分析實驗基本操作

1、分析實驗基本操作分析實驗基本操作分析實驗的基本過程u稱量u溶解u定容u過濾u稀釋u測定-容量分析（滴定）、重量分析、儀器分析（UV、HPLC、GC等）稱量v根據(jù)稱量準確度的要求選擇合適的天平。一般樣品（50mg以上）可用萬分之一天平（分度值為0.1mg）稱量。對照品等量少而準確度又要求高的樣品一般用十萬分之一天平（分度值為0.01mg），且稱量的量最好不要少于5mg。v電子天平使用前需預熱30分鐘?？梢栽跍蕚浞Q量前先去把天平打開，再準備稱量所需的物品：藥品、藥匙、容量瓶or錐形瓶 v稱量前，先檢查一下天平水平儀是否調平，調平后，不能移動天平，否則要重新調平。 v稱量時，要輕拿輕放，避免磕碰天平

2、托盤或其他部位影響天平的準確度。稱量v讀數(shù)時一定要關緊艙門，最好不要打開上蓋稱量和讀數(shù)。v避免藥粉撒落在天平托盤上或其他部位。（每個天平最好配一個小毛刷，以便刷去不小心撒落的藥粉。） 稱量溶解v以容量瓶為例，可先加少量溶劑（1/3 1/2），稍加振搖，觀察一下溶解情況，如果較易溶解，再加溶劑至滿刻度的3/4處，振搖使溶解，（注意沒定容注意沒定容之前不要塞上瓶塞反復顛倒振搖，之前不要塞上瓶塞反復顛倒振搖，這樣會使較濃的溶液附著在刻度線以上和瓶塞上，使定容后濃度不準確.）。如果溶質不易溶解，再加溶劑到至滿刻度的3/4處，超聲溶解，（注意超聲會使瓶內溶液溫注意超聲會使瓶內溶液溫度升高，超聲完成后一定

3、要放冷至室溫再定容度升高，超聲完成后一定要放冷至室溫再定容）。v也可將準確稱量好的固體溶質放在燒杯中，用少量溶劑溶解。然后把溶液沿玻璃棒轉移到容量瓶里。為保證溶質能全部轉移到容量瓶中，要用溶劑多次洗滌燒杯，并把洗滌溶液全部轉移到容量瓶里(見圖a)。 v向容量瓶內加入液體液面離標線1厘米左右時，應改用滴管小心滴加，最后使液體的彎月面與標線正好相切。v塞緊瓶塞，用倒轉和搖動的方法使瓶內的液體混合均勻(見圖b)。 定容v定容時不能手拿容量瓶瓶體，以防溫度升高（尤其尤其是有機溶劑是有機溶劑）影響溶液體積，應用左手的拇指和食指輕捏輕捏瓶頸（刻度線上部分刻度線上部分），提離桌面，（使瓶使瓶體自然懸垂體自然

4、懸垂），眼睛視線與刻度齊平，用滴管沿瓶口緩慢滴加溶劑至凹液面的最低點（實線實線）恰與刻度相切。（注意：觀察時不要把瓶子放在桌面上，彎腰或半蹲去看刻度是否平齊，因為一來很難保證視線與刻度同一水平面，二來桌子也不太可能完全水平。） 過濾v過濾時（無論是濾紙過濾或膜過濾），首先都要棄去初濾液棄去初濾液，一般要棄23次（以保證濾紙或濾膜的吸附達到飽和），棄去的同時先潤洗一下接濾液的容器（錐形瓶or液相的進樣瓶等），以防止容器壁的吸附。 稀釋v移液管與刻度吸管的選擇：如果取樣量為1、2、5、10ml這樣的整數(shù)體積，一般用校正過的移液管（大肚吸管）吸取，如果是其他體積（3、4、8ml等）也可用刻度吸管吸取

