中藥防治硫酸鎳致肝腎損傷的實驗研究

1、中藥防治硫酸鎳致肝腎損傷的實驗研究    文獻報道，硫酸鎳直接損傷肝腎組織，并使天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)等酶活力增加15。本實驗觀察了扶正解毒湯(FJD)對硫酸鎳致肝腎損傷的防治作用，現(xiàn)報告如下。        1材料與方法    1.1材料FJD由紅芪、當歸、丹參、連翹、莪術(shù)等組成。按比例配方，制成水煎劑，過濾，濃縮成含生藥4 g/mL的溶液，高溫高壓消毒滅菌，密封，4以下儲存?zhèn)溆?。硫酸鎳NiSO4為分析純，西

2、安化學試劑廠，批號：920014。AST，ALT，AKP及BUN試劑盒：均由南京建成生物工程研究所提供，批號：980112。754型紫外分光光度計，上海第三分析儀器廠。Wistar大鼠70只，雌雄各半，體重(180±20)g，由蘭州醫(yī)學院實驗動物中心提供。    1.2方法動物稱重后隨機分為7組，雌雄分籠飼養(yǎng)，自由攝取飼料及飲水。    生理鹽水(NS)組：與各防治組平行予以NS腹腔注射及灌胃，并同時處死，作為空白對照。NiSO4組：腹腔注射NiSO42.5 mg·kg-1.d-1，連續(xù)7 d，

3、以后隔日注射1次，直至處死；以生理鹽水0.5 mL/只灌胃，1次/d，作為實驗對照組。治療大、中、小劑量組(FJZ大、FJZ中、FJZ小)：染毒與NiSO4組相同，染毒第2周起分別以FJD20、10、5 g·kg-1.d-1灌胃治療，1次/d。預(yù)防大、小劑量組(FJY大、FJY小)：分別以FJD 20、10g·kg+-1·d-1灌胃，1次/d。7 d后腹腔注射NiSO4，方法同NiSO4組。各組灌胃第4周末，摘除眼球采血，測定血清AST、ALT、AKP活力及BUN含量。斷頭處死，迅速摘取肝腎組織，以體積分數(shù)為10%的甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡檢查

4、。    2結(jié)果    2.1NiSO4對大鼠肝腎功能的影響從表1可見，NiSO4組血清AST、ALT、AKP活力及BUN含量比NS組明顯升高(P0.001)。    2.2FJD對NiSO4致大鼠肝腎功能損傷的防治作用從表1可見，F(xiàn)JD防治4周后，各組AST、ALT、AKP活力及BUN含量較NiSO4組均明顯降低(P0.010.001)，F(xiàn)JZ大、FJY大組與NS組差異已無顯著性(P0.05)。    2.3肝臟病理學檢查結(jié)果NiSO

5、4組間質(zhì)充血較重，肝竇內(nèi)皮細胞核濃縮，部分細胞核核膜著色不良，趨向于核溶解消失，部分肝細胞胞漿中出現(xiàn)嗜堿性物質(zhì)，匯管區(qū)炎性細胞浸潤。NS及FJY大組未見明顯異常改變。FJY小組肝竇內(nèi)皮細胞輕度腫脹，部分肝細胞胞漿中出現(xiàn)嗜堿性物質(zhì)。FJD治療各組較NiSO4組間質(zhì)充血明顯減輕，炎性細胞浸潤減少，仍可見肝竇內(nèi)皮細胞核濃縮，肝細胞胞漿中有嗜堿性物質(zhì)。說明預(yù)防組療效優(yōu)于治療組。    表1扶正解毒湯對NiSO4致大鼠肝腎功異常的防治作用(±s)         &

6、#160;      組別    劑量        (g/kg)    動物數(shù)    AST        (kat/L)    ALT       

7、; (kat/L)    AKP        (kat/L)    BUN        (mmoL/L)        NS    (0.5ml/L)    10  

8、  0.644 3±0.071 6    0.584 5±0.082 7    5.094 2±1.143 4    51.82±8.74        NiSO4    0.002 5    10    1.086 0

9、±0.088 9    1.746 4±0.193 9    8.749 2±0.550 4    221.14±24.06        治療組    20    10    0.693 3±0.110 7  

10、;  0.658 8±0.133 9    6.390 9±0.851 0    57.73±5.80            10    10    0.693 3±0.087 0    0.938 8±0.1

11、15 1    6.466 0±0.839 2    66.52±13.39            5    10    0.910 6±0.087 3    1.261 0±0.148 4    7

12、.828 3±0.767 0    104.06±10.87        預(yù)防組    20    10    0.638 9±0.077 9    0.654 8±0.129 7    7.506 4±0.808 4 

13、;   52.94±12.91            10    10    0.696 0±0.042 3    0.870 2±0.115 4    7.596 3±1.126 8    63.13

