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1、 人工合成(反轉(zhuǎn)錄法_和化學(xué)合成法。適合基因較小,序列已知) 基因工程專題1 5、PCR技術(shù): 1) 概念:PCR全稱為多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),是一項(xiàng)生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。 基因工程概念:2) 原理:DNA復(fù)制 基因工程又名DNA重組技術(shù)或轉(zhuǎn)基因技術(shù)?3) 條件:模板DNA、DNA引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)、四種脫氧核苷酸 原理:基因重組?n 2指數(shù)形式擴(kuò)增4) 結(jié)果:以 分子水平DNA? 水平: )循環(huán)重復(fù)5560)、適溫延伸(70755) 過程:高溫變性(9095)、低溫退火( ? 操作對(duì)象:基因,使目的,可以遺傳至下一代6、基因表達(dá)載體的構(gòu)建的目的:使目的基因在受體

2、細(xì)胞中穩(wěn)定存在 ?特點(diǎn):按照人們的意愿,定向改變生物性狀 表達(dá)和發(fā)揮作用?;蚰軌?標(biāo)記基因啟動(dòng)子終止子7、重組DNA(重組質(zhì)粒)的組成:目的基因 1基因工程的基本工具1、 識(shí)別和結(jié)合的部位,聚合酶,首端是RNA啟動(dòng)子:是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,位于基因的(1)賦予生DNA體外重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù),1、基因工程:是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),通過 。mRNA,最終獲得所需的蛋白質(zhì)能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出 分子水。基因工程是在DNA更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品物以新的遺傳特性,創(chuàng)造出 。使轉(zhuǎn)錄停止 ,位于基因的尾端(2)終止子:也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段 重組技術(shù)。原理是基因重組。平

3、上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的,又叫做DNA 篩含有目的基因的細(xì)胞)標(biāo)記基因的作用:是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因,從而將(3 連接酶、載體2、基因工程的基本工具:限制性核酸內(nèi)切酶、DNA 、限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)3 。選出來。常用的標(biāo)記基因是抗生素抗性基因 中分離純化出來的。(1)來源:主要是從原核生物 、轉(zhuǎn)化的概念:是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。8 )功能特點(diǎn):2( 植物細(xì)胞9、將目的基因?qū)?的核苷酸序列;特定DNA 能夠識(shí)別雙鏈分子的某種 :)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法(1 斷開部位(識(shí)別位點(diǎn))的兩個(gè)核苷酸之間的使每一條鏈中特定磷酸二酯鍵 適用植物:雙子葉植物、裸子植

4、物 平末端和結(jié)果:形成黏性末端 上。將目的基因插入到DNAT-DNA可整合到受體細(xì)胞的染色體作用特點(diǎn):農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的 3()例子:EcoR、Sma T-DNA上,即可在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定遺傳和表達(dá)Ti質(zhì)粒上的 、4DNA連接酶 基因槍法(微彈轟擊法):?jiǎn)巫尤~植物常用的轉(zhuǎn)化方法。成本較高(2) 連接酶:DNATE.coli DNA連接酶和連接酶DNA(1)兩種4 花粉管通道法:我國(guó)獨(dú)創(chuàng)。成功例子:抗蟲棉(3) 相同點(diǎn):都縫合 磷酸二酯鍵。 受精卵。動(dòng)物細(xì)胞方法:顯微注射法;此方法的受體細(xì)胞多是 10、將目的基因?qū)?連接酶來源于DNATT4噬菌體,能夠連接粘性末端和平末端區(qū)別: 4 、將目的

5、基因?qū)胛⑸锛?xì)胞11 E.coli DNA連接酶來源于大腸桿菌,只能連接粘性末端 )原核生物作為受體細(xì)胞的特點(diǎn):繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)較少1( 5、載體 (1)載體具備的條件:能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。2+ 細(xì)胞(容易吸收周圍環(huán)境中的DNA分子)(2)轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵:Ca處理,使細(xì)胞成為感受態(tài) 具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn),供外源DNA片段插入。 具有標(biāo)記基因,供重組DNA的鑒定和選擇。生物 種類 植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞 微生物細(xì)胞 質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒)載體種類:2( ,質(zhì)粒3()最常用的載體是它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外,并具有 DNA 自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀分

