凝測(cè)定、心肌損傷標(biāo)志物檢測(cè)、甲狀腺激素檢測(cè)傷標(biāo)志物檢測(cè)、甲狀腺激素檢測(cè)lPOCTPOCT采用的主要技術(shù)采用的主要技術(shù): :電化學(xué)分析電化學(xué)分析酶學(xué)分析酶學(xué)分析免疫分析免疫分析熒光分析熒光分析層析技術(shù)層析技術(shù)酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析 實(shí)驗(yàn)儀器小型化實(shí)驗(yàn)儀器小型化 操作方法簡(jiǎn)單化操作方法簡(jiǎn)單化 結(jié)果報(bào)告即時(shí)化結(jié)果報(bào)告即時(shí)化 lPOCTPOCT儀器的主要特點(diǎn)儀器的主要特點(diǎn): :第一節(jié)第一節(jié) 免疫膠體金分析技術(shù)免疫膠體金分析技術(shù)一、根本原理

3、一、根本原理 以膠體金標(biāo)志結(jié)合抗原抗體反響的一種新型以膠體金標(biāo)志結(jié)合抗原抗體反響的一種新型的免疫標(biāo)志分析技術(shù)。的免疫標(biāo)志分析技術(shù)。 斑點(diǎn)免疫金滲濾分析法斑點(diǎn)免疫金滲濾分析法DIGFADIGFA免疫層析法免疫層析法ICAICA u檢測(cè)原理檢測(cè)原理:膠體金標(biāo)志物膠體金標(biāo)志物膠體金膠體金斑點(diǎn)免疫金滲濾分析法斑點(diǎn)免疫金滲濾分析法DIGFA 以硝酸纖維素膜為載體，利用微孔濾膜的可過(guò)濾性，以硝酸纖維素膜為載體，利用微孔濾膜的可過(guò)濾性，使抗原抗體反響和洗滌在一特殊的滲濾安裝上以液體濾過(guò)使抗原抗體反響和洗滌在一特殊的滲濾安裝上以液體濾過(guò)膜的方式迅速完成膜的方式迅速完成 免疫滲濾安裝及操作表示圖免疫滲濾安裝及操

4、作表示圖 以金膠粒或著色乳膠粒等有色粒子作標(biāo)志物，層析條以金膠粒或著色乳膠粒等有色粒子作標(biāo)志物，層析條經(jīng)過(guò)多種資料復(fù)合而成，多用于定性的檢測(cè)，也可半定量經(jīng)過(guò)多種資料復(fù)合而成，多用于定性的檢測(cè)，也可半定量分析。分析。免疫層析法免疫層析法ICA免疫層析法檢測(cè)試劑條構(gòu)造免疫層析法檢測(cè)試劑條構(gòu)造 B C T R A 免疫層析實(shí)驗(yàn)原理表示圖吸水資料吸水資料免疫金復(fù)合物免疫金復(fù)合物 測(cè)試區(qū)測(cè)試區(qū) 參照區(qū)參照區(qū)末段吸水資料末段吸水資料層析方向?qū)游龇较騯檢測(cè)特點(diǎn)：檢測(cè)特點(diǎn)：試劑和樣本用量極小試劑和樣本用量極小不需貴重儀器不需貴重儀器沒(méi)有污染性物質(zhì)沒(méi)有污染性物質(zhì)檢測(cè)速度快檢測(cè)速度快u技術(shù)關(guān)鍵步驟：技術(shù)關(guān)鍵步驟：

