AB液質(zhì)操作規(guī)程完整

1、第一局部開關(guān)機A A、開機1 .翻開UPS電源,翻開氮氣發(fā)生器氣瓶,確認Curtain gas的輸入壓力為0.4MPa, gas1/2為 0.7MPa, exhuast為 0.4MPa.2 .翻開機械泵電源開關(guān)5500系列直接翻開質(zhì)譜主機電源,儀器自動啟動機械泵3 .等機械泵工作至少30min5 .翻開質(zhì)譜主機電源開關(guān)6 .過夜抽真空B B、關(guān)機1 .停止輸液：關(guān)停針泵或液相泵,或斷開輸液管線一般質(zhì)譜主機Standby后液相系統(tǒng)也自動待機,輸液泵自動關(guān)停,但建議操作人員再次確認,必須保證沒有任何 液體再泵入質(zhì)譜2 .使儀器待機,并滅活配置3 .關(guān)閉質(zhì)譜儀主機電源開關(guān)5500系列只需按下電源開關(guān)

2、旁的VENT按鍵排放 真空4 .機械泵繼續(xù)工作至少30min5 .關(guān)閉機械泵上的電源開關(guān)5500系列會自動關(guān)停機械泵,待機械泵停止后即可 關(guān)閉5500系列主機上的電源開關(guān)6 .關(guān)閉氣體發(fā)生器或氣瓶第二局部調(diào)諧1、PPG就是正離子校正液,PPG3000負離子調(diào)諧液,本臺儀器只用兩瓶校正液,正離子一瓶,負離子一瓶.洗液一瓶50%的甲醇水.調(diào)諧前先用洗液洗針兩次.吸校正液的時候慢慢吸,防止吸入氣泡,吸好以后將針泵卡住.再將高度調(diào)到5,將管路重新連接.不再連接六通閥,由質(zhì)譜直接進樣,且將針泵的速度調(diào)到10pL/ml.2、調(diào)諧液弄好后在儀器面板工具欄上：TOOl一工程一創(chuàng)立工程.此工程為一個文件夾,文件

3、夾里面包括所有此次采集的信息,方法、 序列等,且所有采集的工程都固定在一個 文件夾下面：D:/Analyst Data/Project.新建工程的時候,彈出窗口中有個 Add All ,可以創(chuàng) 建孫文件夾.3、聯(lián)機：軟件翻開后在左上方硬件配置單機選中,雙擊翻開一只需選中儀器MA active profi le.圖標變?yōu)榫G色,表示聯(lián)機成功.調(diào)諧只需要選中質(zhì)譜.儀器的實時狀態(tài) 可以點擊右下方的圖標,質(zhì)譜和液相都是單獨觀察,質(zhì)譜要注意真空度,為0.5.4、調(diào)諧一手動調(diào)諧一工程文件夾選中下拉菜單中的為系統(tǒng)默認的調(diào)諧文件夾,先Qbstart syring pump 翻開針泵一start 質(zhì)譜,開始采集以

4、后觀察基線是否平衡,假設(shè) 等兩分鐘還未平衡好,那么手動將針泵往上抬.5、平衡好后基線平穩(wěn)那么為平衡好,重新進樣,重新點擊start syring pump o Resolution 分辨率一advanced 高級選項看到結(jié)果后調(diào)節(jié)質(zhì)量軸和分辨率做準備,只能先翻開這個,再翻開譜圖一實時質(zhì)譜圖右鍵 一open file 燧便點一個框一軟件上方的從譜圖校正一 PPGPOS正離子- start出現(xiàn)三行：1、質(zhì)量軸.2、分辨率.3、兩次調(diào)諧的差異一假設(shè)質(zhì)量軸有差異一右上角一yes一假設(shè)分辨率飛離出虛線 一offset 偏大調(diào)大,偏小調(diào)小輸入校正的數(shù)值,再重新進樣,如此反復(fù),直到點落在虛線以內(nèi),實線代表最

5、適宜.6、校正好后儀器會自動保存,直接關(guān)掉窗口即可.負離子調(diào)諧和正離子調(diào)諧步驟一樣,只是在選擇方法的時候要注意選擇負離子模式.還有看結(jié)果時要選擇PPG3000.此為負離子調(diào)諧液.調(diào)諧因針泵流速很小,10L/ml,所以不需要設(shè)定離子源溫度及輔助氣,直接設(shè)定噴霧器流速為50,就可以將樣品霧化,氣簾氣也不需要設(shè)置,由于沒有多余的溶劑需要吹 走.第三局部：方法優(yōu)化1 .在 Analyst 軟件 Tools 菜單中選擇 Project - Create Projec在 Project name項下 輸入新建的Project名稱.注意,不要點選窗口中的其他按鈕！點擊 OK,確認新 建 Projecto2