6、子。 4()真正用作載體的質(zhì)粒,都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過人工改造的。常用2 )改造后的質(zhì)粒結(jié)構(gòu):一個(gè)或多個(gè)酶切位點(diǎn);復(fù)制原點(diǎn);標(biāo)記基因5( 處理法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 Ca顯微注射技術(shù) 方法1、2基因工程的基本操作程序 1、基因工程的基本操作程序: 受體 目的基因的獲取 體細(xì)胞原核細(xì)胞受精卵 基因表達(dá)載體的構(gòu)建(核心) 細(xì)胞 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 目的基因的檢測(cè)與鑒定 2、目的基因: 編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 3、目的基因的來源:從自然界已有的物種中分離 人工方法合成 4、獲取目的基因的常用方法: 從基因文庫(kù)中獲?。ɑ蚪M文庫(kù),cDNA文庫(kù)) 利用PCR技術(shù)擴(kuò)增 1 轉(zhuǎn)化過程 抗原注入小鼠體內(nèi) 分離

7、 B淋巴細(xì)胞 骨髓瘤細(xì)胞 選擇培養(yǎng)基篩選 細(xì)胞融合 雜交瘤細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 克隆化培養(yǎng),抗體檢測(cè)選擇培養(yǎng)細(xì)胞 培養(yǎng)注入腹腔體外培養(yǎng) 體內(nèi)培養(yǎng) 從腹水提取 從培養(yǎng)液提取 工程建設(shè)中應(yīng)注意的問題物種多樣性原理、 考慮樹種生態(tài)適應(yīng)性問題,種植適宜品種協(xié)調(diào)與平衡原理、 整體性原理 考慮樹種多樣性,保證防護(hù)林體系穩(wěn)定 三不同地區(qū)應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r采取不同策略退耕還林、防風(fēng)治沙、 主要措施:協(xié)調(diào)與平衡原理 采取工程和生物措施相結(jié)合的方 、整體性原理 法:廢水處理,污染控制、植被引種。濕地生態(tài)恢復(fù)工程 建立緩沖帶,減少人類干擾 主要困難:解決遷出湖區(qū)居民的生計(jì)問題 系統(tǒng)學(xué)和工程學(xué)原理 工程機(jī)械措施 制造表土、壓實(shí)

8、 礦區(qū)廢棄地的生態(tài)恢復(fù)工程 項(xiàng)目理論基礎(chǔ)實(shí)例 意義 圖植被恢復(fù)、土壤微生物群落的重建 P122可避免環(huán)境污染及 解決大氣污染措施:禁止使用有鉛汽油 協(xié)調(diào)與平衡原理、 影響 物質(zhì)循環(huán) 無廢棄物農(nóng)業(yè)物質(zhì)循環(huán)再生原理 整體性原理 城市環(huán)境生態(tài)工程進(jìn)行污水水污染:減少或禁止污水排放, 系統(tǒng)的穩(wěn)定和發(fā)展 凈化 “三北”防護(hù)林建設(shè)中的單生物多樣性程度高, 2、生態(tài)工程的發(fā)展前景生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn) 可提高系統(tǒng)的抵抗物種多樣性原理 純林問題,珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng) 定性 力穩(wěn)定性的生物多樣性問題 可避免系統(tǒng)的失衡生物與環(huán)境的 太湖富營(yíng)養(yǎng)化問題協(xié)調(diào)與平衡原理上TDNA將目的基因插入Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞整合到DNA表達(dá)

9、 受體細(xì)胞的染色體 將含有目的基因的表達(dá)體提純?nèi)÷眩ㄊ芫眩╋@微注射受精卵發(fā)育獲得具有新性狀的2處理細(xì)胞微Ca生物細(xì)胞壁的通透性增加感受態(tài)重組質(zhì)粒與感受態(tài) 操作水平:細(xì)胞水平、細(xì)胞器水平2. 目的:按照人的意愿改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或者獲得細(xì)胞產(chǎn)品3. 植物細(xì)胞工程知識(shí)點(diǎn)清單 (一)植物組織培養(yǎng) 細(xì)胞全能性1.理論基礎(chǔ)(原理): 全能性概念:具有某生物發(fā)育所需全部遺傳信息的細(xì)胞,都具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。2.細(xì)胞混合感受態(tài) 、過程:外植體脫分化愈傷組織再分化叢芽、不定根新植株3 動(dòng)物 分子細(xì)胞吸收DNA 、相關(guān)概念及實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)4 外植體:離體植物器官、組織、細(xì)胞 愈傷組織:高度液泡化,無固定

