醫(yī)用電子顯微技術(shù)

1、 醫(yī)用電子顯微技術(shù) 緒 論 電鏡室 陳明霞 Tel: 82655158 E-mail: cmxem電子顯微鏡以電子束代替光束，以電磁透鏡（電子透鏡）代替玻璃透鏡而使物體成像的。 （electron microscope, EM, 電鏡） 分辨率能夠分辨兩點(diǎn)間最小距離的能力 人眼的分辨率：0.10.2mm 人眼的分辨率：0.10.2mm宏觀水平 1665年人類發(fā)明了光學(xué)顯微鏡，其分辨率：0.2µm微觀/細(xì)胞水平 1931年德國科學(xué)家Knoll和Ruska發(fā)明了透射式電子顯微鏡，其分辨率：0.1-0.2nm （晶格）分子細(xì)胞水平/ 超微結(jié)構(gòu) 1935年Knoll，1942年M.Mulla

2、n(英國劍橋大學(xué)) 發(fā)明了掃描式電子顯微鏡，其分辨率：3-6nm transmission electron microscope，TEM, 透射電鏡 scanning electron microscope, SEM，掃描電鏡 電鏡的應(yīng)用1、細(xì)胞生物學(xué)EM證實(shí)并豐富了細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu) LM：線粒體、高爾基體等 EM：核糖體、微絲、微管等細(xì)胞化學(xué)決定酶蛋白的特定部位，證實(shí)結(jié)構(gòu)的機(jī)能狀態(tài) 冰凍蝕刻生物膜結(jié)構(gòu)真相單位膜液態(tài)相嵌學(xué)說2、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)分子生物學(xué)：借助EM觀察細(xì)胞器的生物功能 線粒體：氧化磷酸化全過程 ATP能源的產(chǎn)生基粒內(nèi)進(jìn)行 核蛋白體/核糖體（核酸+蛋白質(zhì)）： 核蛋白體/核糖體+

3、信使核糖核酸（mRNA） 多聚核蛋白體/多聚核糖體電鏡可見 （D=1-1.5nm）遺傳基因：DNA分子鏈中某一區(qū)段可用特殊方法展開成一單鏈電鏡可見3、微生物學(xué)1、進(jìn)一步了解了細(xì)菌、真菌等形態(tài)結(jié)構(gòu) 2、確定了病毒的形態(tài) 結(jié)構(gòu)3、發(fā)現(xiàn)了病毒復(fù)制合成及制病機(jī)理4、臨床快速診斷病毒性疾病4、免疫學(xué) 在細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)水平上觀察抗原抗體相互作用的部位，可解決LM難以定位的問題。如： 不孕癥、白血病的診斷：單抗 膠體金5、病理學(xué)/病理診斷學(xué)（1） 病毒性疾病的診斷（2） 腫瘤的診斷（3） 腎臟疾病的診斷（4） 肝臟疾病的診斷（5） 骨骼肌疾病的診斷（6）

4、60; 臨床疑難病例的診斷（1）     病毒性疾病的診斷電鏡是確定病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)最有效用的工具 超薄切片-感染細(xì)胞內(nèi)病毒的大小、形態(tài)、排列及其復(fù)制組裝、成熟的過程，有包膜病毒的芽生成熟的部位、病毒包含體的形態(tài)特征、致病病毒的鑒定和分類 負(fù)染色快速、簡單、診斷（2）     腫瘤的診斷病理診斷：光鏡+免疫組化大部分腫瘤可以明確診斷病理診斷的局限性：腫瘤的多項(xiàng)分化+免疫組化試劑的交叉反應(yīng) 電鏡診斷：利用電鏡技術(shù)進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)診斷新途徑 神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤 神經(jīng)內(nèi)分泌顆粒 （原發(fā)/轉(zhuǎn)移） 電鏡識(shí)別（3） &

5、#160;   腎臟疾病的診斷診斷：光鏡+免疫熒光+電鏡，在某些疾病的診斷中，電鏡起著決定性作用。 遺傳性腎炎基底膜分裂、板層 腎小球薄基底膜病基底膜變薄 Farbry氏病足細(xì)胞中大量的髓鞘樣小體 腎淀粉樣變類淀粉樣纖維 纖維性腎小球病微管樣纖維 （4）     肝臟疾病的診斷代謝性疾病的診斷（肝穿刺） Wilson病 病變早期線粒體大小、 形態(tài)不一；基質(zhì)電子密度增高；內(nèi)外膜分離等（5）     骨骼肌疾病的診斷代謝性肌?。?線粒體肌病骨骼肌內(nèi)含有大量的線粒體 糖原儲(chǔ)積病骨骼肌纖維間含

