Nk細胞殺傷腫瘤的臨床應用

1、2 NK 細胞治療策略臨床上采用的 NK 細胞治療方案有: IL-2 激活NK 細胞殺傷腫瘤、單克隆抗體介導 NK 細胞殺傷腫瘤、自體和異體 NK 細胞過繼治療殺傷腫瘤 NK 細胞的治療效果與 NK 細胞的數量和殺傷功能直接相關，用上述治療方案擴增激活的 NK 細胞普遍存在數量低和殺傷功能弱的問題2. 1 IL-2 激活 NK 細胞殺傷腫瘤IL-2 是第 1 個被批準用來治療腫瘤的細胞因子，早在 1992 年，IL-2 已經獲得了美國 FDA 的批準，用于治療轉移性腎細胞癌( RCC)16 體內和體外的實驗表明，IL-2 能增加 NK 細胞的數量，提高被腫瘤 細 胞 抑 制 的 NK 細 胞

2、的 殺 傷 能 力 Gottlieb等17發(fā)現，IL-2 可以激活 NK 細胞來殺傷多發(fā)性骨髓瘤( multiple myeloma) 細胞系和來自多發(fā)性骨髓瘤病人的腫瘤細胞18 IL-2 能顯著增加患者對腫瘤治療的反應率 治療過程中，患者外周血中 NK細胞數量的上升與否是衡量治療效果的風向標19例如，IL-2 在神經母細胞瘤的腫瘤臨床治療中有效果 在化療和骨髓移植后進行 IL-2 治療的 7 個病人中只有 1 人復發(fā)，而復發(fā)者正是 IL-2 治療后 NK 細胞數量沒有明顯改變的病人19雖然 IL-2 治療對某些病例安全有效，但在其它類型腫瘤的研究中，注射低劑量 IL-2 的臨床效果不顯著 例

3、如，在淋巴瘤、乳腺癌和高齡 AML 中 低劑量 IL-2 治療對上述腫瘤效果不佳，這與直接注射低劑量 IL-2 只能擴增殺傷力不強的 CD56brightNK 細胞亞群有關 同時，IL-2 還能擴增在膜上表達 IL-2 受體 的 Treg 細胞，而 Treg 細胞能夠顯著抑制 NK 細胞的殺傷作用202. 2 單克隆抗體介導 NK 細胞殺傷腫瘤單克隆抗體對腫瘤有極好的輔助治療效果NK 細胞不具備識別腫瘤抗原的功能，而需要借助抗體 的 介 導 才 能 結 合 殺 傷 腫 瘤 細 胞 ( antibodydependent cell mediated cytotoxicity，ADCC) 目前的研

4、究表明，所有單克隆抗體的 ADCC 作用均需通過NK 細胞介導21，22 ch14 18 是抗 GD2 的單克隆抗體，GD2 在神經母細胞瘤細胞表面有極高的表達在臨床期實驗中發(fā)現，ch14 18 與 IL2 以及 GM-CSF 聯合使用，能顯著增強神經母細胞瘤標準化療的效果 ch14. 18 聯合 IL2 和 GM-CSF 的使用，使神經母細胞瘤患者的治愈率從 2 年無病率的 46 ± 5%提高到 66 ± 5%23 Rituximab 是抗 CD20 的單克隆抗體，單獨使用或與化療結合使用對非霍奇金淋巴瘤有較好的治療作用24 對于使用 Rituximab 后復發(fā)的非霍奇金

5、淋巴瘤患者，自體 LAK 細胞移植能改變患者對 Rituximab 的耐藥性 Rituximab 也可以用來治療慢性淋巴細胞白血病、瓦爾登斯特巨球蛋白血癥、免疫或特發(fā)性血小板減少性紫癜25單克隆抗體在介導 NK 細胞結合殺傷腫瘤細胞的過程中扮演中介作用，殺傷腫瘤細胞仍需依賴NK 細胞 由于腫瘤患者 NK 細胞受到了一定的損傷，因此，如何增加腫瘤患者體內 CD56dimNK 細胞亞群的數量和提高 NK 細胞的殺傷能力是亟需解決的問題2. 3 腫瘤的自體 NK 細胞過繼治療在體外和動物實驗中，體外激活的 NK 細胞對來自患者自體的腫瘤細胞具有殺傷能力 自體免疫治療對于患者通常十分安全，對某些腫瘤也

6、取得了一定的療效 研究顯示，將在體外擴增并激活 13 21 d 的自體 NK 細胞回輸至患者體內，提高了轉移性腎癌患者的緩解率25 體外擴增并激活的自體NK 細胞結合 IFN-b 干擾素回輸到腦膠質瘤患者體內的臨床實驗顯示，這些擴增的細胞對患者很安全，并有一定的治療效果26 在乳腺癌和淋巴瘤的自體 NK 細胞治療中，將體外培養(yǎng) 14 18 d 的 LAK 細胞回輸給病人 據報道，該 LAK 細胞治療患者耐受性良好，患者體內 CD56bright NK 細胞顯著增加 然而，與對照組相比，患者存活率和腫瘤復發(fā)率并沒有明顯改善27 在臨床 期 11 例肺癌和腸癌患者的自體 NK 細胞治療中，患者對用