10、形態(tài)的薄壁細(xì)胞。全能性高,分化程度低 、目的基因的檢測(cè)和鑒定12 無菌水沖洗無菌水沖洗次氯酸鈉30min 外植體消毒:70%酒精30s 分子雜交技術(shù)。DNA(1)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體上是否插入了目的基因:方法是 DNA 取材:選取形成層部位 分子雜交技術(shù),方法是)檢測(cè)(2 目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA o ,避光C 脫分化:2326 。3()檢測(cè) 目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì),方法是抗原抗體雜交 再分化:將愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基,光照下培養(yǎng) 4()有時(shí)還需進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。如抗蟲或抗病的接種實(shí)驗(yàn) / 細(xì)胞分裂素:比值高促進(jìn)生根;比值低促進(jìn)發(fā)芽 生長(zhǎng)素 基因工程的應(yīng)用1.3、植物組織培養(yǎng)

11、概念:在無菌和人工控制條件下,將離體的植物器官,組織,細(xì)胞培養(yǎng)在人工配5 )抗蟲、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物11.植物基因工程:( 置的培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織,叢芽,最終形成完整的植株。 2)利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。( 6、地位:是培育轉(zhuǎn)基因植物、植物體細(xì)胞雜交培育植物新品種的最后一道工序。 1)提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度2.動(dòng)物基因工程:( (二)植物體細(xì)胞雜交 2)改善畜產(chǎn)品品質(zhì)(、植物體細(xì)胞雜交概念:將不同種的植物細(xì)胞,在一定條件下融合成雜種細(xì)胞,并把雜種細(xì)胞培1 )用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物。(乳腺生物反應(yīng)器) 3( 育成新的植物體的過程。 1)把正常的外源基因?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮作用

12、。3.基因治療:( 2、過程及注意事項(xiàng): 去除細(xì)胞壁:酶解法(纖維素酶、果膠酶),獲得原生質(zhì)體 (2)是治療遺傳病的有效手段 ;化學(xué)法:聚乙二醇 原生質(zhì)體融合方法:物理法(離心、震蕩、電刺激) (3 )包括:體外基因治療;體內(nèi)基因治療 細(xì)胞融合成功的標(biāo)志:雜種細(xì)胞再生細(xì)胞壁 蛋白質(zhì)工程1.4 3、融合結(jié)果:獲得雜種細(xì)胞,進(jìn)而獲得雜種植株。 1、基因工程的局限性:只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì) =A+B+B細(xì)胞所得雜種植株遺傳物質(zhì) A細(xì)胞 基因修飾或基因蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系2、蛋白質(zhì)工程:指以作為基礎(chǔ),通過 4、成功例子:番茄馬鈴薯;煙草海島煙草;胡蘿卜羊角芹;白菜甘藍(lán) 合成新的

13、蛋白質(zhì),或制造一種,對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。 5、優(yōu)點(diǎn):克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙 3、蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上延伸出來的第二代基因工程。 6、局限性:不能按照人的要求表達(dá)性狀 4、過程:從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列 (三)植物細(xì)胞工程應(yīng)用 找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因) 、微型繁殖:可以高效快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖(觀賞植物,經(jīng)濟(jì)林木,無性繁殖作物)1 )生物工程制藥:速效性胰島素15、發(fā)展前景:( 、作物脫毒:采用莖尖等分生區(qū)組織培養(yǎng)來除去病毒(因?yàn)榉稚鷧^(qū)附近的病毒極少或沒有)2 2( )改造酶結(jié)果,提高穩(wěn)定性 如:馬鈴薯

