天然藥物分析方法

1、最新資料推薦天然藥物分析方法二、水蒸汽蒸儲法：揮發(fā)油、小分子化合物 三、升華法：樟腦、香豆素四、壓榨法：龍舌蘭中海柯皂甘元五、酶解法：甘元六、化學(xué)法：內(nèi)酯 七、超聲波萃取 八、超臨界流體萃取SFE九、膜 別離技術(shù)大類成分樣品制備一、生物堿強(qiáng)堿非極性有機(jī)溶劑 萃取極性有機(jī)溶劑萃取水提或酸水提弱堿有機(jī)溶劑直接提取水溶性生物堿或季鏤堿：雷氏鹽、磷鴇酸揮發(fā)性生物堿：水蒸氣蒸儲、 升華法 二、黃酮 醇提 鉛鹽沉淀法 三、皂 甘：醇提 精制方法 醇-醍沉淀法 鉛鹽沉淀法 膽苗醇沉淀法 氧化鎂吸附法 四、強(qiáng)心昔：醇提五、揮發(fā)油水蒸汽蒸儲浸取法：石油醍吸收法：豚脂、牛脂冷壓法第三節(jié)供試品溶液的精制溶劑別離法：

2、多糖提取、去蛋白液液萃取：石油醍除脂溶性色素沉淀法：1 / 12醋酸鉛除酸性物質(zhì)和鞍質(zhì)鹽析法:丹皮酚-氯化鈉色譜法: 柱色譜、薄層色譜、氣相色譜、高效液相色譜等常見雜質(zhì)的處理 1、鞍質(zhì)：明膠沉淀、生物堿沉淀、醋酸鉛、氨水沉淀2、葉綠素：苯、氯仿、鉛鹽 3、油脂、蠟和樹脂:石油醍、苯 4、蛋白質(zhì)：乙醇、甲醇、鉛鹽 5、無機(jī)鹽:醇提、透析 6、糖和淀粉：有機(jī)溶劑提取水分檢查法烘干法不含或少含揮發(fā)性成分甲苯法含揮發(fā)性成分減壓枯燥法含揮發(fā)性成分貴重藥GC法氣相色譜法古蔡法檢查碑的原理為金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫, 與藥物中微量碎鹽反響生成具揮發(fā) 性的碎化氫, 遇澳 化汞試紙, 產(chǎn)生黃色至棕色 的碑斑

3、,與一定量標(biāo)準(zhǔn)碑溶液所生成 的碑班比 較,判定藥物中碎鹽的含量.醋酸鉛棉花、 澳化汞試紙、 標(biāo)準(zhǔn)碎溶液、 鹽 酸、碘化鉀 試液、酸性氯化亞錫試液、鋅粒常用的理化鑒定方法 顯微鑒 別 定性反響顏色或沉淀反響 色譜法 波譜法2顏 色或沉淀反響各類成分因結(jié)構(gòu)或功能團(tuán)的不同, 常與某些特定試劑發(fā)生反響, 產(chǎn)生不同的顏色或沉 淀.生物堿與碘化韌鉀生成橙色沉淀;慈釀類與堿液反響生成最新資料推薦橙、紅、藍(lán)色； 黃酮類與鹽酸鎂粉的反響 內(nèi)酯類的異羥肪酸 鐵反響皂苴類的Liebermann Burchard反響酚類的三氯化鐵反 應(yīng) 鞍質(zhì)的明膠沉淀反響 氨基酸的苗三酮反響 糖類的苯酚-硫 酸反響等.對照藥材法陽性

4、對照：將要鑒別的藥材按制劑工藝處理,再按鑒別方法提取的溶液陰性對照：把制劑中要鑒別的藥材除去,用剩 下的各味藥按制劑工藝處理,再按鑒別方法提 取的溶液分析實例萬氏牛黃清心丸牛黃清熱解毒藥,主含膽酸類成分.黃連清熱燥濕藥,主要為小集堿.黃苓清熱燥濕藥,主要為黃酮類.桅子清熱瀉火藥,主含桅子苴.朱砂安神藥,主含硫化汞Hg0 .郁金活血去瘀藥, 主含揮發(fā)油.化學(xué)鑒別1.朱砂的鑒別 取本品3g,加水適量, 研勻, 反復(fù) 洗去懸浮物, 可得少量朱紅色沉淀,取 出,參加鹽酸1ml及銅片少量, 加熱煮 沸,銅片由黃色變?yōu)殂y白色.十211cli Cu CuC12- Hg 1112s在酸性條件下,朱砂與 銅片發(fā)

