輻照滅菌確認(rèn)方案

1、#有限公司研發(fā)部# # 輻 昭 八、 滅 菌 確 認(rèn) 方 案驗(yàn)證方案審批表驗(yàn)證方案擬訂表方案起草人方案起草日期二、驗(yàn)證方案審核審核人（簽名）日 期三、驗(yàn)證方案批準(zhǔn)批準(zhǔn)人（簽名）：批準(zhǔn)日期： 年 月 日方案執(zhí)行日期： 年 月日四、驗(yàn)證執(zhí)行小組成員成員簽 名組長副組長小組成員目1. 主要內(nèi)容和適用范圍2. 輻照劑量測定2.1 原理2.2 選才i SAL和獲得產(chǎn)品樣品2.3 測定初始污染菌2.3.1 初始污染菌的計(jì)算2.3.2 初始污染菌的測定2.3.3 校正系數(shù)的測定2.3.4 產(chǎn)品釋出物的檢驗(yàn)2.4 建立驗(yàn)證劑量2.5 完成驗(yàn)證劑量實(shí)驗(yàn)2.6 建立滅菌劑量3. 輻照滅菌加工確認(rèn)4. 驗(yàn)證總結(jié)報(bào)告

2、書#輻照滅菌確認(rèn)方案1 .主要內(nèi)容和適用范圍本文對于#的滅菌確認(rèn)過程做了詳細(xì)描述，確認(rèn)的內(nèi)容包括輻照劑量的設(shè)定及輻照加工確認(rèn)。本方案制定的目的在于證實(shí)產(chǎn)品輻照符合ISO11137-2006的要求，滅菌后的產(chǎn)品能達(dá)到10-6的無菌保證水平。2 .輻照滅菌劑量設(shè)定原理驗(yàn)證的原理是基于ISO11137方法，即先對輻照前產(chǎn)品的初始污染菌進(jìn)行測 定，然后選擇驗(yàn)證劑量。再用驗(yàn)證劑量對產(chǎn)品進(jìn)行輻照，并測定存活微生物的樣 品件數(shù)，以此來確定最低滅菌劑量（SAL=1。）。選才¥ SAL和獲得產(chǎn)品樣品該產(chǎn)品的SAL選定為10-6,收集常規(guī)生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)包裝產(chǎn)品，于滅菌前對三個 批號進(jìn)行隨機(jī)抽樣，每批至少抽取

3、10個樣品，其中取樣比例（SIP）為1。測定初始污染菌初始污染菌的計(jì)算測定至少30個樣品單元的每件樣品的初始污染菌并計(jì)算，a）三批中的每一批的平均的單元產(chǎn)品初始污染菌（批平均），和b）所有的單元產(chǎn)品平均初始污染菌（總平均初始污染菌）。ISO11137-2006或GB/T18280-2007中，測定至少30個樣品單元的每件樣品 的初始微污染菌并計(jì)算：批平均值和總平均值。當(dāng)初始污染菌較低（如小于10）; 允許集中檢測單獨(dú)一批中10個單元產(chǎn)品來確定批平均初始污染菌。將三批產(chǎn)品的每批平均初始污染菌與總平均初始污染菌比較，確定是否有一批平均值是總平均值的兩倍或兩倍以上。確定初始污染菌測定中是否提供了校正

4、因子，建立測定校正因子的方法。初始污染菌測定測定依據(jù)：ISO11737-1: 1995試驗(yàn)方法：（平板計(jì)數(shù)法）1）洗脫液：無菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液：取磷酸二氫鉀，磷酸氫二鈉，氯化鈉，蛋 白陳，加水1000ml,微溫溶解，分裝，過濾，滅菌。2）樣品處理：取樣品10cm2,剪碎，加無菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液10ml,浸泡，振搖， 作為1:10的供試液。3）需氣菌培養(yǎng)：取供試液1ml,置直徑90mmi勺無菌平皿中，注入1520ml溫度不超過 45c的溶化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。4）霉菌培養(yǎng)：取供試液1ml,置直徑90mmi勺無菌平皿中，注入1520ml溫度不超過 45c的溶化的玫瑰紅鈉