14、;草莓;甘蔗;菠蘿、香蕉等經(jīng)濟(jì)作物 3( )應(yīng)用與微電子、人工種子:以植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等為材料,經(jīng)人工薄膜包裝得3 6、困難:大多數(shù)蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)不了解 到的種子。優(yōu)點(diǎn):完全保持優(yōu)良品種的遺傳特性,不受季節(jié)的限制;方便儲(chǔ)藏和運(yùn)輸 、作物新品種培育:?jiǎn)伪扼w育種 4(如篩選抗病、5、 通過從有用的突變體中選育出新品種突變體利用:在組織培養(yǎng)中會(huì)出現(xiàn)突變體, 抗鹽、含高蛋白的突變體) 、細(xì)胞產(chǎn)物的生產(chǎn):通過能夠產(chǎn)生對(duì)人們有利的產(chǎn)物的細(xì)胞進(jìn)行組織培養(yǎng),從而讓它們能夠產(chǎn)生6 專題二:細(xì)胞工程 大量的細(xì)胞產(chǎn)物。 如:生產(chǎn)人參皂甙,三七,紫草,銀杏等。 細(xì)胞工程概念: (定向誘導(dǎo)

15、愈傷組織細(xì)胞分化為產(chǎn)生特定物質(zhì)的細(xì)胞,提純產(chǎn)物) 1.原理方法:細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué) 2 4、原理:動(dòng)物細(xì)胞核全能性 動(dòng)物細(xì)胞工程知識(shí)點(diǎn)清單4、選擇卵母細(xì)胞質(zhì)的原因: 細(xì)胞體積大,易操作 (一)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 營(yíng)養(yǎng)豐富 1.概念:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞, 含有促進(jìn)細(xì)胞核表達(dá)全能型的物質(zhì) 然后放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。 6、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用: 2、原理:細(xì)胞增殖 加速家畜遺傳改良進(jìn)程,促進(jìn)良畜群繁育; 保護(hù)瀕危物種,增大存活數(shù)量; 3 、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程:生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白; 作為異種移植的供體; 取動(dòng)物組織塊(動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的

16、器官或組織)用于組織器官的移植等。 剪碎用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞 制成細(xì)胞懸液 7、體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題: 轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng) 成功率低 貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞 克隆動(dòng)物存在著健康問題、表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等 傳代培養(yǎng)繼續(xù) 克隆動(dòng)物食品安全問題存在爭(zhēng)議 4、細(xì)胞貼壁:懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上,稱為細(xì)胞貼壁(三)動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體 、接觸抑制:細(xì)胞數(shù)目不斷增多,當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互抑制時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止5 1、動(dòng)物細(xì)胞融合:也稱細(xì)胞雜交,是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。 分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞

17、的接觸抑制。 融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞,稱為雜交細(xì)胞。 代以內(nèi))506 、細(xì)胞株:細(xì)胞核型未發(fā)生改變的,不能無限增值的細(xì)胞(一般2、原理:細(xì)胞膜的流動(dòng)性 、細(xì)胞系:少數(shù)細(xì)胞克服細(xì)胞壽命的自然界限,獲得不死性,遺傳物質(zhì)發(fā)生改變,朝著癌 73、誘導(dǎo)因素:物理法(離心、震蕩、電擊)、化學(xué)法(聚乙二醇)、生物法(滅活病毒) 細(xì)胞方向發(fā)展 4、優(yōu)點(diǎn):克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙,成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育 、目前使用和冷凍保存的通常是 810代以內(nèi)的細(xì)胞:保持細(xì)胞正常的二倍體核型。的重要手段。 9、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件: 5、單克隆抗體過程: ,以

18、防培添加一定量的抗生素菌、無毒的環(huán)境:培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中無單克隆抗體的制備過程: ,防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身定期更換培養(yǎng)液養(yǎng)過程中的污染。此外,應(yīng) 造成危害。 營(yíng)養(yǎng):合成培養(yǎng)基成分:糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽、微量元素等。 通常需加入血清、血漿等天然成分。 7.2。7.4;溫度:適宜溫度:哺乳動(dòng)物多是36.50.5pH: O。空氣5%COpH的主要作用是維持培養(yǎng)液的是細(xì)胞代謝所必需的,CO。氣體環(huán)境:95%222 10、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用: 生產(chǎn)生物制品:病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體 生產(chǎn)基因工程的受體細(xì)胞 檢測(cè)有毒物質(zhì)、判斷物質(zhì)毒性 用于生理、病理、藥理的研究