5、。v左手拿洗耳球，右手拿移液管，以右手拇指及中指拿住管頸標線上方v先吸取少量待量取的溶液蕩洗蕩洗2 2次次移液管，左手拿洗耳球輕輕將溶液吸上，眼睛注意正在上升的液面的位置，當管內液面上升至刻度標線以上時，迅速用右手食指堵住管口，取出移液管，用濾紙擦干移液管外壁用濾紙擦干移液管外壁，并使與地面垂直，稍微松開右手食指，使液面緩緩下降，此時視線應平視標線，直到彎月面與標線相切，立即緊按食指，使液體不再流出，再將移液管移入準備接受溶液的容器中，使管垂直管尖靠著容器使管垂直管尖靠著容器內壁，內壁，放開右手食指，讓管內溶液自然地全部沿器壁流下，再等待再等待15s15s后后，取出移液管，切勿把殘留在管尖的溶

6、液吹出。v使用同一移液管量取不同濃度溶液時要注意充分蕩洗，應先量取較稀的溶液，然后量取較濃的。在吸取第一份溶液時，高于標線的距離最好不超過1cm，然后再往下放至標線，這樣吸取第二份不同濃度的溶液時，可以吸得再高一些蕩洗內壁，以消除第一份的影響。注意事項v容量儀器最好校正后再使用（刻度吸管例外），以確保測量體積的準確性。v滴定管、容量瓶、移液管及刻度吸管均不可用毛刷或其他粗糙東西擦洗內壁，以免造成內壁劃痕，容量不準或損壞。v每次用畢應及時用自來水將內壁沖凈，瀝干后再用重鉻酸鉀洗液洗滌，用自來水沖洗干凈，再用蒸餾水沖內壁3次，外壁13次，倒掛，自然瀝干，不應在烘箱中烘烤。v做分析實驗的儀器在洗干凈

7、后一定要用蒸餾水蕩洗，這一點很重要也是最最基本的。測定v容量分析（滴定）v重量分析v儀器分析（UV、HPLC、GC等）紫外-可見分光光度法測定UV-注意事項v石英吸收池的配對：在吸收池中裝入同一溶劑，于規(guī)定波長測定各吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配對使用，否則必須加以校正。 UV-注意事項v取吸收池時，手指拿毛玻璃面的兩側。v裝樣品溶液的體積以池體積的4/5為度。v使用揮發(fā)性溶液時應加蓋。v先用濾紙吸干吸收池外壁液體，透光面再用擦鏡紙由上而下擦拭干凈。v吸收池放入樣品室時應注意每次放入方向相同。v使用后用溶劑及水沖洗干凈，晾干防塵保存。v吸收池如污染不易洗凈時可用硫酸-發(fā)煙硝酸

8、（3:1v/v）混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用重鉻酸鉀清潔液清洗時，吸收池不宜在清潔液中長時間浸泡，否則清潔液中的鉻酸鉀結晶會損壞吸收池的光學表面，并應充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面。 UV-注意事項v測定前應先檢查所用的溶劑在測定波長附近是否符合要求，可用1cm石英吸收池盛溶劑以空氣為空白（即參比光路中不放置任何物質）測定其吸光度，應符合下表規(guī)定，并不得在溶劑的截止使用波長以下測定。以空氣為空白測定溶劑在不同波長處的吸光度的規(guī)定波長范圍(nm)220240241250251300300以上吸光度 0.4 0.2 0.1 0.05UV-注意事項v配制測定溶液時稀釋轉移次數(shù)應盡可能少

9、，轉移稀釋時所取容積一般應不少于5ml。含量測定時供試品應稱取2份，平行操作，每份結果對平均值的偏差應在0.5%以內。如為對照品比較法，對照品一般也應稱取2份。作鑒別或檢查可取樣品1份。v供試品溶液的濃度，應以吸光度在0.30.7之間為宜，吸光度讀數(shù)在此范圍誤差較小，并應結合所用儀器吸光度線性范圍，配制合適的濃度。UV-注意事項v選用儀器的狹縫譜帶寬度應小于供試品吸收帶半高寬的10%，否則測得的吸光度值會偏低，或以減小狹縫寬度時供試品溶液的吸光度不再增加為準，對于中國藥典紫外測定的大部分品種，可以使用2nm縫寬，但當吸收帶的半高寬小于20nm 時，則應使用較窄的狹縫，例如青霉素鉀及鈉的吸光度檢

