維生素AD膠丸中維生素A的含量測(cè)定ppt課件

1、維生素維生素AD膠丸中膠丸中維生素維生素A的含量測(cè)定的含量測(cè)定 維生素維生素A的構(gòu)造為具有一個(gè)共軛多烯醇側(cè)鏈的構(gòu)造為具有一個(gè)共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)己烷，由于其中有多個(gè)不飽和鍵，性質(zhì)不穩(wěn)的環(huán)己烷，由于其中有多個(gè)不飽和鍵，性質(zhì)不穩(wěn)定，易被空氣中氧或氧化劑氧化，易被紫外光裂定，易被空氣中氧或氧化劑氧化，易被紫外光裂解，并且其對(duì)酸不穩(wěn)定。其醋酸酯比維生素解，并且其對(duì)酸不穩(wěn)定。其醋酸酯比維生素A穩(wěn)穩(wěn)定，臨床運(yùn)用普通將本品或棕櫚酸酯溶于植物油定，臨床運(yùn)用普通將本品或棕櫚酸酯溶于植物油中運(yùn)用。因此，維生素中運(yùn)用。因此，維生素A及其制劑除需密封在涼及其制劑除需密封在涼暗處保管外，還需充氮或參與適宜的抗氧劑。暗處保

2、管外，還需充氮或參與適宜的抗氧劑。 維生素維生素A與氯仿、乙醚、環(huán)己烷或石油醚能與氯仿、乙醚、環(huán)己烷或石油醚能恣意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。恣意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、主要儀器和試劑二、主要儀器和試劑 紫外分光光度儀，紫外分光光度儀，100ml容量瓶，燒杯假容量瓶，燒杯假設(shè)干個(gè)，維生素設(shè)干個(gè)，維生素A膠丸規(guī)格膠丸規(guī)格2.5萬(wàn)單位萬(wàn)單位/粒環(huán)粒環(huán)己烷，乙醚己烷，乙醚 掌握掌握UV三點(diǎn)校正法的原理和維生素三點(diǎn)校正法的原理和維生素A含量含量測(cè)定的方法。測(cè)定的方法。三、實(shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)原理 本法是在三個(gè)波優(yōu)點(diǎn)測(cè)得吸收度，根據(jù)校正公式本法是在三個(gè)波優(yōu)點(diǎn)測(cè)得吸收度

3、，根據(jù)校正公式計(jì)算吸收度計(jì)算吸收度A校正值后，再計(jì)算含量，故本法稱為校正值后，再計(jì)算含量，故本法稱為“三點(diǎn)校正法。該原理主要基于：三點(diǎn)校正法。該原理主要基于：1雜質(zhì)的無(wú)關(guān)吸收在雜質(zhì)的無(wú)關(guān)吸收在310nm340nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)的波長(zhǎng)范圍內(nèi) 幾乎呈一條直線，且隨波長(zhǎng)的增長(zhǎng)吸收度下降。幾乎呈一條直線，且隨波長(zhǎng)的增長(zhǎng)吸收度下降。2物質(zhì)對(duì)光吸收呈加和性的原理。即在某一樣品的吸物質(zhì)對(duì)光吸收呈加和性的原理。即在某一樣品的吸 收曲線上，各波優(yōu)點(diǎn)的吸收度是維生素收曲線上，各波優(yōu)點(diǎn)的吸收度是維生素A與雜質(zhì)吸與雜質(zhì)吸 收度的代數(shù)和，因此吸收曲線也是二者的疊加。收度的代數(shù)和，因此吸收曲線也是二者的疊加。 一膠丸內(nèi)容物

