Chap藥物的含量測定方法

1、 化學(xué)分析法 重量分析容量分析含量測定儀器分析法效價測定（生物學(xué)法）可見紫外分光高效液相色譜法氣相色譜法藥物的含量測定容量分析法三種分析方法光譜分析法色譜分析法特點操作簡單、結(jié)果準確，耐用性高，但專屬性差特點特點簡便快速、靈敏度高，有一定的準確度，但專屬性稍差靈敏度與專屬性都高，有一定的準確度，但結(jié)果需要對照品適用于準確度與精確度要求較高的樣品測定適用于靈敏度要求較高，樣本量較大的分析項目適用于專屬性和靈敏度要求較高的復(fù)雜樣品第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點容量分析法定義將已知濃度的滴定液，由滴定管滴加到被測藥物的溶液中，直至滴定液與被測藥物反應(yīng)完全，然后根據(jù)滴定液消耗的濃度和被消耗的體積，按

2、化學(xué)計量關(guān)系式計算出被測藥物的含量。亦稱滴定法特點1.方法簡便易行：儀器價廉易得，操作簡便快速2.方法耐用性高：影響測定的試驗條件與環(huán)境因素少3.測定結(jié)果準確：誤差低于0.2%4.方法專屬性差：對相近雜質(zhì)干擾缺少選擇，適用于主成分含量較高的樣品(如原料藥)分析第一節(jié) 定量分析方法容量分析法有關(guān)計算例:用碘量法測定維生素C的含量時，中國藥典規(guī)定：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相當于8.806mg的維生素C（C2H8O6）T(滴定度):1ml滴定液(m mol/L)相當于被測藥物的毫克數(shù)dDcCbBaA被測藥物 滴定液Mbam)ml/mg(T藥物分子量滴定液濃度滴定度的計算示例一 計算Vi

3、tC的滴定度T碘量法測定VitC含量M(C6H6O6)=176.13，C(I2)=0.05mol/LHI2OHCIOHC6662686Mbam)ml/mg(TT =mbaM=0.0511176.13=8.806(mg/ml)m=0.05mol/L11M=176.13示例二 異煙肼的滴定度溴酸鉀法測定異煙肼含量M(C6H7N3O)=137.14，C溴酸鉀=0.01667mol/LOH3KBr2N3NOHC3KBrO2ONHC3222563376Mbam)ml/mg(TT =mbaM=0.0166732137.14=3.429(mg/ml)ab取用倍數(shù)濃度校正因數(shù)滴定度消耗體積例:VitC的含量測

4、定:精密稱取本品0.1332g,置錐形瓶中,加稀醋酸與新沸過的冷蒸餾水的混合液(1:10)110ml, 加淀粉批示液1ml,用碘滴定液(0.05014mol/L)滴定至藍色,用去15.02ml,每1ml的碘液(0.05mol/L)相當于8.806mg C6H8O6，計算本品是否符合藥典規(guī)定的含量限度。藥典規(guī)定含C6H8O6 不得低于99.0%。濃度校正因數(shù)滴定度消耗體積F=實際C規(guī)定C計算步驟=99.57%= 1又例 非那西丁含量測定 精密稱取本品0.3630g加稀鹽酸回流1小時后，放冷，用亞硝酸鈉滴定液（0.1010mol/L）滴定，用去20.00ml。每1ml亞硝酸鈉液（0.1mol/L）

5、相當于17.92mg的C10H13O2N，請計算非那西丁的含量。%72.9910010003630. 01. 01010. 000.2092.17%非那西丁需做空白試驗的計算公式例:萘普生的含量測定：精密稱取本品0.4960g，加甲醇45ml溶解后，再加水15ml與酚酞指示劑3滴，用NaOH滴定液（0.1078mol/L）滴定，同時用空白試驗校正，求萘普生百分含量。中國藥典規(guī)定每1ml NaOH滴定液（0.1mol/L）相當于23.03mgC14H14O3。按干燥品計算，含C14H14O3不得少于98.5%。滴結(jié)果如下：V=19.85ml，V0=0.10ml，干燥失重=0.40%。光譜分析法藥

