慢性排斥反應移植體動脈硬化與增殖細胞核抗原表達

1、慢性排斥反應移植體動脈硬化與增殖細胞核抗原表達【摘要】目的探討慢性排斥反應移植動脈硬化與增殖細胞核抗原(PCNA)表達的關系。方法采用免疫組化SP法研究61只大鼠的移植動脈，10例慢性排斥反應移植腎動脈組織中的PCNA表達。結(jié)果實驗組：在大鼠移植動脈中層PCNA術后7天達最高峰，內(nèi)膜層術后20天達最高峰，且細胞數(shù)明顯增多，兩者呈正相關。臨床組：移植腎動脈PCNA表達主要集中在內(nèi)膜，其次為中層，外膜極少。結(jié)論移植動脈硬化過程中細胞增殖與PCNA表達關系密切。慢性排斥的移植腎動脈PCNA呈高表達。且與術后早期急性排斥反應的發(fā)生頻率及程度密切相關?！娟P鍵詞】移植物排斥動脈硬化動物，實驗 Expres

2、sion of PCNA in the transplant arteriosclerosis of chronic rejectionLI Qiansheng,QIAO Zhuoyi,FANG Yuhuan,et al.(Renal Transplantation Center,Daping Hospital,the Third Military Medical University,Chongqing 400042,China)【Abstract】ObjectiveTo investigated the relationship between the expression of PCNA

3、 and transplant arteriosclerosis of chronic rejection.MethodsThe expression of PCNA in the allograft arteriosclerosis of 61 rats and the transplant renal artery in 10 patients of chronic rejection were studied with immunohistochemistry SP method.ResultsIn the experiment group,the expression of PCNA

4、in the media of transplant aorta showed a peak at 7 days postoperative,the intimal PCNA showed a peak at 20 days and the cell numbers increased.The expression of PCNA and the cell numbers showed a positive correlation.In the clinical group,the expression of PCNA was mainly found in the intimal membr

5、ane of transplant renal artery,the next was in the media,where as the exomembrane showed a few.ConclusionsThere was a close relationship between the increase of expression of PCNA and the cell proliferation.The expression of PCNA in the transplant artery of chronic rejection increased.It had signifi

6、cant relationship with the frequency or the degree of acute rejection.【Key words】Graft rejectionArteriosclerosisAnimals,laboratery移植體動脈硬化是慢性排斥反應的主要病理學特征之一。目前，在移植動脈硬化過程中細胞增殖進程與原癌基因的表達尚缺乏了解。為明確血管細胞增殖DNA復制與增殖細胞核抗原(PCNA)表達的相互關系，我們在建立標準慢性排斥反應動物模型基礎上，對移植體動脈硬化與PCNA表達作了實驗與臨床觀察。動物實驗時相點(術后，天)內(nèi)膜中層3051157063461

7、4259272220732412103036217560970 與同組前一時相點比較，差別有顯著性意義，P0.05臨床研究一、研究對象收集10例同種腎移植術后19年移植腎失功病理診斷為慢性排斥反應并行腎切除的移植腎標本。男8例，女2例。年齡2355歲。腎移植術后3個月內(nèi)發(fā)生急性排斥反應1次3例，2次4例，3次1例，不詳2例。5例正常腎組織為對照組。二、材料與方法與實驗組相同，即取移植腎動脈12級分支，采用SP法行PCNA免疫組化檢測。三、結(jié)果1.PCNA表達形式：在光鏡下顯示移植腎動脈硬化血管中PCNA陽性細胞染色呈棕黃色顆粒，呈彌散狀或混合狀分布，不規(guī)律地表達于胞漿、胞核及胞膜，胞漿內(nèi)以混合

8、型多見，核內(nèi)分布以彌散狀顆粒為主。血管壁各層均可見大量炎性細胞，其中以內(nèi)膜占相當大的比例，包括單核、巨噬細胞及T細胞。對照組未見PCNA陽性細胞。2.PCNA表達部位及其陽性率：血管壁內(nèi)膜、中層及外膜PCNA陽性表達率分別為90%、50%及10%。表明排斥反應時血管PCNA表達主要集中在內(nèi)膜，其次為中層，外膜極少，差別有顯著性意義，P0.05。3.PCNA表達強度與急性排斥發(fā)生頻率關系：腎移植術后發(fā)生急性排斥1次3例，血管內(nèi)皮細胞PCNA陽性表達率為31%，2次4例，陽性細胞表達率63%，3次1例，陽性細胞表達率80%。即急性排斥發(fā)生頻率越高，PCNA陽性細胞表達率越明顯，P0.05。討論一、

