各種緩沖液的配制方法-

1、各種緩沖液的配制方法創(chuàng)作：歐陽術(shù)時(shí)間：2021.02.02Na2HPO4-tr檬酸鈿緩沖液PH0.2mol/LNa2HPO4(ml)O.lmol/L檸椽酸 鈉(ml)PH0.2mol/LNa2HPO4(ml)O.lmol/L檸樣酸鈉(ml)2.20.419.65.210.729.282.41.2418.765.411.158.852.62.1817.825.611.608.402.83.1716.835.812.097.913.04.1115.896.012.637.373.24.9415.066.213.226.783.45.7014.306.413.856.153.66.4413.566.

2、614.555.453.87.1012.906.815.454.554.07.7112.297.016.473.534.28.2811.727.217.392.614.48.8211.187.418.171.834.69.3510.657.618.731.274.89.8610.147.819.150.855.010.309.708.019.450.55Na2HPO4o 2H2O,分子量=178.05 0.2mol/L 落液含 35.6lg/L檸檬厳.H2O,分子量=210.140.1mol/L 溶液含 21.01g/L檸掾酸-檸檬酸鈉緩沖溶液（0.1mol/L）PHO.lmol/L檸樣酸(m

3、l)O.lmol/L檸掾酸 鈉（ml）PHO.lmol/L檸檬酸(ml)O.lmol/L檸樣酸鈉(ml)3.018.61.45.08.211.83.217.22.85.27.312.73.416.04.05.46.413.63.614.95.15.65.514.53.814.06.05.84.715.34.013.16.96.03.816.24.212.37.76.22.817.24.411.48.66.42.018.04.610.39.76.61.418.64.89.210.8檸檬酸.H2O,分子量=210.140.1mol/L 溶液含 21.01g/L檸檬 KIB.2H2O,分子量=294

4、.12; 0.1mol/L 溶裁含 29.4g/L醋酸緩沖液(0.2mol/L, 18°C)PH0.2mol/LNaAC(ml)0.2mol/LHAC(ml)PH0.2mol/LNaAC(ml)0.2mol/LHAC(ml)3.60.759.254.85.904.103.81.208.805.07.003.004.01.808.205.27.902.104.22.657.355.4&601.404.43.706.305.69.100.904.64.905.105.89.400.60NaAC.3H2O,分子量= 136.090.2mol/L 溶液含 27.22g/L(1 )附酸

5、鹽溶液的配制:歸酸- BKJfi緩沖液(PH3.6)取醋酸鈉5.1g, JU冰附酸20ml,再加水稀釋至250ml,即 得。醯酸-酩酸鈾緩沖浪(pH3.7)取無水88酸鈉20g, HU水300ml溶解后，加漠酚藍(lán)指示® 1ml K 冰酩酸60 - 80ml,至洛液"、藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)榧兙G色，再加水柿釋至 1000ml,即得。Sh K - SI酸鈉緩沖液(pH3.8)® 2mol/L酬酸鋼落液13ml與2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml 含鋼lmg的砸酸鋼潘液0.5ml,再抽水稀釋至1000ml,即得。f K - f酸鋼緩沖液(pH4.5)取附酸鈉18g,加冰確膠9

6、.8ml,再加水稀釋至1000ml,即 得。 8!酸-能酸鈉緩沖液(pH4.6)取凰酸樹5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至4.6, 再加水稀釋至100ml,即得。01 K B酸鈉緩沖液(pH6.0)取i i ft 54.6g,加1 mol/L醋酸溶液20ml落解后,加水稀釋至500ml,即得。用酹酸和酬戲鈿配制的緩沖溶液的 PH=PKa+lgC(NaAc)/C(HAc)(在此，C(HAc)指附酸的濃度， C(NaAc)指酬酸鋼的濃g,Ka是醯酸的解離常 = 1.8*10-5 ( 1.8乘 10的5次方)，PKa=-lgKa=4.75 ,將PH=5.5代人，可得 C(NaAc)/

7、C(HAc)=5.6 通常我們配制時(shí)會使 C(HAc)=0.1mol/L,或 是 C(HAc)=0.2mol/L 等。若是趾制 C(HAc)=0.1mol/L ,則 C(NaAc)=0.56mol/L稱量酹酸鈉固體質(zhì)量為82*0.56=46克量取 冰ft枳為0.1*1000/17.5=5.7mLo將稱好的醋酸鋼和量好的 冰醋酸加A 1000mL水中溶解、攪拌均勻即可。當(dāng)然若想配制其 它的濃度,也可照公式計(jì)算即可，通常緩沖溶液不能配的太稀, 否則緩沖能力要下降,太濃的話Q浪費(fèi)試劑。苯二甲酸氫鉀氫氧化鈉緩沖液PH0.1mol/LNaOH(ml)0.2mol/L苯二甲酸氫鉀(ml)加水至(ml)4.