5、培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。5）計(jì)數(shù)：除另有規(guī)定外，細(xì)菌培養(yǎng)48小時，逐日點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，一般以 48小時 的菌落數(shù)報(bào)告；霉菌、酵母菌培養(yǎng) 72小時，逐日點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，一般以 72 小時的菌落數(shù)報(bào)告；必要時，可適當(dāng)延長培養(yǎng)時間至57天進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)并報(bào)告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計(jì)數(shù)。計(jì)算各稀釋級供試液的平均 菌落數(shù)，按菌數(shù)報(bào)告規(guī)則報(bào)告菌數(shù)。若同稀釋級兩個平板的菌落平均數(shù)不 小于15,則兩個平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。結(jié)果：、批號需氣菌毒菌需氣菌毒菌需氣菌毒菌（cfu/ 件）（cfu/ 件）（cfu/ 件）（cfu/ 件）（cfu/ 件）（cfu/ 件）12345678910平均數(shù)批平均初始污

6、染菌為 （cfu/件）總平均初始污染菌為 （cfu/件）校正系數(shù)的測定根據(jù)ISO11737-1中描述的初始污染菌的確定方法進(jìn)行試驗(yàn)，測定校正因子, 該因子取自對活菌計(jì)數(shù)的初始污染菌檢測技術(shù)的驗(yàn)證。測定依據(jù)：ISO11737-1:1995試驗(yàn)方法：1）標(biāo)準(zhǔn)菌株準(zhǔn)備：取枯草桿菌黑色變種（ATCC9372,傳代培養(yǎng)，制成100cfu/ml 備用。2）洗脫液準(zhǔn)備：無菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液：取磷酸二氫鉀，磷酸氫二鈉，氯 化鈉，蛋白陳，加水1000ml,微溫溶解，分裝，過濾，滅菌。3）制備懸液稀釋液，使中含有100個芽抱。向隨機(jī)抽取的10個產(chǎn)品上接種該稀釋懸液，并在層流下進(jìn)行干燥4）用洗脫液對接種的產(chǎn)品進(jìn)

7、行洗脫，測定洗脫的芽抱數(shù)，并計(jì)算平均值。100除以平均芽抱數(shù)即為回收率的校正系數(shù)。樣品編號12345678910芽抱數(shù)平均芽抱數(shù)：校正系數(shù)：產(chǎn)品釋出物的檢驗(yàn)測定依據(jù)：ISO11737-1: 1995試驗(yàn)方法：1）標(biāo)準(zhǔn)菌株準(zhǔn)備：取枯草桿菌黑色變種（ATCC9372，白色念珠菌 （ATCC1023兒 傳代培養(yǎng)，制成100cfu/ml備用。2）產(chǎn)品處理：取滅菌產(chǎn)品以無菌操作轉(zhuǎn)移到100mlSCD解養(yǎng)基中，3035c 培養(yǎng)24ho3）接種：以無菌操作接種標(biāo)準(zhǔn)菌于上述產(chǎn)品 SCDBS養(yǎng)基中，2832c培養(yǎng) 出現(xiàn)陽性結(jié)果或是至少培養(yǎng)7天。用標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)（CFU。結(jié)果：微生物ATCC接種量（

8、cfu ）產(chǎn)品+ SCD4標(biāo)準(zhǔn)菌對照SCDB+準(zhǔn)菌枯草桿菌黑 色變種9372白色念珠菌10231結(jié)論：建立驗(yàn)證劑量根據(jù)初始污染菌的結(jié)果和ISO11137: 2006方法1中的表5,建立合適的驗(yàn) 證劑量。具體方法為：a）如果一批或更多批次平均初始污染菌等于或大于總平均初始污染菌的兩 倍，則使用最高批次值；b）如果批次平均初始污染菌的每一個小于總平均初始污染菌的兩倍，則使 用總平均初始污染菌。根據(jù)初始污染菌的測定試驗(yàn)結(jié)果，得到該產(chǎn)品三批的批平均初始污染菌和 總平均初始污染菌分別為 （cfu/件）和（cfu/件），最高批次值為 （cfu/ 件），因此選擇 （cfu/件）作為初始污染菌。根據(jù)11737