5、膠體金制備膠體金制備蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)(第二抗體第二抗體)的膠體金標(biāo)志的膠體金標(biāo)志二、膠體金的制備二、膠體金的制備復(fù)原法復(fù)原法 u復(fù)原劑：復(fù)原劑： 檸檬酸鈉、鞣酸、抗壞血酸、硼氫化鈉等檸檬酸鈉、鞣酸、抗壞血酸、硼氫化鈉等u制備方法及本卷須知：制備方法及本卷須知：方法：在加熱攪拌器上將方法：在加熱攪拌器上將0.01氯金酸水溶液氯金酸水溶液加熱沸騰后，滴加一定量的加熱沸騰后，滴加一定量的1檸檬酸三鈉溶檸檬酸三鈉溶液，煮沸約液，煮沸約15min后冷卻即可。檸檬酸三鈉用后冷卻即可。檸檬酸三鈉用量從低到高可獲得相應(yīng)膠體金的顏色從藍(lán)、紫量從低到高可獲得相應(yīng)膠體金的顏色從藍(lán)、紫到紅、橙。到紅、橙。本卷須知：留意所

6、用玻璃容器的清潔及硅化本卷須知：留意所用玻璃容器的清潔及硅化 三、抗體蛋白的膠體金標(biāo)志三、抗體蛋白的膠體金標(biāo)志u標(biāo)志方式標(biāo)志方式: 靜電吸附靜電吸附 在弱堿環(huán)境下膠體金顆粒帶負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)分在弱堿環(huán)境下膠體金顆粒帶負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)分子中堿性氨基酸帶正電荷的基團(tuán)構(gòu)成靜電結(jié)合，屬于非子中堿性氨基酸帶正電荷的基團(tuán)構(gòu)成靜電結(jié)合，屬于非共價(jià)結(jié)合。共價(jià)結(jié)合。 u影響蛋白質(zhì)與膠體金的結(jié)合的要素影響蛋白質(zhì)與膠體金的結(jié)合的要素 蛋白質(zhì)所帶電荷蛋白質(zhì)所帶電荷溶液的溶液的pH蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量膠體金顆粒的大小膠體金顆粒的大小蛋白質(zhì)與膠體金的比例蛋白質(zhì)與膠體金的比例溶液的離子強(qiáng)度溶液的離子

7、強(qiáng)度u膠體金標(biāo)志的關(guān)鍵步驟：膠體金標(biāo)志的關(guān)鍵步驟：(一一)待標(biāo)志抗體蛋白溶液的預(yù)備待標(biāo)志抗體蛋白溶液的預(yù)備 去無(wú)機(jī)離子和蛋白聚合物去無(wú)機(jī)離子和蛋白聚合物(二二)待標(biāo)志膠體金溶液的預(yù)備待標(biāo)志膠體金溶液的預(yù)備 適宜的適宜的pH和離子強(qiáng)度和離子強(qiáng)度 (三三)標(biāo)志抗體蛋白最適用量確實(shí)定標(biāo)志抗體蛋白最適用量確實(shí)定以最低穩(wěn)定用量的以最低穩(wěn)定用量的120為標(biāo)志抗體蛋白的最適用量為標(biāo)志抗體蛋白的最適用量 (四四)膠體金與抗體蛋白的結(jié)合膠體金與抗體蛋白的結(jié)合 電磁攪拌、參與穩(wěn)定劑電磁攪拌、參與穩(wěn)定劑(五五)膠體金標(biāo)志抗體蛋白的純化膠體金標(biāo)志抗體蛋白的純化 離心法和凝膠過(guò)濾法離心法和凝膠過(guò)濾法 四、免疫膠體金分析

8、技術(shù)任床邊檢測(cè)中的運(yùn)用四、免疫膠體金分析技術(shù)任床邊檢測(cè)中的運(yùn)用第二節(jié)干化學(xué)分析技術(shù)第二節(jié)干化學(xué)分析技術(shù) l定義：定義：干化學(xué)分析干化學(xué)分析(dry chemical assav) (dry chemical assav) 指建立在某些特殊固相支持物上的檢測(cè)分指建立在某些特殊固相支持物上的檢測(cè)分析技術(shù)，通常將測(cè)定某些工程所必需的全部或析技術(shù)，通常將測(cè)定某些工程所必需的全部或部分試劑固定在具有一定構(gòu)造的載體上，經(jīng)過(guò)部分試劑固定在具有一定構(gòu)造的載體上，經(jīng)過(guò)滴加液態(tài)樣品溶解載體上的試劑，并與樣品中滴加液態(tài)樣品溶解載體上的試劑，并與樣品中的待測(cè)成分發(fā)生反響，在支持物的部分區(qū)域產(chǎn)的待測(cè)成分發(fā)生反響，在支持