6、.在Analyst軟件界面下,雙擊導(dǎo)航欄內(nèi) Hardware Configuration.在彈出窗口中 選擇MassOnly,點擊Activate Profile,激活 MassOnly 只聯(lián)接質(zhì)譜主機.3 .在導(dǎo)航欄內(nèi)單擊Tune and Calibrate進入調(diào)諧模式.點擊上方工具條中的T鈕. 此時,應(yīng)注意到主機有 撲聲音,說明進入調(diào)諧狀態(tài).此時右下角質(zhì)譜狀態(tài)顯示 綠色.雙擊Manual Tuning,進入質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置及運行窗口.4 .使用1mL玻璃進樣針吸取適當(dāng)標準溶液,置于進樣針座上.點擊MS Method下拉菜單,選擇 Syringe Pump Method,設(shè)定針泵流速 Flow

7、Rate為10仙L/mirt 5.點擊Start Syringe Pump按鈕開針泵進樣.6 .返回MS Method,選擇掃描模式 Scan Type為Q1 MS,設(shè)定掃描速度Scan Rate 為10Da/s,設(shè)定掃描范圍Start-Stop設(shè)定為50化合物分子量.DP預(yù)輸入 60.7 .點擊start開始采集數(shù)據(jù).運行穩(wěn)定后,注意觀察是否有預(yù)期的母離子出現(xiàn),并限制其響應(yīng)值在約E4以下.點擊stop,選擇第一個峰(后面是同位素峰)的平 穩(wěn)段,雙擊,選中母離子.點擊右鍵,選擇 Delete Pane8 .設(shè)定Scan type為產(chǎn)物離子掃描 Product Ion (Ms2),掃描速度200

8、Da/s,選擇掃 描正/負離子,輸入母離子(product of),設(shè)定掃描范圍startstop為50MW+20,覆蓋可能的子離子質(zhì)量范圍,點擊 compoud標簽,設(shè)定(DP) 60, (CE) 5.9 .點擊start,開始采集數(shù)據(jù),注意觀察是否有預(yù)期的母離子出現(xiàn).手動調(diào)節(jié)CE,以5eV為步長,逐漸增加.每次增加后稍作等待,直至目標化合物的子離子清 晰看見.選擇平穩(wěn)的一段,雙擊,選擇子離子.10 .選才¥ Scan Type為MRM.設(shè)定參數(shù)表格中的Q1對應(yīng)的母離子,Q3對應(yīng)的子 離子,time (ms)為50, ID值設(shè)為 名稱1 (定量),名稱2 (定性).11 .點擊 E

9、dit Ramp,在 Paramete嚇選擇 Collision Energy,點擊 OK.點擊 start 開始采集數(shù)據(jù),記錄每個 MRM通道的最正確CE電壓.在MRM參數(shù)設(shè)定表中, 右鍵點擊.選擇 Collision Energy CE,調(diào)出表格中的CE歹輸入每個 MRM通 道的最正確CE電壓值,精確到個位數(shù).重復(fù)以上步驟,在 Parameter項下選擇 Declustering Potential,優(yōu)化并保存DP.完成后選擇菜單File/Save保存采樣方法, 文件名.dam.第四局部：方法建立一、LCMS方法的建立：1、連接儀器：翻開HPLC質(zhì)譜電源,將HPLC系統(tǒng)接上柱子,將6號出口

10、管線與離子源連好.調(diào)離子源噴霧針位置到2mm處,雙擊HardwareConfigure ,在硬件配置菜單下單擊 LCMS 液相與質(zhì)譜聯(lián)用,單擊Activate profile激活儀器,會聽到笛的一聲,說明儀器已經(jīng)連接上.2、確認液質(zhì)同步：選擇工程之前優(yōu)化方法的時候已經(jīng)建立的工程；雙擊 Build acquisition method新建方法,彈出新建方法模板.在模板左側(cè)點擊 acquisition method, 模板右邊顯示對應(yīng)的參數(shù), 確認 synchronization mode選擇 LC Sync,表示液質(zhì)同步.3、設(shè)置MRM參數(shù)：點擊方法模板左側(cè)的 MRM ,在模板右側(cè)Scan Ty

11、pe 下選擇 MRM ；在polarity下選擇化合物極性：Positive正離子、Negative 負 離子；Duration為15min 與液相別離相同的時間；表格中Q1:母離子分子量, Q3Da:子離子分子量,Time msec: 50, ID欄：化合物名稱離子對名稱 后空格加1為定量,空格加2為定性,在表格中右鍵分別單擊 DP、CE ,點擊 工具欄的OPEN翻開之前優(yōu)化的方法參數(shù),調(diào)出DP,CE值,選中整行,Ctrl+c 復(fù) 制參數(shù),關(guān)閉窗口,再Ctrl+v 粘貼參數(shù)；最后點擊Edit parameter設(shè)置離子 源參數(shù)：Source/Gas項用以下推薦值：CUR 35 , IS:55

12、00正離子或-4500 負離 子,TEM 600 , GS1 60, GS2 70,點擊 OK.4、設(shè)置液相參數(shù)：點擊模板左邊的shimadzu LC system ,在右邊的pumps 欄下,設(shè)置stop time 運行時間為15min , flow流速為1mL/min , A為水 相設(shè)為95%, B為有機相設(shè)為5% 設(shè)置時改B, A自動,泵最大壓力為50; 點擊time program設(shè)置液相梯度：例咪口坐類梯度設(shè)置：Time(min)AB95%5%55%95%105%95%10.195%5%1595%5%接著在右邊的Auto sampler欄下,設(shè)置清洗時間,在Rinse mode下選擇