4、平均分量的測(cè)定一膠丸內(nèi)容物平均分量的測(cè)定四、實(shí)驗(yàn)過(guò)程四、實(shí)驗(yàn)過(guò)程 取膠丸取膠丸20粒，精細(xì)稱定，用注射將內(nèi)容物抽粒，精細(xì)稱定，用注射將內(nèi)容物抽出，再用刀片切開丸殼，用乙醚逐個(gè)洗滌丸殼三次，出，再用刀片切開丸殼，用乙醚逐個(gè)洗滌丸殼三次，置置50 ml燒杯中，再用乙醚浸洗燒杯中，再用乙醚浸洗12次，置通風(fēng)處，次，置通風(fēng)處，使乙醚揮散，精細(xì)稱定，算出每丸內(nèi)容物的平均分使乙醚揮散，精細(xì)稱定，算出每丸內(nèi)容物的平均分量。量。四、實(shí)驗(yàn)過(guò)程四、實(shí)驗(yàn)過(guò)程二供試品溶液的制備與測(cè)定二供試品溶液的制備與測(cè)定 取維生素取維生素AD膠丸內(nèi)容物適量，精細(xì)稱定，用環(huán)膠丸內(nèi)容物適量，精細(xì)稱定，用環(huán)己烷溶解并定量稀釋成每己烷溶解

5、并定量稀釋成每1 mL中含中含915單位的溶液。單位的溶液。按照分光光度法，測(cè)定其吸收峰的波長(zhǎng)，并在以下各按照分光光度法，測(cè)定其吸收峰的波長(zhǎng)，并在以下各波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定吸收度。計(jì)算各吸收度與波長(zhǎng)波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定吸收度。計(jì)算各吸收度與波長(zhǎng)328 nm處吸處吸收度的比值和波長(zhǎng)收度的比值和波長(zhǎng)328 nm處的處的E1%1cm值。值。 第一法第一法計(jì)算計(jì)算 求求 ：由：由 A= CL， 求得求得 =A/CL。 求效價(jià)求效價(jià)IU/g：效價(jià)系指每克供試品中所：效價(jià)系指每克供試品中所含維生素含維生素A的國(guó)際單位數(shù)的國(guó)際單位數(shù)IU/g。 即即IU/g= 1900。 求維生素求維生素A占標(biāo)示量的百分含量：占標(biāo)示量的百分含量

6、： 標(biāo)示量標(biāo)示量%=AD1900W100%/ W100L標(biāo)示量標(biāo)示量100%。A值的選擇值的選擇首先計(jì)算吸收度比值即首先計(jì)算吸收度比值即Ai/A328 假設(shè)最大吸收波長(zhǎng)在假設(shè)最大吸收波長(zhǎng)在326nm329nm之間，之間，并分別計(jì)算并分別計(jì)算5個(gè)波長(zhǎng)下的差值，均不得超越個(gè)波長(zhǎng)下的差值，均不得超越0.02時(shí)，那么不用校正公式計(jì)算吸收度，而時(shí)，那么不用校正公式計(jì)算吸收度，而直接用直接用328nm處測(cè)得的吸收度處測(cè)得的吸收度A328求得。求得。 假設(shè)最大吸收波長(zhǎng)在假設(shè)最大吸收波長(zhǎng)在326nm329nm之間，之間，并分別計(jì)算并分別計(jì)算5個(gè)波長(zhǎng)下的差值，如有一個(gè)或幾個(gè)個(gè)波長(zhǎng)下的差值，如有一個(gè)或幾個(gè)超越超越

7、0.02，這時(shí)應(yīng)按以下方法判別：，這時(shí)應(yīng)按以下方法判別： 假設(shè)假設(shè)A328校正與校正與A328的吸收度相差不超越的吸收度相差不超越3.0%，那么不用校正吸收度，仍以未經(jīng)校正的，那么不用校正吸收度，仍以未經(jīng)校正的A328求求得得 。 假設(shè)假設(shè)A328校正與校正與A328的吸收度相差在的吸收度相差在 -15%-3%之間，那么以之間，那么以A328校正得校正得 。 假設(shè)假設(shè)A328校正與校正與A328的吸收度相差小于的吸收度相差小于-15%或或大于大于+3%，那么不能用本法測(cè)定，而運(yùn)用第二法皂化法，那么不能用本法測(cè)定，而運(yùn)用第二法皂化法測(cè)定含量。測(cè)定含量。 假設(shè)最大吸收波長(zhǎng)不在假設(shè)最大吸收波長(zhǎng)不在3

