消毒滅菌效果與環(huán)境衛(wèi)生學監(jiān)測手冊[1]

1、消毒滅菌效果與環(huán)境衛(wèi)生學監(jiān)測一、環(huán)境衛(wèi)生學：包括各類環(huán)境、空氣、物體表面、醫(yī)護人員手1、細菌菌落總數衛(wèi)生標準環(huán)境內別范圍標準空氣 物體 醫(yī) 護表面 人員手cfu/m3 cfu/m2 cfu/m2類類類類層流潔凈手術室、層流潔凈手病房普通手術室、產房、嬰兒室、早產兒室、普通保護性隔離病室、供應室無菌區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護病房，輸血科、血透室、介入中心兒科病房、婦產科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應室清潔區(qū)、各類普通病房和房間傳染病科及房間10 5 5200 5 5500 10 10 15 152、致病性微生物及結果判定（一）、空氣：類區(qū)域：細菌總數10 cfu/m3（或0.2 cfu/平板）

2、，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；類區(qū)域：細菌總數200 cfu/m3（或4 cfu/平板），未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；類區(qū)域細菌總數500 cfu/m3（或10 cfu/平板），未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；（二）、物體表面：類區(qū)域：細菌總數5 cfu/m2，并未檢出致病菌為消毒合格；類區(qū)域：細菌總數10cfu/m2，并未檢出致病菌為消毒合格；類區(qū)域：細菌總數15 cfu/m2，并未檢出致病菌為消毒合格；母嬰同室、早產兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門菌。（三）、手、類區(qū)域工作人員：細菌總數5 cfu/m2，并未檢出金黃色

3、葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌為消毒合格；類區(qū)域工作人員：細菌總數10 cfu/m2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格；類區(qū)域工作人員：細菌總數15 cfu/m2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格；母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。二、醫(yī)療用品1、進入人體無菌組織、器官或接觸破損皮膚、黏膜的醫(yī)療用品必須無菌。滅菌物品不得檢出任何微生物。2、接觸皮膚、黏膜的醫(yī)療用品：必須消毒。細菌菌落總數應20 cfu/g或100cm 2，消毒物品不得檢出致病性微生物。三、使用中消毒劑和無菌器械保存液1、使

4、用中消毒劑：細菌菌落數應100 cfu/ml；致病性微生物不得檢出。2、無菌器械保存液：必須無菌。四、紫外線燈管輻照強度1、普通30W直管型紫外線燈：新燈輻照強度90W/；使用中的紫外線輻照強度應70W/；2、30W高強度紫外線：新燈的輻照強度180W/為合格。3、生物監(jiān)測標準：經消毒后的物品或空氣的自然菌應減少90.00%以上，人工染菌殺滅率應達到99.90%。五、內鏡：1、滅菌后的內鏡（入腹腔鏡、關節(jié)鏡、膽道鏡、腦室鏡、膀胱鏡、胸腔鏡）；不得檢出任何微生物。2、消毒后的內鏡（入喉鏡、氣管鏡、支氣管鏡、胃鏡、腸鏡、乙狀結腸鏡、直腸鏡）：細菌總數20 cfu/件，不得檢出致病菌。六、血液凈化系

5、統：1、透析器入口液：細菌菌落總數必須200 cfu/ml；2、透析器出口液：細菌菌落總數必須200 0cfu/ml，并不得檢出致病微生物。七、醫(yī)院感染病例：1、醫(yī)院感染發(fā)病率10%。2、醫(yī)院感染漏報率10%。3、無菌手術切口感染率5%。4、出現醫(yī)院感染散發(fā)病例：經治醫(yī)生應及時向本科室醫(yī)院感染監(jiān)控小組負責人報告，查找感染原因，采取有效控制措施，并于24小時內填表報告醫(yī)院感染管理科。5、醫(yī)療機構經調查證實5例以上醫(yī)院感染暴發(fā)；或由于醫(yī)院感染暴發(fā)直接導致患者死亡；或由于醫(yī)院感染暴發(fā)導致3人以上人身損害后果時，應當于12小時內向所在地的縣級地方人民政府衛(wèi)生行政部門報告，并同時向所在地疾病預防控制機構

6、報告。八、污物處理：按照醫(yī)療衛(wèi)生機構醫(yī)療廢物管理辦法進行處理。監(jiān)測時間一、使用中的消毒劑、滅菌劑1、生物化學監(jiān)測：消毒劑每季度一次；滅菌劑每月一次；2、化學監(jiān)測：含氯消毒劑、過氧乙酸等易揮發(fā)產品每日監(jiān)測；戊二醛監(jiān)測每周不少于一次。二、消毒物品、滅菌物品1、消毒物品：每季度一次；2、滅菌物品：每月一次。三、壓力蒸汽滅菌1、工藝監(jiān)測：每鍋進行，并詳細記錄。2、化學監(jiān)測：每包進行，手術包還需進行中心部位的化學監(jiān)測。3、生物監(jiān)測：每月進行，對新滅菌器使用前或擬采用新包裝容器、擺放方式、排氣方式等特殊工藝，都必須進行生物監(jiān)測，合格后才能使用。4、B-D試驗：預真空壓力蒸汽滅菌器每天滅菌前進行。四、環(huán)氧乙