5、生置換反響析出金屬汞,在銅片外表形成銀白色汞齊色譜 鑒別2.人工牛黃的鑒別取本品,剪碎,加硅藻± 0. 6g, 研3 / 12 勻,加氯仿10ml、冰醋酸0. 5ml , 加熱回流30min,放冷, 濾 過,濾液蒸 干,殘渣加乙醇2ml使溶解,濾過, 濾液作為供試 品溶液.膽酸和豬去氧膽酸加乙醇制成1ml含1mg的混合溶液, 作為 對照品溶液.TLC 法CMC-Na硅月& G展開劑 醋酸乙酯-正己烷-醋酸-甲醇 32: 6: 1: 1 顯色劑10%磷鋁酸乙醇液,1100C, 10min 黃苓 的鑒別供試品溶液的制備：取本品3g ,剪碎, 加硅藻土 0. 5g ,研勻, 加甲醇

6、20ml, 加熱回流1hr,放冷, 濾過,濾液作為供試品溶液.對照品溶液的制備：黃苓昔對 照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對照品 溶液.TLC 法CMC-Na硅月G 4%昔酸鈉使斑點更為集中 展開劑 醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水5:3:1:1 顯色劑2%E氯化鐵乙醇液-OH 與Fe+3絡(luò)合5. 黃連的鑒別 供試品溶液的制備：取含量測定項下剩余的 鹽酸-甲醇提取液4ml,水浴蒸干,殘 渣加 甲醇溶解,使成1ml作為供試品溶液.對照藥材溶液的制備：黃連對照藥材50mg 加甲醇10ml,回流加熱15min ,濾過, 濾液 蒸干,殘渣加甲醇1ml使溶解,作為對照藥 材溶液.對照品溶液的制備：最新

7、資料推薦再取鹽酸小聚堿對照 品,加甲醇制成每1ml含0. 5mg的溶液, 作 為對照品溶液TLC法 硅月G CMC-N共開劑 苯-醋酸乙酯-甲醇- 異丙醇-濃 氨試液12： 6： 3： 3： 1 顯色方式UV365nm 硅 膠：微酸性極性固定相,適用于 酸性、中性物質(zhì)別離可以制備成酸度不 同或堿性硅膠擴(kuò)大使用范圍氧化鋁：堿性極性固定相,適用于 堿性、中性物質(zhì)別離可以制備成中性或 酸性氧化鋁擴(kuò)大使用范圍聚酰胺：含有酰胺基極性固定相,適用于酚類、醇類化合物的別離纖維素：含有羥基的極性固定相,適用于別離親水性物質(zhì).薄層掃描儀中國藥典采用雙波長薄層掃描儀實例 2用氣相色譜法同時測定石 菖蒲揮發(fā)油中-細(xì)

8、辛醍和-細(xì)辛醍的含量 色譜條件HP-35 二苯 基-65%-二甲基硅氧烷共聚物毛細(xì)管氣相色譜柱；程序升溫：起始 溫度為30 C ,升至220C ,保持5m進(jìn)樣口溫度:250 C;檢測器溫 度:320 C;進(jìn)樣量:2. 0 l ;無分流進(jìn)樣；溶劑：甲醇；載氣：氨氣； 柱頭壓:5. 5 04Pa ;內(nèi)標(biāo)物:-蔡酚.樣品溶液的制備用水蒸汽蒸儲法提取石菖蒲中的揮發(fā)油,稱 取適量,以-蔡酚,以甲醇溶解,進(jìn)樣.對照品溶液的制備稱取-細(xì)辛醍、-細(xì)辛醍對照品適量,加 0.2mgml 1 -蔡酚的甲醇溶液制成含-細(xì)辛醍的對照品溶液1和5 / 12 含-細(xì)辛醍的對照品溶液.靈敏度 分析方法的靈敏度是指單位濃度或量