8、26nm329nm之間，也不能之間，也不能用本法測(cè)定，而運(yùn)用第二法皂化法測(cè)定含量。用本法測(cè)定，而運(yùn)用第二法皂化法測(cè)定含量。 第一法校正公式：第一法校正公式：A328(校正校正)=3.52(2A328-A316-A340)維生素維生素A吸收度差值吸收度差值 由掃描結(jié)果得最大吸收波長(zhǎng)為由掃描結(jié)果得最大吸收波長(zhǎng)為327.7nm326329nm 各個(gè)差值均不超越各個(gè)差值均不超越0.02，不需用校正公式。故直接用，不需用校正公式。故直接用A328進(jìn)展計(jì)算。進(jìn)展計(jì)算。 328= A328 /100ms/D =0.746/(1000.0048/100)=155.42 效價(jià)效價(jià)= 1900=155.42190

9、0=295298 標(biāo)示量標(biāo)示量%=(AD1900W)/(W100L標(biāo)示量標(biāo)示量) 100%=(0.74610019000.08714)/(0.0048 100125000) 100%=102.9%二法：二法： 方法：精細(xì)稱取一定量供試品，加氫氧化鉀乙醇溶液后煮方法：精細(xì)稱取一定量供試品，加氫氧化鉀乙醇溶液后煮沸回流，得到的皂化液再經(jīng)乙醚提取、洗滌、濾過(guò)、濃縮沸回流，得到的皂化液再經(jīng)乙醚提取、洗滌、濾過(guò)、濃縮和枯燥等處置，最后用異丙醇溶解殘?jiān)⑾♂尦擅亢涂菰锏忍幹茫詈笥卯惐既芙鈿堅(jiān)⑾♂尦擅?ml中中含維生素含維生素A為為915單位的溶液，在單位的溶液，在300、310、325、334波優(yōu)點(diǎn)

10、測(cè)定吸光度，并確定最大吸收波長(zhǎng)。計(jì)算同第一法，波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定吸光度，并確定最大吸收波長(zhǎng)。計(jì)算同第一法，換算因子為換算因子為1830。 二法校正公式：二法校正公式：A325校正校正=6.815A3252.5553104.260A334討討 論：論：1、維生素、維生素A具有紫外吸收特征，在具有紫外吸收特征，在325nm328nm的范圍內(nèi)有最大吸收；并且，的范圍內(nèi)有最大吸收；并且，它能與三氯化銻試劑作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色。它能與三氯化銻試劑作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色。故可利用這些性質(zhì)對(duì)其進(jìn)展鑒別和含量測(cè)定。故可利用這些性質(zhì)對(duì)其進(jìn)展鑒別和含量測(cè)定。2、維生素、維生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直線醋酸酯的吸收

11、度校正公式是用直線方程式法即代數(shù)法推導(dǎo)而來(lái)；維生素方程式法即代數(shù)法推導(dǎo)而來(lái)；維生素A醇的醇的吸收度校正公式是用類似三角形法幾何法或吸收度校正公式是用類似三角形法幾何法或稱稱6/7定位法推導(dǎo)而來(lái)。定位法推導(dǎo)而來(lái)。 3、在運(yùn)用三點(diǎn)校正法時(shí)，除其中一點(diǎn)在最大吸、在運(yùn)用三點(diǎn)校正法時(shí)，除其中一點(diǎn)在最大吸收波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定外，其他兩點(diǎn)均在最大吸收峰的收波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定外，其他兩點(diǎn)均在最大吸收峰的兩側(cè)進(jìn)展測(cè)定。假設(shè)儀器波長(zhǎng)精度不準(zhǔn)確時(shí)，兩側(cè)進(jìn)展測(cè)定。假設(shè)儀器波長(zhǎng)精度不準(zhǔn)確時(shí)，會(huì)產(chǎn)生較大誤差。因此，在測(cè)定前務(wù)必要校正會(huì)產(chǎn)生較大誤差。因此，在測(cè)定前務(wù)必要校正波長(zhǎng)，并可用全反式維生素波長(zhǎng)，并可用全反式維生素A進(jìn)展測(cè)定，比較測(cè)