7、烷氣體滅菌1、工藝監(jiān)測：每鍋進行。2、化學監(jiān)測：每包進行。3、生物監(jiān)測：每月進行。五、紫外線消毒1、日常監(jiān)測：包括頂管應用時間、累計時間和使用人簽名。2、強度監(jiān)測：每半年一次。3、生物監(jiān)測：必要時進行。六、內鏡1、消毒后內鏡：每季度進行。2、滅菌后內鏡：每月進行。七、血液凈化系統1、對入、出透析器的透析液：每月進行。2、疑有透析液污染或有嚴重感染病例時：應及時進行監(jiān)測，并增加采樣點，如原水口、軟化水入口、反滲水出口、透析液配液口等。八、空氣、物體表面、醫(yī)護人員手1、重點部門：每月進行。如手術室、重癥監(jiān)護病房/室（ICU）、產房、母嬰室、新生兒病房、骨髓移植病房、血液病房、血液透析室、供應室無菌

8、區(qū)、治療室、換藥室等。2、有醫(yī)院感染流行，懷疑與醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學因素有關時：應及時進行監(jiān)測。采樣及檢查方法一、采樣及檢查原則采樣后必須盡快對樣品進行相應指標的檢測，送檢時間不得超過6h，若樣品保存于04條件時，送檢時間不得超過24h。二、空氣采樣檢查方法1、采樣時間：在消毒后與醫(yī)療活動前之間采樣。2、采樣高度：與地面垂直高度1.5m,距墻1m。3、布點方法：室內面積30 m2，設內、中、外對角線3點，即中心一點，內、外布點部位距墻1m處；室內面積30 m2，設4角及中央5點，4角的布點部位距墻1m。4、采樣方法：平板暴露法將9cm直徑普通營養(yǎng)瓊脂平板放在室內個點采樣點，高度距地面1.5m，采樣時

9、將平板打開，扣放于平板龐，暴露5min后蓋好立即送檢。將送檢的平板置37溫箱培養(yǎng)48小時，計算菌落數，并分離致病菌。5、計算結果： 50000平均菌落數空氣細菌菌落總數（cfu/m3）= 平板面積（cm2）5min三、物體表面采樣及檢查方法1、采樣時間：消毒處理后4h內采樣。2、采樣面積：被采表面100 cm2,取全部表面：被采表面100 cm2，取100 cm2。3、采樣方法：用5cm5cm的標準滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子1支，在規(guī)格板內橫豎往返均勻涂抹各5次，并轉動棉拭子，連續(xù)采樣1-4個規(guī)格板面積，剪去手接觸部分，將棉拭子投入10ml含相應中和劑的無菌

10、洗脫液試管中立即送檢。門把等小型不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。4、結果計算：平皿上菌落的平均數采樣液稀釋倍數物體表面細菌菌落總數=（cfu/m2） 采樣面積（cm2）小型物體表面的結果計算，用cfu/件表示。四、醫(yī)護人員采樣及檢查方法1、采樣時間：在接觸病人、從事醫(yī)療活動前進行采樣。2、采樣面積及方法：被檢人員五指并攏，將浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子一支在雙手指屈面從指根到指端來回涂擦各兩次（一只手涂擦面積30 cm2），并隨之轉動采樣棉拭子，剪去手接觸部分，將棉拭子放入裝有10ml采樣液的試管內送檢。3、結果計算：平皿上菌落的平均數采樣液稀釋倍數手細菌菌落總數（cfu/m2）= 30

11、2五、醫(yī)療用品采樣及檢查方法1、采樣時間：在滅菌處理后，存放有效期內采樣。2、無菌試驗：是指檢查經滅菌的敷料、縫線、一次性使用的醫(yī)療用品、無菌器械以及適合于無菌間的其他物品。注意：無菌檢驗應在潔凈度為100級單向流空氣區(qū)域內進行，應嚴格遵守無菌操作，避免微生物污染；對單向流空氣區(qū)域及工作臺面，必須進行潔凈度驗證。3、采樣及采樣方法：可用破壞性方法取樣的醫(yī)療用品，如輸液（血）器、注射器、注射針頭等可直接送細菌室采樣。（1）、即用無菌方法將擬檢縫合針、針頭、手術刀片等小件醫(yī)療器械各5件直接浸入6管需-厭氧培養(yǎng)管（其中一管作陽性對照）與4管霉菌培養(yǎng)管。培養(yǎng)管用量為15ml/管。（2）、對不能用破壞性