6、有大量糖原 （6）     臨床疑難病例的診斷 利用多種電鏡技術(shù) 對(duì)臨床（LM）難以確診的病例進(jìn)行診斷急性白血?。杭?xì)胞具有高異質(zhì)性+形態(tài)學(xué)特征診斷60%-70%（LM）WBC分化成熟過程中相應(yīng)的細(xì)胞表面抗原免疫電鏡技術(shù)+EM酶細(xì)胞化學(xué)+形態(tài)特征診斷（EM）貧血：RBC的形態(tài)學(xué)改變（SEM6、 其它理工科：各種材料的微細(xì)結(jié)構(gòu)植物類：花草、樹葉等電鏡對(duì)臨床疾病的診斷作用是效的，目前仍存在以下問題 ：1、 傳統(tǒng)習(xí)慣問題2、 免疫組化技術(shù)及分子遺傳學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展可輔助診斷3、 EM技術(shù)的復(fù)雜性，樣品制作的高難度，儀器設(shè)備昂貴4、 診斷與鑒別診斷的指標(biāo)尚未完全確

7、立EM下進(jìn)行觀察時(shí)應(yīng)具有以下觀點(diǎn)：1、 形態(tài)與功能2、 全局與發(fā)展3、 比較和對(duì)照4、 三維立體5、 LM和EM 電鏡圖象的描述 形態(tài)，大小，數(shù)量，電子密度 “大部分線粒體的基質(zhì)內(nèi)近嵴旁可見少數(shù)150-300nm大小，無定形，絮狀，中等電子密度的物質(zhì)沉積”可以說明該線粒體以至于該細(xì)胞已處于不可逆的嚴(yán)重退變狀態(tài)。 如何獲得理想的電鏡照片1、 首先要排除各種人工假象（取材、固切片、染色）2、 EM操作正確，排除漂移、像散等因素。3、 觀察中拍照注意定位準(zhǔn)確，調(diào)整好反差及焦距。4、 暗室制作、照片洗印。 細(xì)胞及細(xì)胞器大小的計(jì)算方法 圖象的大?。╩m）×1000（）

8、15;1000 (n) 該圖片的放大倍數(shù)= 某細(xì)胞/細(xì)胞器的實(shí)際大小(nm)照片的標(biāo)識(shí)方法標(biāo)尺大?。╩m）×1000()×1000(n) 該圖片的放大倍數(shù)= 標(biāo)尺代表的實(shí)際大小(nm) 電子顯微鏡的基本原理與結(jié)構(gòu) 分辨率能夠分辨兩點(diǎn)間最小距離的能力透射電鏡（內(nèi)部結(jié)構(gòu)）transmission electron microscope TEM掃描電鏡（表面結(jié)構(gòu)）scanning electron microscope SEM， 1、透射式電子顯微鏡（TEM）基本原理分辨本領(lǐng)/分辨率： 能夠區(qū)別物體細(xì)節(jié)的能力/放大倍率： 物體經(jīng)放大后的大小與原物大小之比影響人眼分辨率的主要因素：

9、 照明、距離、反差 (人眼的分辨率=0.1-0.2mm)影響光鏡分辨率的主要因素： 色差、球差、干涉、衍射 ( LM的分辨率=0.2m) 阿貝公式 0.61 = nsin =分辨率 =光線的波長(390-750nm) n =物體所在介質(zhì)的折射率 =物與物鏡所成夾角一半 目前技術(shù)上 nsin最大可達(dá)1.2，則LM的分辨本領(lǐng)：0.5電子顯微鏡光源電子波 A.具有光線的粒子性質(zhì)和波動(dòng)性質(zhì)，波長極短 B.波長與其速度成反比 ，加速電壓增加波長變短 加速電壓 電子波長 100V 1.23Å 50KV 0.053Å 100KV 0.037Å 1mm10 7Å放大倍數(shù)

10、與分辨率的關(guān)系 M=眼/ 鏡M放大倍數(shù) 眼人眼的分辨率 鏡電鏡(LM)的分辨率有效放大：顯微鏡的分辨本領(lǐng)放大到人眼的分辨本領(lǐng)所需要的最小放大倍數(shù) (LM=500-1000,EM=1000,000) 無效放大/空放大：超過有效放大值的放大0.2mm(人眼) 0.2µm （LM） 0.2nm（EM）2、TEM的結(jié)構(gòu) 光源電子槍電子透鏡靜電透鏡（電場）電磁透鏡（磁場）樣品室螢光屏和照相機(jī)真空泵（ 旋轉(zhuǎn)泵/機(jī)械泵和擴(kuò)散泵聯(lián)合抽氣) 其它部件：閥門，真空管道，各種密封圈墊真空不好：燈絲氧化、高壓放電、電子散射、樣品污染鏡體系統(tǒng)穩(wěn)定的電壓、電流，電子槍用的高壓電源： 3萬伏；10萬伏；20萬伏；