7、 Hsp70 處理的 NK細胞耐受良好，但是，治療中僅有 1 例患者病情緩解穩(wěn)定28腫瘤患者的 NK 細胞與健康人相比，其類型發(fā)生明顯改變 已有的數據表明，短期培養(yǎng)的 LAK 細胞不能夠轉變 NK 細胞亞群及其功能29 因此，有必要開發(fā)出新的激活 NK 細胞殺傷功能的方法2. 4 腫瘤的異體 NK 細胞過繼治療鑒于腫瘤患者 NK 細胞自體移植面臨的困難，對腫瘤患者進行 NK 細胞異體移植是免疫治療的另一種方式 與干細胞移植不同，NK 細胞的異體移植不要求供者的 6 個 KIR 配體與患者的配體完全匹配 體外實驗證實，NK 細胞對 KIR 不完全匹配的腫瘤細胞的殺傷能力較完全匹配腫瘤細胞的殺傷能

8、力強30 Miller 等31在 2005 年報道了半相合 NK 細胞實驗 在這項臨床期試驗中，43 名晚期腫瘤患者接受了半相合的外周血淋巴細胞 這些外周血淋巴細胞在輸入患者體內之前，在加入1 000 U/mLIL-2 的 X-VIVO 15 培養(yǎng)液中隔夜培養(yǎng) 43 名患者對輸入的細胞完全耐受，沒有明顯的異體排斥 19例急性髓系白血病( acute myeloid leukemia，AML) 患者中有 5 例獲得完全緩解 Koehl 等32將半相合NK 細 胞 輸 入 2 例 急 性 淋 巴 細 胞 白 血 病 ( acutelymphoblastic leukemia，ALL) 患者和 1

9、例 AML 患者體內，未見任何副作用及排斥反應 Passweg 等33用半相合 NK 細胞 治療 4 例 AML 和 1 例慢性粒細胞白血病( chronic myelogenous leukemia，CML) 病人耐受性良好，無排斥反應 在 Shi 等34臨床期研究中，10 例多發(fā)性骨髓瘤患者接受了半相合 NK 細胞治療 患者耐受性良好，沒有異體移植排斥反應跡象，50% 病人的癥狀獲得完全緩解 2.5 異體NK細胞過繼免疫在治療血液腫瘤中的應用同種異體NK細胞過繼免疫治療的應用是建立在供受者HLA-I不相合的基礎上，通過同種異體反應起到殺傷腫瘤的作用。同種異體反應的積極效應是Ruggeri等

10、在haploHSCT中首次報道的。通過對去T淋巴細胞haploHSCT中NK細胞的作用分析得知：異體半相合NK細胞可以增加抗腫瘤作用；異體半相合NK細胞可以阻斷移植物抗宿主病(graftversus host disease，GVHD)的發(fā)展；異體半相合NK細胞可以促進移植物的植入¨11。為異體半相合NK細胞的過繼免疫治療的發(fā)提供了有利條件。初期試驗及后續(xù)的I期和期臨床試驗都證實了高危白血病患者對NK細胞的免疫治療是敏感的¨213。Miller等在為了確定異體NK細胞輸注的安全性及NK細胞在體內擴增情況的試驗中發(fā)現供受者HLAI不相合的緩解率高。為了確定在接受免疫抑制治療的

11、兒童AML患者中同種異體半相合NK細胞輸注的安全性、敏感性，Rubnitz等H4 o對10例未移植的低、中危組AML患者進行異體半相合NK細胞輸注聯合IL-Z治療，結果沒發(fā)現任何不良反應，也沒有發(fā)生GVHD，在964 d的中位隨訪期后，所有患者都處于緩解狀態(tài)，2年無事件生存率達100。Curti等¨糾對13例中位年齡在62歲的AML患者進行NK細胞輸注聯合IL2治療，同樣沒有發(fā)生任何不良反應(包括GVHD)，5例活動期患者中有1例出現短暫性CR；2例分子學緩解患者的緩解期分別持續(xù)到4個月和9個月；6例形態(tài)學完全緩解的患者，其中有3例患者分別有32、34和24個月的無瘤生存期。這些試驗

12、都證實了異體半相合NK細胞對AML腫瘤細胞的殺傷作用。2. .1補充 給轉移癌患者輸入 IL-2 激活的 NK 細胞或輸入在體外經過擴增的自身或供者來源的粘附 NK 細胞，可以達到治療腫瘤的目的11。人體的腫瘤細胞和病毒感染細胞的細胞溶解是通過 NK 細胞介導自然細胞毒作用抗體依賴的細胞毒作用以及陽性和陰性細胞溶解信號控制作用的12，13。其中陰性信號（抑制）的轉導是被一些類 Ig 受體 （KIRs）、ILT2/LIR 和 C-lectin 域包含受體CD94/NKG2A 完成的。在腫瘤患者體內缺乏外來刺激的情況下，抗腫瘤免疫反應很少能發(fā)揮作用，因此許多方法都是通過激活腫瘤患者免疫細胞來發(fā)揮作用。通過細胞因子、基因修飾、KIR 封閉抗體激活 NK細胞，是目前常用方法。研究表明腫瘤靶細胞表達 Rae21 基因或 H-60 基因可激發(fā)NK 細胞的殺傷活性和 IFN- 分泌，而且可觸發(fā)巨噬細胞分泌NO 和產生 TNF-14。體內研究發(fā)現 Rae-1 或 H-60 轉染的腫瘤細胞由于能有效激活 NK 細胞及 CD8+T 細胞，幾乎不能成瘤，而且能誘發(fā)繼發(fā)保護效應15。重要的是，表達 MIC 蛋