9、與響應(yīng)值的比 值.檢測限：以信噪比來確定檢測限的 最低水平.回收率.加樣回收率 即于被測成分含量的成藥中再精 密參加一定量的被測成分純品2.以成藥空白所做的加樣回收率 在 成藥空白9即除去欲測成分的藥材后 制成的成藥中參加一定 量的被測純品, 依 法測定.例如治傷軟膏中苦參堿的含量測定色譜條件的選擇2.1固定相的選擇曾采用苯基柱、C8、ODS硅膠柱、DIOL和富基柱,苦參堿、槐定堿和槐果堿均不能到達(dá)良好的別離；考慮到用反相色譜柱時, 軟膏基質(zhì)影響色譜柱壽命最終參考苦參國家標(biāo)準(zhǔn)中苦參堿、 氧化苦參堿的含量測 定方法,選用氨基鍵合硅膠為固 定相,本試驗采用L色譜柱.2.2流動相的選擇采用氨基柱,

10、試驗了如下幾種流動相系統(tǒng),見表1.最終采用 苦參國家標(biāo)準(zhǔn)中苦參堿、氧化苦參堿含量測定用流動相：乙 睛-無水乙醇-3%磷酸,結(jié)合本藥實際情況, 將比例調(diào)整為 表1流動相系統(tǒng)的選擇 乙睛-無水乙醇-3海酸84:9:7苦參堿出 峰時間適宜, 無干擾,苦參堿出峰太慢 乙睛-無水乙醇-0.1%磷最新資料推薦酸(調(diào)節(jié)PH至2.5) , (80:10:10)乙睛-無水乙醇-3海酸(80:10:10)苦參堿出峰太早,有干擾 結(jié)果 流動相組成2.3檢測波長的選擇采用苦參國家標(biāo)準(zhǔn)中苦參堿、氧化苦參 堿的含量測定用波長220 nm前處理方法的選擇先后采用甲醇水浴提取法,乙醇水浴提取法,氯仿放置過夜 提取法,氯仿振搖

11、提取法,氯仿回流法,氯仿超聲提取法.甲醇、乙醇水浴提取方法簡單,但提取出的成分復(fù)雜,干擾苦參堿的測定.以氯仿作為提取溶劑提取率高且雜質(zhì)干擾少,我們比擬了以下幾種提取方法：氯仿放置過夜提取法、氯仿振搖提取法、氯仿回流法、 氯仿超聲提取法.氯仿放置過夜提取和氯仿振搖提取法提取率均不高且操作不便,費時.通過比擬, 超聲 提取和回流提取測得的含量接近,因超聲提取操作步驟簡 單,所以選擇此方法處理供試品.3.1超聲時間的考察 表2超聲時間的考察0.056 0.060 0.0600.065 0.065苦參堿含量(%)超聲時間(min) 3.2冰浴時間的考察為了預(yù)防軟膏中脂溶性基質(zhì)影響色譜柱壽命,采取冰浴的

12、方式使脂溶性基質(zhì)盡可能析 出,再離心除去.表3冰浴時間的考察 測得含量()冰浴時間(min) 207 / 1240 50 60 70 試驗結(jié)果說明:冰浴1小時以內(nèi)不會造成樣品含量降低 考慮時間長有利于基質(zhì) 析出,最終確定為60 min.復(fù)溶溶劑的選擇曾選用甲醇作測定法色譜條件及系統(tǒng)適用性以氨基鍵合硅膠為填充劑；以乙睛-無水乙醇-3%磷酸溶液84:9:7為流動相；檢測波長220 nm.理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于1500.對照品溶液的制備精密稱取苦參堿對照品適量,加流動相溶解,制成每1ml含苦參堿80 g的溶液,即得.供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物約 2.5 g,精密稱定,置 具塞錐形瓶中,盡可

13、能平鋪于底部,加氨水1 ml,充分浸潤膏體后,精密參加氯仿50 ml,密塞,稱定重量,60 c超聲處理 功率250W 頻率40kHz 1小 時,放冷, 再稱定重量, 用氯 仿補(bǔ)足減失的重量, 搖勻,轉(zhuǎn)移至分液漏斗 中,分取氯仿層,濾 過,精密量取續(xù)濾液25 ml置100 ml燒杯中,80c水 浴蒸干,殘 渣精密參加流動相10 ml,密閉,超聲3分鐘,并時時振搖,所得溶液轉(zhuǎn)移至10ml具塞玻璃離心管中, 密塞,置冰浴中靜置1小 時,離心20分鐘4000轉(zhuǎn)/分,取上清液作為供試品溶液.測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各201 ,注入液相色譜 儀,測定,即得.本品每支含苦參堿C15H24N2

