病原生物學(xué)探索性實驗阿米巴痢疾傳染源、病原體檢測及致病性探究

1、病原生物學(xué)探索病原生物學(xué)探索性實驗阿米巴痢性實驗阿米巴痢疾傳染源、病原疾傳染源、病原體檢測及致病性體檢測及致病性探究探究一、研究背景溶組織內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體侵襲腸壁引起腸阿米巴病。常見部位在盲腸和升結(jié)腸，臨床過程可分為急性或慢性，急性期的臨床癥狀從輕度、間歇性腹瀉到暴發(fā)性、致死性痢疾不等。多流行于熱帶和亞熱帶地區(qū)研究目的1.確定引起腹瀉暴發(fā)的傳染源。2.根據(jù)檢查和培養(yǎng)鑒定，確定引起腹瀉的病原體為溶組織內(nèi)阿米巴。3.探究和了解溶組織內(nèi)阿米巴中一種重要致病因子半胱氨酸蛋白酶的致病機制。研究意義1.確定傳染源可控制疾病的傳播，同時對疾病的預(yù)防有借鑒意義。2.鑒定病原體及其致病因子的致病機制，為疾病的治療

2、提供理論和實驗依據(jù)。二、研究現(xiàn)狀及發(fā)展現(xiàn)狀1.在離體的溶組織內(nèi)阿米巴腹足中，半胱氨酸酶和絲氨酸蛋白酶含量很高72.在溶組織內(nèi)阿米巴包囊期，編碼半胱氨酸酶的基因上調(diào)7；3.半胱氨酸酶的高表達可使非致病性的溶組織內(nèi)阿米巴具有致病能力8；4.溶組織內(nèi)阿米巴包含一種能改變結(jié)腸上皮屏障功能的閉合蛋白樣蛋白11研究現(xiàn)狀及發(fā)展現(xiàn)狀5.溶組織內(nèi)阿米巴中的半胱氨酸蛋白酶可破壞結(jié)腸黏膜的聚合結(jié)構(gòu)，并改變其保護功能14 ；6.半胱氨酸蛋白酶結(jié)合蛋白家族6（CPBF6）參與介導(dǎo)淀粉酶轉(zhuǎn)運至吞噬體內(nèi)4；7.溶組織內(nèi)阿米巴半胱氨酸蛋白酶5可結(jié)合結(jié)腸細胞上的整聯(lián)蛋白，刺激NF-B介導(dǎo)促炎癥反應(yīng)10；8.溶組織內(nèi)阿米巴分泌半

3、胱氨酸蛋白酶可誘導(dǎo)人肥大細胞中IL-8的產(chǎn)生6；三、研究內(nèi)容及技術(shù)路線傳染源的確定病原體的檢測半胱氨酸酶致病性的鑒定1.1.傳染源的確定痢疾等腸道疾病的傳染源鑒定可以通過檢查病人的糞便來確定傳染源的性質(zhì)以及病原體的類型。包囊水源糞便肥料包囊手指、食物或用具蠅類及蟑螂食物2.2.病原體的檢測1）.糞便檢查 活滋養(yǎng)體檢查法 包囊2）.組織檢查 乙狀結(jié)腸鏡、纖維結(jié)腸鏡3.3.半胱氨酸酶致病性的鑒定培養(yǎng)溶組織型阿米巴siRNA準(zhǔn)備重組EhCP112蛋白的表達及純化Western blot檢測設(shè)計siRNA將siRNA導(dǎo)入溶組織型阿米巴滋養(yǎng)體抗體生成檢測蛋白酶活性細胞毒性和細胞吞噬性檢測紅細胞吞噬性檢測

4、四. .創(chuàng)新點及特色通過研究半胱氨酸蛋白酶的致病機制，深入探究阿米巴的致病性，為臨床治療提供一定參考。五、預(yù)期成果實現(xiàn)用siRNA沉默Ehcp112的設(shè)想。并且通過檢測證明，在Ehcp112被沉默后，溶組織內(nèi)阿米巴的細胞溶解和吞噬能力都顯著減小六、可能產(chǎn)生的問題設(shè)計siRNA沉默Ehcp112以及檢測Ehcp112確實被沉默通過檢測，證實沉默Ehcp112后溶組織內(nèi)阿米巴的毒力減弱七、參考文獻1Olga Zamudio-Prieto. Conformational changes induced by detergents during the refolding of chemically

5、denatured cysteine protease ppEhCP-B9 from Entamoeba histolytica J. Biochimica et Biophysica Acta, 2014, (3): 1299-1306.2Ramn Ocdiz-Ruiz. Effect of the silencing of the Ehcp112 gene on thein vitro virulence of Entamoeba histolytica J. Parasites & Vectors,2013, (6): 1-9.3 Nazmiye lk TZEMEN. Entamoeba

6、 histolyticanm Tanismda Direkt Mikroskopi, Kultur, ELISA ve Molekler Yntemlern Karilatirilmasi J. Mikrobiyol Bul, 2014, (1): 114-122.4 Atsushi Furukawa. Cysteine Protease-Binding Protein Family 6 Mediates the Trafficking of Amylases to Phagosomes in the Enteric Protozoan Entamoeba histolyticaJ. Amer

7、ican society for microbiology, 2013, (5): 132-144.六、參考文獻5 Cdiz, Aleyla EscuetaDe. Transcriptome Analysis of Encystation in Entamoeba invadensJ. Public Library of Science, 2013, (9)6Lee YA, Nam YH. Entamoeba histolytica-secretedcysteine proteasesinduce IL-8 production in human mast cells via a PAR2-i

8、ndependent mechanism.Parasite. 2014.1.21.7Marquay Markiewicz J, Syan S.et al.A proteomic and cellular analysis of uropods in the pathogen Entamoeba histolytica.PLoS Negl Trop Dis. 2011 Apr 5;5(4):e1002. 8Bosch DE, Kimple AJ, Muller RE.et al. Heterotrimeric G-protein signaling is critical to pathogen

9、ic processes in Entamoeba histolytica.PLoS Pathog. 2012;8(11):e10030409Guzmn-Silva MA, Santos HL, et al. Experimentalamoebicliver abscess in hamsters caused by trophozoites of a Brazilian strain of Entamoeba dispar.Exp Parasitol. 2013 May;134(1):39-47. 六、參考文獻10Yongzhong Hou, Leanne Mortimer , Kris C

10、hadee. Entamoeba histolytica Cysteine Proteinase 5 Binds Integrin on Colonic Cells and Stimulates NFB-mediated Pro-inflammatory Responses. The Journal of Biological Chemistry. November 12, 2010:28511Michael Goplen, Manigandan Lejeune.et al. Entamoeba histolytica Contains an Occludin-Like Protein Tha

11、t Can Alter Colonic Epithelial Barrier Function. PLoS One. 2013; 8(9): e73339.12Xuchu Que and Sharon L. Reed. Cysteine Proteinases and the Pathogenesis of Amebiasis. Clin Microbiol Rev. Apr 2000; 13(2): 196206.13Microscopy versus enzyme linked immunosorbent assay test for detection of Entamoeba histolytica infection in stool samples六、參考文獻14Moncada D, Keller K, Chadee K. Entamoeba histolytica cysteine proteinases disrupt the polymeric structure of colonic mucin and alter its protective function. Infect Immun. 2003;71:838-844.15Betanzos A,