微生物復(fù)習(xí)提綱

1、應(yīng)用微生物技術(shù)復(fù)習(xí)提綱1、 微生物學(xué)的發(fā)展史，重要人物所做的突出貢獻(xiàn)史前時(shí)期：中國(guó)古代農(nóng)民用谷物釀酒（8000年前至1676）初階階段：荷蘭人列文虎克，準(zhǔn)確地描述了微生物的形態(tài)。奠基時(shí)期：巴斯德：微生物學(xué)的奠基人。他把微生物學(xué)的研究從形態(tài)描述推進(jìn)到生理學(xué)研究水平，并開(kāi)創(chuàng)了尋找病原微生物的興盛時(shí)期，使微生物學(xué)開(kāi)始以獨(dú)立的學(xué)科形成。貢獻(xiàn)：(1)曲頸瓶實(shí)驗(yàn)徹底否定了“自然發(fā)生”學(xué)說(shuō)；（2）證實(shí)了發(fā)酵是由微生物引起的。（3）將病原菌減毒，使其轉(zhuǎn)變?yōu)橐呙?。（狂犬疫苗）科赫：?）發(fā)明了固體培養(yǎng)基制備方法，并建立通過(guò)了固體培養(yǎng)分離純化微生物的技術(shù)；（2）用自創(chuàng)的方法分離了許多病原菌，如炭疽芽孢桿菌、結(jié)核分

2、枝桿菌等；（3）提出了“科赫法則”；（4）創(chuàng)立了許多顯微鏡技術(shù)，如細(xì)菌鞭毛染色法、懸滴培養(yǎng)法等。發(fā)展階段：布赫納：用酵母菌無(wú)細(xì)胞壓榨汁將葡萄糖進(jìn)行酒精發(fā)酵獲得成功，發(fā)現(xiàn)了微生物酶的重要作用，從此將微生物學(xué)推進(jìn)到了生化研究的階段。此后，微生物生理、生化等研究得到了迅速的發(fā)展弗萊明：發(fā)現(xiàn)點(diǎn)青霉能抑制葡萄球菌的生長(zhǎng)，揭示了微生物間的拮抗關(guān)系，并發(fā)現(xiàn)了青霉素。2、 細(xì)菌的形態(tài)、細(xì)胞結(jié)構(gòu)功能和繁殖方式、生長(zhǎng)曲線細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)功能：細(xì)菌是具有細(xì)胞壁的一類單細(xì)胞原核微生物，形體微小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。無(wú)成形細(xì)胞核，無(wú)核膜和核仁，除蛋白體外無(wú)其他細(xì)胞器，在適宜的條件下有相對(duì)穩(wěn)定的形態(tài)與結(jié)構(gòu)，分布廣，種類多，與人關(guān)系

3、密切。細(xì)菌的形態(tài)：,通常以微米(Micrometer,um;1um=1/1000mm)作為測(cè)量它們大小的單位 按其外形主要有三類 1.球菌：呈圓球形或近似圓球形，有的呈矛頭狀或腎狀。單個(gè)球菌的直徑約在0.81.2um左右。又稱化膿性球菌（ 1雙球菌，2鏈球菌 3.四聯(lián)球菌和八疊球菌4.葡萄球菌）肺炎雙球菌，溶血性鏈球菌， 藤黃八疊菌，金黃色葡萄球菌 2桿菌：各種桿菌的大小，長(zhǎng)短，彎度，粗細(xì)差異較大。大多數(shù)桿菌中等大小，長(zhǎng)（2-5微米，寬0.3-1微米）。多數(shù)呈直桿狀，大的桿菌如炭疽桿菌(35um×1.01.3um),小的如野兔熱桿菌 (0.30.7um×0.2um)。介于球

4、菌和桿菌之間的，稱為球桿菌。兩端多呈鈍圓形，少數(shù)兩端平齊（炭疽桿菌），兩端尖細(xì)（梭桿菌） 末端膨大呈棒狀（白喉?xiàng)U菌）排列一般分散存在，無(wú)一定排列形式， 偶有成對(duì)或鏈狀，（枯草芽孢桿菌），呈鏈狀，個(gè)別呈特殊的排列呈八字狀或柵欄狀，（白喉?xiàng)U菌）。 1.弧菌(Vibrio)菌體只有一個(gè)彎 曲呈弧狀或逗點(diǎn)狀。如霍亂弧菌偏端生鞭毛3螺旋菌：菌體彎曲，可分為： 2.螺菌(Spirillum)菌體有數(shù)個(gè)彎 曲。如鼠咬熱螺菌。 細(xì)菌形態(tài)可受各種理化因素的影響，一般說(shuō)來(lái)，在生長(zhǎng)條件適宜時(shí)培養(yǎng)818小時(shí)的細(xì)菌形態(tài)較為細(xì)菌形態(tài)較為典型型;幼齡細(xì)菌形體較長(zhǎng);細(xì)菌衰老時(shí)或在陳舊培養(yǎng)物中，或環(huán)境中有不適合于細(xì)菌生長(zhǎng)的物質(zhì)