13、Before and after 前后都洗,并設(shè)置清洗時間為5s,清洗液用50%甲醇水.最后點擊保 存按鈕,在保存窗口輸入該方法的名稱.二、建立批處理：1、雙擊Build acquisition batch ,在右邊窗口 set欄為批處理保存的文件夾 命名以便識別,冉點擊add set,最后點擊add sample,再選擇之前建立的LC-MS 方法,在彈出的窗口內(nèi)的number 進樣樣品數(shù)處填入需要進樣的 樣品個數(shù), 點擊OK.2、在參加的樣品列表內(nèi)依次填寫 sample name 樣品名稱、via position 樣 品瓶的位置、inj.volunme 進樣體積：一般5微升或10微升.3、

14、在submit項下點擊submit按鈕以提交樣品序列.4、點擊工具條上左上角的view queue按鈕,可查看已提交的樣品.此時將儀器從校正狀態(tài)退出,進入分析模式.確認泵已翻開,首次進樣液相 先排氣,再平衡儀器：先點擊工具條上的equilibrate平衡按鈕,在彈出的平衡 窗口中輸入平衡時間10min,點擊ok.右下角圖標會變黃,待平衡結(jié)束后此處 圖標會變成綠色,此時即可點擊start sample按鈕采集樣品信息,儀器會自動對 已提交的全部樣品進行采集.第五局部數(shù)據(jù)處理1 .雙擊翻開Multiquilt ,選擇工程,點擊File下的熒光棒型圖標：點擊 sample, 選擇需要的標準品和樣品數(shù)

15、據(jù),點擊 next, create new method為方法命名, 點擊next,選擇一個有代表性的樣品一般選擇濃度較大的標品數(shù)據(jù),設(shè)置 分組同一物質(zhì)定量離子和定性離子設(shè)置為一組,并指定內(nèi)標,next,對每 個物質(zhì)進行積分.2 .設(shè)置積分參數(shù)：a、Causian Smoth 平滑：一般是0,如有毛刺可改成1或2；b、 Expeceted Time 保存時間：一般不動c、Expected time范圍：一般30s,表示在保存時間 土5s范圍d、 最小峰寬e、最小峰高f、背景噪音扣除：可調(diào)整目標峰基線以下被積分的面積,比例越高積分越往下,必要時調(diào)整.g、分峰因子：峰有分叉時設(shè)置,如有兩個分叉,設(shè)

16、置為2,峰分叉不能大于2h、單位：設(shè)置單位,勾選 Apply units to all可將此單位用于所有化合物 點擊next,點擊finish 0在新跳出窗口內(nèi)將標準品選定,輸入濃度.查看各化合 物積分是否正常,點擊第三個圖標查看標準曲線.報告打印：點擊 File, create report Report template 選擇報告模板,般用 samplel 和標 線,內(nèi)標報告只能用sample1,2,3,命名,選擇存儲報告位置,點 ok.信噪比：選擇工程,雙擊open date file,點擊sample,選擇低濃度樣品,點擊 ok,點擊 XIC ,選擇定量離子,點擊ok,選中峰,按住sh

17、ift,選峰附近的一段時間,點 Script,點擊S-To NScript,即可得到結(jié)果.第六局部：LC-MS離子阱原理及其應(yīng)用原理：在進行多級質(zhì)譜分析MS-MS時,首先限定目標質(zhì)量的離子.通過調(diào)整交 變電壓,將大于以及小于目標質(zhì)量的離子射出,從而使得僅有一個質(zhì)量的離子存 在于離子阱中并將其富集.目標質(zhì)量的范圍被稱為 Isolation Width.之后通過向 離子阱內(nèi)注入氣體通常為氮氣或氮氣,與離子發(fā)生碰撞使其被打成碎片.操作方法：首先在Analyst中翻開一個成熟的MRM采樣方法,然后右鍵單擊 Acquisition Method 中的 MRM ,在彈出菜單中選擇 Add IDA Crit

18、eria Level.在新增的IDA-First Level Criteria頁面中設(shè)置相關(guān)邏輯選項其中四項尤 為重要1Select"X" to "Y" most internseOks個組分色譜共流出時,指定觸發(fā)最強的假設(shè)干個母離子,“1 to 2表示最強和次強的兩個母離子,“ 1 to 3襲示最強和次強和第三位三個母離子,以此類推.請注意,如果 選擇了 “1 to 2< “1 to 3,'那么后續(xù)的EPI個數(shù)應(yīng)調(diào)整為對應(yīng)的兩個或三 個.一般選擇兩個以下2)After Dynamic Background Subtraction of Survey Scan 表示執(zhí)行動態(tài)背景 扣除,使得感興趣的母離子都盡可能的獲得觸發(fā)EPI的時機.該選項尤為重要,為必選項.3)Exclude former target ions在某些情況下,一次數(shù)據(jù)采集中,如果同一 個