無菌檢查方法驗證方案

1、安徽捷眾生物化學(xué)無菌檢查方法薄膜過濾法驗證方案文件編號：QYe TS 05 0070批準(zhǔn)日期： 年 月 日實施日期年 月日安徽捷眾生物化學(xué)文件審批表文件名稱：無菌檢查方法薄膜過濾法驗證方案文件編號： QY TS05 - 007文件提出部門：質(zhì)量限制部/QC文件起草目的：新訂 回修訂匚文件起草人簽字：完成日期：年 月 日文件會審部門文件審核人簽字審核日期質(zhì)量治理部年 月 日質(zhì)量保證部/QA年 月 日質(zhì)量限制部/QC年 月 日生產(chǎn)部年 月 日工程設(shè)備部年 月 日文件批準(zhǔn)人簽字：批準(zhǔn)日期年 月 日文件實施日期：仝E月日起實施文件編制依據(jù)：1、衛(wèi)生部：?藥品生產(chǎn)質(zhì)量治理標(biāo)準(zhǔn)?2021年修訂版和修訂附錄

2、2、?中華人民共和國藥典?二部2021年版附錄.文件復(fù)制人：校對人：復(fù)制份數(shù)：復(fù)制日期：年 月日頒發(fā)部門：質(zhì)量治理部分發(fā)單位：備注：安徽捷眾生物化學(xué)無菌檢查方法薄膜過濾法驗證方案目 錄1 .驗證目的2 .驗證頻次3 .驗證操作內(nèi)容與要求3.1. 驗證操作試驗3.2. 驗菌要求3.3. 驗證方法步驟3.4. 驗證準(zhǔn)備3.5. 證試驗操作4 .驗證結(jié)果評價分析5 .附件安徽捷眾生物化學(xué)無菌檢查方法薄膜過濾法驗證方案編RQY- TS 05 - 0070頁 數(shù)共11頁制定人制定日期年 月 日修訂日期年 月 日審核人審核日期年 月 日頒發(fā)部門質(zhì)量治理部批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期年 月 日生效日期年 月 日分發(fā)部門相

3、關(guān)部門1 .驗證目的確認(rèn)所采用的方法適合于供試品的無菌檢查.即確認(rèn)供試品在該檢驗量、該檢驗條 件下無抑菌活性,以保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠及檢驗方法的完整性.2 .驗證頻次2.1. 建立藥品的無菌檢查法時2.2. 修訂檢驗方法時2.3. 供試品的組分或原檢驗條件發(fā)生改變可能影響檢驗結(jié)果時3 .驗證操作內(nèi)容與要求：3.1. 驗證時,按“供試品的無菌檢查的規(guī)定要求進行驗證操作試驗：3.1.1. 對每一試驗菌應(yīng)逐一進行驗證.3.1.2. 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基一金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌、生抱梭菌.3.1.3. 改進馬丁瓊脂培養(yǎng)基一白色念珠菌、黑曲霉.3.2. 驗菌要求：3.2.1. 驗

4、證試驗所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代,并采用適宜的菌種保藏技術(shù),以保證試驗菌株的生物學(xué)特性.3.2.2. 驗證試驗可在供試品的無菌檢查之前或與供試品的無菌檢查同時進行.當(dāng)同時進行時,假設(shè)驗證試驗失敗,那么供試品的無菌檢查結(jié)果是不成立的3.3. 驗證方法步驟：3.3.1. 驗證試驗的操作方案用3個不同批號產(chǎn)品根據(jù)無菌檢查方法薄膜過濾法進行平行試驗,通過計算回收率來判斷無菌檢查方法薄膜過濾法是否對產(chǎn)品有影響.3.3.2. 試驗結(jié)果可接受標(biāo)準(zhǔn)用無菌標(biāo)準(zhǔn)評價方法0.9%氯化鈉注射液三層共擠膜袋的無菌檢查對檢品中無菌檢查試驗結(jié)果應(yīng)顯示3次獨立的平行試驗中,稀釋劑對照組的菌回收率應(yīng)不小于70% ,試驗組的

5、回收率也不低于70% 03.4. 驗證準(zhǔn)備：準(zhǔn)備驗證所需的供試品、培養(yǎng)基、試藥試劑、儀器設(shè)備和菌種.3.4.1. . 培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基；改進馬丁瓊脂培養(yǎng)基；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；血瓊脂培養(yǎng)基 備注：3.4.1.1 培養(yǎng)基應(yīng)注明來源；如采用市售干粉培養(yǎng)基,應(yīng)按說明配制.3.4.1.2 配制后的培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)中國藥典附錄“無菌檢查法中“培養(yǎng)基的適用性檢查 項下檢驗無菌性和靈敏度.3.4.2. 儀器設(shè)備3.4.2.1 凈化工作臺3.4.2.2 生物潔凈平安柜3.4.2.3 集菌儀3.4.2.4 生化培養(yǎng)箱3.4.2.5 霉菌培養(yǎng)箱3.4.2.6 高溫試驗箱3.4.2.7 臺式滅菌器3.4.2.8

