常用pH緩沖溶液的配制和pH值

1、一）溶液配制注意事項(xiàng)1.藥品要有較好的質(zhì)量試劑分為優(yōu)級(jí)純（保證試劑, Guaranteed reagent,G. R.）、分析試劑（An talytical reage nt,A. R.）化學(xué)純（Chemical pure,C. P.）和實(shí)驗(yàn)試劑（Laboratory reage nt, L. R.）等等。工業(yè)用的化學(xué) 試劑,雜質(zhì)較多,只在個(gè)別情況下應(yīng)用,如配洗液用的硫酸、配干燥劑的氯化 鈣等。2. 藥品稱量要精確。3. 配制試劑用水應(yīng)用新鮮的去離子水或雙蒸餾水,比電阻值在 50 萬(wàn)歐姆 以上, pH 在5.57.0 之間才可應(yīng)用,在組織培養(yǎng)等特殊用途時(shí)應(yīng)注意此項(xiàng)要求,配制一般化 驗(yàn)用溶液只要

2、求用雙蒸餾水或去離子水。4.配好后的溶液，應(yīng)立即除菌處理（如高壓滅菌、抽濾或加抑菌物 質(zhì)）,以防雜菌生長(zhǎng)。0.067（） Mol/L 磷酸緩沖液1. 磷酸二氫鉀溶液的配制：稱取磷酸二氫鉀（ KH2PO4,A. R.）9.08g,用蒸餾水溶解后，傾入1 000ml容量瓶?jī)?nèi)，再稀釋至刻度（1000ml）。2.1 /15M0I/L磷酸二氫鈉溶液的配制:稱取無(wú)水磷酸氫二鈉（ Na2HPO4，A.R.)9.47g (或者 Na2HPO42H2O11.87g ）用蒸餾水溶解后，放入1 000ml容量瓶?jī)?nèi)，再加蒸餾水稀釋至刻度1 000ml）。3按附表的比例，配制成不同 pH 值的緩沖溶液。附表 1 磷酸鹽

3、緩沖液配制法（單位：毫升）5.88.092.07.166.690.17.272.028.06.034 / 2912.287.87.376.884.77.380.881.47.522.477.67.687.013.06.426.773.37.789.410.66.531.868.27.837.562.57.943.556.58.849.64.26.955.444.68.297.03.07.098.02.00.

4、15Mol/L PB 液附表 20.15Mol/LPB 液配制法pH0.15Mol/L Na2HPO4（ ml）0.15Mol/L NaH2PO4（ ml）6.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.0Na2 HPO 42H2O 分子量=175.050.15Mol/L 溶液含26.7g/L。Na2 HPO 412H2O 分子量=358.220.15Mol/L 溶液含53.7g/L。NaH2PO4H2O 分子量二138.000.15Mol/L 溶液含20.7g/L。NaH2 PO 42H2

5、O 分子量二156.030.15Mol/L 溶液含23.4g/L。四）0.2Mol/L PB 緩沖液附表 30.2mol/L PB 緩沖液配制法pH0.2 Mol/L Na2HPO4（ml）0.2Mol/L NaH2PO4（ml）5.88.092.06.012.381.56.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.07.8Mol/LNa2 HPO 42H2O 溶液35.61g/LNa2 HPO 412H2O 溶液含71.64g

6、/L0.2Mol/LNaH2 PO4 H2O 溶液含27.60g/LNaH2 PO 42H2O 溶液含31.21g/L欲配0.1Mol/L PB緩沖液則在0.2MoI/L PB緩沖液的基礎(chǔ)上加H2O稀釋1倍即可。欲配制PBS液時(shí)，則在 溶液中加0.85%的NaCI溶液即可。五）無(wú)鈣鎂離子磷酸緩沖鹽水（ PBS）（0.15Mol/L PH7.2)NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO41.15g（如為Na2HPO412H2O，貝卩為2.89g）KH2PO40.2g將上述試劑依次溶于1 000ml去離子水中，完全溶解后，115C高壓滅菌 10min15min，存在4C冰箱中備用。此液可用于配制

7、和稀釋細(xì)胞分散劑以及洗 滌細(xì)胞培養(yǎng)物。（六）硼酸鹽緩沖液（Borate saline buffer）文章來(lái)自:醫(yī)藥園 （http:zfg1 .硼酸（H 3BO3）0.2Mol/L 硼酸:硼酸12.37g 加水至 1 000ml。2硼砂（ Na2B4O7）0.05Mol/L 硼砂:硼砂19.07g 加水至 1 000ml。附表4不同pH的0.2Mol/L 硼酸緩沖液配制法pH0.05Mol/L 硼砂（ ml）0.2Mol/L 硼酸（ ml）pH0.05Mol/L 硼砂（ ml）0.2Mol/L 硼酸（ ml）7.41.09.07.82.08.