5、(如藥物、抗生素、抗體、過(guò)高的鹽分等)時(shí)，細(xì)菌常常出現(xiàn)不規(guī)則的形態(tài)，表現(xiàn)為多形性(Pleomorphism),或呈梨形、氣球狀、絲狀等，稱為衰退型(Involutionform),不易識(shí)別。觀察細(xì)菌形態(tài)和大小特征時(shí)，應(yīng)注意來(lái)自機(jī)體或環(huán)境中各種因素所導(dǎo)致的細(xì)菌形態(tài)變化細(xì)菌的結(jié)構(gòu)：細(xì)菌的結(jié)構(gòu)對(duì)細(xì)菌的生存，致病性和免疫性等均有一定作用。分為基本結(jié)構(gòu)和特殊結(jié)構(gòu)，各種細(xì)菌共有的結(jié)構(gòu)稱為基本結(jié)構(gòu)，包括細(xì)胞壁，細(xì)胞膜，細(xì)胞質(zhì)和核質(zhì)，將某些細(xì)菌在一定條件下所持有的結(jié)構(gòu)稱為特殊結(jié)構(gòu)，包括鞭毛，芽孢，菌毛和莢膜。基本結(jié)構(gòu)：1細(xì)胞壁，細(xì)胞壁為細(xì)菌表面比較復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，是一層厚度平均為15-30納米，質(zhì)量均勻的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)

6、，可承受細(xì)胞內(nèi)強(qiáng)大的滲透壓而不被破壞。細(xì)胞壁緊貼細(xì)胞膜外，堅(jiān)韌而有彈性。（主要成分是肽聚糖又稱黏肽，由肽聚糖單體聚合而成的網(wǎng)狀大分子，單體由（N-乙酰葡萄糖胺（G）和N-乙酰胞壁酸（M）兩種氨基糖經(jīng)-1，4糖苷鍵連接形成的多糖骨架，在N-乙酰胞壁酸分子上連接四肽側(cè)鏈，肽鏈之間再由肽橋或者肽鏈聯(lián)系起來(lái)，組成一個(gè)機(jī)械性很強(qiáng)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。各種細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖的支架均相同，四肽側(cè)鏈的組成及其連接方式隨菌種而異）細(xì)胞壁的功能：細(xì)菌細(xì)胞壁堅(jiān)韌而富有彈性，保護(hù)細(xì)菌能承受胞內(nèi)巨大滲透壓，而不被破壞，與細(xì)胞膜共同參與細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)的交換，細(xì)胞壁可允許水分及直徑小于1納米的可溶性小分子自由通過(guò)，革蘭氏陽(yáng)性菌：肽聚糖

7、（基本結(jié)構(gòu)），包括聚糖骨架，四肽側(cè)鏈，五肽交聯(lián)橋 磷壁酸（特殊成份），包括膜磷壁酸，壁磷壁酸 表面蛋白（特殊成分），包括SPA,M蛋白 三維立體結(jié)構(gòu)，磷壁酸，抗原性強(qiáng)，是革蘭氏陽(yáng)性的重要表面抗原，調(diào)節(jié)離子通過(guò)黏肽層中起到作用，革蘭氏陰性菌:肽聚糖（基本結(jié)構(gòu)），包括聚糖骨架，四肽側(cè)鏈 外膜（特殊成分），二維平面結(jié)構(gòu)。 外膜層位于細(xì)胞壁外側(cè)，由脂蛋白，脂質(zhì)雙層，脂多糖三部分組成。細(xì)胞膜：又稱細(xì)胞質(zhì)膜，位于細(xì)胞壁內(nèi)側(cè)，緊包在細(xì)胞質(zhì)外的具有彈性的半滲透性生物膜，主要由磷脂和蛋白質(zhì)組成。在電子顯微鏡下觀察，顯雙層結(jié)構(gòu)。磷脂分子由一個(gè)帶正電荷且能溶于水的極性頭（磷酸端）和一個(gè)不帶電荷，不溶于水的非極性尾（

