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文檔簡介

1、 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理瓊脂糖為鏈狀多糖 繩狀瓊脂糖束大網(wǎng)孔型 凝膠 分離、鑒定、純化DNA影響DNA遷移率的因素：DNA分子的大小、構(gòu) 象，凝膠濃度，電壓，電泳緩沖液的組成緩沖液pHDNA Pi，DNA帶負(fù)電荷，遷移率與 分子量對數(shù)成反比DNA分子構(gòu)象影響遷移率：共價(jià)閉環(huán)DNA線 狀DNA開環(huán)DNA溴化乙錠（EB）DNA：紫外光下 紅色熒光電泳儀電泳儀電泳槽電泳槽緩沖液緩沖液瓊脂糖瓊脂糖凝膠槽凝膠槽梳子梳子取液器取液器溴酚藍(lán)溴酚藍(lán)瓊脂糖凝膠的制備：溶化，冷卻，EB凝膠板的制備：加梳子，倒膠樣品的制備：樣品+1/5體積溴酚藍(lán)加樣：加樣端為負(fù)極（黑）電泳：5V/cm觀察：紫外燈下觀察，照相相關(guān)瓊脂糖凝

2、膠電泳分離材基因組DNA ，按常規(guī)提取，置-20 保存?zhèn)溆?。Agarose 、限制性內(nèi)切酶EcoR為上海生工生物工程有限公司產(chǎn)品。從凝膠中小量回收DNA 片段的試劑盒為上海華舜生物工程有限公司產(chǎn)品，1 kb DNA Ladder為MBI 產(chǎn)品。方配制0.8 %瓊脂糖凝膠，電泳緩沖液為1 TAE，電壓為5 V/ cm ，電泳1 h ，用溴化乙錠或LIGHTBLUE Dye 顯色。2 和3(分別約為10 、7、4.5 kb)之后有很多的較小片段(從大約3.5 kb 到100 bp不等)。在日光下(用LIGHTBLUE Dye 顯色)分別切取含有單一目的片段1、2、3 的膠條用試劑盒回收DNA 分子

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