人教版高中生物選修1專題五課題2　多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段ppt課件

1、1.DNA1.DNA分子構(gòu)造特點(diǎn)分子構(gòu)造特點(diǎn)DNADNA分子是由分子是由 的即一條鏈為的即一條鏈為3 35 5，另，另一條鏈為一條鏈為5 53 3脫氧核苷酸長鏈盤旋而成的規(guī)那么脫氧核苷酸長鏈盤旋而成的規(guī)那么 構(gòu)造。構(gòu)造。雙螺旋雙螺旋兩條反向平行兩條反向平行2 2、DNADNA復(fù)制的根本條件復(fù)制的根本條件DNADNA復(fù)制為什么需求引物？復(fù)制為什么需求引物？ DNA DNA聚合酶不能從頭合成聚合酶不能從頭合成DNADNA，只能從，只能從DNADNA母鏈的母鏈的33端開場延伸端開場延伸DNADNA鏈，或者說鏈，或者說DNADNA合成方向總是從子合成方向總是從子鏈的鏈的55端向端向33端延伸。因此，端

2、延伸。因此，DNADNA復(fù)制需求引物。復(fù)制需求引物。3.PCR3.PCR原理原理在在8080100100C C的溫度范圍內(nèi)，的溫度范圍內(nèi)，DNADNA的雙螺旋構(gòu)造將的雙螺旋構(gòu)造將解體，雙鏈分開，這個(gè)過程稱為變性。解體，雙鏈分開，這個(gè)過程稱為變性。當(dāng)溫度緩慢降低后，兩條當(dāng)溫度緩慢降低后，兩條彼此分別的彼此分別的DNADNA鏈又會(huì)重新鏈又會(huì)重新結(jié)合成雙鏈。結(jié)合成雙鏈。PCRPCR利用了利用了DNADNA的熱變性原理，經(jīng)過控制溫度來控的熱變性原理，經(jīng)過控制溫度來控制雙鏈的解聚與結(jié)合。制雙鏈的解聚與結(jié)合。 PCR PCR儀本質(zhì)上是一臺(tái)可以自動(dòng)調(diào)控溫度的儀器。儀本質(zhì)上是一臺(tái)可以自動(dòng)調(diào)控溫度的儀器。耐高溫

3、的耐高溫的Taq DNATaq DNA聚合酶處理了高溫導(dǎo)致聚合酶處理了高溫導(dǎo)致DNADNA聚合聚合酶失活的問題，促成了酶失活的問題，促成了PCRPCR技術(shù)的自動(dòng)化技術(shù)的自動(dòng)化 。 4.4.需求為需求為PCRPCR反響提供的物質(zhì)反響提供的物質(zhì)緩沖液、緩沖液、DNADNA模板，分別與兩條模板鏈相結(jié)合模板，分別與兩條模板鏈相結(jié)合的兩種引物，四種脫氧核苷酸，耐高溫的的兩種引物，四種脫氧核苷酸，耐高溫的Taq Taq DNADNA聚合酶，同時(shí)經(jīng)過控制溫度使聚合酶，同時(shí)經(jīng)過控制溫度使DNADNA復(fù)制在體復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)展。外反復(fù)進(jìn)展。4、PCR 循環(huán)的結(jié)果 DNA聚合酶只能特異性地復(fù)制處于兩個(gè)引物之間的D

4、NA序列，使這段固定長度的序列呈指數(shù)擴(kuò)增。從第二輪循環(huán)開場，上一次循環(huán)的產(chǎn)物也作為模板參與反響，并且由引物延伸而成的DNA單鏈會(huì)與引物結(jié)合，進(jìn)展DNA的延伸。1、PCR儀一設(shè)備及器具本質(zhì)上一臺(tái)可以自動(dòng)調(diào)控溫度的儀器2、微量離心管一種薄壁塑料管，總?cè)莘e為0.5mL3、微量移液器 用于定量轉(zhuǎn)移PCR配方中的液體，其上的一次性吸液槍頭用一次改換一次1、預(yù)備2、移液按照PCR反響體系的配方將所需用的試劑擺放在實(shí)驗(yàn)桌上用微量移液器按照PCR反響體系配方往微量離心管里面參與各種試劑二實(shí)驗(yàn)操作步驟蓋嚴(yán)微量離心管口的蓋子，用手指悄然彈擊管壁。3、混合將離心管放入PCR儀上，設(shè)置好PCR儀的循環(huán)程序。過程：將微

5、量離心管放在離心機(jī)上,離心約10s。4、離心5、反響離心目的：使反響液體集中在離心管底部，提高反響效果。 PCR技術(shù)高度靈敏，為了防止外源DNA等要素的污染而呵斥干擾實(shí)驗(yàn)，PCR操作時(shí)要留意做到：6、本卷須知 隔離操作區(qū)，所用微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在運(yùn)用必需進(jìn)展高壓滅菌； 分裝試劑，簡化操作程序，運(yùn)用一次性槍頭一實(shí)際上DNA擴(kuò)增數(shù)目的計(jì)算1 、一條DNA，復(fù)制n次， DNA為2n2 、 a條DNA，復(fù)制n次， DNA為a 2n二實(shí)驗(yàn)中DNA含量的測定1、原理DNA在260nm的紫外線波段有一劇烈的吸收峰，峰值的大小與DNA的含量有關(guān)2 、過程稀釋對照調(diào)零測定計(jì)算DNA含量g50

6、x(260nm的讀數(shù) x 稀釋倍數(shù)50：1 g /mL的DNA在厚度為1cm比色杯中的吸光值為0.02 例如：PCR產(chǎn)物每輪循環(huán)添加一倍，30輪循環(huán)擴(kuò)增量達(dá)230個(gè)拷貝109拷貝 PCR技術(shù)是80年代中期開展起來的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。 它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、 快速、 簡便、反復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出特點(diǎn)課堂小結(jié)課堂小結(jié)多聚酶鏈?zhǔn)椒错憯U(kuò)增多聚酶鏈?zhǔn)椒错憯U(kuò)增DNA片段片段PCR原理原理DNA的復(fù)制需求酶、原料、能量、引物的復(fù)制需求酶、原料、能量、引物DNA的變性和復(fù)性受溫度影響的變性和復(fù)性受溫度影響PCR過程過程變性變性復(fù)性復(fù)性延伸延伸操作步驟操作步驟配制配制PCR反響體系反響體系移入離心管移入離心管放入放入PCR儀儀設(shè)置任務(wù)參數(shù)設(shè)置任務(wù)參數(shù)DNA擴(kuò)增擴(kuò)增測定含量測定含量稀釋稀釋調(diào)零調(diào)零測定并讀數(shù)測定并讀數(shù)計(jì)算計(jì)算以下關(guān)于以下關(guān)于DNA復(fù)制和復(fù)制和PCR的描畫中，正確的選項(xiàng)的描畫中，正確的選項(xiàng)是是()ADNA聚合酶不能從頭開場所成聚合酶不能從頭開場所成DNA，只能從，只能從5端延伸端延伸DNA鏈鏈BDNA復(fù)制不需求引物復(fù)制不需求引物C引物與