9、物的部分區(qū)域產(chǎn)生信號(hào)變化，再經(jīng)過(guò)檢測(cè)以獲取待測(cè)物的濃度。生信號(hào)變化，再經(jīng)過(guò)檢測(cè)以獲取待測(cè)物的濃度。 l檢測(cè)原理：檢測(cè)原理：反射光度法反射光度法差示電位法差示電位法l特特 點(diǎn)：點(diǎn)： 速度快、檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度較高速度快、檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度較高可采用儀器進(jìn)展檢測(cè)可采用儀器進(jìn)展檢測(cè)一、根本原理一、根本原理( (一一) )雙層膜法：雙層膜法：特點(diǎn)：特點(diǎn)：經(jīng)過(guò)反射光度計(jì)測(cè)定其顏色改動(dòng)，從而計(jì)算待測(cè)物質(zhì)的含量經(jīng)過(guò)反射光度計(jì)測(cè)定其顏色改動(dòng)，從而計(jì)算待測(cè)物質(zhì)的含量 雙層膜法不能排除樣品中某些物質(zhì)對(duì)吸光度的干擾雙層膜法不能排除樣品中某些物質(zhì)對(duì)吸光度的干擾主要運(yùn)用于尿生化分析主要運(yùn)用于尿生化分析 試劑試劑( (二

10、二) )多層膜法多層膜法采用反射光度法采用反射光度法 差示電位法差示電位法u檢測(cè)原理：檢測(cè)原理：u特點(diǎn)：特點(diǎn)：集光學(xué)、現(xiàn)代化學(xué)、化學(xué)計(jì)量學(xué)、酶學(xué)工程和計(jì)算機(jī)技術(shù)集光學(xué)、現(xiàn)代化學(xué)、化學(xué)計(jì)量學(xué)、酶學(xué)工程和計(jì)算機(jī)技術(shù)于一體于一體定量的準(zhǔn)確度和精細(xì)度曾經(jīng)到達(dá)了常規(guī)濕化學(xué)的程度，部定量的準(zhǔn)確度和精細(xì)度曾經(jīng)到達(dá)了常規(guī)濕化學(xué)的程度，部分甚至到達(dá)了參考方法的程度分甚至到達(dá)了參考方法的程度1 1基于反射光度法的多層膜基于反射光度法的多層膜 分布層分布層 光漫射層光漫射層 輔助試劑層輔助試劑層 試劑層試劑層 又稱浸透分散層，由高密度多孔聚合物組成，其特點(diǎn)是可又稱浸透分散層，由高密度多孔聚合物組成，其特點(diǎn)是可以快速

11、吸附液體樣品并使之迅速、均勻地浸透，并可阻止以快速吸附液體樣品并使之迅速、均勻地浸透，并可阻止一些顆粒成分一些顆粒成分(如血細(xì)胞、結(jié)晶如血細(xì)胞、結(jié)晶)和大分子和大分子(如蛋白質(zhì)如蛋白質(zhì))向下向下浸透，因此能透過(guò)分布層的根本上是無(wú)蛋白濾液浸透，因此能透過(guò)分布層的根本上是無(wú)蛋白濾液 為白色不透明層，由反射系數(shù)為白色不透明層，由反射系數(shù)95的物質(zhì)如的物質(zhì)如BaSO4，或，或TiO2構(gòu)成。光漫射層的特點(diǎn)是可以隔離分布層中有色物構(gòu)成。光漫射層的特點(diǎn)是可以隔離分布層中有色物質(zhì)的干擾，使反射光不受影響；同時(shí)因其具有高反射系數(shù)，質(zhì)的干擾，使反射光不受影響；同時(shí)因其具有高反射系數(shù)，可為下面的試劑層提供反射背景，

