水中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)

1、水中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)水中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握水的細(xì)菌學(xué)檢測(cè)方法2、了解水質(zhì)狀況與細(xì)菌數(shù)量在飲用水檢測(cè)中的重要性。2、菌落總數(shù) standard plate-count bacteria水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上、有氧條件下37。C培養(yǎng)48 h后，所得1 mL水樣所含菌落的總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)就是評(píng)價(jià)水質(zhì)污染程度的主要衛(wèi)生指標(biāo)，所測(cè)定的細(xì)菌總數(shù)增多說(shuō)明水被生活廢棄物污染。由于結(jié)果不能說(shuō)明污染的來(lái)源，因此必須結(jié)合總大腸菌群數(shù)來(lái)判斷污染源與安全程度。3、培養(yǎng)基與試劑2、1營(yíng)養(yǎng)瓊脂成分蛋白陳10 g牛肉膏3 g氯化鈉5g瓊脂10-20 g蒸瑞水工000 mL2、2制法:根據(jù)實(shí)際需要量，按照上述配方稱

2、取各成分混合后 ，加熱溶解，調(diào)整pH為7、47、 6,分裝于玻璃容器中（如用含有較多雜質(zhì)的瓊脂，應(yīng)先過(guò)濾。，經(jīng)103、43 kPa（121° C,15 lb）濕 熱滅菌20 min,儲(chǔ)存于冷暗處備用。4、儀器與材料儀器:高壓蒸汽滅菌器、干熱滅菌箱、水熱恒溫培養(yǎng)箱、電爐、天平、冰箱。材料:滅菌平皿（直徑9 cm）、滅菌試管、刻度吸管、三角燒瓶、采樣瓶、酒精燈、消毒水、鐐子、試管架 等。放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器、pH計(jì)或精密pH試紙、火柴或打火機(jī)。5、樣品采集自來(lái)水的取樣：先將自來(lái)水龍頭用酒精棉擦拭，再用酒精燈火焰滅菌，打開(kāi)龍頭放水3-5 min,用 無(wú)菌空三角瓶接取水樣 200 ml。純凈水

3、取樣：用消毒酒精棉擦拭純水機(jī)出口后，先放走部分水，再用無(wú)菌空三角瓶接取水樣200毫升。地表水的取樣：應(yīng)取距水面10-15 cm的深層水樣，先將滅菌的帶玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水 中,然后翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿后，將瓶塞蓋好，再?gòu)乃腥〕?，最好立即檢 查，否則需放入冰箱中保存。水中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)6、檢驗(yàn)步驟生活飲用水（自來(lái)水、純凈水）:以無(wú)菌操作方法用滅菌吸管吸取1 mL充分混勻的水樣，注入滅菌培養(yǎng)皿中，傾注約15 ml已融化并冷卻到45。C左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并立即旋搖平皿，使 水樣與培養(yǎng)基充分混勻。每次檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)做一平行接種，同時(shí)另用一個(gè)平皿只傾注培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。待冷卻凝

4、固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使底面向上，置于36。0± 1。C條件下連續(xù)培養(yǎng) 48 h,進(jìn)行菌落計(jì)數(shù), 即為1 ml水樣中的菌落總數(shù)。水源水：以無(wú)菌操作方法吸取1 ml充分混勻的水樣，注入盛有9 ml滅菌生理鹽水的試管中，混勻呈1:10稀釋液。吸取1:10稀釋液1 ml,注入盛有9 ml滅菌生理鹽水的試管中，混勻呈1:100稀釋液。按同法依 次稀釋成1:1000、1:10000稀釋液備用。如此遞增稀釋一次，必須更換一支刻度吸管。用滅菌吸管吸取1 ml未稀釋的水樣與23個(gè)適宜稀釋度的水樣，分別注入滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)，其余 操作同6、1生活飲用水的檢驗(yàn)步驟。7、菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法作平皿菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用眼睛

5、直接觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查以防遺漏。在記下各平皿的菌落數(shù)后，應(yīng)求出同稀釋度的平均菌落數(shù)，供下一步計(jì)算時(shí)應(yīng)用。在求同稀釋度的平均數(shù)時(shí)，若其中一個(gè)平皿有較大片狀菌落產(chǎn)生時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落產(chǎn)生的平皿作為該稀釋度的 平均菌落數(shù)。若片狀菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半皿計(jì)數(shù)后乘2以代表全皿菌落數(shù)。然后再求該稀釋度的平均菌落數(shù)。不同稀釋度的選擇及報(bào)告方法首先選擇平均菌落數(shù)在30300之間者進(jìn)行計(jì)算，若只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí),則將該菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1中實(shí)例1）。若有兩個(gè)稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落數(shù)均在 30300之間，則視二者之比值來(lái)決定

6、：若其比值小于2, 應(yīng)報(bào)告兩者的平均數(shù)（如表1實(shí)例2）;若比值大于2,則報(bào)告其中稀釋度較小的菌落數(shù) （如表1 實(shí)例3）。若等于2亦報(bào)告其中稀釋度較小的菌落數(shù) （見(jiàn)表1實(shí)例4）。水中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)表1稀釋度選擇及菌落總數(shù)報(bào)告方式妻例不同稀每度的平均的落數(shù)兩個(gè)稀釋度菌落效之比菌落總數(shù)（CFU/ml）報(bào)告方式SCFU/ml）10_,樣Iff311365164加16 40016 00?；?kfiXlO42276。295幅1.637 "5038 00?；?君乂1。/528902716。2227 J0027 000 或 2.7XJQ141503021 5001 500 或】5X1O35多c 口.

7、計(jì)1 11650513513 00051 4 000 或 5.3X1/62711270270 2.7X1027多不可好3D51230 50031 000 或 3.1X104若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1中實(shí)例5）。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1中實(shí)例6）。3若所有稀釋度的平均菌落數(shù)不在30300之間，則應(yīng)以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1中實(shí)例7）。若所有稀釋度的平板上均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以“未檢出”報(bào)告之。如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可計(jì)”報(bào)告,而應(yīng)在稀釋度最大的平板上，任意數(shù)其 中2個(gè)平板1 cm2中的菌落數(shù)，除2求出每平方厘米內(nèi)平均菌落總數(shù) ，乘以皿底面積63、6 cm2, 再乘以其稀釋倍數(shù)報(bào)告之。菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告：菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按實(shí)有數(shù)報(bào)告；大于100時(shí)，采用兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值 ，以四舍五入法計(jì)算；為了縮短后面的零數(shù)， 也可以用10的指數(shù)來(lái)