19、 (二)動(dòng)物體細(xì)胞移植與克隆動(dòng)物 、概念:將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中,使其重組發(fā)育成1 一個(gè)新的胚胎,最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。 體細(xì)胞核移植胚胎細(xì)胞核移植、哺乳動(dòng)物核移植可以分為(比較容易)和(比較難)。2 3、體細(xì)胞核移植的大致過程是: 卵母細(xì)胞要求:減中期 單克隆抗體 核移植方法:顯微注射法 ? 雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn):既能迅速大量繁殖又能產(chǎn)專一抗體 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、 涉及到的技術(shù): ? 單克隆抗體優(yōu)點(diǎn):特異性強(qiáng)、靈敏度高,可大量制備 細(xì)胞核移植、胚胎移植 6、單克隆抗體的作用: 作為診斷試劑:準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異,并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合, 具有準(zhǔn)確、高效

20、、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。 用于治療疾病和運(yùn)載藥物:主要用于治療癌癥治療,可制成“生物導(dǎo)彈”,也有少量用 于治療其它疾病。 3 減小。有機(jī)物種類增加,總量下降。 專題三 胚胎工程知識(shí)點(diǎn) 根據(jù)胚胎形態(tài)變化,早期胚胎發(fā)育分為:桑葚胚、囊胚、原腸胚 。(2)桑椹胚:胚胎細(xì)胞數(shù)目達(dá)到32個(gè)左右時(shí),胚胎形成致密的細(xì)胞團(tuán),形似桑椹。是全能細(xì)胞胚胎分割、胚胎工程概念:對(duì)動(dòng)物早期胚胎或配子進(jìn)行顯微操作和處理,如:體外受精、胚胎移植、 )。)囊 胚:細(xì)胞開始出現(xiàn)分化(該時(shí)期細(xì)胞的全能性仍比較高胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù),獲得胚胎并移植入雌性動(dòng)物子宮產(chǎn)生后代,以滿足人類各種需求 (3 內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(發(fā)育成胎兒的各種組織)一、體內(nèi)

21、受精和早期胚胎發(fā)育 囊胚腔1、精子的發(fā)生 滋養(yǎng)層細(xì)胞(發(fā)育成胎兒的胎膜胎盤)場(chǎng)所:睪丸(精巢) 孵化:囊胚進(jìn)一步發(fā)育,導(dǎo)致透明帶破裂,胚胎從中伸展出來的過程生殖機(jī)能衰退 時(shí)間:初情期- )原腸胚:有了內(nèi)、中、外三胚層的分化,具原腸腔。 第一階段:精原細(xì)胞 有絲分裂 許多初級(jí)精母細(xì)胞 (4 階段: 次級(jí)精母細(xì)胞 減精細(xì)胞 二、體外受精早期胚胎培養(yǎng) 第二階段:初級(jí)精母細(xì)胞減 、試管動(dòng)物技術(shù):通過人工操作使卵子和精子在體外條件下成熟和受精,并通過培養(yǎng)發(fā)育為早期 第三階段:精細(xì)胞變形精子 1 變形:細(xì)胞核-精子頭的主要部分 胚胎后經(jīng)胚胎移植產(chǎn)生后代的技術(shù)。 頂體 2、體外受精主要過程包括:卵母細(xì)胞的采

22、集,精子的獲取,和受精 高爾基體- (1)卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng): 中心體-尾中沖鼠、兔、豬、羊等小型動(dòng)物:用促性腺激素處理,使其排出更多的卵子,然后,從輸卵管? 線粒體-線粒體鞘 取卵子,采集的卵母細(xì)胞可直接與獲能的精子在體外受精。 脫落原生質(zhì)滴- 其它物質(zhì)-中采集卵母細(xì)胞;或借助超聲波探測(cè)儀、腹腔鏡等直接屠宰母畜的卵巢 牛等大型牲畜:從剛? 精子的外形:似蝌蚪,分頭,頸,尾三部分。 中吸取卵母細(xì)胞。采集的卵母細(xì)胞,都要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)成熟后,才能與活體動(dòng)物的卵巢從 精子的大小與動(dòng)物的體型大小無關(guān)。 獲能的精子受精。 、卵子的發(fā)生:2 精子的采集和獲能:(2) 場(chǎng)所:卵巢 方法:假陰道法,手握