9、-1附錄校正過的初始污染菌可通過初始污染菌乘以校正系數(shù) 求得，故產(chǎn)品的生物負(fù)載估計(jì)值為： （cfu/件）。按照ISO11137方法1中的表5查得該校正過的初始污染菌對應(yīng)的驗(yàn)證劑量 為kGy （SAL=10 -2）,指定這個劑量作為滅菌劑量。如果平均初始菌在表5中沒有給出，則用比實(shí)際計(jì)算的初始污染菌大些的， 最接近表中數(shù)值的平均初始污 染菌。完成驗(yàn)證劑量試驗(yàn)概述從批次 產(chǎn)品中選擇100件產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)證劑量試驗(yàn)，在浙江佳翔輻照技術(shù)有限公司進(jìn)行輻照。采用確定的滅菌劑量進(jìn)行輻射處理， 所照劑量用該公司 放置的劑量計(jì)測定劑量，保證所測劑量落在規(guī)定劑量的土10股內(nèi)。最高劑量不能超過滅菌驗(yàn)證劑量的 10%如果

10、計(jì)算的輻照樣品的平均劑量少于驗(yàn)證劑量的 90%則驗(yàn)證劑量實(shí)驗(yàn)要重做。如果牛¥品吸收劑量比驗(yàn)證劑量的90%>,并且實(shí)施無菌實(shí)驗(yàn)時，觀察到的結(jié)果是可接受的（100個無菌試驗(yàn)的陽性個數(shù)不超過 2 個，則驗(yàn)證可以接受），則驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)不需重做。輻照處理試驗(yàn)劑量計(jì)布放應(yīng)說明劑量計(jì)布放示意圖，每一劑量計(jì)的測定數(shù)據(jù)，并通過數(shù)據(jù)判定所測計(jì) 量是否在規(guī)定劑量的范圍內(nèi)。由于本公司輻照滅菌屬委托加工，該部分實(shí)驗(yàn)報(bào)告 可由委托加工公司出具。無菌檢驗(yàn)劑量計(jì)測定結(jié)果判定合格后，對經(jīng)輻照處理的樣品進(jìn)行無菌檢驗(yàn)。試驗(yàn)依據(jù)：ISO11732:1998試驗(yàn)方法：1）樣品測試接種均應(yīng)按無菌操作法（在 100級凈化工作臺

11、內(nèi)）進(jìn)行。2）無菌打開包裝，用滅菌剪刀、銀子，將產(chǎn)品轉(zhuǎn)移至SCDBt養(yǎng)基中。3）將樣品培養(yǎng)基放2832C溫箱中培養(yǎng)14天。4）觀察有無細(xì)菌生長。結(jié)果：無菌試驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)樣品試驗(yàn)數(shù)量A口加工溫度（C）培養(yǎng)天數(shù)陽性數(shù)150ml SCDB28-32結(jié)論：經(jīng)測試，試驗(yàn)產(chǎn)品陽性菌數(shù)為 ,經(jīng)驗(yàn)證劑量輻照后的無菌檢查結(jié)果為。建立滅菌劑量如果實(shí)驗(yàn)使用整個產(chǎn)品，并且驗(yàn)證劑量是可以接受的，從表5中得到最接近 平均初始污染菌的單元產(chǎn)品的滅菌劑量，該初始污染菌與單元產(chǎn)品的平均初始污 染菌相等或者跟大，讀出達(dá)到10-6SAL所需的輻照劑量，該劑量定為生物型無菌 護(hù)創(chuàng)膜產(chǎn)品常規(guī)輻照滅菌的最低劑量，最高劑量通常按照最低劑量的兩倍來制 定。3.輻射滅菌加工確認(rèn)該部分用于確認(rèn)在建立的滅菌劑量下，#產(chǎn)品輻照滅菌過程的有效性，確