8、08.76.04.08.03.07.09.08.02.0七）巴比妥緩沖液1pH8.2 離子強(qiáng)度0.05Mol/L 巴比妥緩沖液巴比妥鈉47.6g蒸餾水3 000ml1.17NHCl55.0ml（1.17 N HCI=193ml濃 HCI 加 1 807ml 蒸餾水）將4.76g巴比妥鈉溶于3 000ml蒸餾水。加1.17 N HCl 55ml。用HCI調(diào)節(jié)pH到8.2，并加蒸餾水至 4 265ml。2pH8.40.06Mol/L 巴比妥緩沖液巴比妥1.84g巴比妥鈉10.30g加蒸餾水至 1000.00ml3pH8.60.06Mol/L 巴比妥緩沖液巴比妥1.66g巴比妥鈉12.76g加蒸餾水

9、 1000.00ml八）0.2Mol/L 醋酸鹽緩沖液見(jiàn)表附表 5附表 50.2Mol/L 醋酸鹽緩沖液配制法pH0.2Mol/LTris（ml）0.1Mol/LHCl（ml）pH0.2Mol/LTris（ml）0.1Mol/LHCl（ml）9.108.95 25 58.067.90 2527.58.928.76 257.57.967.82 2530.08.758.60 2510.57.877.73 2532.58.628.48 2512.57.777.63 2535.08.508.37 2515.57.667.52 2537.58.408.27 2517.57.547.40 2540.08.

10、328.18 2520.07.367.22 2542.5九）三羥甲基甲烷 鹽酸緩沖液（ TrisHCl 緩沖液）不同 pH，0.05Mol/L25ml0.2MOI/L三羥甲基氨基甲烷加 X ml0.1NHCI,加水稀釋至100ml （見(jiàn)下表）附表6 TrisHCI緩沖液配制法pH0.2MoI/LTris(mI)0.1NHCIpH(mI)0.2MoI/LTris(mI)0.1NHCI(mI)9.108.96 25 58.057.90 2527.58.928.78 257.57.967.82 2530.08.748.60 2510.07.877.73 2532.58.628.48 2512.57.

11、777.63 2535.08.508.37 2515.07.667.52 2537.58.408.27 2517.57.547.40 2540.08.328.18 2520.07.367.22 250 255 2545.08.148.00 252525.0三羥甲基氨基甲烷（ Tris）分子量 =121.140.2Mol/L 三羥甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至 1 000ml。0.1NHCl：取 HCl8.6ml，加水至 1 000ml。十）0.5Mol/L pH9.5 碳酸鹽緩沖液NaHCO33.70gNa2CO30.60g溶于600.0

12、0ml 蒸餾水中即得。不用時(shí)塞緊瓶塞，以免吸收空氣中二氧化碳使 PH 下降。最好小量配制。十一）甘油磷酸緩沖液1 配制 pH8.0磷酸緩沖液0.1Mol/L Na2HPO494.50ml0.1N NaH2PO45.50ml混合即可29份甘油與 1 份 pH8.0 磷酸緩沖液混合，即為甘油磷酸緩沖液。用途：用于免疫熒光試驗(yàn)。（十二）Ha nkS1貯存液NaCl80.00gKCl4.00gNa2 HPO 412H2O1.52gKH2PO40.60g葡萄糖4.00g0.4酚紅液50.00ml雙餾水加至100.00ml115C高壓滅菌15min，冰凍保存。2工作液貯存液 1 份雙餾水 9 份115C高

13、壓滅菌15min。臨用時(shí)用滅菌的5.6% NaHC03液調(diào)pH值至7.2 左右（溶液呈橙紅色）。十三）萘（鈉）氏試劑（ Nessler sreag）ent配方 1 ：氯化汞6.0g碘化鉀12.4g30ml20% NaOH加蒸餾水至 100ml配方 2：碘化汞11.5g碘化鉀 8g蒸餾水 50ml完全溶解后）過(guò)濾，加 20NaOH 50ml。用途：檢測(cè)溶液中氨離子。（十四）阿氏（Alsever 液葡萄糖2.05g檸檬酸鈉0.80g氯化鈉0.42g蒸餾水 100ml溶解后，以 10%檸檬酸調(diào)節(jié) pH 至6.1,過(guò)濾，分裝，10磅10min滅菌，4C保存。（十五）青、鏈霉素混合液（簡(jiǎn)稱 S. P.液

14、或雙抗液）青霉素（ 40 萬(wàn) U） 5 支鏈霉素（200萬(wàn)a g 1支分別溶于100ml滅菌無(wú)離子水中或共同溶于 200ml滅菌無(wú)離子水中，混合 后分裝小瓶，置-10C -20C冰箱保存?zhèn)溆茫?萬(wàn)單位a g/m）。臨用時(shí),按 1%的量加入營(yíng)養(yǎng)液或其他溶液中,最后濃度是青霉素 100U/ml，鏈霉素 100ug/ml。十六）洗液（清潔液）配方 1：重鉻酸鉀 150g蒸餾水 300ml濃硫酸 3 000ml將重鉻酸鉀加入蒸餾水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩堝中加 熱溶解，然后慢慢加入濃硫酸，邊加邊攪拌，見(jiàn)發(fā)熱過(guò)劇則稍停，冷卻后再繼 續(xù)加。此為強(qiáng)洗液。盛清潔液的容器要堅(jiān)固，上加厚玻璃蓋，操作