12、方法取樣的特殊醫(yī)療用品，可用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子在被檢物品表面涂抹采樣。手術鉗、鑷子等大件醫(yī)療器械取2件用沾有無菌洗脫液的棉拭子反復涂擦采樣，將棉拭子投入5ml無菌洗脫液中，將采樣液混均，接種于需-厭氧培養(yǎng)管（共6管，其中一管作陽性對照）與霉菌培養(yǎng)管（共4管）。接種量為1ml/管，培養(yǎng)管用量為15ml/管。4、培養(yǎng)：在待檢樣品的需-厭氧培養(yǎng)管中，接種預先準備的金黃色葡萄球菌陽性對照管1:1000稀釋1ml，將需-厭氧培養(yǎng)管以及陽性與陰性對照管均于3035培養(yǎng)5天，霉菌培養(yǎng)管與陰性對照管于2025培養(yǎng)7天，培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長，如加入供試品后培養(yǎng)基出現混濁或沉淀，經培養(yǎng)后不能從

13、外觀上判斷時，可取培養(yǎng)液轉種入另一支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)4872h后，觀察是否再現混濁或斜面上有菌落生長，并在轉種的同時，取培養(yǎng)液少量，圖片染色，用顯微鏡觀察是否有菌生長。5、判定結果：陽性對照24h內應有菌生長，陰性對照在培養(yǎng)期間應無菌生長，如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管內均為澄清或雖混濁但經證明并非有菌生長，判為滅菌合格；如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管中任何一管顯混濁并證實有菌生長，應重新采樣，分別同法復試2次，除陽性對照外，其他各管均不得有菌生長，否則判為滅菌不合格。6、注意事項：送檢時間不得超過6h，若樣品保存于04，則不得超過24h。被采樣表面100，取全部表面；被采表面100，取

14、100。若消毒因子為化學消毒劑時，采樣液中應加入相應的中和劑。六、使用中是消毒劑與無菌器械保存液1、采樣時間：更換前使用中的消毒劑與無菌器械保存液。2、采樣量級方法：在無菌條件下，用無菌吸引管吸取1ml被檢液體，加入9ml稀釋液中混均。稀釋液中需根據不同種類消毒劑加入相應中和劑，以中和被檢樣液的殘效作用。醇類與酚類消毒劑，稀釋液用普通營養(yǎng)肉湯即可；含氯、含碘、過氧化物消毒劑，需在肉湯中加入0.1%硫代硫酸鈉；洗必泰、季銨鹽類消毒劑，需在肉湯中加入3%（W/V）吐溫80。3、結果分析：平板上有菌生長，證明被檢樣液有殘存活菌，若每個平板菌落數在10個以下，仍可用于消毒處理（但不能用于滅菌），若每個

15、平板菌落數超過10個，說明沒毫升被檢液含菌量已超過100個，即不能再使用。七、紫外線消毒效果的監(jiān)測1、監(jiān)測方法：開啟紫外線燈5min后將紫外線強度指示卡或紫外線輻照計探頭置于距燈管下垂直距離1m處，照射1min。2、結果判定：普通30W直管型紫外線燈，新燈輻照強度90W/為合格；使用中的紫外線輻照強度70W/為合格；30W高強度紫外線新等輻照強度180W/為合格。八、內鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測1、采樣時間：在消毒滅菌后、使用前進行采樣。2、采樣方法：監(jiān)測采樣部位為內鏡的內腔面。用無菌注射器抽取10ml含相應中和劑的緩沖液，從待檢內鏡活檢口注入，應15ml無菌試管從活檢出口收集，及時送檢，2h內檢測

16、。3、菌落計數：將送檢液用漩渦器充分震蕩，取0.5ml加入2只直徑90mm無菌平皿，每個平皿分別加入已經熔化的4548營養(yǎng)瓊脂15ml18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，于35培養(yǎng)48h后計數。4、結果判定：菌落數/鏡=2個平皿菌落數平均值20。5、致病菌檢測：將送檢液用漩渦器充分震蕩，取0.2ml分別接種于90mm血平皿、中國蘭平皿和SS平皿，均勻涂布，35培養(yǎng)48h，觀察有無致病菌生長。九、壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測方法1、化學監(jiān)測方法：化學指示卡(管)：放入每一個待滅菌的物品包中央?；瘜W指示膠帶監(jiān)測法：將其粘貼于每一個滅菌包外。結果判定：所放的指示卡（管）的性狀或顏色均變至規(guī)定的條件，即滅菌合

17、格。2、生物監(jiān)測法指示菌株:為嗜熱脂肪桿菌芽孢（ATCC7953或SSIK31株）。檢測方法：將兩個嗜熱脂肪桿菌芽孢菌片分別裝入滅菌小紙袋內，置于標準試驗包中心部位。預真空滅菌柜內，排氣口上方放置一個標準測試包（由16條全棉手術巾，每條41cm66cm，將每條手術巾的長邊先折成3層，短邊折成2層然后疊放，作成23cm23cm15cm大小的測試包）；下排氣滅菌柜室內，排氣口上方放置一個標準測試包（由3件平紋長袖手術衣、4塊小手術巾、2塊中手術巾、1塊大手術巾，30塊10cm10cm8層紗布敷料包裹成25cm30cm30cm大?。?。手提壓力蒸汽滅菌器用通氣貯物盒（22cm13cm6cm）代替標準試驗