8、烴端）構(gòu)成。極性頭朝向膜的內(nèi)外兩個(gè)表面，呈親水性，非極性端則埋藏在膜的內(nèi)層，形成磷脂雙分子層，其中含有各種功能的蛋白質(zhì)。功能：具有選擇性通透作用，與細(xì)胞壁共同完成菌體內(nèi)外物質(zhì)的交換；膜上有多種呼吸酶，參與細(xì)胞的呼吸過(guò)程，膜上有多種合成酶，參與生物合成過(guò)程細(xì)胞質(zhì)：又稱原生質(zhì)，為無(wú)色透明黏稠的膠狀物，基本成分是水，糖，蛋白質(zhì)，脂類，核酸，少量無(wú)機(jī)鹽，是細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境，內(nèi)含豐富的酶系統(tǒng)，是細(xì)胞合成和分解代謝的主要場(chǎng)所。細(xì)胞質(zhì)中還有多種重要的結(jié)構(gòu)質(zhì)粒：是染色體外的遺傳物質(zhì)，游離于細(xì)胞質(zhì)中，閉環(huán)雙鏈DNA分子，分子量小于染色體（脫氧氫核酸），攜帶某些特殊的遺傳信息，編碼。如細(xì)菌的耐藥性，產(chǎn)抗生素，性菌毛等

9、一些次要性狀，能進(jìn)行獨(dú)立復(fù)制，非細(xì)菌生存所必需，失去質(zhì)粒的細(xì)菌能正常存活。核糖體：又稱核蛋白體細(xì)菌的繁殖方式：生長(zhǎng)曲線：曲線形成的條件是少數(shù)細(xì)菌接種到固定容積的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)接種一段時(shí)間后，菌數(shù)迅速增長(zhǎng)（如圖BC段），此時(shí)種群數(shù)量變化與_J_型曲線相似，原因是營(yíng)養(yǎng)充足，培養(yǎng)條件適宜。（3）若此細(xì)菌最初的數(shù)目是n，每20min繁殖一代，調(diào)整期后2h，發(fā)酵罐中的菌數(shù)為_(kāi)64n_；（4）AD段與種群數(shù)量變化的_S_型曲線相似，請(qǐng)解釋曲線C點(diǎn)E點(diǎn)的成因： 隨著營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗，有害代謝產(chǎn)物的積累，pH的變化等，細(xì)菌的分裂速度下降，死亡細(xì)胞的數(shù)目增加，整個(gè)培養(yǎng)基中新增加的細(xì)胞數(shù)目和死亡的細(xì)胞數(shù)目達(dá)到動(dòng)態(tài)

10、平衡（5）CD段表示此細(xì)菌群體的生長(zhǎng)進(jìn)入_穩(wěn)定_期，該期是積累_次級(jí)代謝_產(chǎn)物的關(guān)鍵時(shí)期。（6）種內(nèi)斗爭(zhēng)最激烈的階段是_CD_。3放線菌的形態(tài)、繁殖方式4酵母菌的形態(tài)和繁殖方式5病毒的結(jié)構(gòu)和繁殖方式6顯微鏡的使用及維護(hù)方法7革蘭氏染色的基本原理方法和注意事項(xiàng)原理G菌:細(xì)胞壁厚，肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性屏障，當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖脫水而孔隙縮小，故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上。呈紫色。G菌:肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，其脂含量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，番紅染液復(fù)染后呈紅注意事項(xiàng)：1. 要用活躍生長(zhǎng)期的幼培養(yǎng)物作革蘭氏染色；涂片不宜過(guò)厚，以免脫色

11、不完全造成假陽(yáng)性。2. 革蘭氏染色結(jié)果是否正確，乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)脫色不足，陰性菌被誤染成陽(yáng)性菌，脫色過(guò)度，陽(yáng)性菌被誤染成陰性菌。3. 染色過(guò)程中勿使染色液干涸，用水沖洗后，應(yīng)吸去玻片上的水漬，以免染色液被稀釋影響染色效果。8藥典中有關(guān)微生物限度檢驗(yàn)的相關(guān)內(nèi)容，如細(xì)菌總數(shù)、霉菌酵母菌數(shù)、大腸菌群數(shù)等指標(biāo)檢驗(yàn)時(shí)所用培養(yǎng)基種類和培養(yǎng)時(shí)間溫度,結(jié)果報(bào)告方式附錄微 生 物 限 度 檢 查 法微生物限度檢査法系檢査非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法。檢査項(xiàng)目包括細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。 微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度1 0 0 0 0級(jí)下的局部潔凈度1 0 0