8、00.4025.00100.004.23.6525.00100.004.47.3525.00100.004.612.0025.00100.004.817.5025.00100.005.023.6525.00100.005.229.7525.00100.005.435.2525.00100.005.639.7025.00100.005.843.1025.00100.006.045.4025.00100.006.247.0025.00100.000.2mol/L苯二甲酸氫即溶液：稱取在確酸干煤器中干煤過24小 時(shí)的苯二甲酸氫卿20.44g洛于水中，稀釋至500mlo磷酸緩沖液(0.2mol/L)P

9、H0.2mol/LNa2HPO40.2mol/LNaH2PO4PH0.2mol/LNa2HPO40.2mol/LNaH2PO4(ml)(ml)(ml)ml)5.88.092.07.061.039.06.012.387.77.272.028.06.218.581.57.481.019.06.426.573.57.687.013.06.637.562.57.891.58.56.849.051.08.094.75.3Na2HPO4.2H2O，分子量=178.05, 0.2mol/L 溶液含 35.61g/L0.2mol/L 溶液含 31.21g/LNaH2PO4.H2O,分子量= 138.03,0.

10、2mol/L 溶 ® 含 27.6g/LNaH2PO4.2H2 O,分子量= 156.03,0.2mol/L 洛液含 71.64g/LNa2HPO4.12H2O 分子量=358.22,磷酸鹽緩沖液(PBS)配制方法0.0IM PBSPBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KC1, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mMK2HPO4, pH 7.2)PBS 緩沖液(pH7.27.4): NaCl 137mmol/L, KC1 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L稱 7.9g NaCl, 0.2g KC1, 0.24

11、g KH2P04(or 1.44g Na2HPO4)和.8g K2HPO4, 1于800 ml蒸福水中，用HC1調(diào)節(jié)液的pH值至 7.4,最后加蒸韜水定容至1L。保存于4C冰箱中即可。需要注意的是，通常所說的濃度0.01 M指的是緩沖溶液中所有 的請嚴(yán)根濃度，而非Na離子或K離子的濃度，Na離子和K離 子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。母液的配制:0.2M Na2HPO4:稱取 71.6g Na2HPO4-12H2O,洛于 1000ml 水0.2M NaH2PO4:稱取 31.2g NaH2PO4-2H2O,溶于 1000ml 水各種濃度PB(pH=7.4)的配制：先 E 0.2M PB (pH=7.4

12、, 100ml):取 19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4, 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4,即可。然后只需將0.2M PB (pH=7.4)按相應(yīng)比例適當(dāng)稀釋即可，如 0.1MPB ( PH=7.4 ):取 500ml 0.2M PB,加水稀釋至 1000ml 即 可。0.01MPB ( PH=7.4 ): ® 50ml0.2MPB,加水稀釋至 1000ml 即 可。0.02M PB ( PH=7.4 ):取 100ml 0.2 MPB,加水稀釋至 1000ml 即 可。若需要NaCl的話，加入NaCl至0.9% ( g/100ml )即可。另：其它各種另

13、P H值的0.2M PB ( 100ml) 方:PH0.2M NaH2PO4 ( ml ) 0.2M Na2HPO4 ( ml )5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.590.57.88.591.57.97938.05.394.70.01M磷酸鹽緩沖液(PBS )配制方法稱取

14、8g NaCl、0.2g KC1、1.44g Na2HPO4 和 0.24g KH2PO4,溶于 800ml蒸錨水中，用HC1調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4,最后加蒸期水 定容至1L即可。在151bf/in2(1034xl05Pa)髙壓下蒸氣滅菌(至 少20分紳)，保存存于室溫或4£冰箱中。需要注意的是，通常所說的濃度0.01M指的是緩沖落液中所有的 磷酸根濃度，而非Na離子或K離子的濃度，Na離子fDK離子 只是用來調(diào)節(jié)滲遹壓的。如果是用于免疫組化的話，則需要在趾 置的時(shí)候分別1 A 100u/ml青霉素和璉霉素之后再調(diào)PH、定容、滅菌消毒。PH7.67.47.27.0H2O100010