6、醫(yī)藥品冷藏柜3.4.2.9 微波爐3.4.2.10 器具 無菌培養(yǎng)皿：直徑90mm 無菌移液管5ml等備注：以上儀器設(shè)備需要確認(rèn)與驗證的均應(yīng)已按要求驗證.3.4.3. .菌種3.4.3.1 金黃色葡萄球菌CMCC (B) 260033.4.3.2 枯草芽抱桿菌CMCC (B) 635013.4.3.3 白色念珠菌CMCC (F) 980013.4.3.4 黑曲霉CMCC (F) 980033.4.3.5 銅綠假單胞菌CMCC (B) 101043.4.3.6 生抱梭菌CMCC (B) 649413.4.4. 操作環(huán)境：3.4.4.1 操作間應(yīng)該安裝空氣除菌過濾層流裝置.3.4.4.2 環(huán)境潔凈

7、度不應(yīng)低于C級,凈化工作臺潔凈度為 A級.3.4.4.3 操作間或凈化工作臺的潔凈空氣應(yīng)該保持對環(huán)境形成正壓,不低于 10pa3.4.5. 試驗樣品：0.9%氯化鈉注射液三層共擠膜袋 規(guī)格：250ml批號：生產(chǎn)日期：批號：生產(chǎn)日期：批號：生產(chǎn)日期：3.4.6. 稀釋液和試劑：PH7.0無菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液無菌十四烷酸異丙酯3.4.7. 驗證用微生物名稱及其編號3.4.7.1實驗菌株的來源：廳P菌株名稱菌株代碼及編號內(nèi)控編p1金黃色葡穩(wěn)球菌CMCC (B) 260032銅綠假單胞菌CMCC (B) 101043枯草芽抱桿菌CMCC (B) 635014白色念珠菌CMCC (F) 980015

8、生抱梭困CMCC (B) 649416黑曲霉CMCC ( F )980033.4.7.2編號由菌名首字母一傳代代數(shù)一制備日期組成3.4.8培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)商培養(yǎng)基批號配制日期后效期營養(yǎng)瓊脂A口加工改進馬丁瓊月日A口加工3.5. 證試驗操作：3.5.1. 試驗菌的制備和稀釋：3.5.1.1 將金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌接種至10ml的無菌營養(yǎng)肉湯中在3035c下培養(yǎng)1824小時,將白色念珠菌接種至良馬丁流體培養(yǎng)基中,2328c下培養(yǎng)2448小時.3.5.1.2 將黑曲霉接種至改進馬丁瓊脂培養(yǎng)基中,在 2328c下培養(yǎng)57天小時.3.5.1.3 將上述培養(yǎng)物用0.9%的無菌氯化鈉溶液制成每1ml含

9、菌落數(shù)為50100cfu的 菌懸液.3.5.2. 用不同類別的微生物考察供試液及檢驗程序的抑菌性,將試驗分為4組3.5.2.1 樣品試驗組：A準(zhǔn)確取供試品10g,加至含20ml無菌十四烷酸異丙酯和無菌玻璃珠適宜容器中,必要時可增加十四烷酸異丙酯的用量,充分振搖,使供試品溶解.B然后參加45 c的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液100ml,振搖510分鐘,萃取,靜置使油水明顯分層,取其水層作為 1: 10的供試液.C用移液管準(zhǔn)確吸取1.0ml供試液至平皿中；并在每個平皿中接種50100cfu試驗 菌,立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,每個試驗菌平行接種 2個平皿,根據(jù)平皿法測定 其菌數(shù).3.5.2.2

10、菌液組：按中國藥典附錄“無菌檢查法中“靈敏度檢查項下的菌液制備A在平皿中注入1ml的菌液立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,以測定所加的菌數(shù).B供試品對照組 取規(guī)定量的供試液,按菌落計數(shù)方法測定供試品的本底菌數(shù).C稀釋劑對照組取相應(yīng)稀釋液1ml參加試驗菌,使最終菌濃度為每 ml供試液含 50100cfu試驗菌,按試驗組的供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌落數(shù).D對于同一份培養(yǎng)物,采用相同的測定方法,不同的試驗人員的測定結(jié)果可能有很大 的誤差.所以在操作過程中,應(yīng)特別注意能造成誤差的各個環(huán)節(jié).E當(dāng)采用固體培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物制備菌懸液時,應(yīng)盡量使菌苔成單個菌體分散于稀釋液中.F為保證每次菌數(shù)測定能在預(yù)計的范圍