11、50萬伏；100萬伏；300萬伏。3、TEM的成像機(jī)制光學(xué)顯微鏡物體對(duì)光線的吸收和反射 電子顯微鏡物體對(duì)光源電子的散射。組成物體元素的原子序數(shù)愈大則對(duì)電子的散射能力愈強(qiáng)，原子序數(shù)愈小則對(duì)電子的散射能力愈弱。4、TEM的用途樣品的內(nèi)部結(jié)構(gòu)5、 SEM結(jié)構(gòu)與基本原理原理 二次電子成像 結(jié)構(gòu) 電子光學(xué)系統(tǒng) （鏡體系統(tǒng)） 電子槍（光源）、電子透鏡、樣品室 信號(hào)檢測、傳遞和顯示系統(tǒng) 掃描系統(tǒng) 真空系統(tǒng)電子系統(tǒng)： （同TEM） 6、SEM的成像機(jī)制 加速電壓 電磁透鏡 陰極電子 電子束（電子探針） 聚焦 探測器 二次電子發(fā)射 樣品表面 視頻放大器 二次電子信號(hào) 信號(hào)反差 顯像管 7、SEM特點(diǎn) ：分辨率較

12、高（LM） ：放大倍數(shù)大且方便（100，000-200，000） ：景深長，視場大 （1MM/TEM，10CM） ：樣品制備簡單/原樣（TEM） ：對(duì)樣品損傷小 ：可帶出多種探測器，對(duì)樣品進(jìn)行綜合分析 ：可對(duì)圖像錄制，可用計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖像處理 TEM：內(nèi)部結(jié)構(gòu)（高分辨率） SEM：表面結(jié)構(gòu) 8、SEM的用途 樣品的表面結(jié)構(gòu)影響電子顯微鏡分辨率的主要因素 1. 儀器質(zhì)量2. 電源3. 振動(dòng)和磁場4. 環(huán)境污染5. 環(huán)境的溫濕度6. 操作 超高壓電子顯微鏡：電壓5003000KV分析電子顯微鏡 高分辨型TEM/SEM：采用場發(fā)射、超高真空、低球差、高加速電壓等技術(shù)，DNA/RNA環(huán)境SEM：采用多級(jí)

13、壓差光闌，使鏡筒保持高真空的同時(shí)，樣品室可保持一定的大氣壓，為含水量大的生物樣品及濕樣品準(zhǔn)備了環(huán)境條件。掃描探針顯微鏡：掃描隧道顯微鏡、原子力顯微鏡 電子顯微鏡樣品制備技術(shù) 透射電鏡樣品的制備技術(shù) 掃描電鏡樣品的制備技術(shù) 超薄切片技術(shù) 生物材料制作 冷凍蝕刻技術(shù) 非生物材料制作 負(fù)染色技術(shù) 血管鑄型 其它超薄切片技術(shù): 常 規(guī) 電 鏡 技 術(shù) 電鏡酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù) 在一定的條件下使細(xì)胞內(nèi)的酶作用于酶的底物，再將酶反應(yīng)的產(chǎn)物作為反應(yīng)物質(zhì)，在酶的作用部位進(jìn)行捕捉，使其在電鏡下具有可見性 電鏡免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理， 用高電子密度的標(biāo)記物標(biāo)記抗體后，和相應(yīng)的抗原結(jié)合，用電鏡觀察的

14、一種技術(shù)電鏡放射自顯影技術(shù) 利用放射性同位素所發(fā)射出來的帶電粒子作用于感光材料的鹵化銀晶體，從而產(chǎn)生潛影，通過顯影過程將 “像”顯示出來，以研究該放射形物質(zhì)在機(jī)體，組織或細(xì)胞的經(jīng)跡或顆粒定位技術(shù)示蹤細(xì)胞化學(xué)技術(shù) 利用高電子密度示蹤劑在細(xì)胞內(nèi)的擴(kuò)散，通過電鏡下觀察的一種技術(shù)冷凍蝕刻技術(shù)（復(fù)型）：冷凍斷裂于復(fù)型相結(jié)合的一種技術(shù)主要顯示膜相結(jié)構(gòu)的技術(shù)負(fù)染色技術(shù) 原理：利用染色液(重金屬鹽類)中的高電子密度物質(zhì)包圍低電子密度的樣品，使其在TEM下 呈現(xiàn)負(fù)像的技術(shù). 用途：觀察生物大分子、病毒、細(xì)菌、 分離的細(xì)胞器以及蛋白質(zhì)晶體等顆粒性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、 大小以及形狀等。掃描電鏡的生物樣品制作程序 冷凍 割斷

