DNA的粗提取與鑒定活動單

1、 DNA的粗提取和鑒定一、DNA的粗提取的原理思考1：DNA存在于真核生物細(xì)胞的哪些部位？思考2：提取生物大分子的一般思路是什么？ 1、DNA的性質(zhì)：DNA和蛋白質(zhì)的溶解性、對酶、高溫和洗滌劑的耐受性在NaCl溶液中的溶解度對蛋白酶的耐受性在酒精中的溶解度對高溫的耐受性對洗滌劑的耐受性DNA畫出曲線圖：蛋白質(zhì)2、分析教材中DNA粗提取時去除濾液中的雜質(zhì)的方案一、二、三的原理。 方案一： 方案二： 方案三： 二、DNA粗提取的主要步驟：1、材料選擇：適于作實驗材的材料：選用 的生物材料；如雞（紅）血，其適宜作為實驗材料的原因：雞血（紅）細(xì)胞核的DNA含量豐富，材料易得；雞血細(xì)胞極易吸水脹破。一般

2、用雞血細(xì)胞液，而不用雞全血，為什么？能否用哺乳動物紅細(xì)胞呢？破碎細(xì)胞，釋放DNA（核物質(zhì)）方法：將510mL雞血細(xì)胞液加入20mL 中；用玻棒同方向攪拌5min；用34紗布過濾，以除去顆粒較大的雜質(zhì)過濾；收集 。目的：破壞細(xì)胞，釋放核物質(zhì)注意：攪拌不能用力過大，以防止打碎DNA分子；DNA存在：多數(shù)與蛋白質(zhì)結(jié)合，存在于濾液中2、主要實驗步驟（以雞血紅細(xì)胞為例）：溶解細(xì)胞核內(nèi)DNA方法：向濾液中加入2倍體積的 mol/LNaCl溶液，攪拌1min；過濾獲取 目的：使與DNA結(jié)合的 解聚，釋放出 ；DNA溶解于高溶液NaCl溶液中注意：按同一方向攪拌DNA析出方法：沿?zé)谙驗V液中緩慢加入蒸餾水，

3、并輕輕按同一方向攪拌，使DNA析出，直到 ；可以在玻棒上收集到黏稠物（或過濾或離心收集黏稠物）目的：降低NaCl溶液濃度達(dá)到 mol/L左右，使DNA析出注意：加入的蒸餾水不能過多，使NaCl溶液濃度過低，DNA又會 黏稠物：絲狀、略帶黃色（DNA分子上附著有少量蛋白質(zhì)）DNA的初步純化方法：向20mL 2mol/LNaCl溶液中加入黏稠物，并按同一方向攪拌3min，使DNA充分溶解；過濾，收集濾液；向濾液中貼壁緩慢加入50mL冷凍的95%乙醇，并用玻棒按同一方向緩慢、均勻地攪拌，在玻棒上收集白色絲狀物（DNA）原理：DNA不溶于 中，而蛋白質(zhì)能溶于 中。思考：1.上述步驟都有攪拌的操作，攪拌

4、操作有什么要求？為什么要這樣做？ 2.上述步驟都有過濾，過濾所用的材料是什么？每次過濾后選取濾液還是粘稠物？ 3本實驗中兩次加入蒸餾水的目的各是什么？第一次：向雞血細(xì)胞液中加入蒸餾水，目的： 第二次：向溶解DNA的2mol/LNaCl溶液中加入蒸餾水，目的： 拓展：1、以菜花為材料進(jìn)行實驗時，如何獲得核物質(zhì)？ 取材、剪碎加入洗滌劑、食鹽研磨、過濾加洗滌劑的目的： 加入食鹽的目的： 2、探究不同方法、洗滌劑、食鹽用量對DNA粗提取量的影響（說說實驗思路）三、DNA的鑒定：1、DNA鑒定的原理：在 的條件下,DNA遇 會被染成 。2、畫出裝置圖，并標(biāo)出每支試管中所加入的物質(zhì)種類、總量、及出現(xiàn)的顏色

5、。3、在沸水浴中加熱的目的是什么？同時說明DNA對高溫的耐受性如何？為何要待試管冷卻后比較顏色變化？4、二苯胺試劑的使用與斐林試劑的使用有一些相似之處，試舉例說明。四、實驗結(jié)果分析與評價1、實驗結(jié)果評價：是否提取到DNA？觀察提取的DNA顏色：如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多；二苯胺鑒定：出現(xiàn)藍(lán)色說明實驗基本成功，如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能所提取的DNA含量低，或是實驗操作中出現(xiàn)錯誤，需要重新制備。2、粗提取得到的絲狀物為什么略帶黃色？實驗提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。3、影響絲狀物總量的因素有哪些？ 實驗材料種類和數(shù)量、溶解核DNA時的NaCl溶液濃度、實驗方法、攪