10、查需用1nm縫寬或更窄，否則其264nm的吸光度會偏低。UV-注意事項v測定時除另有規(guī)定外，應在規(guī)定的吸收峰2nm處，再測幾點的吸光度，以核對供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸光度最大的波長作為測定波長，除另有規(guī)定外吸光度最大波長應在該品種項下規(guī)定的波長2nm以內，否則應考慮試樣的同一性、純度以及儀器波長的準確度。v用于制劑含量測定時，應注意供試液與對照液的pH值是否一致，如pH值對吸收有影響，則應調溶液的pH值一致后再測定吸光度。HPLC測定色譜柱的使用及保存 v使用前注意事項色譜柱的儲存液一般均為有機溶劑，反相柱常用甲醇、乙腈或者高比例的甲醇/乙腈-水溶液，正相柱常用脫水處理后的純正己烷。

11、使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與待分析樣品的流動相之間是否互溶。有些色譜柱（如氨基柱或氰基柱），既可用于正相體系，也可用于反相體系，如色譜柱中的貯存液為正相（環(huán)己烷）而使用條件為反相時，必須用異丙醇先置換掉色譜柱內的儲存液，然后再用于反相條件，否則將會明顯減少色譜柱的使用壽命。在反相色譜中，如果流動相中緩沖鹽的濃度較高（0.1mmol/L），必須先用低濃度的甲醇/乙腈-水溶液（10%20%）沖洗20min，否則緩沖鹽在高濃度的有機相中很容易析出，從而使色譜柱堵塞，無法恢復。v色譜柱使用方向裝色譜柱時應使流動相流路的方向與色譜柱標簽上箭頭所示方向一致。除另有規(guī)定外，不宜反向使用，否則會導致色譜

12、柱柱效明顯降低，無法恢復。v流動相流動相中所使用的各種有機溶劑應盡可能使用色譜純，水最好為超純水或重蒸餾水。流動相配制好后還應經0.45um或0.22um的濾膜過濾。另外，裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)的在線過濾器等裝置應清潔，否則將影響色譜柱壽命。以硅膠為基質的各種鍵合相對酸和堿都很敏感，一般pH使用范圍為2.57.5，應參閱色譜柱使用說明書，配制好流動相后，必要時測定pH值，防止pH 過酸過堿，以免色譜柱填料不可逆性損壞。v樣品樣品溶液應經0.45um或0.22um的濾膜過濾，或用固相萃取小柱（SPE）對樣品溶液進行預處理；如樣品成分復雜，部分組分有可能吸附在色譜柱上，最好使用前置保護柱。在用正

13、相色譜分析樣品時，如無特殊要求，所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。v反相色譜柱用后的保存如使用緩沖液或含鹽溶液作為流動相，每天實驗結束后，應用10倍柱體積（對150mm柱長，約15ml）的低濃度的甲醇/乙腈-水溶液（10%20%）沖洗，使色譜柱內的鹽完全溶解洗脫出，再用較高濃度的甲醇/乙腈-水溶液（50%）沖洗，最后用高濃度的甲醇/乙腈-水溶液（80%100%）沖洗，使色譜柱中的強吸附物質沖洗出來。色譜柱的保養(yǎng)v反相柱，可以儲存于甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于經脫水處理后的正己烷中，離子交換柱可以貯存于含5%甲醇或含0.05%疊氮化鈉的水中，并將色譜柱兩端的堵頭堵上，以免干枯，室溫保存。色譜柱的長期保存色譜柱的再生v色譜柱使用一段時間后，會發(fā)生柱壓上升、柱效降低的現(xiàn)象。這主要是柱床上端或過濾片處積累了污染物，可通過再生予以消除。正相柱按極性增大的順序，依次用2030倍柱體積的正己烷、二氯甲烷和異丙醇沖洗色譜柱，然后，按反順序沖洗，最后用干燥的正己烷平衡。反相柱首先用蒸餾水沖洗，再分別用2030倍柱體積的甲醇和二氯甲烷沖洗，然后按相反順序沖洗，最后用流動相平衡。離子交換柱在低離子強度的緩沖液中長期使用會導致色譜柱失活，用稀酸緩沖液沖洗可使陽離子交換柱再生，而用