15、 取材 清洗 固定 脫水 干燥 組織導(dǎo)電處理 （血管鑄型/管道） 噴金SEM觀察（一）取材 表面清潔、及時(shí)固定、部位準(zhǔn)確（二）清洗表面清潔一般清潔/特殊清潔吹氣球等吹 緩沖液/生理鹽水/DDW 酶 有機(jī)溶劑（三）固定同TEM樣品固定劑 ：   戊二醛、四氧化餓 、多聚甲醛、高錳酸鉀固定溫度、時(shí)間：基本同TEM樣品固定方式：基本同TEM樣品（四）脫水乙醇/丙酮梯度脫水（五）干燥 n   1空氣干燥 n   2真空干燥 n   3冷凍干燥 n   4乙脂真空干燥 n   5臨界點(diǎn)

16、干燥 (六) 樣品的粘貼n   導(dǎo)電性能好，不破壞樣品結(jié)構(gòu)、牢固(七) 導(dǎo)電/噴金 方法：   真空鍍膜、離子濺射鍍膜。 作用：  防止或減輕放電、提高圖像質(zhì)量 要求：樣品表面導(dǎo)電膜厚度均勻，無結(jié)構(gòu)且較薄，不掩蓋樣品真實(shí)結(jié)構(gòu)，二次電子發(fā)射率高。 超薄切片制作法概述 TEM:transmission electron microscope SEM:scanning electron microscope 電鏡樣品制備技術(shù)n 透射電鏡樣品的制備(TEM) 超薄切片技術(shù)（常規(guī)、細(xì)胞化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、放射自顯影） 冷凍蝕刻技術(shù)（復(fù)型） 負(fù)染色技術(shù) 其

17、它n 掃描電鏡樣品的制備(SEM) 生物材料制作（表面、內(nèi)部） 非生物材料制作 血管鑄型 超薄切片制作技術(shù)超薄切片為TEM提供的厚度為10-100nm的切片石蠟切片（LM）超薄切片（EM） 超薄切片制作程序取材前固定浸洗后固定浸洗脫水浸透包埋聚合切片染色一、取材n 1、快 樣品快速浸入固定液 1分鐘內(nèi)n 2、小 1mm3n 3、低溫 0-4n 4、部位準(zhǔn)確n 5、避免人工損傷二、固定n 固定的目的n 1、防止自溶n 2、防止細(xì)胞成分丟失或增加n 3、易于切片n 4、增加反差理想的固定劑n 1、穿透力強(qiáng)n 2、穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分n 3、使細(xì)胞內(nèi)成分變不溶n 4、增強(qiáng)圖像反差n 5、酶及

18、大分子活性得到保存固定劑種類n 四氧化鋨n 戊二醛n 多聚甲醛n 高錳酸鉀n 其它 四氧化鋨（OsO4）n 1、穩(wěn)定蛋白質(zhì)n 2、保護(hù)脂類n 3、增加圖像反差n 1、滲透力較弱n 2、對(duì)糖類及核蛋酸固定效果差n 3、使酶喪失活性n 4、樣品不可長期固定n 5、價(jià)格昂貴戊二醛（GA）n 1、滲透力強(qiáng)n 2、保護(hù)糖原及核蛋 白 n 3、固定細(xì)胞基質(zhì)及易變結(jié)構(gòu)n 4、可用于細(xì)胞化學(xué)n 5、樣品可長期保存n 6、價(jià)格低廉n 1、不保護(hù)脂肪n 2、不增加反差多聚甲醛n 1、滲透力極強(qiáng)n 2、保存酶活性n 對(duì)細(xì)胞基質(zhì)保存較差，不單獨(dú)使用高錳酸鉀n 保護(hù)磷脂蛋白效果好，對(duì)細(xì)胞膜相結(jié)構(gòu)的保存較好，常用于神經(jīng)纖

19、維及葉綠體等的研究。常用的固定劑方式戊二醛+多聚甲醛+四氧化鋨戊二醛+四氧化鋨固定的注意事項(xiàng)n 1、PH 7.27.4n 2、滲透壓n 3、濃度 OsO41% GA1%-4%n 4、溫度 0-4n 5、時(shí)間n 6、大小固定方法n 1、體外固定法n 2、原位固定法n 3、體內(nèi)微量注射法n 4、血管灌注法n 5、其它固定方法（植物、培養(yǎng)細(xì)胞）緩沖液相應(yīng)的PH適當(dāng)?shù)臐B透壓適宜的離子濃度三、浸洗n 固定后的樣品必須浸洗n 用同系列緩沖液浸洗n 常用：磷酸緩沖液 二甲砷酸鹽緩沖液 四、脫水n 脫水劑：乙醇 丙酮n 脫水時(shí)間：10-30分鐘n 脫水濃度：30%-100% 逐級(jí)脫水五、浸透n 包埋介質(zhì)進(jìn)入組

