鈣鎂磷的測定

1、實驗十七 偶氮胂法測血鈣 血漿中約含鈣2.1mmol/(8.410.2mg/dl)，以三種形式存在：非擴散鈣(non-difusional calcium)：是指與血漿蛋白相結合的鈣，占血漿總鈣的45%；離子鈣(ion calcium)：是具有生理活性的部分，約占血漿總鈣的50%；絡合鈣(chelating calcium)：主要指與枸櫞酸結合的鈣，是體內鈣的一種運輸方式，約占血漿總鈣的5%左右。鈣離子和絡合鈣都能透過毛細血管壁，故統(tǒng)稱為擴散鈣。血鈣的測定方法很多，一般可分為總鈣測定和離子鈣測定法。前者包括同位素稀釋質譜法(isotope diluting mass spectrometry)

2、、原子吸收光譜法(atomic absorption spectroscopy，AAS)、分光光度法(spectrophotography)和絡合滴定法(chelating titration)等。AAS是最常用的準確測定血漿總鈣含量的參考方法，但費用昂貴，不適于常規(guī)工作；分光光度法中以甲基百里香酚藍比色法（methyl thymol blue colorimetry）和偶氮胂比色法（Arsenazo colorimetry）最常用。絡合滴定法簡便易行，但判斷終點受主觀因素影響，有被淘汰趨勢，但不少基層實驗室仍延用。離子選擇電極法測定離子鈣已在臨床廣泛應用。分光光度法已被廣泛用自動生化分析議分

3、析。 【實驗原理】 在堿性條件下，樣品中鈣與偶氮胂作用生成藍色復合物，其顏色深淺與鈣濃度成正比，通過在660nm波長處測定吸光度的變化值，與經(jīng)過同樣處理的鈣校準液進行比較，即可計算出樣品中鈣含量。 【操作步驟】 測定管（U） 標準管（S） 空白管（B） 試劑（ml） 2.0 2.0 2.0 37恒溫5分鐘 蒸餾水（ml） - - 0.02 標準液（ml） - 0.02 - 血清 0.02 - - 混勻，37恒溫2分鐘，660nm波長，以空白管調零，測定各管吸光度。 【計算】 樣品鈣含量（mmol/L）= 2.50 【參考范圍】血清鈣：2.12.6mmol/L 【臨床意義】 （1）低鈣血癥見于

4、攝入不足和吸收不良：慢性脂肪性腹瀉、阻塞性黃疸；需要增加：妊娠后期及哺乳期婦女；吸收減少：佝僂病、甲狀旁腺功能減退癥；腎臟疾?。杭?、慢性腎衰竭、腎病綜合征、腎小管性酸中毒；壞死性胰腺炎。 （2）高鈣血癥見于 攝入鈣過多：靜脈用鈣過量、大量飲用牛奶等；原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進癥、腎癌等使血鈣升高；服用維生素D過多，鈣吸收作用增強；骨?。鹤冃涡怨茄?、轉移性骨癌、多發(fā)性骨髓瘤等，骨溶解增加；具有異位內分泌作用的腫瘤；長期制動引起骨骼脫鈣。標準管吸光度測定管吸光度 【評價】 1. 線性范圍：0.006.00mmol/L，0.99。2. 精密度：批內、批間平均CV分別5.0%3. 準確度：不準確度10%4

5、. 試劑空白吸光度值0.35。 【注意事項】 1. 樣品中鈣含量超過5.00mmol/L，則用生理鹽水稀釋后測定，結果乘以稀釋倍數(shù)。 2. 測試溫度無嚴格規(guī)定，但色素對溫度敏感，應保持反應體系恒溫。 3. 高脂樣本會引起測定結果假性升高，可用樣本空白管校正。 4. 反應形成的色素可穩(wěn)定2小時。 5. 所用試驗器材必須清潔，沒有鈣污染。6. 試劑與樣品量可根據(jù)需要按比例改變。7. 試劑使用后立即關緊瓶蓋，避免污染。8. 使用肝素作為抗凝劑時濃度不能太高，每毫升血液中肝素濃度應小于50單位。不能使用草酸鹽、枸櫞酸鹽、EDTA等作抗凝劑。 實驗十七 鈣鎂試劑比色法測血鎂 【目的要求】 1.掌握比色法

6、測血鎂 2.熟悉血鎂測定的其他方法 【實驗原理】 血清中的鎂在堿性條件下，與金屬色原染料鈣鎂試劑（calmagite)反應生成紫紅色絡合物。顏色深淺與美的濃度成正比，與同樣處理的標準品比較，可以求得鎂的含量。 【操作步驟】 測定管（U） 標準管（S） 空白管（B） 試劑（ml） 2.0 2.0 2.0 37恒溫5分鐘 蒸餾水（ml） - - 0.02 標準液（ml） - 0.02 - 血清 0.02 - - 混勻，37恒溫2分鐘，540nm波長，以空白管調零，測定各管吸光度。 【計算】 樣品鎂含量（mmol/L）= 1.0 【參考范圍】血清鎂：0.671.04mmol/L 【評價】 1. 線性