14、7;14.43    與NiSO4組比較，P0.01，*P0.0012.4腎臟病理學檢查結(jié)果NiSO4組腎間質(zhì)嚴重淤血，腎小管上皮細胞顆粒變性，部分水腫壞死，脫落于管腔內(nèi)，部分近曲小管上皮細胞內(nèi)充滿嗜堿性均質(zhì)狀物，集合管內(nèi)有散在的蛋白管型。預(yù)防組僅見腎小管上皮細胞輕度顆粒變性。治療組輕度腎間質(zhì)淤血，腎小管輕度顆粒變性，病變程度依小、中、大劑量依次減輕。    3討論    本實驗結(jié)果表明，NiSO4可損傷大鼠肝腎功能，并引起肝腎組織的病理性改變。鎳致肝腎損傷的機制為：(1)N

15、i+2+導(dǎo)致細胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)失調(diào)，引起肝腎細胞損傷1，2。鈣穩(wěn)態(tài)的維持主要依賴于鈣調(diào)節(jié)系統(tǒng)，包括CaM,Na+-K+-ATP酶和Ca+2+-ATP酶，以及鈣庫的調(diào)節(jié)作用6，7。Cheung及Chao等認為，Ni+2+能替代Ca+2+與CaM相互作用，高濃度的Ni+2+可抑制CaM及其依賴酶活力，導(dǎo)致細胞內(nèi)鈣超載，引起細胞損傷或死亡。實驗證實2，NiSO4可抑制Na+-K+-ATP酶和Ca+2+-ATP酶活力，導(dǎo)致鈣調(diào)節(jié)系統(tǒng)功能障礙。(2)肝腎組織中微量元素的分布失調(diào)。我們的實驗證實，NiSO4染毒后，肝腎中的Ni+2+含量明顯升高，而Zn+2+、Mg+2+、Fe+2+、Mn+2+等含量明顯下降。高

16、濃度的Ni+2+可直接損傷肝腎組織3。Zn2+、Mg2+、Mn2+等是多種酶的重要組成成分和致活因子8，9，其缺乏可影響相關(guān)酶的活力而致組織損傷。(3)Ni2+導(dǎo)致細胞脂質(zhì)過氧化作用增強，引起細胞損傷3。鎳能直接通過Haber|Weiss反應(yīng)催化羥基自由基的生成，后者可攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，形成脂質(zhì)過氧化物及新的自由基，從而引起一系列的細胞損傷。同時，鎳還能引起細胞抗氧化系統(tǒng)功能降低，加重鎳對細胞的損傷作用。    本實驗結(jié)果揭示，F(xiàn)JD能有效防治NiSO4對肝腎的損傷作用，使AST、ALT、AKP及BUN等肝腎功能指標明顯改

17、善，肝腎病理改變減輕。我們認為FJD防治NiSO4致肝腎損傷的機制如下：(1)調(diào)節(jié)肝腎組織中微量元素的含量。FJD中富含Zn2、Mg2+、Fe2+、Mn2+，而Ni2+含量甚微。FJD防治后，肝腎組織中的Ni2+含量下降，減輕了鎳的直接毒性作用；其他元素基本恢復(fù)正常，從而使與其相關(guān)酶的活力恢復(fù)。(2)FJD能緩解Ni2+對鈣穩(wěn)態(tài)的影響。我們的實驗已證實，F(xiàn)JD能使肝線粒體Ca2+-ATP酶，肝勻漿中CaM及腎小管細胞膜Na+-K-ATP酶及Ca2+-ATP酶的活力得到恢復(fù)，從而使鈣調(diào)節(jié)系統(tǒng)的功能恢復(fù)。(3)FJD可減弱Ni2+導(dǎo)致的脂質(zhì)過氧化增強作用，提高機體清除自由基及抗氧化的能力。我們的實

18、驗已證實，F(xiàn)JD能使NiSO4導(dǎo)致上升的血清MDA含量恢復(fù)正常，使SOD活性及GSH含量升高。說明FJD具有對抗Ni2+導(dǎo)致的脂質(zhì)過氧化作用，增強機體清除自由基及抗氧化的能力，從而減輕自由基對細胞膜的攻擊及氧化損傷作用。    參考文獻    1文允鎰，張志明，胡蓓，等.鈣與鈣調(diào)素.北京：化學工業(yè)出版社，1989.106-108.    2朱玉真，李鋒.硫酸鎳對鈉泵鈣泵活性的影響.中國公共衛(wèi)生學報.1996，15：347-348.    3朱玉真，李鋒.鎳致大鼠肝損傷與脂質(zhì)過氧化關(guān)系的研究.中國公共衛(wèi)生學報，1997，16：112-114.    4程婉珍.鎳的生物學作用及毒性(綜述).石家莊醫(yī)學?？茖W校學報，1989，3：32-35.    5顧祖維，王NFDA3蘭.勞動衛(wèi)生學進展.北京：人民衛(wèi)生出版社，1987，32-33.