11、內(nèi),在對菌液做10倍系列稀釋時,要求稀釋每個濃度的菌液均應(yīng)換滅菌吸管.G液體培養(yǎng)物直接稀釋法較比濁法造成誤差小,根本保證每次菌數(shù)能限制在要求的范 圍內(nèi).I最終制得的菌懸液應(yīng)為小于100CFU/ml.J金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；生抱梭菌采 用血瓊脂培養(yǎng)基；白色念珠菌、黑曲霉采用改進馬丁瓊脂培養(yǎng)基.3.5.3. 培養(yǎng)將金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌在3050c下培養(yǎng)48小時將白色念珠菌、黑曲霉在2328 c下培養(yǎng)72小時,點計菌落數(shù).并將結(jié)果記錄于附件 1.3.5.4. 試驗結(jié)果3.5.4.1 稀釋劑對照組菌的回收率接入菌種0.9 %氯化鈉注射液批號菌落計數(shù)cfu

12、/皿回收率稀釋劑對照組菌液組金黃色葡錮球平均值銅綠假單胞菌平均值枯草芽抱桿菌平均值白色念珠菌平均值生抱梭困平均值黑曲霉平均值表中：回收率=稀釋劑對照組的平均菌落數(shù)+菌液組的平均菌落數(shù)X100%3.5.4.2 試驗組的菌的回收率接入菌種0.9 %氯化鈉注射液菌落計數(shù)cfu/皿回收率批號試驗組供試品對照組金黃色葡錮球平均值銅綠假單胞菌平均值枯草芽抱桿菌平均值白色念珠菌平均值生抱梭困平均值黑曲霉平均值表中：回收率=(試驗組的平均菌落數(shù)一供試品對照組的平均菌落數(shù)的值)+菌液組的平均菌落數(shù)X 100% 04 .驗證結(jié)果評價分析4.1. 對驗證結(jié)果的評審應(yīng)包括：(1)驗證試驗是否有遺漏?(2) 驗證實施過

13、程中對驗證方案有無修改？修改原因、 依據(jù)以及是否經(jīng)過批準(zhǔn)? (3)驗證記錄是否完整？(4) 驗證試驗結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求？偏差及對偏差的說明合理？是否需進一 步補充試驗？4.5.結(jié)果判斷：？4.5.1.供試品按無菌檢查法進行檢查,如含供試品各容器中的試驗菌均生長良好,結(jié)果 判斷驗證無效,并重新進行方法驗證.4.5.2如含供試品的任一容器中微生物生長微弱、緩慢或不生長,可采用增加沖洗量, 增加培養(yǎng)基用量,使用中和劑或滅菌劑；更換濾膜品種等方法,并重新進行方法驗 證.5 .附件附件1產(chǎn)品試驗組的微生物生長檢查記錄：菌種名稱產(chǎn)品試驗組計數(shù)結(jié)果(cfu/皿)平均值金黃色葡錮球菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌

14、白色念珠菌生抱梭困黑曲霉供試品對照組的微生物生長檢查記錄菌種名稱供試品對照組計數(shù)結(jié)果(cfu/皿)平均值金黃色葡錮球菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌生抱梭困黑曲霉稀釋劑照組的微生物生長檢查記錄菌種名稱陽性對照計數(shù)結(jié)果cfu/皿平均值金黃色葡錮球菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌生抱梭困黑曲霉菌液組菌種名稱陽性對照計數(shù)結(jié)果cfu/皿平均值金黃色葡穩(wěn)球菌1銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌生抱梭困黑曲霉復(fù)核人/復(fù)核日期:測試人/測試日期:附件2安徽捷眾生物化學(xué)質(zhì)量限制檢測儀器設(shè)備 驗證結(jié)果評價表驗證名稱無菌檢查方法溥膜過濾法編號VF-PR-17-A驗證方案驗證結(jié)果評價及建議確認(rèn)驗證小組：年月日附件3安徽捷眾生物化學(xué)質(zhì)量限制檢測儀器設(shè)備驗證報告年 月 日至 年 月 日,驗證小組根據(jù)批準(zhǔn)的編號為“VF-PR-17-A 的無菌檢查方法薄膜過濾法驗證文件對無菌檢 查方法薄膜過濾法檢查法進行了相關(guān)的一系列驗證工作,到達了預(yù)期效