7、范圍：2.0mmol/L10%。2. 精密度：批內、批間平均CV分別5.0%3. 準確度：不準確度10%4. 試劑空白吸光度值1.10。標準管吸光度測定管吸光度 【注意事項】 1. 試劑與樣品量可根據(jù)需要按比例改變。 2. 測試溫度無嚴格規(guī)定，但色素對溫度敏感，應保持反應體系恒溫。 3. 高脂樣本會引起測定結果假性升高，可用樣本空白管校正。 4. 反應形成的色素可穩(wěn)定1小時。 5. 所用試驗器材必須清潔，沒有鎂污染。6. 所用試劑具有毒性和腐蝕性，請勿用口吸吸管，如有污染，應立刻用大量流水沖洗。實驗十八 還原鉬藍法測血清磷 血液中的磷( phosphorus )主要有兩種形式：有機磷和無機磷。

8、血清無機磷含量與血鈣有一定關系，兩者濃度的乘積為一常數(shù)（以mg/dl濃度計算，乘積等于40）。磷參與機體糖、脂類及氨基酸的代謝，是骨鹽的主要成分，也是轉運能量的物質，磷酸鹽是調節(jié)酸堿平衡的重要緩沖體系之一。 【目的要求】 1.掌握此法測血磷的原理。 2.熟悉血磷測定的其他方法 【實驗原理】 利用磷在酸性溶液中與鉬酸銨反應生成磷鉬酸復合物，用對甲氨基酚硫酸鹽還原生成鉬藍，與同樣處理的標準液進行比色，可求得血磷的含量。試劑中加入聚山梨酯-80以抑制蛋白質干擾。 【操作步驟】 測定管（U）標準管（S）空白管（B） 去離子水（ml） - - 0.1 磷標準液（ml） - 0.1 - 血清 0.1 -

9、- 顯色液（ml） 4.0 4.0 4.0 混勻，37恒溫10分鐘，650nm波長，以空白管調零，測定各管吸光度。 【計算】 樣品磷含量（mmol/L）= 1.29 【參考值】成人0.97 1.62 mmol/L；兒童1.45 2.10 mmol/L 【臨床意義】 1. 低磷血癥見于 攝入不足和吸收減少：饑餓或惡病質、吸收不良綜合征、嘔吐、腹瀉、長期應用含鋁的制劑等；磷轉移入細胞內：靜脈注射葡萄糖、胰島素及堿中毒、妊娠等；丟失過多：血液透析、腎小管酸中毒、急性痛風等；其他：如酒精中毒、糖尿病酮癥酸中毒、維生素D缺乏癥等。 2. 高磷血癥見于 甲狀旁腺功能減退癥、維生素D過多癥、Addison病

10、、肢端肥大癥、多發(fā)性骨髓瘤等。標準管吸光度測定管吸光度 體重約見5%的無機鹽主要有Ca、Mg、K、Na、P和Cl，這六種無機元素約占體內無機鹽總量的60%80%，主要存在于體液。無機離子的測定方法主要有火焰光度法、化學測定法、離子選擇電極法、代謝物酶試劑法等。其中離子選擇電極法標本用量少（100l全血）,1min出結果，快而準確，操作簡便，是目前廣為臨床使用的方法。 【評價】 1. 線性范圍：0.006.00mmol/L，0.99。2. 精密度：批內、批間平均CV分別5.0%3. 準確度：不準確度10%4. 試劑空白吸光度值0.35。 【注意事項】 1. 樣品中鈣含量超過5.00mmol/L，

11、則用生理鹽水稀釋后測定，結果乘以稀釋倍數(shù)。 2. 測試溫度無嚴格規(guī)定，但色素對溫度敏感，應保持反應體系恒溫。 3. 高脂樣本會引起測定結果假性升高，可用樣本空白管校正。 4. 反應形成的色素可穩(wěn)定2小時。 5. 所用試驗器材必須清潔，沒有鈣污染。6. 試劑與樣品量可根據(jù)需要按比例改變。7. 試劑使用后立即關緊瓶蓋，避免污染。8. 使用肝素作為抗凝劑時濃度不能太高，每毫升血液中肝素濃度應小于50單位。不能使用草酸鹽、枸櫞酸鹽、EDTA等作抗凝劑。 實驗十七 鈣鎂試劑比色法測血鎂 【目的要求】 1.掌握比色法測血鎂 2.熟悉血鎂測定的其他方法 【實驗原理】 血清中的鎂在堿性條件下，與金屬色原染料鈣鎂試劑（calmagite)反應生成紫紅色絡合物。