12、級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。檢驗(yàn)全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。供試品檢查時(shí)，如果使用了表面活性劑、中和劑或滅活劑，應(yīng)證明其有效性及對(duì)微生物無(wú)毒性，除另有規(guī)定外， 本檢査法中細(xì)菌及控制菌培養(yǎng)溫度為30 -35°C; 霉菌，酵母菌培養(yǎng)溫度為23-28°C。檢驗(yàn)結(jié)果以l g l m l 1 0 g 1 0 m l或1 0 c m 2為單位報(bào)告，特殊品種可以最小包裝單位報(bào)告。所用培養(yǎng)基的種類和培養(yǎng)時(shí)間，溫度，結(jié)

13、果報(bào)告方式驗(yàn) 證 方 法 驗(yàn) 證 試 驗(yàn) 至 少 應(yīng) 進(jìn) 行 3 次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率。另有規(guī)定外， 細(xì)菌培養(yǎng)3 天， 霉菌、酵母菌培養(yǎng)5天，逐日觀察菌落生長(zhǎng)情況，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù).必要時(shí)，可適當(dāng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至7 天進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)并報(bào)告。菌落蔓延生長(zhǎng)成片的平板不宜計(jì)數(shù)。點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)后，計(jì)算各稀釋級(jí)供試液的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報(bào)告規(guī)則報(bào)告菌數(shù)。若同稀釋級(jí)兩個(gè)平板的菌落平均數(shù)不小于1 5 , 則兩個(gè)平板的菌落數(shù)不能相差1 倍或以上。一般營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細(xì)菌計(jì)數(shù)；玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)；酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于酵母菌計(jì)數(shù)。在特殊情況下， 若營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

14、上長(zhǎng)有霉菌和酵母菌、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)有細(xì)菌，則應(yīng)分別點(diǎn)計(jì)霉菌和酵母菌、細(xì)菌菌落數(shù)。然后將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的霉菌和酵母菌數(shù)或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)，與玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基中的霉菌和酵母菌數(shù)或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中的細(xì)菌數(shù)進(jìn)行比較，以菌落數(shù)高的培養(yǎng)基中的菌數(shù)為計(jì)數(shù)結(jié)果菌數(shù)報(bào)告規(guī)則細(xì)菌、酵母菌宜選取平均菌落數(shù)小于300cfu、霉菌宜選取平均菌落數(shù)小于lOOcfu的稀釋級(jí)，作為菌數(shù)報(bào)告（取兩位有效數(shù)字）的依據(jù)。以最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報(bào)告l g l m l或10cm²供試品中所含的菌數(shù)。如各稀釋級(jí)的平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)，或僅最低稀釋級(jí)的平板有菌落生長(zhǎng)，但平均菌落數(shù)小于1時(shí)，以<

15、; 1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)。9藥典中關(guān)于大腸菌群的檢驗(yàn)方法驗(yàn)證大腸菌群檢査法時(shí)，采用大腸埃希菌作為驗(yàn)證菌株驗(yàn)證方法：取規(guī)定量供試液及1 0 -1 0 0 c f u 試驗(yàn)菌加入增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢査法進(jìn)行檢查。當(dāng)采用薄膜過(guò)濾法時(shí)，取規(guī)定量供試液，過(guò)濾，沖洗，試驗(yàn)菌應(yīng)加在最后一次沖洗液中，過(guò)濾后，注人增菌培養(yǎng)基或取出濾膜接人增菌培養(yǎng)基中。(2)大腸菌群（Coliform) 取含適量（不少于1 0 m l )的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管3支，分別加入1 ： 1 0 的供試液l m l ( 含供試品0 . l g 或0 . l m l ) a ： 1 0 0 的供試液l m l ( 含供試