23、法、電刺激法? (精子與卵子在發(fā)生時(shí)間上的差別是重要的區(qū)別)減時(shí)間:性別分化以后(胎兒期)- A23187溶液中)在體外受精前獲能處理:培養(yǎng)法(獲能液);化學(xué)誘導(dǎo)法(肝素或鈣離子載體 ?結(jié)果產(chǎn)生一個(gè)次級(jí)卵母細(xì)胞和第一極體減數(shù)第二次分?jǐn)?shù)第一次分裂是在雌性動(dòng)物排卵前后完成的, 中完成受精過程。受精溶液(3) 受精:獲能的精子和培養(yǎng)成熟的卵細(xì)胞在獲能溶液或?qū)S玫闹欣^續(xù)培養(yǎng),以檢查發(fā)育培養(yǎng)液裂是在精子和卵子結(jié)合的過程中完成的 (4)胚胎的早期培養(yǎng):精子與卵子在體外受精后,應(yīng)將受精卵移入除一些無機(jī)鹽和有機(jī)鹽外,培養(yǎng)液成分較復(fù)雜,受精狀況和受精卵的發(fā)育能力。羊、人、排卵:卵子從卵泡中排出(不同的動(dòng)物排卵的

24、時(shí)間不同:馬、犬排初級(jí)卵母細(xì)胞; 等物質(zhì)。當(dāng)胚血清還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營(yíng)養(yǎng)成分,以及 牛、豬排次級(jí)卵母細(xì)胞)不同動(dòng)物胚胎移受體移植或冷凍保存胎發(fā)育到適宜的階段時(shí),可將其取出向。 減數(shù)第二次分裂中期的次級(jí)卵母細(xì)胞具有受精能力小鼠、(牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚階段才能進(jìn)行移植,植的時(shí)間不同。說明 判斷卵子是否受精的重要標(biāo)志:當(dāng)卵細(xì)胞膜和透明帶的間隙可以觀察到兩個(gè)極體時(shí),階段移移植,人的體外受精胚胎可在4個(gè)細(xì)胞家兔等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可在更早的階段 卵子已經(jīng)完成了受精。) 植。 三、胚胎工程的應(yīng)用 、受精:3 、胚胎移植1同種)概念:是指將雌性動(dòng)物的早期胚胎,或者通過體外受精及其它方式得

25、到的胚胎,移植到(1 場(chǎng)所:雌性的輸卵管內(nèi)完成的 的、生理狀態(tài)相同的其它雌性動(dòng)物的體內(nèi),使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。 過程:品種,作為。(供體為優(yōu)良? 其中提供胚胎的個(gè)體稱為“供體”,接受胚胎的個(gè)體稱為“受體” :輸卵管內(nèi),發(fā)育到減中期)。? 準(zhǔn)備階段(精子獲能:雌性生殖道內(nèi);卵子準(zhǔn)備 的品種。)受體的雌性動(dòng)物應(yīng)為常見或存量大受精階段(精子頂體反應(yīng),釋放頂體酶穿越放射冠透明帶接觸卵細(xì)胞膜后,發(fā)生透明帶 ? ? 實(shí)質(zhì):生產(chǎn)胚胎的供體和孕育胚胎的受體共同繁殖后代的過程。卵子反應(yīng)卵細(xì)胞膜微絨毛抱合進(jìn)入卵細(xì)胞膜,發(fā)生卵細(xì)胞膜反應(yīng)核膜破裂形成雄原核, ? 移植的時(shí)期:桑葚胚或囊胚 完成減數(shù)第二次分裂,形