12、進(jìn)展測(cè)定，比較測(cè)定結(jié)果和比值能否與對(duì)照品相符合，以進(jìn)一步定結(jié)果和比值能否與對(duì)照品相符合，以進(jìn)一步核對(duì)儀器波長(zhǎng)能否準(zhǔn)確。測(cè)定的樣品應(yīng)不得少核對(duì)儀器波長(zhǎng)能否準(zhǔn)確。測(cè)定的樣品應(yīng)不得少于兩份。于兩份。4、本組在對(duì)維生素、本組在對(duì)維生素A含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)過(guò)一些問(wèn)題。含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)過(guò)一些問(wèn)題。第一次用一法測(cè)定結(jié)果不符合規(guī)定，按照要求應(yīng)該用二第一次用一法測(cè)定結(jié)果不符合規(guī)定，按照要求應(yīng)該用二法測(cè)定。但分析緣由后，我們重新做了一遍，用一法測(cè)法測(cè)定。但分析緣由后，我們重新做了一遍，用一法測(cè)定獲得了較好結(jié)果，所給維生素定獲得了較好結(jié)果，所給維生素A含量符合規(guī)定。含量符合規(guī)定。我們發(fā)現(xiàn)第一次實(shí)驗(yàn)失敗的緣由是：我

13、們發(fā)現(xiàn)第一次實(shí)驗(yàn)失敗的緣由是：紫外分光光度計(jì)紫外分光光度計(jì)出現(xiàn)了問(wèn)題，波長(zhǎng)不準(zhǔn)確，從而導(dǎo)致在相應(yīng)波長(zhǎng)下測(cè)得出現(xiàn)了問(wèn)題，波長(zhǎng)不準(zhǔn)確，從而導(dǎo)致在相應(yīng)波長(zhǎng)下測(cè)得的吸收度不準(zhǔn)確。可見(jiàn)儀器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確與否在實(shí)驗(yàn)中是的吸收度不準(zhǔn)確?？梢?jiàn)儀器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確與否在實(shí)驗(yàn)中是致關(guān)重要的。致關(guān)重要的。整個(gè)操作過(guò)程沒(méi)有進(jìn)展暗室操作，在光整個(gè)操作過(guò)程沒(méi)有進(jìn)展暗室操作，在光照下暴露了較長(zhǎng)時(shí)間，而維生素照下暴露了較長(zhǎng)時(shí)間，而維生素A不穩(wěn)定，見(jiàn)光易蛻變，不穩(wěn)定，見(jiàn)光易蛻變，所以導(dǎo)致測(cè)定含量不準(zhǔn)。所以導(dǎo)致測(cè)定含量不準(zhǔn)。 另外，在操作中應(yīng)留意：另外，在操作中應(yīng)留意： 在含量測(cè)定時(shí)膠殼要盡量洗干凈，防止內(nèi)容在含量測(cè)定時(shí)膠殼要盡量洗干凈，防止內(nèi)容物殘留，使粒重盡量準(zhǔn)確。物殘留，使粒重盡量準(zhǔn)確。 由于所取的樣品量非常小，所以用于搜集樣由于所取的樣品量非常小，所以用于搜集樣品的小燒杯一定要用溶劑洗滌多次并合并入容量品的小燒杯一定要用溶劑洗滌多次并合并入容量瓶中，容量瓶口也要沖洗使樣品全部轉(zhuǎn)入。瓶中，容量瓶口也要沖洗使樣品全部轉(zhuǎn)入。 在測(cè)定不同波長(zhǎng)下的吸收度時(shí)每一次都要用在測(cè)定不同波長(zhǎng)下的吸收度時(shí)每一次都要用空白液進(jìn)展調(diào)零。空白液進(jìn)展調(diào)零。 按以下操作步驟制備供試品溶