14、O 不得少于10 mg.為復(fù)溶溶劑,圖譜顯示對苦參 堿峰有干擾, 采用流動相復(fù)溶最新資料推薦沒有干擾,所 以選擇流動相為溶劑.5 方法學(xué)驗證5.1專屬性試驗空白溶劑的制備流動相作為空白溶劑：乙睛-無水乙醇-3%磷 酸84:9:7 ;苦參堿對照品溶液的制備取苦參堿對照品約10 mg,精密稱定, 置50 ml容量瓶中,流動相溶解并 稀釋至刻度, 搖勻,精密量取20 ml置50 ml 容量瓶中, 流動相稀釋至刻 度,搖勻,作為對照品溶液,精密量取20 1 ,注入液相色譜儀, 測定, 即得；苦參堿、氧化苦參堿、槐定堿、槐果堿、氧化槐果堿混合對照溶液的制備 分別取上述對照品適量,流動相溶解, 搖勻,即得

15、； 不含苦參的陰性對照供試品溶液的制備取不含苦參的陰性對照軟膏內(nèi)容物約2.5 g,依測定法中供試品溶液的 制備方法操作,即 得；軟膏供試品溶液的制備定量限苦參堿對照溶液稀釋濃度為每1 ml含245 ng的溶 液時,色譜圖中苦參堿的信噪比約為 10 見附圖6,所以苦參堿的最低定量限為245 ng/ml線性試驗精密稱取苦參堿對照品12.25 mg ,置50 ml量瓶中, 加流動相 溶解并稀釋制成每1 ml含245 g的溶液,作為貯備液；分別精密量取貯備液2、5、10、12.5和20 ml于25 ml量瓶中,用 流動相稀釋至刻度,搖勻,得稀釋液1、2、3、4和5.分別精密量取各稀釋液20 l ,注入

16、液相色譜儀, 記錄 色譜圖,測定結(jié)果見表.9 / 12Y=9943.8X-8472.9回歸方程 187387 481722 961907 12068291941545 2428906 平均峰面積 A C g/ml 19.6 49 98 122.5 196 2455.4精密度試驗重復(fù)性 取2批供試品,照測定法項下方法操 作,一天內(nèi)共分析6次,計算含量202271101批治傷 軟膏重復(fù)性試驗考察 RSD% 1.80平均值mg支 含量mg/ 18. 支分析次數(shù)1 2中間精密度 進(jìn)樣精密度試驗 6回收率試驗 取苦參堿對照品約21 mg,精密稱定, 置50 ml量瓶中,用純水溶 解并稀釋到刻度, 制成4

17、22.9 g/ml的對照品儲藏液.取20221101批供試品的內(nèi)容物約1.25 g,精密稱定,置具 塞 錐形瓶中,制備9份；分別精密參加苦參堿對照品儲藏 液各1、2、 3 ml ,制成75%、100 %和125%三個濃度水平的供試品每個濃 度水平3份,按測定法項下測定,由重復(fù)性試驗知道本批供試品苦參堿含量為0.06 % ,按下式計算回收率：回收率% =測得總量內(nèi)容物含苦參堿量/對照品參加量m0 100 %回收率試驗說明,三個濃度水平測定的回收率均在95.0%-105.0位間溶液穩(wěn)定性試驗?zāi)陀眯栽囼炄┰嚻返暮?量測定：每支軟膏中含苦參堿約為18mg規(guī)定本品每支軟膏含苦參堿C15H24N2O不

18、得少于黃楊寧片 中黃楊寧的含量測定 本品為黃楊寧經(jīng)加工制成的片劑.每片含環(huán)維黃楊星 D 0. 5mg或1 mg.對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)1 05c枯燥至恒重的環(huán)維黃楊星最新資料推薦D對照品25mg,置250ml量瓶中, 加甲醇70ml使溶解,用0. 05mol /L磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻度,搖勻,精密量取1 0ml ,置1 00ml量瓶中,用0. 05mol /L 磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻度, 搖勻,即得每1 ml含環(huán)維黃楊星D1 0 g .環(huán)維黃楊星D1 0mg供試品溶液的制備取本品20片每片含環(huán)維黃楊星D0.5mg , 精密稱定2. 050g ,研細(xì),精密稱取0. 1 020g 約相當(dāng)于黃 楊0.5m g, 置50ml量瓶中,力口 0. 05mol /L 磷酸二氫鈉緩沖 液至近刻度,80c