12、使入射在光漫射層上的可為下面的試劑層提供反射背景，使入射在光漫射層上的光最大限制地反射回去，以減小因光吸收所引起的丈量誤光最大限制地反射回去，以減小因光吸收所引起的丈量誤差差 主要作用是去除血清中的內(nèi)源性干擾物，從而使檢測(cè)結(jié)果主要作用是去除血清中的內(nèi)源性干擾物，從而使檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確，還可運(yùn)用親和過(guò)濾、凝膠過(guò)濾、免疫沉淀等方更加準(zhǔn)確，還可運(yùn)用親和過(guò)濾、凝膠過(guò)濾、免疫沉淀等方法，有選擇地把待測(cè)物和干擾物分別。是多層膜法中保證法，有選擇地把待測(cè)物和干擾物分別。是多層膜法中保證測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確、誤差更小的一個(gè)非常重要的構(gòu)造測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確、誤差更小的一個(gè)非常重要的構(gòu)造又稱為指示劑層或反響層，由親水性多聚

13、物構(gòu)成，該層固又稱為指示劑層或反響層，由親水性多聚物構(gòu)成，該層固定了工程檢測(cè)時(shí)所需的部分或全部試劑。用于檢測(cè)不同工定了工程檢測(cè)時(shí)所需的部分或全部試劑。用于檢測(cè)不同工程的干片，其固定的試劑成分不同程的干片，其固定的試劑成分不同 起支持作用，為光學(xué)透明的塑料基片，允許入射光和反射起支持作用，為光學(xué)透明的塑料基片，允許入射光和反射光完全透過(guò)光完全透過(guò) 2 2基于差示電位法的多層膜基于差示電位法的多層膜 構(gòu)造：兩個(gè)構(gòu)造：兩個(gè)ISE，都有，都有5層膜構(gòu)造層膜構(gòu)造 測(cè)定時(shí)取一定量的血測(cè)定時(shí)取一定量的血清參與到樣品電極的加樣清參與到樣品電極的加樣槽中，再取等量的參比液槽中，再取等量的參比液加人參比電極的加樣

14、槽中，加人參比電極的加樣槽中，經(jīng)過(guò)電位計(jì)來(lái)測(cè)定這兩個(gè)經(jīng)過(guò)電位計(jì)來(lái)測(cè)定這兩個(gè)電極的差示電位。假設(shè)樣電極的差示電位。假設(shè)樣品與參比液中的離子活度品與參比液中的離子活度一樣，那么差示電位為零；一樣，那么差示電位為零；假設(shè)離子活度不同，那么假設(shè)離子活度不同，那么可根據(jù)差示電位的值計(jì)算可根據(jù)差示電位的值計(jì)算待測(cè)離子的活度。待測(cè)離子的活度。 測(cè)定方法：測(cè)定方法：特點(diǎn)：干片是一次性運(yùn)用的，消除了電極老化和特點(diǎn)：干片是一次性運(yùn)用的，消除了電極老化和“蛋蛋白質(zhì)中毒的缺陷，可用于干化學(xué)自動(dòng)生化分析儀。白質(zhì)中毒的缺陷，可用于干化學(xué)自動(dòng)生化分析儀。二、干化學(xué)分析儀二、干化學(xué)分析儀干式尿液分析儀干式尿液分析儀 便攜式血糖分析儀便攜式血糖分析儀 三、本卷須知三、本卷須知試劑條應(yīng)放置在允許的溫度條件下保管。試劑條應(yīng)放置在允許的溫度條件下保管。留意有效期，并在效期內(nèi)用質(zhì)控物進(jìn)展監(jiān)控。留意有效