6、典收載紫外可見分光度法原子吸收分光光度法紅外分光度法熒光分析法火焰光度法二、光譜分析法紫外可見分光度法基于物質(zhì)對紫外區(qū)(200400nm)和可見光區(qū)(400760nm)的單色光輻射建立起來的光譜分析法朗伯-比爾定律基礎(chǔ)EclTA1lg%11)100/(cmEAmlgc紫外可見分光度法方法特點與適用范圍1.簡便易行：本法使用的儀器價格比較低廉，操作簡單，易于普及2.靈敏度高：適用于低濃度試樣分析3.準確度較高：本法誤差在2%5%之間，適用于對測定結(jié)果的準確度要求較高的樣品4.專屬性較差：本法通常不受一般雜質(zhì)的干擾，但對結(jié)構(gòu)相近的有關(guān)物質(zhì)缺乏選擇性。本法比較少應(yīng)用于原料藥的含量測定，可用于制劑的含

7、量測定，更多的應(yīng)用于生物制劑的定量檢查本法紫外區(qū)須選用石英比色皿，比色皿一般為1cm，吸光度在0.30.7之間為宜，選用最大吸收光波長。紫外可見分光度法含量測定方法3種方法對照品比較法吸收系數(shù)法計算光度法(少用)紫外可見分光度法含量測定方法1.對照品比較法分別配制供試品溶液和對照品溶液, 所用溶劑量兩者相同,在規(guī)定的波長下測定吸光度.按下式計算結(jié)果;,;對應(yīng)吸光度對照品溶液濃度供試品溶液濃度RxRxRRxxAACCACAC紫外可見分光度法含量測定方法2.吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法:引入吸光系數(shù)的含量計算方法100EAC%1cm1xx含量% = 1%1cmE1%1cmE（ ）供（ ）標藥典記載例 已知

8、VitB12在361nm處的百分吸收系數(shù)為207，現(xiàn)測得其水溶液的吸收度為0.414，吸收池厚度為1cm，求其濃度。解：C=A L1%1cmE= = 0.00200( ) 0.4142071g/100ml單位?例精密稱取VitB12供試品25.0mg，加水溶解并稀釋制成1000mL，于1cm厚的吸收池中，在361nm處測得吸收度為0.507，已知其百分吸收系數(shù)為207，求其百分含量。解：C= m/V = 2510-3/1000（g/ml）= （g/100ml） 2.510- 3 1%1cmE( ) 供= A / CLVitB12% = 1%1cmE1%1cmE（ ）供（ ）標= 202.8/2

9、07 = 97.97%= 0.507 / (2.510-31) 用A算出（ ）供 ，再用其與已知（ ）標 比值 1%1cmE1%1cmE= 202.8例用UV法測定對乙酰氨基酚的含量：精密稱取本品0.0410g，置250ml量瓶中，加0.4%NaOH溶液50ml,溶解后,加水于刻度,搖勻。精密量取5ml,置100ml量瓶中, 加0.4%NaOH溶液10ml,溶解后,加水至刻度,搖勻。在257nm處測得吸收度為0.580，按其百分吸收系數(shù)715計算，求其百分含量。解：C= m/V = （g/100ml） 8.210- 4 1%1cmE( ) 供= A / CLVitB12% = 1%1cmE1%

10、1cmE（ ）供（ ）標= 707.3/715 = 98.93%= 0.580 / 8.210-4= 707.3特點： 靈敏度高，可達10-1010-12g/ml 要求低濃度下測定 須做空白測定 熒光弱的藥物可衍生化后測定(二)熒光分析法rbrrxbxxCRRRRC(三)色譜分析法1.HPLC1.1 內(nèi)標法 RRssC/AC/Af 校正因子As：內(nèi)標物質(zhì)峰面積或者峰高AR: 對照品的峰面積或者峰高Cs: 內(nèi)標物質(zhì)濃度CR：對照品濃度兩步: (1)測f; (2)測含量(1)測f (用標準品與內(nèi)標物)SSxxC/AAf)C(含量As：內(nèi)標物質(zhì)峰面積或者峰高Ax: 供試品的峰面積或者峰高Cs: 內(nèi)標

