植物染色體的孚爾根染色法ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)四 植物染色體的孚爾根染色法一、實(shí)驗(yàn)原理 孚爾根Feulgen染色法是鑒別細(xì)胞核中DNA的組織化學(xué)方法, 其原理與希夫試劑的化學(xué)性質(zhì)有關(guān)。 希夫試劑是由堿性品紅與亞硫酸氫鈉和鹽酸作用而生成的, 為無色透明的溶液, 它遇醛類物質(zhì)即呈紫紅色, 故可用于鑒定醛基的存在。 DNA分子構(gòu)造中本身無醛基, 但在60C1M鹽酸的水解作用下, 部分地打斷DNA分子中脫氧核糖與嘌呤間的糖苷鍵, 使嘌呤堿基零落, 并在脫氧核糖的第一個(gè)碳原子上釋放出活性醛基, 該基團(tuán)遇希夫試劑即呈紫紅色。 在細(xì)胞內(nèi)只需DNA才具有這種反響, 故可定性地鑒定細(xì)胞核內(nèi)DNA的存在。 這一染色方法是Feulgen和Rossenbec

2、k于1924年首先發(fā)現(xiàn)和確定的, 故稱孚爾根染色法。二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?在熟習(xí)火焰枯燥法制片的根底上, 掌握弗爾根染色法, 并察看有絲分裂的各個(gè)時(shí)期三、資料、方法、器具、藥品三、資料、方法、器具、藥品 小麥根尖小麥根尖 希夫試劑，希夫試劑， 45%醋酸，醋酸， Carnoys固定液固定液 堿性品紅、偏重亞硫酸鈉、活性炭、堿性品紅、偏重亞硫酸鈉、活性炭、1M鹽酸鹽酸 鑷子鑷子 載玻片載玻片 蓋玻片蓋玻片 顯微鏡顯微鏡 青霉素瓶子青霉素瓶子 恒溫水浴鍋恒溫水浴鍋四、實(shí)驗(yàn)步驟希夫試劑的配制將將0.5g堿性品紅徐徐參與煮沸的堿性品紅徐徐參與煮沸的100ml蒸餾水中蒸餾水中, 用玻璃棒攪拌用玻璃棒攪拌, 使之

3、充分溶解使之充分溶解, 待溶液冷卻至待溶液冷卻至58C左右左右, 過濾于棕色瓶中。過濾于棕色瓶中。當(dāng)濾液冷卻至當(dāng)濾液冷卻至26C時(shí)時(shí), 再參與再參與10ml的的1M鹽酸和鹽酸和0.5g亞硫酸氫亞硫酸氫鈉或偏重亞硫酸鈉鈉或偏重亞硫酸鈉(鉀鉀), 搖動(dòng)搖動(dòng), 溶解后密封于棕色瓶中溶解后密封于棕色瓶中, 置于黑置于黑暗低溫處。次日檢查溶液顏色暗低溫處。次日檢查溶液顏色, 須呈無色透明或淡茶色才可運(yùn)須呈無色透明或淡茶色才可運(yùn)用。用。假設(shè)稍呈紅色可參與假設(shè)稍呈紅色可參與0.5g活性炭延續(xù)搖動(dòng)活性炭延續(xù)搖動(dòng), 在在4C下靜置過夜下靜置過夜, 然后過濾脫色。然后過濾脫色。染色過程取固定好的根尖, 用水洗2-

4、3分鐘, 放入室溫條件下的1N HCl處置根尖資料2-3分鐘。將根尖換入60預(yù)熱的HCl, 置于恒溫水浴中, 在600.5的條件下水解8-10分鐘。吸出熱HCl, 換入室溫1N HCl再處置1-2分鐘, 然后水洗2-3次。吸凈水分, 參與Schiff試劑, 蓋上蓋子, 在黑暗條件下染色30分鐘, 也可過夜。用水漂洗, 去掉細(xì)胞中殘存的一些有色的品紅分子。取根尖置載玻片上, 用鑷子夾碎后, 加一滴45醋酸, 然后蓋上蓋片。壓片、察看。玉米染色體核型圖(2n=20), Feulgen 染色玉米染色體核型圖(2n=20+2B)玉米染色體核型圖(2n=20+4B)/mnl/79/18rosado.htmRye, Secale cereale, 2n=2x=14+2B (standard B), metaphase I pairing with 5II ring + 2II rod + 1B rod, FEULGEN stainingdesicca.de/Rye%20gene%20map/Other_genes/B_chromosome/b_chromosome.htmlequitationpassio