20、織取代脫水劑六、包埋 樣品包埋于包埋劑中，支持柔軟的組織，便于超薄切片包埋劑： 環(huán)氧樹脂（618、812、水溶性） 十二烷基琥珀酸酐（DDSA） 甲基內(nèi)次甲基二甲酸酐（MNA） 2，4，6-三二甲氨基甲基苯（DMP-30）七、聚合n 包埋劑在溫度的作用下由固體變?yōu)橐后w的過程n 溫度：37、45 、60 八、切片半超薄切片為超薄切片定位的1-2µ的切片（LM）。超薄切片50-70nm載網(wǎng)：銅網(wǎng) 切片刀：玻璃刀九、染色正增差染色染色劑和細(xì)胞中的微細(xì)結(jié) 構(gòu)結(jié)合，以增加這些成分的密度， 從而增強(qiáng)這些成分散射電子的能力。 常用染色劑：硝酸鉛、醋酸鈾負(fù)正增差染色陰性染色，利用染色劑高 密度的背景

21、，“包埋”低密度的樣品。 常用染色劑：醋酸鈾、磷鎢酸 超薄切片制作全過程n 取材 快 小 低溫 部位準(zhǔn)確 避免損傷n 前固定 2-4%GA 2小時(shí)以上n 浸洗 緩沖液洗n 后固定 1% OsO4 1-2小時(shí)n 浸洗 緩沖液洗n 脫水 乙醇 丙酮n 浸透 包埋劑 （EPON812+DDSA+MNA+DMP-30）n 包埋 包埋劑 n 聚合 37-45-60 /60 48小時(shí)n 切片 半超薄切片超薄切片n 染色 醋酸鈾、檸檬酸鉛 10-20分鐘SEM樣品制作 冷凍斷裂 TEM樣品制作 n 取材固定（前、后）浸洗脫水置換 清潔表面 （真空、空氣、冷凍、臨界點(diǎn)）干燥 噴金 取材： 1、表面清潔 2、迅

22、速 3、大小干燥：（1）空氣干燥 （2）真空干燥 （3）冷凍干燥 （4）臨界點(diǎn)干燥 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)病理改變細(xì)胞核亞微結(jié)構(gòu)在電鏡下觀察到的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，是介于細(xì)胞水平和大分子水平之間的結(jié)構(gòu)，也稱細(xì)胞器結(jié)構(gòu)。超微結(jié)構(gòu)分子水平結(jié)構(gòu)。 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)病理是研究細(xì)胞在病理狀態(tài)下出現(xiàn)的各種微細(xì)結(jié)構(gòu)的改變 形態(tài)：細(xì)胞器、大分子、生化代謝的改變 功能：各種酶在細(xì)胞內(nèi)的定位等利用各種電鏡技術(shù)獲得結(jié)果l 顯示細(xì)菌、病毒、分離的細(xì)胞器等結(jié)構(gòu)負(fù)染色技術(shù)l 顯示膜結(jié)構(gòu)超薄切片、負(fù)染色、冷凍斷裂、冰凍蝕刻等技術(shù)l 顯示酶及抗原部位等結(jié)構(gòu)組化、免疫組化技術(shù)正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)LM下細(xì)胞結(jié)構(gòu) 細(xì)胞膜 細(xì)胞質(zhì) 細(xì)胞核質(zhì)膜/單位膜 線粒體

23、核膜 高爾基體 核仁 中心體 染色質(zhì)/染色體 細(xì)胞基質(zhì) 核液 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) 微絲 微管 糖原 EM下細(xì)胞結(jié)構(gòu)l 細(xì)胞的膜相結(jié)構(gòu) 細(xì)胞膜 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) 高爾基體 線粒體 溶酶體 過氧化氫體 核膜l 細(xì)胞的非膜相結(jié)構(gòu) 核蛋白體 中心體 微管 微絲 細(xì)胞質(zhì)基質(zhì) 核仁 染色質(zhì)/染色體 核基質(zhì)細(xì)胞核l 正常結(jié)構(gòu)： 核膜、染色質(zhì)、核仁、核液 超微病理變化一、細(xì)胞核體積與外形： 正常: 體積：細(xì)胞核:細(xì)胞質(zhì)1 核形： 園形/橢圓形,核膜略有曲折 病理：體積：細(xì)胞核:細(xì)胞質(zhì)1 核形： 畸型 、分葉二、細(xì)胞核核膜l 單位膜，核周間隙，核孔 外膜表面有核糖體附著 與粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相連 包圍核物質(zhì)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的一部分 核膜的病理變化l