11、物質(zhì)濃度f：校正因子(2)測含量(用樣品與內(nèi)標物)示例一 炔諾酮的含量測定 照高效液相色譜法(附錄D測定)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(65:35)為流動相，檢測波長為244nm。理論塔板數(shù)按炔諾酮峰計算不低于1500，炔諾酮峰與內(nèi)標物質(zhì)峰的分離度及主成分峰后一雜質(zhì)峰與主成分峰的分離度均應(yīng)符合要求。內(nèi)標溶液的制備 取黃體酮約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。測定法 取本品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液2ml與內(nèi)標溶液3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取20l

12、注入液相色譜儀，記錄色譜儀，記錄色譜圖；另取炔諾酮對照品適量，精密稱定，同法測定。按內(nèi)標法以峰面積計算，即得。對照品對照品樣品測得量WA/A/ArrssA例HPLC法測定磺胺嘧啶的含量對照品+內(nèi)標溶液配制：精密稱取對照品50.0mg，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度,搖勻。精密量取5ml,置25ml量瓶中, 精密加內(nèi)標溶液(0.20mg/ml)5ml,加流動相至刻度,搖勻。供試品+內(nèi)標溶液配制：精密稱取本品50.5mg，照上法配制。取上述兩種溶液各10l進樣，測得對照品和內(nèi)標峰分別為1350和1040，供試品峰和內(nèi)標峰分別為1313和1013。求SD的含量。解：由于對照品和供試品稀釋倍數(shù)相同

13、，所以直接按質(zhì)量代替濃度計算As/CsAr/mr=f=As/CsAx/mx1040/0.201350/50.0=f=1013/0.201313/mx解之,得:mx=49.924(mg)SD%=49.924/50.5=98.86%2.外標法含量(Cx)=CRAxARRRssC/AC/Af 校正因子SSxxC/AAf)C(含量(二) GC內(nèi)標法不經(jīng)有機破壞經(jīng)有機破壞直接測定配位滴定法氧化還原滴定法水解后測定酸水解堿水解經(jīng)還原分解后測定濕法破壞凱氏定氮法干法破壞高溫灼燒法氧瓶燃燒法(一)、直接測定法 葡萄糖酸鈣 EDTA配位滴定 富馬酸亞鐵 鄰二氮菲-硫酸鈰滴定 葡萄酸銻鈉 間接碘量法(二)、經(jīng)水解

14、后測定法適用范圍：金屬原子不直接于碳原子相連或某些C-M鍵結(jié)合不牢固的有機金屬藥物。1、堿水解法344332334)(NONHAgSCNSCNNHAgNO NaNOAgClAgNONaCl O2HHCOONa3NaClCO)(CHNaOHOHCHCCCl3223 回回流流三氯叔丁醇銀量法返滴定2、酸水解法適用范圍：含鹵素有機藥物結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不牢固的藥物。十一烯酸氯化鋅十一烯酸鋅稀鹽酸EDTA配位滴定(三)、經(jīng)還原分解后測定法適用范圍：碘原子直接與芳環(huán)連接的含碘有機化合物。COOHIIINHCOCH3CH3COHN+11NaOH+COOHNH2H2N+ +2CH3COONa+3Na2ZnO

15、2+NaI+AgNO3AgI3Zn3NaOH3H2O+ NaNO3回流泛影酸3NaI三、經(jīng)有機破壞的分析方法 含氮、硫、硫柳汞、氯化鈉的生物制品、含氮有機合成藥物測定的前處理和生物制品中金屬元素測定時生物基質(zhì)的去除。u H2SO4-HNO3u H2SO4-HClO4u H2SO4-H2SO4u HNO3-KMnO4分解劑/消化劑輔助分解劑凱氏定氮法測定含有氨基和酰胺結(jié)構(gòu)的藥物結(jié)構(gòu)(一)濕法破壞原 理 將含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子中有機結(jié)構(gòu)被“消化”成CO2和H2O，有機結(jié)合的氮轉(zhuǎn)化為無機氮，與過量的硫酸結(jié)合為硫酸氫銨和硫酸銨，經(jīng)堿化后釋放出氨氣，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或定量的酸