15、時(shí)要穿橡皮圍裙、長(zhǎng)統(tǒng)膠 靴、戴上眼鏡和厚膠皮手套，以保安全。洗液一旦變綠，表示鉻酸已經(jīng)還原，失去了氧化能力，不宜再用。如將這樣洗液加熱，再加適量重鉻酸鉀，又可重新使用。配方 2：濃硫酸 50%蒸餾水 50%重鉻酸鉀 5%此為中等強(qiáng)度洗液。配方 3：重鉻酸鉀 100g蒸餾水 1 000ml加熱溶解，冷卻后緩慢加入工業(yè)硫酸 100ml此液為弱洗液，為棕紅色。使用此液時(shí)，必須預(yù)先用熱肥皂水將玻璃器皿洗凈，經(jīng)自來(lái)水沖洗，瀝干然后才能浸入，否則該洗液很快失效緩沖溶液（英文：buffer solution ）是一種能在加入少量酸或堿和水時(shí)大大減低 pH 變動(dòng)的溶 液。pH緩沖系統(tǒng)對(duì)維持生物的正常pH值和正

16、常生理環(huán)境起到重要作用。多數(shù)細(xì)胞僅能在很窄的 pH 范圍內(nèi)進(jìn)行活動(dòng)，而且需要有緩沖體系來(lái)抵抗在代謝過(guò)程 中出現(xiàn)的 pH 變化。在生物體中有三種主要的 pH 緩沖體系，它們是蛋白質(zhì)緩沖系統(tǒng)、重碳酸鹽 緩沖系統(tǒng)以及磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。每種緩沖體系所占的分量在各類細(xì)胞和器官中 是不同的。在生化研究工作中，常常需要使用緩沖溶液來(lái)維持實(shí)驗(yàn)體系的酸堿度。研 究工作的溶液體系 pH 值的變化往往直接影響到研究工作的成效。如果 “提取酶” 實(shí)驗(yàn)體系的 pH 值變動(dòng)或大幅度變動(dòng)，酶活性就會(huì)下降甚至完全喪失。所以配制 緩沖溶液是一個(gè)不可或缺的關(guān)鍵步驟。編輯本段常用作緩沖溶液常用作緩沖溶液的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成

17、的溶液具有緩沖作用。 生化實(shí)驗(yàn)室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、 Tris （三羥甲基氨基甲烷）等系統(tǒng)，生化實(shí)驗(yàn)或研究工作中要慎重地選擇緩沖體 系，因?yàn)橛袝r(shí)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素并不是緩沖液的 pH 值，而是緩沖液中的某種 離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需 要的化學(xué)反應(yīng)。硼酸鹽：硼酸鹽與許多化合物形成復(fù)鹽、如蔗糖。檸檬酸鹽：檸檬酸鹽離子容易與鈣結(jié)合，所以存在有鈣離子的情況下不能使用。磷酸鹽：在有些實(shí)驗(yàn)，它是酶的抑止劑或甚至是一個(gè)代謝物，重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉淀出來(lái)。而且它在 pH7.5 以上時(shí)緩沖能力很小。三羥甲基氨基甲烷：它可以

18、和重金屬一起作用,但在有些系統(tǒng)中也起抑制作用。其主要缺點(diǎn)時(shí)溫度效應(yīng)。這點(diǎn)往往被忽視,在室溫 pH 是7.8的Tris緩沖液，4C時(shí)是8.4, 37C 時(shí)是7.4,因此，4C配制的緩沖液在37C進(jìn)行測(cè)量時(shí)，其氫離子濃度就增加了10 倍。在 pH7.5 以下，其緩沖能力極為不理想。 編輯本段 緩沖溶液組成緩沖體系由、弱酸和它的鹽（如 HAc-NaAc）2、弱堿和它的鹽（ NH3.H2O-NH4C)l3、多元弱酸的酸式鹽及其對(duì)應(yīng)的次級(jí)鹽（如NaH2PO4-Na2HPO）的水溶液組成。編輯本段決定緩沖液 pH 值的因素設(shè)緩沖系統(tǒng)的弱酸的電離常數(shù)為 K （平衡常數(shù)），平衡時(shí)弱酸的濃度為酸,弱酸鹽的濃度為 鹽,則由弱酸的電離平衡式可得下式：H+ = Ka 弱酸/共軛堿pH = pKa + log 共 軛堿/弱酸這就是 Henderson-Hasselbach等式。如果弱酸 = 共軛堿，pH =pKa根據(jù)此式可得出下列幾點(diǎn)結(jié)論：1 緩沖液的 pH 值與該酸的電離平衡常數(shù)