24、 1、假包涵體l 2、單層膜假包涵體l 3、核突、核袋l 4、病毒引起的核膜改變l 5、核膜外突及大皰形成 1、假包涵體：形成：核膜曲折凹陷，胞質(zhì)隨凹陷的核膜下陷形成。形態(tài)：雙層核膜包圍的包涵體，外層膜的外表面附有異染色質(zhì)。 內(nèi)容物：細(xì)胞質(zhì)成分 2、單層膜假包涵體l 形成：粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)合成的物質(zhì)逆行到核周間隙內(nèi)，再隨核內(nèi)膜內(nèi)陷入核內(nèi)。l 形態(tài)：只有一層核膜（內(nèi)膜）包圍的包涵體l 內(nèi)容物： 粘液與漿液。常見于唾液腺的分泌細(xì)胞內(nèi)及漿細(xì)胞內(nèi)的廬氏小體。 3、核突、核袋： 核突核表面呈錘、結(jié)節(jié)、棒狀突起，外周為核膜，內(nèi)容為核質(zhì)。 核袋核膜內(nèi)陷形成，內(nèi)容為胞質(zhì)，類似于假包涵體。核袋下陷緊鄰于核膜邊緣部

25、分,其外側(cè)繞以恒定寬度的染色質(zhì)帶。 核袋常見于惡性淋巴瘤、淋巴細(xì)胞白血病及其他惡性腫瘤，可能是染色體畸型/核旦白合成缺陷所致。4、病毒引起的核膜改變 核膜反應(yīng)性增生 核膜曲折凹凸不平 成層狀小體5、核膜外突及大皰形成形成：雙層核膜向外呈皰狀突起形態(tài)：雙層核膜包繞的大皰，皰內(nèi)清亮位于核附近，常與核斷離。內(nèi)容物：清亮僅含少許類似染色質(zhì)狀的顆粒，為核內(nèi)物質(zhì)加強(qiáng)外運(yùn)的表現(xiàn)形式。三、核孔的變化l 核孔的數(shù)目與細(xì)胞代謝密切相關(guān)l 孔核減少：衰老細(xì)胞，成熟細(xì)胞l 核孔增多：幼稚細(xì)胞， 腫瘤細(xì)胞四、染色質(zhì)的改變： 常染色質(zhì) 異染色質(zhì)1、染色質(zhì)邊集2、核固縮 3、核碎裂 4、核溶解 1、染色質(zhì)邊集 常見的核染色

26、質(zhì)變化，染色質(zhì)呈不規(guī)則的團(tuán)塊狀集中分布于核周圍，是細(xì)胞死亡過程中較早期的核病變之一。 多見于缺血、X線照射和病毒感染等 2、核固縮/核濃縮：染色質(zhì)濃縮，核體積縮小，電子密度增加，為細(xì)胞壞死的形態(tài)學(xué)標(biāo)志。 3、核碎裂：完整的細(xì)胞核裂解為多個(gè)核碎塊，反映細(xì)胞核功能已經(jīng)完全喪失。4、核溶解：為核膜外形仍然存在，染色質(zhì)分解消失，最終核膜消失，核溶解時(shí)細(xì)胞已經(jīng)壞死。五、核質(zhì)內(nèi)的改變l 1、核內(nèi)小管、小泡、板層： 被覆于假包涵體外的核膜（內(nèi)膜）分解消失后轉(zhuǎn)化而來，總稱為核內(nèi)膜結(jié)構(gòu)， l 2、核小體： 核內(nèi)圓形小體，其周圍常見有一很窄的亮帶，病毒感染時(shí)可見有核小體，腫瘤細(xì)胞內(nèi)容易見到核小體。 l 3、核內(nèi)纖

27、維板： 緊附于核膜內(nèi)層的中等電子密度的細(xì)絲網(wǎng)狀帶， 常見于纖維母細(xì)胞、雪旺氏細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及各種瘤細(xì)胞和損傷細(xì)胞內(nèi)。六、核仁的變化： 大小、數(shù)目與細(xì)胞功能密切相關(guān)1、核仁肥大2、圈狀核仁：3、核仁邊集：4、核仁離解： l 1、核仁肥大 核糖體的前體物質(zhì)增多，是蛋白質(zhì)合成機(jī)能旺盛的標(biāo)志之一，見于新生細(xì)胞、功能旺盛細(xì)胞、胚胎組織細(xì)胞及惡性腫瘤細(xì)胞。l 2、圈狀核仁：形態(tài)上表現(xiàn)為環(huán)形核仁 ,此為核仁退變，核旦白合成受阻的表現(xiàn)。l 3、核仁邊集： 核仁緊靠核膜/核膜凹陷附近，常見于腫瘤， 再生肝細(xì)胞有50%可見核仁邊集。 l 4、核仁離解：原纖維與顆粒分開，可形成核仁帽，是核仁退變的表現(xiàn)。 七、核內(nèi)