26、成雌原核,原核融合形成配子。受精結(jié)束)胚 地位:如等任何一項(xiàng)胚胎工程技術(shù)所生產(chǎn)的胚胎,都必須經(jīng)過轉(zhuǎn)基因、核移植,或體外受精? :透明帶反應(yīng);卵細(xì)胞膜反應(yīng) 防止多精入卵的兩道屏障 胚胎工程的最后一道“工序”。胎移植技術(shù)才能獲得后代,是 。供體本身的繁殖周期(2) 胚胎移植的優(yōu)勢(shì):大大縮短了,充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖能力 具體應(yīng)用及意義:(3) 4、動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過程 ? 加速育種工作與品種改良 胚后發(fā)育(以受精卵為起點(diǎn),性成熟為終點(diǎn))個(gè)體發(fā)育分為:胚胎發(fā)育+ 節(jié)省購(gòu)買種畜的費(fèi)用? )卵裂期:胚胎發(fā)育早期在透明帶內(nèi)的發(fā)育過程(1 ? 增加雙胎及多胎的比例 并不增加,或略有分裂,細(xì)胞數(shù)量不斷增

27、加,但胚胎的總體體積特點(diǎn):細(xì)胞 有絲 ?建立胚胎庫(kù),保存品種資源和瀕危物種 4 (4) 生理學(xué)基礎(chǔ): 專題四生物技術(shù)安全性和倫理問題知識(shí)點(diǎn) 。動(dòng)物發(fā)情排卵后,同種動(dòng)物的供、受體生殖器官的生理變化是相同的 。意義:這就為供體的胚胎移入受體提供了相同的生理環(huán)境(一)轉(zhuǎn)基因生物的安全性爭(zhēng)論 : 游離狀態(tài)。早期胚胎在一定時(shí)間內(nèi)處于(1)基因生物與食物安全: 。意義這就為胚胎的收集提供了可能? 反方觀點(diǎn):反對(duì)“實(shí)質(zhì)性等同”、出現(xiàn)滯后效應(yīng)、出現(xiàn)新的過敏原、營(yíng)養(yǎng)成分改變 受體對(duì)移入子宮的外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。? 正方觀點(diǎn):有安全性評(píng)價(jià)、科學(xué)家負(fù)責(zé)的態(tài)度、無實(shí)例無證據(jù) 胚胎在受體的存活提供了可能。意義:

28、這為(2)轉(zhuǎn)基因生物與生物安全:對(duì)生物多樣性的影響 在孕育過程中不受影遺傳特性供體胚胎可與受體子宮建立正常的生理和組織聯(lián)系,但供體胚胎的? 反方觀點(diǎn):擴(kuò)散到種植區(qū)之外變成野生種類、成為入侵外來物種、重組出有害的病原體、成為 響。意義:保證胚胎的正常發(fā)育。超級(jí)雜草、有可能造成“基因污染” (5) 基本程序主要包括:? 正方觀點(diǎn):生命力有限、存在生殖隔離、花粉傳播距離有限、花粉存活時(shí)間有限 健康的體質(zhì)和正常繁選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體,有 對(duì)供、受體的選擇和處理。(3)轉(zhuǎn)基因生物與環(huán)境安全:對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響 同期發(fā)情處理的受體,供體和受體是同一物種。并用激素進(jìn)行殖能力? 反方觀點(diǎn):打破

29、物種界限、二次污染、重組出有害病原微生物、毒蛋白等可能通過食物鏈進(jìn)入 用促性腺激素對(duì)供體母牛做超數(shù)排卵處理。人體 。 配種或人工授精? 正方觀點(diǎn):不改變生物原有的分類地位、減少農(nóng)藥使用、保護(hù)農(nóng)田土壤環(huán)境 對(duì)胚胎的收集:配種或輸精后第7天用特殊的沖卵裝置將子宮內(nèi)的胚胎沖洗出來稱為沖卵(二)生物技術(shù)的倫理問題 檢查:檢查胚胎發(fā)育情況(發(fā)育至桑葚胚或囊胚)(1)克隆人:兩種不同觀點(diǎn),多數(shù)人持否定態(tài)度。 196的液氮中保存。 培養(yǎng)或保存:直接向受體移植或放入否定的理由: 對(duì)胚胎進(jìn)行移植:手術(shù)法、非手術(shù)法? 克隆人嚴(yán)重違反了人類倫理道德,是克隆技術(shù)的濫用; 移植后的檢查:對(duì)受體母牛進(jìn)行是否妊娠的檢查。