6、拌方法（攪拌不當(dāng)可能破壞DNA）五、案例：（快速閱讀、理解步驟原理）以菜花為實驗材料進(jìn)行DNA的粗提取【實驗材料準(zhǔn)備】 將新鮮菜花和體積分?jǐn)?shù)為95的乙醇溶液放入冰箱冷凍室24 h【提取DNA的具體步驟】1、取材  稱取30 g菜花，去梗取花，切碎。2、研磨  將碎菜花放入研缽中，倒入10 mL研磨液，充分研磨10 min。動作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟的操作。教材中建議采用洗發(fā)香波、洗滌劑等一些去污劑，使植物細(xì)胞膜破碎，釋放DNA。學(xué)生可以設(shè)置對照實驗，比較哪一種方法可以提取到純度更高的DNA。一般實驗室提取高純度的DNA都采用一種陽離子去污劑十六

7、烷三甲基溴化銨分離緩沖液，使細(xì)胞膜破碎，同時將DNA與植物中多糖等雜質(zhì)分開，再用氯仿異丙醇混合液（體積比為241）抽提去除雜質(zhì)蛋白，得到高純度的DNA。3、過濾  在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨液過濾到燒杯中(有條件的學(xué)校可將濾液倒入塑料離心管中進(jìn)行離心，用1000 r/min的轉(zhuǎn)速，離心25 min，取上清液放入燒杯中)。在4 冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。4、沉淀  將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95的預(yù)冷乙醇溶液中，并用玻璃棒緩緩、輕輕地攪拌溶液(玻璃棒不要直插到燒杯底部)。沉淀35 min后，可見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉(zhuǎn)，將絮狀物纏繞

8、在玻璃棒上。六、訓(xùn)練題：1在DNA粗提取的過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用分別是A稀釋血液；沖洗樣品 B使血細(xì)胞破裂；降低氯化鈉的濃度C使血細(xì)胞破裂；增大DNA的溶解度 D使血細(xì)胞破裂；沖洗樣品2NaCl的物質(zhì)量為多少mol/L時，DNA的溶解度最小A0.12 B0.13 C0.14 D0.153在提取的細(xì)胞核物質(zhì)的溶液中，加入2mol/L的NaCl溶液40ml目的是A溶解雜質(zhì) B溶解蛋白質(zhì) C析出DNA D溶解DNA4提取含雜質(zhì)較少的DNA所用的溶液 ANaCl溶液 B冷卻90%的酒精 C加熱95%的酒精 D冷卻95%的酒精5DNA遇二苯胺（沸水浴）時，會染成 A磚紅色 B紅色 C紫色

9、D藍(lán)色6破譯生物基因組DNA的遺傳信息或進(jìn)行基因操作，首先要提取細(xì)胞核DNA。下列不適宜作為DNA提取的實驗材料是A雞血細(xì)胞 B蛙的紅細(xì)胞C人的成熟紅細(xì)胞 D菜花7.下表有關(guān)“DNA粗提取和鑒定”的相關(guān)操作中所選取的試劑，錯誤的是8（多選）下表是關(guān)于DNA粗提取與鑒定實驗中所使用的材料、操作及其作用的表述正確的是試劑操作作用A檸檬酸鈉溶液與雞血混合防止血液凝固B蒸餾水與雞血細(xì)胞混合保持細(xì)胞形狀C蒸餾水加入到溶解有DNA的NaCl中析出DNA絲狀物D冷卻的酒精加入到過濾后DNA的NaCl中產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)9. 在利用獼猴桃進(jìn)行“DNA粗提取與鑒定”實驗中，相關(guān)操作正確的是A直接向剪碎的獼猴桃果

10、肉組織中加入蒸餾水并攪拌，以釋放核DNAB向獼猴桃果肉研磨液中加入適量的蒸餾水，以降低DNA酶活性C將獼猴桃果肉研磨液迅速加熱到100，再冷卻后過濾，可以獲得DNA粗提物D向溶有粗提物的NaCl溶液中加入冷卻的體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精，可以獲得較純凈的DNA10（多選）下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說法不正確的是A洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜，同時也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度B在探究洗滌劑對植物細(xì)胞DNA提取的影響實驗中，需要控制的變量是洗滌劑和植物細(xì)胞C常溫下，DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色D將濾液放在6075的恒溫水浴箱中保溫1015分鐘能去除濾液中的雜質(zhì)，其原理是利用了DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的