16、品0. O l g 或0 . 0 1 m l ) 、l ： 1 0 0 0 的供試液l m K 含供試品0 . OOlg或0 . 0 0 1 m l ) , 另取1 支乳糖膽鹽' 發(fā)酵培養(yǎng)基管加人稀釋液l m l 作為陰性對(duì)照管。培養(yǎng)1 8 -2 4 時(shí) 。乳糖膽鹽發(fā)酵管若無(wú)菌生長(zhǎng)或有菌生長(zhǎng)但不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，判該管未檢出大腸菌群；若產(chǎn)酸產(chǎn)氣，應(yīng)將發(fā)酵管中的培養(yǎng)物分別劃線接種于曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)1 8 -2 4 時(shí)。若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)， 或生長(zhǎng)的菌落與表4 所列的菌落形態(tài)特征不符或?yàn)榉歉锾m陰性無(wú)芽抱桿菌，判該管未檢出大腸菌群； 若平板上生長(zhǎng)的菌落與表4 所列

17、的菌落形態(tài)特征相符或疑似，且為革蘭陰性無(wú)芽孢桿菌，應(yīng)進(jìn)行確證試驗(yàn)。確證試驗(yàn)從上述分離平板上挑選4 -5個(gè)疑似菌落 分別接種于乳糖發(fā)酵管中，培養(yǎng)24 -48 時(shí)。若產(chǎn)酸產(chǎn)氣,判該乳糖膽鹽發(fā)酵管檢出大腸菌群，否則判未檢出大腸菌群。根據(jù)大腸菌群的檢出管數(shù)， 按表5 報(bào)告l g 或l m l 供試品中的大腸菌群數(shù)。注：+代表檢出大腸菌群；一代表未檢出大腸菌群。10無(wú)菌操作方法11微生物、生長(zhǎng)因子、鑒別培養(yǎng)基、轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)導(dǎo)、碳源氮源、免疫應(yīng)答等詞匯的概念微生物：是指自然界中個(gè)體微小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，肉眼不可見(jiàn)或看不清楚，必須借助顯微鏡才能觀察到的一類微小生物。生長(zhǎng)因子：是細(xì)菌在其生長(zhǎng)過(guò)程中必需的，需要量少但自身不

18、能合成的一類有機(jī)物質(zhì)。鑒別培養(yǎng)基：利用細(xì)菌生化反應(yīng)能力不同，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基內(nèi)加入特殊的底物和指示劑，以達(dá)到鑒別細(xì)菌的目的。轉(zhuǎn)化：指將質(zhì)?；蚱渌庠碊NA導(dǎo)入處于感受態(tài)的宿主細(xì)胞，并使其獲得新的表型的過(guò)程轉(zhuǎn)導(dǎo)：由噬菌體和細(xì)胞病毒介導(dǎo)的遺傳信息轉(zhuǎn)移過(guò)程也稱轉(zhuǎn)導(dǎo)。碳源：在微生物生長(zhǎng)過(guò)程中能為微生物提供碳素來(lái)源的物質(zhì)。氮源：在微生物生長(zhǎng)過(guò)程中能為微生物提供氮素來(lái)源的物質(zhì)免疫應(yīng)答：抗原性物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體后激發(fā)免疫細(xì)胞活化，分化和效應(yīng)過(guò)程稱之為免疫應(yīng)答。12微生物消毒滅菌的方法有哪些干熱滅菌：小的玻璃或者金屬器皿等用具不適于用其他方法滅菌又耐高溫的物品可用干熱滅菌法。電熱鼓風(fēng)干燥箱。160-170.恒溫1-2h

19、。溫度不宜過(guò)高，防止包裝紙燒焦或自然。濕熱滅菌：高壓蒸汽滅菌法.培養(yǎng)基，玻璃器皿，無(wú)菌水，金屬用具和無(wú)菌室的實(shí)驗(yàn)服。 121.15-20分鐘，高壓蒸汽滅菌器。巴氏消毒法。它適用于不能進(jìn)行高溫滅菌的液體，低溫持續(xù)63.30分鐘和高溫快速法85.5分鐘，135-150攝氏度2-6秒間歇滅菌法，適用于不耐熱的培養(yǎng)基，又稱分段滅菌法，100下30-60分鐘.室溫或者20-30培養(yǎng)過(guò)夜，第二天再用同樣的方法處理，重復(fù)3次，加熱后應(yīng)迅速降溫，防止未殺雜菌大量滋生。輻射消毒，紫外線照射消毒。對(duì)人體有損傷作用，避免在紫外燈下工作。過(guò)濾除菌，適用于對(duì)空氣不宜加熱的液體除菌，濾菌器，采用抽濾式和注射式。化學(xué)方法：殺菌劑，抑菌劑表面消毒。13微生物營(yíng)養(yǎng)吸