16、滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。n 常量法含氮量 2530mgn 半微量法含氮量 1.02.0mg凱氏燒瓶K2SO4(提高消解溫度)CuSO4(加快消解速度)硫酸堿液硼酸(吸收液)甲基紅-溴甲酚綠指示劑硫酸滴定空白校正先用強酸水解再用含堿硫代硫酸鈉中和最后用堿釋放出氨氣 ，并蒸餾出之(二)干法破壞1.高溫灼燒法用于含鹵素、含磷藥物和藥物中砷鹽的檢查。常加入無水碳酸鈉、硝酸鎂、氫氧化鈣、氧化鋅等輔助灰化。2.氧瓶燃燒法 系指將含有待測元素的有機藥物置于充滿氧氣的密閉的密閉的燃燒瓶中充分燃燒，使有機結(jié)構(gòu)部分徹底分解為CO2和H2O，待測元素根據(jù)電負性的不同轉(zhuǎn)化為不同價態(tài)的氧化物，被吸收于適當?shù)?/p>

17、吸收液中，再根據(jù)其性質(zhì)和存在方式選擇方法進行分析。燃燒時待測物轉(zhuǎn)化成不同價態(tài)的無機物以供測定 濾紙包裝樣品藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗指導(dǎo)原則藥物穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則緩釋、控釋制劑指導(dǎo)原則微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則細菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則目的： 證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求效能指標： 評價分析方法的尺度 效能指標包括: 精密度, 準確度, 檢測限,定量限,選擇性, 線性與范圍, 耐用性一、準確度（accuracy） 系指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度。(一)含量測定方法%100(%)%100(%)加入量本底量測得量回收率加入量測得量回收率回收率(Rec

18、overy)回收試驗加樣回收試驗33，至少9個測定結(jié)果二、精密度(Precision) 系指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之接近的程度。表示：偏差(d)、標準偏差(s),、 相對標準偏差(RSD)重復(fù)性: 同一實驗室,同一人多次測定的精密度中間精密度: 同一實驗室，不同人，不同儀器測定的精密度 重現(xiàn)性: 不同實驗室，不同人測定的精密度三、專屬性(Specificity)v 指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準確測定出被測物的特性。目視法信噪比法 S/N=3四、檢測限(Limit of Detection, LOD)藥物能被檢出的最低濃度

19、(g/ml)五、定量限(Limit of Quantitation, LOQ)藥物能被定量測定的最低濃度(g/ml)信噪比法 S/N=10紫外可見分光度法基于物質(zhì)對紫外區(qū)(200400nm)和可見光區(qū)(400760nm)的單色光輻射建立起來的光譜分析法朗伯-比爾定律基礎(chǔ)EclTA1lg%11)100/(cmEAmlgc紫外可見分光度法方法特點與適用范圍1.簡便易行：本法使用的儀器價格比較低廉，操作簡單，易于普及2.靈敏度高：適用于低濃度試樣分析3.準確度較高：本法誤差在2%5%之間，適用于對測定結(jié)果的準確度要求較高的樣品4.專屬性較差：本法通常不受一般雜質(zhì)的干擾，但對結(jié)構(gòu)相近的有關(guān)物質(zhì)缺乏選擇性。本法比較少應(yīng)用于原料藥的含量測定，可用于制劑的含量測定，更多的應(yīng)用于生物制劑的定量檢查本法紫外區(qū)須選用石英比色皿，比色皿一般為1cm，吸光度在0.30.7之間為宜，選用最大吸收光波長。例 已知VitB12在361nm處的百分吸收系數(shù)為207，現(xiàn)測得其水溶液的吸收度為0.414，吸收池厚度為1cm，求其濃度。解：C=A L1%1cmE= = 0.00200( ) 0.4142071g/100ml單位?SSxxC/AAf)C(含量As：內(nèi)標物質(zhì)峰面積或者峰高Ax: 供試品的峰面積或者峰高Cs: 內(nèi)標物質(zhì)濃度f：校正因子(2)測含量(用樣