9、PCNA來源、表達形式及部位PCNA作為評價細胞增殖狀態(tài)的一個重要指標，近年來已廣泛開展。本實驗在異系移植動脈硬化研究中發(fā)現(xiàn)，PCNA在血管的內(nèi)、中、外層均有不同程度的表達，且主要集中在內(nèi)膜及中層，染色呈棕黃色顆粒，彌散狀或混合狀分布，不規(guī)律地表達于胞漿、胞核及胞膜。胞漿內(nèi)以混合型顆粒為主，核內(nèi)以彌散狀顆粒為主。外膜有大量炎性細胞浸潤，PCNA有不均勻少量的表達。因外膜中不存在平滑肌細胞增生，故推測PCNA來源于內(nèi)皮細胞、單核及巨噬細胞1。二、PCNA表達與動脈硬化的關系本實驗發(fā)現(xiàn)移植后14天，內(nèi)膜出現(xiàn)增生層，內(nèi)膜細胞PCNA陽性表達率為25%9%，術后20天達最高峰為73%24%，且伴隨平滑

10、肌細胞由中層向內(nèi)膜遷移以及遷移后細胞增生。此后PCNA表達陽性率逐漸下降。而在血管中層術后7天PCNA陽性率達最高峰63%24%。以后逐漸下降，反映出術后2周出現(xiàn)的“中層壞死”現(xiàn)象。由此推測，中層PCNA陽性表達多為平滑肌細胞。有人認為，移植動脈中層壞死與內(nèi)膜增生其主要因素與中層平滑肌細胞向內(nèi)膜遷移有關2。某些細胞因子如IGF-1，PDGF及TGF-b，或白介素及炎癥脂質(zhì)介質(zhì)等可促進平滑肌細胞的遷移3。本組10例移植腎慢性排斥的動脈硬化標本中可見血管各層均有炎性細胞浸潤。如單核、巨噬細胞及T細胞，尤以內(nèi)膜更為顯著。PCNA表達也主要集中在內(nèi)膜，其次為中層。雖然由于人類腎移植術后免疫抑制劑的應用

11、，中層壞死炎性細胞浸潤程度、PCNA表達程度均較動物實驗低，但炎性細胞的浸潤與內(nèi)膜PCNA表達及細胞增生導致動脈硬化的關系密切。三、PCNA高表達與急性排斥之間的關系腎移植術后急性排斥發(fā)生頻率及強度是導致慢性排斥的主要危險因素4。在移植動脈硬化的過程中，當給予免疫抑制劑抑制急性排斥的發(fā)生，內(nèi)膜增生可明顯受到抑制。Almond等5報告術后早期使用MMF，內(nèi)膜增生較對照組低76.3%。本組急性排斥8例移植腎動脈標本中發(fā)現(xiàn)，急性排斥發(fā)生的頻率越高，內(nèi)膜增生越顯著。增生形式有半月狀或同心圓狀，嚴重者管腔完全閉塞。因此，我們認為，腎移植術后急性排斥是導致移植腎動脈硬化的重要因素。一旦發(fā)生，其改變不可逆轉(zhuǎn)

12、。四、PCNA表達的啟動因素與增生的關系1.炎性細胞的浸潤：炎性細胞通過不相容MHC抗原識別，釋放淋巴因子(IL-1等)，通過其免疫介導，使其產(chǎn)生PCGF，TGF-等生長因子，PCNA表達增強，DNA大量復制合成，出現(xiàn)細胞增生6。2.缺血與再灌注損傷：一般認為，在冷缺血時間較短的情況下，缺血/再灌注損傷對移植動脈硬化影響不大。相反，供體長時間缺血，或再灌注性損傷，均可導致氧自由基的活化降低。脂蛋白氧化7，刺激細胞及生長因子，促使內(nèi)膜增生及動脈硬化。3.感染：術后早期感染，血管外膜炎性細胞浸潤，可使內(nèi)膜增生程度加倍。而術后晚期的CMV感染可通過增強PDGF-BB及TGF- mRNA的表達，導致內(nèi)

13、膜增生8。我們認為，移植體動脈硬化過程中細胞增殖是多因素作用的結(jié)果，而PCNA的表達乃是細胞增殖的主要分子病理學基礎。因腎移植術后使用免疫抑制劑，使PCNA的表達強度較實驗動物弱。作者單位：李黔生(第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所泌尿外科洗腎移植中心重慶，400042)喬著意(第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所泌尿外科洗腎移植中心重慶，400042)方玉華(第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所泌尿外科洗腎移植中心重慶，400042)徐序廣(第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所泌尿外科洗腎移植中心重慶，400042)靳風爍(第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所泌尿外科洗腎移植中心重慶，400042)

14、朱方強(第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所泌尿外科洗腎移植中心重慶，400042)萬江華(第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所泌尿外科洗腎移植中心重慶，400042)姜慶(第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所泌尿外科洗腎移植中心重慶，400042)吳剛(第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所泌尿外科洗腎移植中心重慶，400042)靳文生(第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所泌尿外科洗腎移植中心重慶，400042)參考文獻1，Alprs CE,Davis CL,Barr D,et al.Identification of platelet-derived growth factor:a and b cha

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