30、? 克隆人沖擊了現(xiàn)有的婚姻、家庭和兩性關(guān)系等傳統(tǒng)的倫理道德觀念; 受體分娩? 克隆人是在人為的制造在心理上和社會(huì)地位上都不健全的人。 2、胚胎分割肯定的理由: 概念:指采用機(jī)械方法將經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)。4早期胚胎切割2等份、等份等,(1)? 技術(shù)性問題可以通過胚胎分級(jí)、基因診斷和染色體檢查等方法解決。 繁殖或克隆。相同(2)意義:來自同一胚胎的后代具有的遺傳物質(zhì),屬于無性? 不成熟的技術(shù)也只有通過實(shí)踐才能使之成熟。 。(桑椹胚至囊胚的發(fā)育過程中,細(xì)胞開始分化,桑椹胚或囊胚(3)材料:發(fā)育良好,形態(tài)正常的中國(guó)政府的態(tài)度:禁止生殖性克隆,不反對(duì)治療性克隆。 但其全能性仍很高,也可用于胚

31、胎分割。)四不原則:不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人的實(shí)驗(yàn)。 分割后胚胎的恢復(fù)分割,否則會(huì)影響(4)操作過程:對(duì)囊胚階段的胚胎分割時(shí),要將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等(2)試管嬰兒:兩種目的試管嬰兒的區(qū)別兩種。 ??扇幼甜B(yǎng)層細(xì)胞做DNA鑒定和進(jìn)一步發(fā)育否定的理由: ()存在問題:5? 把試管嬰兒當(dāng)作人體零配件工廠,是對(duì)生命的不尊重; 剛出生的動(dòng)物體重偏低,毛色斑紋有差異。 ? 早期生命也有活下去的權(quán)利,拋棄或殺死多余胚胎,無異于“謀殺”。 產(chǎn)生同卵多胎可能性有限,分割份數(shù)越多成功率越低 肯定的理由: 3、胚胎干細(xì)胞? 符合倫理道德,出于愛子之心 早期胚胎或從原始性腺或ESEK細(xì)胞,來源于中分離

32、出來。哺乳動(dòng)物的胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱)(1概念:? 提供骨髓中造血干細(xì)胞救治患者最好、最快捷的方法,提供骨髓造血干細(xì)胞并不會(huì)對(duì)試管嬰兒造成損傷。 (2)特點(diǎn):(3)基因身份證: 小,核仁細(xì)胞核大,明顯;體積 在形態(tài)上表現(xiàn)為否定的理由: 發(fā)育的全能性在功能上,具有,可分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。 ? 目前人類對(duì)基因的結(jié)構(gòu),基因間的相互作用認(rèn)識(shí)有限 遺傳改造。也可進(jìn)行保存,冷凍,而不發(fā)生可以 另外在體外培養(yǎng)的條件下,增殖分化可進(jìn)行? 個(gè)人基因資訊的泄漏造成基因歧視勢(shì)必造成遺傳學(xué)失業(yè)大軍、 )胚胎干細(xì)胞的主要用途是:(3? 造成個(gè)人婚姻困難、人際關(guān)系疏遠(yuǎn)等嚴(yán)重后果。 可用于研究哺乳動(dòng)物個(gè)體發(fā)生和發(fā)

33、育規(guī)律;肯定的理由: ? 通過基因檢測(cè)可以及早采取預(yù)防措施,適時(shí)進(jìn)行治療,達(dá)到挽救患者生命的目的。 如牛黃酸等化學(xué)物質(zhì)的理想材料,細(xì)胞分化分化誘導(dǎo)因子在培養(yǎng)液中加入,是在體外條件下研究? 基因歧視現(xiàn)象可以通過正確的知識(shí)傳播、倫理道德教育和立法得以解決 的機(jī)理提供了細(xì)胞向不同類型的組織細(xì)胞分化,這為揭示細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡ES時(shí),就可以誘導(dǎo)(三)生物武器 有效的手段; (1)種類:致病菌、病毒、生化毒劑,以及經(jīng)過基因重組的致病菌。 ,如帕金森綜合癥、少年糖尿病等;人類的某些頑疾可以用于治療(2)散布方式:吸入、誤食、接觸帶菌物品、被帶菌昆蟲叮咬等。 的部位得以修復(fù)并壞死或退化細(xì)胞可使ES的特性,移植新的組織細(xì)胞利用

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