28、包含物（真包涵體,無膜包繞） l a. 糖原： 常見于肝炎、糖尿病、甲亢、腫瘤等l b. 脂滴： 偶見于正常組織，腫瘤內(nèi)常見。l c. 晶體及纖維：其本質(zhì)屬蛋白質(zhì)，具有晶格條紋，有時(shí)可見成束微絲。常見于病毒感染 l d. 病毒：大多數(shù)DNA病毒 均在核內(nèi)合成，RNA病毒雖然在胞漿內(nèi)復(fù)制，但也可在胞核 中見到聚集的小管狀物。l e. 鉛、鉍 包涵物：鉛和鉍均可在核內(nèi)形成原形、電子密度大的包含物 l f. 血色素 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)病理線粒體 l 正常結(jié)構(gòu): l 外形 短/長的桿狀，圓/卵圓形，外被有雙層界膜，內(nèi)層向線粒體內(nèi)部反復(fù)折轉(zhuǎn)而形成線粒體嵴，表面附有基粒。l 線粒體內(nèi)外膜間為外室，內(nèi)膜所包繞的空

29、間為內(nèi)室。 l 線粒體嵴的基本形態(tài)板狀嵴 、管狀嵴 病理變化1、. 線粒體腫脹： 線粒體內(nèi)有過多的水潴留， 使線粒體體積增大，質(zhì)地變空。 l 輕度腫脹的線粒體體積略大，基質(zhì)均勻變淺，電子密度降低；線粒體嵴在內(nèi)腔邊緣部分變短、減少，排列紊亂。重度腫脹的線粒體顯著增大， 基質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)多個(gè)亮區(qū)/全部變空，使整個(gè)線粒體轉(zhuǎn)變?yōu)闊o結(jié)構(gòu)的大泡狀。l 線粒體腫脹多發(fā)生于缺血、缺O(jiān)2、中毒的組織。 2、 線粒體肥大與增生： 線粒體肥大時(shí)其體積增大，但基質(zhì)的電子密度基本正常，嵴的數(shù)目正常/增多。線粒體增生是指細(xì)胞內(nèi)線粒體數(shù)目增多。生理：經(jīng)過鍛煉的人骨骼肌細(xì)胞；妊娠子宮平滑肌細(xì)胞病理：高血壓性心臟病 3、巨大線粒體：

30、 線粒體體積增大，可由數(shù)個(gè)線粒體融合/由單個(gè)線粒體發(fā)育而成，常伴有畸形，嵴數(shù)目增多。 惡性腫瘤、慢性酒精中毒、病毒性肝炎等?？蓹z見巨大線粒體。4、線粒體固縮： 線粒體體積小，基質(zhì)變深 ，嵴紊亂進(jìn)而融合。 心肌細(xì)胞內(nèi)多數(shù)固縮線粒體的出現(xiàn)，則為心力衰竭的指征。也可見于肝炎、凝固性壞死組織及癌細(xì)胞內(nèi)。l 5、線粒體絮狀變性 ： 線粒體嵴附近出現(xiàn)的電子密度高、無定形的絮狀物質(zhì)，其邊界不清、大小不一。 預(yù)示細(xì)胞的不可逆的病理改變，是細(xì)胞死亡的亞微結(jié)構(gòu)特征之一。 l 6、線粒體疝： 線粒體局部膜受損，使得相鄰線粒體膜突入另一線粒體內(nèi)，局部呈髓鞘/旋渦狀小體樣結(jié)構(gòu)。 可見于維生素E缺乏及肝癌等。7、畸形線粒

31、體l （1）環(huán)狀線粒體及杯狀線粒體： 線粒體呈C形、O形或U形等畸形， 正常和病理均可見， 可能與細(xì)胞中毒變性有關(guān)。l （2）球形線粒體:常與杯狀線粒體同時(shí)存在， 常見副腎皮質(zhì)、睪丸、服藥后肝細(xì)胞內(nèi)及其它多種瘤細(xì)胞。8、線粒體嵴的改變l a. 同心圓嵴： l b. 之字嵴： l c. 穿孔嵴：線粒體功能活躍的表現(xiàn)l d. 縱向嵴： 線粒體內(nèi)細(xì)胞色素氧化酶活性降低l e. 梭形嵴： l f. 線形致密嵴：即桿狀變性， 呈黑色，可涉及一根、多根/整個(gè)嵴， 常見于心肌梗死細(xì)胞退變的 線粒體內(nèi)，為細(xì)胞不可逆的病變的標(biāo)志。9、線粒體基質(zhì)顆粒的變化及Ca化： l a. 基質(zhì)顆粒消失： l b. 基質(zhì)顆粒增

