實(shí)驗(yàn)二油鏡的使用細(xì)菌的單染色及革蘭氏染色

1、（一（一)、油鏡的工作原理、油鏡的工作原理增加照明強(qiáng)度增加照明強(qiáng)度當(dāng)光線由反光鏡通過玻片當(dāng)光線由反光鏡通過玻片與鏡頭之間的空氣時(shí)，由與鏡頭之間的空氣時(shí)，由于空氣與玻片的密度不同，于空氣與玻片的密度不同，有些光線會(huì)因折射或全反有些光線會(huì)因折射或全反射，不能進(jìn)入鏡頭，降低射，不能進(jìn)入鏡頭，降低了視野的照明度；若中間了視野的照明度；若中間的介質(zhì)是一層油（的介質(zhì)是一層油（其折射其折射率與玻片的相近率與玻片的相近），則幾），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視乎不發(fā)生折射，增加了視野的進(jìn)光量，從而使物象野的進(jìn)光量，從而使物象更加清晰。更加清晰。增加顯微鏡的分辨率：增加顯微鏡的分辨率： D=/2NA=/2nsin(

2、/2 ) D：分辨率：分辨率NA：物鏡的數(shù)值孔徑值：物鏡的數(shù)值孔徑值 ：可見光的波長(zhǎng)（平均：可見光的波長(zhǎng)（平均0.550.55 m) m) n: n: 物鏡和被檢標(biāo)本間介物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率質(zhì)的折射率 ：鏡口角（即入射角）：鏡口角（即入射角）顯微觀察顯微觀察低倍鏡觀察低倍鏡觀察高倍鏡觀察高倍鏡觀察油鏡觀察油鏡觀察在待觀察的樣品區(qū)域滴加香柏油，從側(cè)面注視，用在待觀察的樣品區(qū)域滴加香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地降下，使油鏡浸在鏡油中。粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地降下，使油鏡浸在鏡油中。顯微鏡用畢后的處理顯微鏡用畢后的處理上升鏡筒，取下載玻片；上升鏡筒，取下載玻片；用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡

3、油，然后用擦鏡紙沾取少量用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡紙沾取少量乙醇乙醚洗液擦去鏡頭上殘留的油跡，最后用干凈的乙醇乙醚洗液擦去鏡頭上殘留的油跡，最后用干凈的擦鏡紙擦去殘留的乙醇乙醚洗液；擦鏡紙擦去殘留的乙醇乙醚洗液；用擦鏡紙清潔物鏡及目鏡，用綢布清潔顯微鏡的金屬用擦鏡紙清潔物鏡及目鏡，用綢布清潔顯微鏡的金屬部件；部件；將鏡體各部分復(fù)原。將鏡體各部分復(fù)原。（二）簡(jiǎn)單染色法（二）簡(jiǎn)單染色法目的要求目的要求學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的簡(jiǎn)單學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法；染色法；初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征；初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征；鞏固顯微鏡（油鏡）的使用方法和無菌

4、操作技術(shù)。鞏固顯微鏡（油鏡）的使用方法和無菌操作技術(shù)。基本原理基本原理借助物理因素（如：細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對(duì)染料的毛細(xì)現(xiàn)借助物理因素（如：細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對(duì)染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用等）和化學(xué)因素（如：正負(fù)離子象、滲透、吸附作用等）和化學(xué)因素（如：正負(fù)離子之間的相互吸引等）的作用而進(jìn)行的。之間的相互吸引等）的作用而進(jìn)行的。實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)器材菌種菌種大腸桿菌大腸桿菌約約24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌12-18h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物藤黃八疊球菌藤黃八疊球菌約約24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物染色劑染色劑草酸銨結(jié)晶紫染液草酸銨結(jié)晶紫染液番紅染

5、液番紅染液儀器或其他用具儀器或其他用具顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、無菌水等。顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、無菌水等。操操作作步步驟驟涂涂 片片干干 燥燥固固 定定 染染 色色 鏡鏡 檢檢 水水 洗洗 干干 燥燥實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果根據(jù)觀察結(jié)果，繪出細(xì)菌形態(tài)圖。根據(jù)觀察結(jié)果，繪出細(xì)菌形態(tài)圖。思考題（思考題（書書P28五、五、2.（2）（）（3）為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察？為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察？如果你的涂片未經(jīng)加熱固定，將會(huì)出現(xiàn)什么問題？如如果你的涂片未經(jīng)加熱固定，將會(huì)出現(xiàn)什么問題？如果加熱溫度過高、時(shí)間太長(zhǎng)，又會(huì)怎樣呢？果加熱溫度過高、時(shí)間太長(zhǎng)，又會(huì)怎樣呢？（三）

6、革蘭氏染色法（三）革蘭氏染色法目的要求目的要求學(xué)習(xí)并初步掌握革蘭氏染色法；學(xué)習(xí)并初步掌握革蘭氏染色法；了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。要性。實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)器材菌種菌種枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌12-18h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物大腸桿菌大腸桿菌約約24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物藤黃八疊球菌藤黃八疊球菌約約24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物染色劑染色劑草酸銨結(jié)晶紫染液草酸銨結(jié)晶紫染液盧戈氏碘液盧戈氏碘液95%乙醇乙醇番紅染色液番紅染色液儀器或其他用具儀器或其他用具顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、無菌水等

7、。顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、無菌水等。操操作作步步驟驟藤黃八疊菌純培養(yǎng)的鏡下形態(tài)（革蘭氏染色）大腸桿菌純培養(yǎng)的鏡下形態(tài)（革蘭氏染色）實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果列表說明你所觀察到的細(xì)菌形狀、顏色和革列表說明你所觀察到的細(xì)菌形狀、顏色和革蘭氏染色反應(yīng)蘭氏染色反應(yīng)。 菌菌 種種 形形 態(tài)態(tài) 顏顏 色色 革蘭氏鑒定革蘭氏鑒定思考題（思考題（書書P30五、五、2.（1）（）（2）（）（6）你認(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會(huì)影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其你認(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會(huì)影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？現(xiàn)有一株細(xì)菌寬度明顯大于大腸桿菌的粗壯桿菌，請(qǐng)現(xiàn)有一株細(xì)菌寬度明顯大于大腸桿菌的粗壯桿菌，請(qǐng)你鑒定其革蘭氏染色反應(yīng)。你怎樣運(yùn)用大腸桿菌和金你鑒定其革蘭氏染色反應(yīng)。你怎樣運(yùn)用大腸桿菌和金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌株進(jìn)行涂片染色，以證明你的黃色葡