15、0010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO4 2.22.22.22.2NaH2PO4 0.10.20.30.4根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來看，新鮮配置的PBS攪勻后其PH值約在7.2-7.4 2 間，可是在溫度的敷咆下，尤其在夏天，其電離常數(shù)發(fā)生了改變, 在經(jīng)過晝夜的時(shí)間后,PH值會明顯改變（我親自測過偏酸）。所 以做實(shí)驗(yàn)的同學(xué)可要注意了，PH值可能僉影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至 可能導(dǎo)致陰性。所以務(wù)必記得泄個(gè)時(shí)候和天氣,要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)條件 控制rOo每次使用前最好用試奴測一下過夜了的pbs,如果發(fā) 生偏嚴(yán)或偏破，注意重新?lián)Q新液。PBS緩沖液稱取 NaCl 8g, KC10.2g, Na2HPO4?12

16、H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g, 溶于900ml雙蒸水中，用鹽酸調(diào)pH值至7.4, Mil水定容至IL, 常溫保存?zhèn)溆谩BST緩沖液取300nl TVeen-20加入PBS 100ml中，混勻后即刻便用。現(xiàn)用 現(xiàn)配。如果是把所有固體加大十倍，配置為濃縮液，工作時(shí)候十倍稀釋, 那么，在恫配好濃縮液時(shí)，PH在6.5左右，明顯偏酸。不能用鹽 酸調(diào)。雖然可以用氫氧化調(diào)，但是有更方便的方法。十倍稀釋以后，PH自動升高到所需要的值。不需耍其它任何處 理。這個(gè)可以先取少量試一試，I!好之后再測一次PH8.0的PBS配方詳細(xì)1. NaCl 137mmol/L, KC1 2.7mmol/L,

17、Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1,4mmol/L2. 向燒杯中加人約800 ml 去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至8.0,然后加入去離子水將溶液定 容至1 L。4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBS Buffer中無二價(jià)陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ) 充 1 mM CaC12 和 0.5 mM MgC12o0.05mol/L PBS（磷酸緩沖液 Phosphate Buffer Solution, PBS）的配 制：甲液:0.05mol/LNa2HP04 溶液：稱取磷酸氫二鋼 9.465g7.099g, 加蒸憎水至1000ml;乙液:0.05mol

18、/L KH2P04 溶液：稱取確酸二氫押，9.07g6.803g, jH 蒸錨水至lOOOmlo將甲乙液分裝在棕色瓶內(nèi)，于4C冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需pH的緩沖液，見下表:PH甲液ml乙液ml5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.080.06.4730.070.06.6440.060.06.8150.050.06.9860.040.07.1770.030.07.3880.020.07.7390.010.08.0495.05.0你要配制pH=6.8的PBS,可用甲、乙液各50ml混臺即可。硼酸緩沖液（02mol/L硼酸鹽）

19、PH0.05mol/L 硼砂(ml)0.2mol/L 硼酸(ml)PH0.05mol/L 硼砂(ml)0.2mol/L 硼酸(ml)7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.08.03.07.09.08.02.0硼砂 Na2B4O7.10H2O,分子量=381.43,0.05mol/L 溶液=0.2mol/L硼砂含19.07g/L關(guān)酸,分子量=61.84,0.2mol/L溶液含12.37g/L硼砂易失去結(jié)晶水，必須在帶塞得敗中保存；硼砂溶液也可以用半中和的關(guān)酸溶液代替鹽酸氯化鉀緩沖液PH0.1mol/LHCl( ml)0.02mo

20、l/LKCl(m1)加 水 至(ml )PH0.1mol/LHCl( ml)0.02mol/LKCl(m1)加水 至(ml)1.194.562.701001.723.7638.101001.275.1012.451001.818.6840.601001.359.6820.151001.914.9842.501001.447.4026.301002.011.9044.051001.537.6431.201002.19.4645.031001.629.9035.001002.27.5246.251000.02mol/LKCl溶裁：溶7.455g氯化鉀于水中,稀釋至500ml苯二甲酸氫鉀-鹽酸緩沖液PHO.lmol/LHCI (ml)0.02mol/L 苯二 甲酸氫鉀(ml)加 水 至 ( mi)PHO.lmol/LHCI (ml)0.02mol/L 苯二 甲酸氫鉀(ml)加水 至(mi)2.246.6025.001003.214.8025.001002.439.6025.001003.49.9525.001002.633.0025.001003.66.0025.001002.826.5025.001003.82.6525.001003.020.4025.001000.02mol/L苯二甲酸氫鉀溶液:稱取在毓酸干操器中干燥過24小時(shí)額苯二甲酸氫鉀20.44g溶于水中,稀釋至50