32、多， l c. Ca化：l 10、線粒體的包涵物：l 1、糖原包涵物： 假包涵物: 雙層膜包繞 真包涵物 ：（1）單層線膜包繞 （2）在擴(kuò)張的嵴內(nèi)（3）游離在基質(zhì)內(nèi)。 常見于各類心肌病及腫瘤的細(xì)胞內(nèi)。l 2、脂質(zhì)包涵物： 真/假包涵體壞死細(xì)胞、瘤細(xì)胞、缺氧的心肌細(xì)胞內(nèi)易出現(xiàn)，為不可逆的變化。l 3、結(jié)晶包涵物：化學(xué)本質(zhì)為蛋白質(zhì)縱切面呈條紋狀，橫切面呈點(diǎn)狀，斜切面呈蜂窩狀/網(wǎng)狀。 l 4、鐵包涵物： 在高鐵性幼紅細(xì)胞貧血時(shí)，常在原紅細(xì)胞及幼紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn). 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)病理內(nèi)質(zhì)網(wǎng)1、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生2、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張及囊泡變3、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的脫粒及解聚4、核糖體板層復(fù)合體5、同心性膜性小體6、池內(nèi)隔離7、對(duì)合

33、扁囊8、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)包含物l 1.  內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生l 粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)密集、增多及 肥大，可 伴有小池?cái)U(kuò)張，反應(yīng)合成外輸?shù)鞍状鷥斪?用增高。 l 滑面及質(zhì)網(wǎng)：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈分枝或小囊狀，且呈灶 性增生聚集，細(xì)胞進(jìn)行藥物解毒時(shí)出現(xiàn)。l 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生常伴有該C的肥大l 2、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張及囊泡變： l 由于水分進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或分泌物潴留導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，表現(xiàn)為口徑增大。 l 囊泡變是指內(nèi)質(zhì)網(wǎng)斷成大量大小不斷的囊泡，常與線粒體腫脹同時(shí)存在。l 多見于炎癥、缺O(jiān)2、中毒及營養(yǎng)不良及瘤細(xì)胞。l 3、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的脫粒及解聚：l 脫粒核糖體從粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜脫落，使膜旁顆粒減少 。 l 解聚多聚核糖體分解為單個(gè)核糖體。為外

34、源性和內(nèi)源性旦白合成障礙的形態(tài)指征。l 多見于肝細(xì)胞損害。l 4、核糖體板層復(fù)合體： 筒狀結(jié)構(gòu)， 橫斷面呈同心圓層狀排列，由平行長軸的微絲組成板層，板層間夾有核糖體。 l 對(duì)毛細(xì)胞白血病有診斷意義。 l 5、同心性膜性小體：l 同心性板層小體，由成對(duì)的膜圍繞而成。l 多見于病毒感染和中毒的肝細(xì)胞及肝腫瘤細(xì)胞內(nèi)。 6、池內(nèi)隔離：l 粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)扁平囊內(nèi)突時(shí)，常有其它細(xì)胞器及包涵物隨同突入，其特點(diǎn)是核糖體緊附于囊之內(nèi)面。 l 多見于萎縮、變性、老化、壞死的細(xì)胞及肝癌細(xì)胞。l 7、對(duì)合扁囊：l 兩層粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)背靠背緊密平行排列形成的多層膜樣結(jié)構(gòu)，內(nèi)側(cè)面核糖體消失，外側(cè)面可有核糖體依附。l 常發(fā)生于分裂旺盛的細(xì)胞、瘤細(xì)胞及病毒感染細(xì)胞 l 8、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)包含物l a. 糖原： l b. 脂質(zhì)： l c. 蛋白質(zhì)： l d. 板層包含物 粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)池內(nèi)呈濃淡交替的板層狀，或呈電子致密顆?；蚓W(wǎng)狀。 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)病理-溶酶體(LY) 特點(diǎn)：含有各種水解酶，對(duì)蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、核酸等物質(zhì)起分解作用形態(tài)：由單位膜包繞而成的囊狀結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器 ，根據(jù)Ly消化活動(dòng)的機(jī)能狀態(tài)可將其分為兩類： 1. 初級(jí)溶酶體2. 次級(jí)溶酶體初級(jí)溶酶體圓形、均質(zhì)、中等電子密度,剛分離出來的囊泡，無作用底物，僅含水解酶，尚未參與細(xì)胞內(nèi)消化過程。次級(jí)溶酶體 溶酶體內(nèi)除含有水解酶外，尚含有