11、不同11.（2010江蘇高考）某生物興趣小組開展DNA粗提取的相關(guān)探究活動，具體步驟如下：材料處理：稱取新鮮的花菜、辣椒和蒜黃各2份，每份10g。剪碎后分成兩組，一組置于20、另一組置于20條件下保存24h。DNA粗提取：第一步：將上述材料分別放入研缽中，各加入15mL研磨液，充分研磨。用兩層紗布過濾，取濾液備用。第二步：先向6只小燒杯中分別注入10mL濾液，再加入20mL體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精溶液，然后用玻璃棒緩緩地向一個方向攪拌，使絮狀物纏繞在玻璃棒上。第三步：取6只試管，分別加入等量的2mol/LNaCl溶液溶解上述絮狀物。DNA檢測：在上述試管中各加入4mL二苯胺試劑，混合均勻后，置

12、于沸水中加熱5min，待試管冷卻后比較溶液的顏色深淺，結(jié)果如下表。分析上述實驗過程，回答下列問題：（1）該探究性實驗課題名稱是 。（2）第二步中“緩緩地”攪拌，這是為了減少 。（3）根據(jù)實驗結(jié)果，得出結(jié)論并分析。結(jié)論1：與20相比，相同實驗材料在20條件下保存，DNA的提取量較多。結(jié)論2： 。針對結(jié)論1，請?zhí)岢龊侠淼慕忉專?。（4）氯仿密度大于水，能使蛋白質(zhì)變性沉淀，與水和DNA均不相溶，且對DNA影響極小。為了進(jìn)一步提高DNA純度，依據(jù)氯仿的特性，在DNA粗提取第三步的基礎(chǔ)上繼續(xù)操作的步驟是 ，然后用體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精溶液使DNA析出。12（2011江蘇卷）在利用雞血進(jìn)行“DNA的粗提

13、取與鑒定”的實驗中，相關(guān)敘述正確的是A用蒸餾水將NaCl溶液濃度調(diào)至0.14mol/L，濾去析出物B調(diào)節(jié)NaCl溶液濃度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分雜質(zhì)C將絲狀物溶解在2mol/NaCl溶液中，加入二苯胺試劑即呈藍(lán)色D用菜花替代雞血作為實驗材料，其實驗操作步驟相同13. (2012江蘇)下列關(guān)于“DNA粗提取與鑒定實驗”的敘述，正確的是A洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度B將DNA絲狀物放入二苯胺試劑中沸水浴后冷卻變藍(lán)C常溫下菜花勻漿中有些酶類會影響DNA的提取D用玻棒緩慢攪拌濾液會導(dǎo)致DNA獲得量減少14.（2013江蘇） 某同學(xué)用洋蔥進(jìn)行 DNA

14、 粗提取和鑒定實驗，操作錯誤的是 A加入洗滌劑后用力進(jìn)行快速、充分的研磨 B 用蛋白酶純化過濾后的研磨液中的 DNA C加入酒精后用玻璃棒輕緩攪拌 D加二苯胺試劑搖勻后沸水浴加熱 15.（2014江蘇）下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實驗敘述，錯誤的是A酵母和菜花均可作為提取DNA的材料BDNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸餾水C向雞血細(xì)胞液中加蒸餾水?dāng)嚢?，可見玻棒上有白色絮狀物DDNA溶液加入二苯胺試劑沸水浴加熱，冷卻后變藍(lán)16.（2015江蘇、多選）圖1、2 分別為“DNA 的粗提取與鑒定冶實驗中部分操作步驟示意圖，下列敘述正確的是A. 圖1、2 中加

15、入蒸餾水稀釋的目的相同 B. 圖1 中完成過濾之后保留濾液C. 圖2 中完成過濾之后棄去濾液D. 在圖1 雞血細(xì)胞液中加入少許嫩肉粉有助于去除雜質(zhì)17科研人員以金定鴨、長樂灰鵝和象洞雞的全血為實驗材料，比較苯酚一氯仿抽提法（方法A）和鹽析法（方法B提取血液中DNA的效率。圖中EDTA具有破壞細(xì)胞膜、抑制DNA酶活性的作用，SDS具有破壞細(xì)胞膜和核膜、使蛋白質(zhì)變性和抑制DNA酶活性的作用。提取過程和結(jié)果如下：請回答：（1）本實驗不選擇哺乳動物血液為實驗材料的原因是 。（2）步驟中，若只用蛋白酶K消化處理.對實驗結(jié)果的影響是 。（3）步驟中.破碎細(xì)胞常用的方法是 。步驟加人蒸餾水的目的是 。（4）苯酚和氯仿-異戊醇不溶或微溶于水，密度均大于水，步驟所依據(jù)的原理是 。（5）對于長樂灰鵝、象洞雞來說，較適宜的DNA提取方法分別是 、 。（6）實驗結(jié)果表明，不同方